Apr-1基因对胆管癌细胞QBC939细胞周期基因表达的影响

目的探讨Apr-1基因调控QBC939胆管癌细胞周期的机制。方法运用脂质体介导法将Apr-1基因转染胆管癌细胞系QBC939,建立稳定表达Apr-1基因的细胞模型(QBC939-Apr-1)。采用细胞周期基因芯片,观察转染Apr-1基因前后胆管癌细胞细胞周期相关基因表达的变化。结果转染Apr-1基因的QBC939-Apr-1细胞出现Apr-1 mRNA的表达,成功建立了稳定表达Apr-1基因的细胞模型。基因芯片检测结果发现:Skp2及UBE基因的表达水平明显上调,而CDC6,Cyclin H等25种基因的表达下降,其中MRE11A,CKS2,CDK8及CDC45等下调在3倍以上。结论过表达的Apr-1基因可诱导QBC939细胞多种细胞周期相关基因表达发生变化,为深入认识Apr-1基因参与调节细胞周期的机制提供了新的思路。     

Pyroptosis及炎性体活化的分子机制

背景 Pyroptosis是一种依赖半胱天冬酶-1(caspase-1)的程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)模式.其特征为快速的质膜破裂及炎性胞内容物的释放,最终诱发组织细胞呈现一种介于凋亡与坏死间的特殊程序性死亡--pyroptosis.目的 综述pyroptosis及炎性体活化的分...     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对结直肠腺癌细胞生长与Notch1蛋白表的影响

目的：探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对人大肠癌SW480细胞生长与Notch1蛋白表达的影响。方法：将3-MA（5 mmol/L）作用于SW480细胞24 h后（以培养相同时间无处理的SW480细胞为对照）,分别免疫组化和Western blot法检测细胞Notch1蛋白的表达,用CCK-8法和Annexin/PI双染法检测细胞增殖与凋亡。结果：免疫组化与Western blot结果均显示,3-MA作用后,SW480细胞Notch1蛋白的表达明显下调（均P<0.05）;增殖与凋亡检测结果显示,3-MA作用后,SW480细胞增殖率明显降低,而凋亡率明显增加（均P<0.05）。结论： 3-MA能抑制结直肠癌细胞的增殖并促进其凋亡,该作用可能与3-MA抑制Notch1蛋白表达从而改变细胞自噬水平有关。

     

GSDMD及caspase-1在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义

目的 探究膜穿孔蛋白D(gasdermin-D,GSDMD)及半胱天冬酶-1(caspase-1)在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法 选取中国人民解放军联勤保障部队第九〇四医院自2015年1月至2016年6月期间行根治性切除术且病理学检查确诊为乳腺浸润性导管癌的女性患者77例作为研究对象。采用免疫组化方法检测癌组织及20例配对癌旁组织中GSDMD和caspase-1蛋白的表达情况,并分析其与患者临床病理特征的相关性;使用Kaplan-Meier分析法绘制生存曲线,采用log-rank检验行单因素生存分析及Cox比例风险回归模型分析影响乳腺浸润性导管癌患者预后的因素。结果 癌旁组织中GSDMD及caspase-1蛋白呈高表达者的占比高于癌组织（P<0.05）。单因素分析结果显示乳腺浸润性导管癌患者的生存时间与淋巴结转移、TNM分期以及孕激素受体、GSDMD、caspase-1和Ki-67的表达状态均相关（P<0.05）;多因素分析结果显示GSDMD蛋白低表达[HR=4.096,95%CI为（1.102,15.216）,P<0.05]和caspase-1蛋白低表...     

β1整合素表达下调对人结肠癌细胞侵袭和耐药的影响

目的 观察β1整合素表达下调对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药的影响.方法 反义寡核苷酸技术转染HT-29细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测β1整合素表达下凋.Transwell侵袭窒方法检测HT-29体外侵袭力.流式细胞术(FCM)和噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量的化疗药物[5-氟尿嘧啶(5-Fu)]对各组凋亡率和生长抑制率的影响.结果 实验组HT-29细胞βl整合素mRNA表达显著降低,体外侵袭实验迁移的HT-29细胞数(59±12)明显减少(P＜0.05),在高浓度5-Fu(100、200 mg/L)时HT-29细胞的生长抑制率(36.97%和47.58%)和细胞凋亡率[(15.7l±1.46)%、(27.82±1.58)%]与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 β1整合素表达下调可降低结肠癌细胞侵袭及化疗药物耐药性.     

