酞胺哌啶酮对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的作用

目的 :观察酞胺哌啶酮对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的抑制作用。方法 :于裸鼠背部右侧皮下接种SKOV3 瘤源 ,随机分为 4组 :治疗组 - 1和对照组 - 1,皮下移植后次日开始分别给予酞胺哌啶酮 2 0 0mg kg .d-1、等体积 0 .5%羧甲基纤维素钠腹腔内注射 ,共 4周。治疗组 - 2和对照组 - 2 ,皮下移植第 15天开始分别给予酞胺哌啶酮 2 0 0mg kg .d-1和等体积 0 .5%羧甲基纤维素钠 ,共 2周。定期检测皮下瘤体积和裸鼠体重。用免疫组化方法检测肿瘤组织微血管内皮细胞的表达情况 ,在光学显微镜高倍视野下 (2 0 0× )分别计数肿瘤组织的微血管密度 (MVD)。结果 :治疗组裸鼠皮下瘤体积较对照组明显减小 :治疗结束时 ,治疗组 - 1抑瘤率为 4 0 .2 % (P <0 .0 1) ;治疗组 - 2抑瘤率为 2 8.5% (P <0 .0 5)。治疗组裸鼠体重与对照组无明显差异 (P >0 .0 5)。两治疗组皮下瘤的MVD明显降低 ,治疗组 - 1的抑制率为 4 3.7% (P <0 .0 1) ,治疗组 - 2的抑制率为4 2 .1% (P <0 .0 5)。结论 :酞胺哌啶酮能抑制人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤生长及微血管生成 ,其生长抑制作用以早期应用效果显著 ,且其副作用不明显     

沙立度胺对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的影响

目的　探讨沙立度胺(Thd;商品名:反应停)对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的影响。方法　建立 15只人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成 3组: (1)Thd组:腹腔内注射Thd(200mg·kg-1·d-1,浓度为 62 5mg/L); (2 )Thd+环磷酰胺 (CTX)组:按上述Thd剂量,加入浓度为 100mg/L的CTX(100mg·kg-1·d-1 ),腹腔内注射; (3)生理盐水组:腹腔内注射 0 2ml生理盐水。观察各组裸鼠皮下移植瘤生长情况、裸鼠体重的变化,并采用RT PCR、酶联免疫吸附法、及Picture二步免疫组化法检测各组瘤组织中血管内皮生长因子 (VEGF)mRNA、外周血中VEGF含量及瘤组织中微血管密度(MVD)。结果　 ( 1 )Thd组、Thd+CTX组皮下移植瘤体积明显小于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Thd组瘤组织中VEGFmRNA为 55±9,血中VEGF含量为(29±10)pg/ml;Thd+CTX组瘤组织中VEGFmRNA为 26±7,血中VEGF含量为(12 ±6)pg/ml;生理盐水组瘤组织中VEGFmRNA为 79±7,血中VEGF含量为(71±16)pg/ml。Thd组、Thd+CTX组瘤组织中VEGFmRNA和血中VEGF含量分别与生理盐水组比较,差异均有统计学意义 (P<0.01)。(3)Thd组MVD计数为 (12.6±3.3)条,Thd+CTX组为 (10.6±1.9)条,均明显低于生理盐水组的(19 3±2 8)条(P<0 01)。结论　Thd有抗卵巢癌皮下移植瘤血     