重症急性胰腺炎模型大鼠肺组织血红素加氧酶-1的表达及意义

目的：探讨重症急性胰腺炎（SAP）肺组织血红素加氧酶-1（HO-1）活性的变化和意义以及乌司他丁的干预作用。方法：将大鼠随机分为正常对照组,SAP模型组,HO-1诱导剂组和乌司他丁组,后3组大鼠用5%牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射制法诱导SAP模型,其中HO-1诱导剂组和乌司他丁组于造模后5 min分别静脉注射牛血晶素和乌司他丁,而SAP模型组给予等体积生理盐水。于术后不同时间点观察各组的肺组织病理变化,检测肺组织湿/干重比、髓过氧化物酶（MPO）活性及HO-1的表达量。结果：除正常对照组外,各组均出现明显的肺损伤,但2个治疗组的肺损伤情况明显好于SAP模型组。与正常对照组比较,各组术后肺组织湿/干重比、肺组织MPO活性及HO-1的表达量均明显升高（均P<0.05）,且基本呈随时间延长的增加趋势;与SAP模型组比较,2个治疗组肺组织湿/干重比、MPO活性降低,HO-1的表达量升高（均P<0.05）;2个治疗组间比较,以上指标的差异均无统计学意义（均P>0.05）。相关分析显示,SAP大鼠肺组织HO-1活性与肺组织MPO活性和湿/干重比均呈明显负相关（r=-0.79,-0.77,均P<0.05）。结论：SAP大鼠肺组织HO-1活性增高,应用HO-1诱导剂增加肺组HO-1活性能减轻SAP急性肺损伤,乌司他丁对SAP急性肺损伤保护作用也可能部分与升高HO-1活性有关。

     

胃癌VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表达及其与淋巴转移的关系

目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及其受体VEGFR-3(也称Flt-4)与神经细胞黏附分子-接触蛋白-1(contactin-1,CNTN-1)在原发性胃癌组织中的表达,并分析其与淋巴转移和其他临床病理参数之间的关系。方法对37例原发性胃癌病例的原发灶和癌旁组织标本,行免疫组化法检测VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表达,测定淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD)。分析上述四者之间的相互关系,及其与临床病理因素之间的联系。结果胃癌组织中VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的阳性表达率分别为54.05%、72.97%及62.16%。CNTN-1的表达与VEGF-C(P0.05)及VEGFR-3表达(P0.05)存在明显的相关性。VEGF-C的阳性表达与TNM分期、淋巴管浸润及淋巴结转移有关(均P0.05)。肿瘤较大、TNM分期、淋巴管浸润和淋巴结转移率较高者,CNTN-1表达的阳性率也越高(均P0.05)。VEGFR-3阳性表达与TNM分期及有淋巴结转移有关(均P0.05)。LVD计数与TNM分期晚、淋巴管浸润、淋巴结转移有关(P0.05)。LVD计数与VEGF-C的表达呈正相关(P0.05)。结论 VEGF-C、VEGFR-3和CNTN-1在胃癌组织中均存在高表达。VEGF-C的表达与LVD计数相关,且两者都与淋巴管浸润和淋巴结转移密切相关。VEGF-C可能是通过CNTN-1通路介导淋巴管生成,从而促进胃癌的淋巴管浸润和淋巴结转移。     

替吉奥（S-1）联合塞来昔布胶囊对老年晚期结直肠癌的疗效及生活质量的影响

目的：观察替吉奥（S-1）联合塞来昔布治疗老年结直肠癌的疗效以及不良反应与患者生活质量情况。方法：对2010年1月—2014年5月间确诊为晚期结直肠癌的31例老年患者给以口服S-1胶囊,40 mg/次,塞来昔布胶囊0.2 g/次,均2次/d,连服2周,休息1周,3周为1个周期。6个周期后观察疗效、患者生存质量与不良反应,以及D二聚体、CEA、CA19-9水平变化。结果：31例患者缓解率64.5%,疾病控制率87.1%;患者的KPS评分、躯体功能、社会功能、情绪功能较前改善,肿瘤导致的疲乏、疼痛、睡眠障碍、食欲减退等不适均较化疗前明显减轻（均P<0.05）。化疗后D二聚体、CEA、CA19-9水平明显降低（均P<0.05）。不良反应主要为骨髓抑制、食欲下降及恶心呕吐,均经对症处理缓解。结论：S-1联合塞来昔布胶囊治疗老年晚期结直肠癌疗效显著,且能提高患者生存质量,降低D二聚体、CEA、CA19-9水平,毒副作用可以耐受。

     

重组人血管内皮抑素联合SOX方案治疗晚期结直肠癌的效果及其对患者血清ICAM-1、VCAM-1的影响

目的:研究重组人血管内皮抑素恩度联合替吉奥联合奥沙利铂(SOX)方案治疗晚期结直肠癌的临床疗效及对患者血清标志物细胞间黏附因子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)水平的影响.方法:选取2010年1月—2015年1月于大连大学附属新华医院就诊并经病理组织学证实的晚期结直肠癌患者127例,随机分为治疗...     