生物钟基因Period2对裸鼠卵巢癌移植瘤生长和血管生成抑制作用的机制研究

目的:探讨生物钟基因Period2对卵巢癌裸鼠移植瘤生长转移和血管生成的作用及可能机制。方法:利用卵巢癌细胞株构建裸鼠卵巢癌皮下移植瘤,利用基因转染技术,外源性导入重组基因Period2,使之在肿瘤组织成功稳定表达,分别采用Real-time定量PCR和Western blot检测移植瘤中Period2表达,治疗期间测量移植瘤体积,治疗2周后处死裸鼠,称取瘤重,免疫组化检测肿瘤组织中血管内皮生长因子/血管通透性因子(VEGF/VPF)、血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)、微血管密度(MVD)(CD34标记)的表达情况,Western blot检测肿瘤转移相关基因(MTA1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9),以及PI3K/Akt信号通路的表达。结果:(1)外源性导入Period2基因在裸鼠移植瘤肿瘤组织中成功稳定表达。(2)Period2组移植瘤体积与其他两组相比较,差异有统计学意义(F=23.469,P0.001)。转染后2周,Period2组移植瘤重量明显低于空质粒组和对照组(P0.05),Period2组抑瘤率达到38.9%。(3)免疫组化结果表明,Period2组的VEGF/VPF、VEGFR1表达下降(F=46.80/48.09,P0.001),MVD计数(CD34标记)显著减少(F=138.4,P0.001)。(4)Western blot结果表明,Period2组MTA-1和MMP-9表达明显少于其他组(P0.05),自噬与凋亡相关信号通路PI3K/Akt中标志性蛋白PI3K、Akt表达明显下调(P0.05)。结论:(1)外源性导入Period2过表达可使卵巢癌生长速度减慢,抑瘤率明显提高。(2)Period2可能通过抑制VEGF/VPF、MTA-1、MMP-9表达而抑制卵巢癌的血管新生和浸润转移。(3)Period2可能通过干扰PI3K/Akt信号通路影响凋亡,抑制肿瘤血管形成来发挥抑瘤作用。     

血管抑素基因治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的:研究血管抑素(Angiostatin)基因转染治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其相关机理。方法:使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机将荷瘤裸鼠分为基因治疗组、空质粒组和空白对照组,分别于瘤体注射Angiosta-tin/PCDNA3、空质粒PCDNA3和无菌生理盐水,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线,检测各组肿瘤Angiostatin、VEGF的表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析,计算细胞凋亡指数(AI)。结果:基因治疗组裸鼠的肿瘤生长在早期受到明显抑制,大约1周后生长速度有所加快,肿瘤组织中Angiostatin蛋白局部高表达,VEGF的表达高于空质粒组和空白对照组,AI(4.21±0.49)高于空质粒组和空白对照组,MVD(19.3±3.2)低于空质粒组。结论:Angiostatin基因可以通过抑制血管生成而在一定程度上抑制肿瘤生长,其作用的发挥是独立于VEGF的。     

c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染对裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤形成的抑制作用

目的 探讨c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)联合转染,对人卵巢癌细胞株SKOV3,在裸鼠皮下移植瘤形成过程中的抑制作用。方法 共分7组：Ⅰ组(正常对照)、Ⅱ组[c-erbB-2正义寡核苷酸(SODN)]、Ⅲ组(c-raf-1 SODN)、Ⅳ组(c-erbB-2 ASODN)、V组(c-raf-1 ASODN)、Ⅵ组(全剂量联合)、Ⅶ组(半剂量联合)。根据不同分组条件将相应寡核苷酸导入SKOV3细胞株内,然后接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。结果 Ⅱ、Ⅲ组与对照组成瘤能力比较,差异无显著性,Ⅳ、V组的成瘤能力明显降低,Ⅵ组与Ⅶ组的成瘤能力最低,Ⅵ组与Ⅶ第1次出现肉眼可见肿瘤的时间分别为13．7d和15．2d,最大抑瘤率分别为61．1％和71．3％。结论 反义寡核苷酸联合转染,对卵巢癌细胞的成瘤能力和肿瘤生长抑制作用更明显。     