激活PPAR-γ对脑缺血-再灌注损伤中炎症反应的影响

目的探究激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)对脑缺血-再灌注损伤(CIRI)与脂多糖(LPS)诱导炎症反应的影响。方法在动物实验中,SD雄性大鼠40只,体重250～270 g,随机分成四组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、二甲基亚砜(DMSO)+缺血-再灌注组(DIR组)和吡格列酮+缺血-再灌注组(PIR组)。其中S组进行假手术处理,IR组进行脑中动脉缺血(MCAO)建模处理,DIR组给予DMSO,随后进行MCAO造模处理。PIR组给予吡格列酮,随后进行MCAO造模处理。在细胞实验中,通过慢病毒转染BV2细胞使PPAR-γ过表达,将细胞培养孔随机分为三组:空白对照组(B组)、阴性对照组(L1组)、过表达组(L2组)。其中B组未做处理,L1组转染PPAR-γ阴性病毒,L2组转染PPAR-γ阳性病毒。之后将细胞培养孔随机分为四组:正常对照组(C组)、正常细胞+LPS处理组(L组)、阴性对照+LPS处理组(LL1组)和过表达+LPS处理组(LL2组)。其中C组未做处理,L组用LPS处理,LL1组转染阴性病毒并确定转染率后使用LPS处理,LL2组转染阳性病毒并确定转染率后用LPS处理。各组大鼠使用Zea Longa评分标准进行神经行为学评分,TTC染色比较脑梗死容积百分比大小,采用ELISA法检测四组大鼠和四组BV2细胞IL-1β和IL-18浓度,Western blot法检测PPAR-γ、活化的半胱天冬酶1(caspase-1)和NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白相对含量。结果与IR组比较,PIR组大鼠行为学评分明显降低,脑梗死容积百分比明显减小,PPAR-γ的蛋白相对含量明显增高,活化的caspase-1、NLRP3蛋白相对含量明显降低,IL-1β和IL-18浓度明显降低(P0.05)。与B组比较,L2组的PPAR-γ蛋白相对含量明显增高。与C组比较,LL2组活化的caspase-1和NLRP3蛋白相对含量明显升高(P0.05),IL-1β和IL-18浓度明显升高(P0.05)。结论吡格列酮通过激活PPAR-γ减轻脑缺血-再灌注损伤,其机制是通过激活PPAR-γ,抑制NLRP3的表达,减轻炎症反应,进而使可能存在的caspase-1介导的细胞焦亡减少。     

放线菌素D在cFLIP抑制大肠癌细胞凋亡中的作用

目的探讨放线菌素D（ActD）在下调cFLIP表达水平增加大肠癌细胞凋亡中的作用。方法应用流式细胞仪（FCM）技术检测ActD预处理的人大肠癌细胞（SW620）凋亡水平、Fas受体及cFLIP蛋白表达的变化情况，并观察在ActD存在时，cFLIP蛋白对大肠癌细胞凋亡的影响。结果10μg／LActD作用于SW620细胞后，cFLIP蛋白的表达水平随着作用时间的延长而降低。ActD作用24h后，cFLIPI表达强度由94．4％下降到71．8％，此时1mg／L的抗Fas抗体诱导SW620细胞凋亡率达33．7％，但ActD本身对大肠癌细胞的凋亡及Fas受体表达无明显影响（P〉0．05）。结论低浓度放线菌素D可明显下调SW620细胞中cFLIP蛋白的表达水平并显著增加大肠癌细胞的凋亡率，ActD有可能成为靶向调节cFLIP蛋白在大肠癌细胞中表达的理想药物。     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对结肠癌细胞生长的影响

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（insulin-like growth factorⅠ receptor,IGF-ⅠR）在人结肠癌细胞株HT-29上的表达,以及两种胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体（IGF-ⅠRMcAb）对HT-29细胞增殖的影响.方法免疫组织化学法检测HT-29的IGF-ⅠR表达,MTT法检测两种IGF-ⅠR McAb对HT-29的抑制增殖作用及诱导凋亡情况.结果人结肠癌细胞株HT-29细胞膜高表达IGF-ⅠR.IGF-ⅠR McAb能抑制HT-29细胞增殖,McAb对HT-29细胞的抑制作用随抗体浓度增大而增大.IGF-ⅠR McAb诱导HT-29凋亡,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.结论IGF-ⅠR McAb通过阻断IGF-ⅠR抑制结肠癌细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