人卵巢癌裸鼠原位移植瘤模型的建立及其生物学特性研究

随着肿瘤实验动物学的发展，人们对肿瘤模型的仿真性日益重视。人肿瘤原位移植瘤模型可以客观地再现人类肿瘤的临床发展过程，自然模拟肿瘤在人体内的浸润和转移过程。我们利用卵巢癌细胞株SW626成功地建立了人卵巢癌裸鼠的原位移植瘤模型，并对其生物学特性进行了研究，现报道如下。     

bFGF单克隆抗体对卵巢癌移植瘤血管生成的抑制作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在卵巢上皮性肿瘤中的表达强度与肿瘤血管生成之间的关系,及其单克隆抗体bFGFMAb对人卵巢癌移植瘤血管生成和肿瘤生长的影响。方法:(1)应用免疫组化法和图像分析系统研究bFGF在正常卵巢组织,良性、交界性和恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达部位和强度;以及bFGF的表达强度与肿瘤新生血管的关系;(2)利用卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,每周2次将不同浓度的bFGFMAb注射于瘤体周围,连续8周,每周测量肿瘤体积,绘制移植瘤生长曲线;对移植瘤组织行Ⅷ因子的免疫组化染色,测定肿瘤内微血管密度(MVD)。结果:(1)bFGF主要在卵巢上皮性肿瘤细胞浆内表达,在交界性和恶性肿瘤中,部分细胞同时存在核表达;bFGF在正常卵巢组织,良性、交界性和恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达强度逐步增强,同时MVD逐步增高,二者呈正相关(P<0.001);(2)30、20、10μgbFGFMAb组移植瘤体积分别是对照组的31.34%、49.20%和71.25%,MVD分别是对照组的27.80%、52.37%和81.86%(P<0.05),其作用呈浓度依赖性。结论:bFGFMAb能明显抑制卵巢癌的血管生成和肿瘤生长,有望成为卵巢癌生物治疗的新方法。     

米非司酮抑制人卵巢癌3AO细胞裸鼠移植瘤生长的研究

目的 :研究抗孕激素米非司酮 (mifepristone ,MIF)对人卵巢癌 3AO细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制作用并探讨其作用机制。方法 :随机将 14只人卵巢癌细胞 3AO移植瘤荷瘤裸鼠分为两组 ,MIF组皮下注射MIF 0 .2mg/d ,对照组注射等量溶剂。观察治疗前后移植瘤的体积和重量。应用末端转移酶介导的生物素标记脱氧尿苷三磷酸缺口标记法 (TUNEL)和流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡率和肿瘤细胞周期时相的变化 ;免疫组织化学染色法检测移植瘤组织增殖细胞核抗原 (PCNA)和孕激素受体 (PR)的表达。光镜和电镜观察移植瘤细胞凋亡的超微结构变化。结果 :治疗 4周后 ,MIF组和对照组裸鼠移植瘤体积和重量分别为 1186 .14± 4 96 .14mm3和 1.30± 0 .4 3g ,2 199.85± 5 41.4 9mm3和 2 .30± 0 .31g(P <0 .0 1)。TUNEL测定显示 ,MIF组细胞凋亡率为 (11.33± 1.5 3) % ,对照组为(2 .6 7± 0 .5 8) % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。FCM测定 ,MIF组凋亡率为 (15 .6 2±3.87) % ,也明显高于对照组的 (7.5 9± 1.4 7) % (P <0 .0 5 ) ,肿瘤细胞出现典型的细胞凋亡形态变化 ,并阻滞于G0 ～G1期 ,S期细胞显著减少 (P <0 .0 5 )。MIF组肿瘤细胞PCNA及PR表达率分别为 2 0 .5 %和 8.0 % ,明显低于对照组的 4 8.0 %和 2 2 .0 % (P <0 .0 5 )     

卵巢癌肿瘤血管形成的研究进展

肿瘤血管形成是指新生血管在肿瘤内或向肿瘤内生长的过程。肿瘤生长离不开血管形成 ,肿瘤血管形成在肿瘤治疗中的作用日益受到关注。目前 ,已有多种抑制肿瘤血管形成的药物进入Ⅰ～Ⅲ期临床试验 ,并取得了良好的效果。现将卵巢癌肿瘤血管形成的研究进展作一综述。一、卵巢癌肿瘤血管形成的研究概况卵巢癌是女性生殖道肿瘤中死亡率最高的疾病 ,其转移多以种植及淋巴途径为主 ,少见血行转移 ,但多年来 ,研究者们一直试图了解肿瘤血管形成在卵巢癌中的确切价值。Ｗｅｉｄｎｅｒ等[1] 提出 ,肿瘤微血管密度 (ＭＶＤ)能较好地反映血管形成活性。…     