人结直肠癌细胞株研究及使用现状

结直肠癌细胞株是研究结直肠肿瘤癌变、浸润转移机制、探寻新的治疗药物及策略的理想模型。然而,目前存在结直肠癌细胞株数目众多、质量参差不齐以及研究者对其生物学特性重视不足等众多问题,导致结直肠癌研究中对细胞株的选择及使用不规范,影响实验结果的准确性,甚至可能得出错误结论。本文对迄今已建立的人结直肠癌细胞株进行整理分类,从其建立和应用、分类与选择、使用现状与存在问题3方面进行总结。     

植物类雌激素杨梅素对结肠癌细胞系RKO生长的影响

目的检测一种植物类雌激素杨梅素对人结肠癌细胞系RKO生长的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测杨梅素对RKO细胞系生长的影响;流式细胞仪技术检测杨梅素对细胞周期的影响;半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)确定杨梅素对抑癌基因p16INK4a表达的影响。结果MTT法显示杨梅素处理组对结肠癌细胞系生长有明显抑制作用;流式细胞仪分析结果显示,经杨梅素处理后RKO细胞周期明显阻滞在G0/G1期;RT-PCR结果显示杨梅素恢复了RKO细胞系p16INK4a的转录。结论杨梅素对RKO细胞系生长有明显的抑制作用,杨梅素可能通过上调抑癌基因p16INK4a的表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期。     

反义人类端粒酶 RNA逆转录病毒载体构建及其对结直肠癌细胞的抑制作用

目的 研究反义人类端粒酶RNA逆转录病毒载体对结直肠癌HT29细胞端粒酶活性及细胞生长的抑制作用。探讨以端粒酶为酸点的结直肠癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义重组病毒，感染结直肠癌HT29细胞，采用RT-PCR检测hTR表达。端粒酶重复扩增法（telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测端粒酶活性，绘制生长曲线了解细胞生长状态，倒置显微镜观察和DNA片段电泳检测细胞凋亡。结果 反义hTR作用后的结直肠癌细胞hTR表达下降，端粒酶活性和细胞生长受到明显抑制，细胞出现凋亡。结论 反义hTR对结直肠癌HT29细胞的生长和端粒酶活性具有明显的抑制人舰艇可能以hTR为靶点对结直肠癌进行基因治疗。     

藤黄酸对膀胱癌细胞株BIU-87生长的抑制作用

目的 探讨GA(藤黄酸)对膀胱癌细胞株BIU-87生长的抑制作用及其机制.方法 分别以倒置相差显微镜、噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术观察GA对BIU-87的形态学改变作用、生长抑制效应、凋亡诱导以及周期阻滞作用.结果 倒置相差显微镜观察发现,GA作用后BIU-87细胞变圆、脱壁,部分死亡、漂浮;MTY法显示,GA对BIU-87具有明显的生长抑制作用,并随着药物浓度的增加(0～3 μmol/L)而逐渐增强,IC50为1.7μmol/L;流式细胞术检测发现,GA浓度为1.5、3.0μmol/L时凋亡率分别为(34.6±5.2)%和(58.6±6.9)%,显著高于对照组的(2.2±0.8)%;GA浓度为0、1.5、3.0 μmol/L,作用48 h后,G_0～G_1期细胞数分别是(35.0±1.2)%、(35.0±1.5)%、(46.0±3.1)%;而S期细胞比例分别为(33.5±0.7)%、(34.1±0.6)%、(15.6±3.3)%,并呈剂量依赖性阻滞BIU-87细胞周期于G_0/G_1期.结论 GA对BIU-87细胞有明显生长抑制作用,这可能与诱导BIU-87凋亡、阻滞其细胞周期进程有关.     

Cytofluorometric analysis of cell proliferation kinetics of the human colorectal cancer]

In order to clarify cell proliferation kinetics of human colorectal cancer, 91 cases were investigated by cytofluorometry and clinicopathological findings. The results showed colorectal cancers could be divided into 3 groups according to the ploidy pattern. Group I was the diploid cell population, group II the polyploid cell populations and group II' the aneuploid cell populations. These ploidy patterns were found not to be related both to the histological types and the gross pathological classification. Most of the intramucosal cancers were found in group I, and the cancers of more advanced growth mainly in groups II and II'. The fraction of diploid cells in the groups I and II' did not show the remarkable change, but in the group II decreased with tumor progression. These results indicate the ploidy patterns appear to change with the submucosal invasion, and also that while the ploidy patterns in the groups I and II' are stable, those in the group II increase the extent of polyploidization with the tumor growth. Lymphatic metastases were found to be more frequent in the group II than in the groups I and II'. It is suggested that the mechanism of lymphatic metastasis would be related to the cell polyploidization.     

PTEN基因联合奥沙利铂对胆管癌细胞生长抑制的研究

目的探讨脂质体介导PTEN基因转染人胆管癌细胞（QBC939）,联合化疗药物奥沙利铂（L-OHP）,分别进行人胆管癌细胞体外培养和体内接种生长,观察分析该基因对胆管癌细胞生长的抑制情况,探索人类胆管癌的生物治疗的可行性和方法.方法将携带PTEN基因的真核表达载体pBP-PTEN和不含该基因的空载体.转胆管癌QBC939细胞,嘌呤霉素抗性筛选克隆、扩增培养.绘制细胞生长曲线及MTT细胞活性观察;利用免疫组化检测转染前后PTEN阳性表达率;透射电镜扫描观察转染前后及联合奥沙利铂后细胞的超微结构变化;流式细胞分析细胞的周期变化和细胞凋亡情况;体外细胞侵袭力抑制试验;裸鼠体内肿瘤生长,病理学及电镜扫描的观测.结果PTEN基因转染后QBC939细胞稳定表达,阳性表达率升高（P＜0.05）;肿瘤细胞活性下降（P＜0.05）,细胞周期G1～S期抑制,细胞凋亡率增加（P＜0.01）;透射电镜细胞较成熟、分化好;细胞侵袭力明显抑制（P＜0.05）;裸鼠体内肿瘤未转染组生长早,加入奥沙利铂后生长受抑制（P＜0.05）,病理证实为腺癌.结论1.脂质体成功将PTEN基因转染人胆管癌QBC939细胞,并稳定表达.2.PTEN基因转染后细胞生长速度无明显变化;MTT实验活性细胞数有所下降.3.转PTEN基因后的胆管癌细胞超微结构变化显示线粒体增多,细胞较成熟、分化好;流式细胞议分析,细胞周期G1期被抑制,细胞凋亡多,侵袭力受到抑制;4.接种转PTEN基因裸鼠的体内成瘤显著抑制;6.转基因的生物治疗联合奥沙利铂（L-OHP）对人胆管癌细胞生长具有显著的抑制作用.     

白细胞介素2基因工程人大肠癌细胞瘤苗的建立及鉴定

目的 建立高表达白细胞介素2的基因工程人大肠癌细胞瘤苗，并完成相关的实验室鉴定。方法 采用重组逆转录病毒将人白细胞介素2基因转导至三株人大肠癌细胞，G418筛选并挑选单克隆，ELISA检测各单克隆24h白细胞介素2表达量，用Student Newman Keuls检验三株细胞白细胞介素2的表达差异，PCR、Southern blot检测白细胞介素2基因整合，RT-PCR、Northern blot检测白细胞介素2基因转录水平。结果 获得72株G418抗性单克隆，其中表达量最高者为COL0205达138.01ng/L×10^7/24h，统计显示COLO205与SW1116、HT-29组间相比差异有统计学意义（P〈0.05），白细胞介素2基因整合至细胞基因组中，未发生重组或部分缺失，且获得成功表达。结论 本研究成功建立了高表达白细胞介素2的基因工程人大肠癌细胞瘤苗。     

氟尿嘧啶对人结直肠癌CA-Ⅱ细胞G1/S期进程和细胞周期调控的影响

目的探讨氟尿嘧啶(5-FU)对结直肠癌细胞G1/S期进程和周期调控的影响;并观察治疗结果是否有药物剂量依赖性。方法采用细胞周期同步化方法,观察结直肠癌化疗主要药物5-FU对人结直肠癌细胞CA-ⅡG1/S期进程的影响,并探讨不同的区域化疗药物浓度与肿瘤杀伤作用的量效关系;并通过RT-PCR方法检测癌细胞在该时期内P16/cyclinD1/CDK4/Rb调控途径转录水平的改变。结果5-FU能够明显延长CA-Ⅱ细胞G1/S期的进程,阻抑细胞周期进展,其阻抑程度对5-FU有剂量依赖性;5-FU同时还可引起癌细胞G1/S期P16基因的转录增强,cyclinD1基因的转录减弱。结论高浓度药物所产生的细胞周期G1/S期阻滞作用可能是5-FU杀伤结直肠癌细胞的机制之一。