卵巢癌淋巴结定向转移裸鼠动物模型的建立

目的:在裸鼠体内建立人卵巢癌定向淋巴道转移动物模型。方法:将卵巢癌细胞株SKOV3移植于裸鼠爪垫下,待裸鼠卵巢癌发生转移时,取其淋巴结转移灶癌细胞再次移植裸鼠爪垫下传代,反复传3代。结果:SKOV3卵巢癌细胞在裸鼠体内传3代后,各代裸鼠的淋巴结转移率一直稳定,且转移途径较为单一;各代癌细胞的体内外增殖能力不断增强。结论:成功建立了人卵巢癌定向高淋巴道转移模型。     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌细胞及移植瘤干预作用

目的检测细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞及移植瘤的干预作用。方法应用流式细胞仪和脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法（TUNEL）检测flavopiridol作用后卵巢癌细胞系AO的细胞凋亡率和细胞周期,应用实时荧光定量PCR技术检测flavopiridol作用前、后AO细胞中细胞周期蛋白（cyclin）D和活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）3的表达情况。建立卵巢癌裸鼠皮下及腹腔移植瘤模型,观测flavopiridol干预后裸鼠的生存情况及肿瘤体积的变化,TUNEL和免疫组化方法分别检测肿瘤组织中的细胞凋亡情况和微血管密度（MVD）。结果AO细胞在150、300、500nmol／L浓度的flavopiridol作用下,凋亡率分别为4．1％、10．7％和7．6％;G1期细胞比例显著增加,S期比例显著降低（P〈0．05）。flavopiridol作用后AO细胞cyclin D的表达量（0．25）显著下降,活性caspase-3的表达量（2．55）轻度升高,高于flavopiridol作用前的0．69（P〈0．05）、2．49（P〉0．05）。flavopiridol干预后裸鼠的累积生存率显著提高（P〈0．05）;裸鼠的平均生存时间为（141±14）d,显著高于磷酸盐缓冲液（PBS）作用后的（106±11）d,两者比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;在flavopiridol干预后53d时抑瘤率为40％。flavopiridol干预后裸鼠的肿瘤组织中有细胞凋亡发生,MVD为（12±5）个,显著高于PBS作用后的（35±10）个,两者比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论flavopiridol能显著抑制卵巢癌细胞及移植瘤的生长,延长荷瘤裸鼠的生存期。     

GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入治疗人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的研究

目的 :研究GE7导入系统体内导入效率及介导抑癌基因NOEY2体内导入后对人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的治疗作用。方法 :将人上皮性卵巢癌细胞株Hey细胞种植于裸鼠皮下成瘤后半包埋缝于裸鼠脾区网膜建立网膜移植瘤模型。将GE7- β -gal四元复合体经腹腔注入荷瘤鼠体内用X -gal染色法检测基因导入效率 ,同法导入生理盐水、GE7-pcDNA3四元复合体及GE7-pcDNA3-NOEY2四元复合体 ,研究其抑制肿瘤生长的作用。结果 :人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的成瘤率达 10 0 % ,3周后瘤体达 3 68± 0 82g。GE7- β -gal四元复合体经腹腔注入荷瘤鼠体内 12h后 β -gal即有表达 ,4 8h后以瘤体、肝、脾表达率最高。GE7-pcDNA3-NOEY2四元复合体腹腔注射 3周后瘤体生长抑制率为 4 0 81% (P <0 0 5)。结论 :人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤模型具有实用性。GE7导入系统体内导入基因效率高 ,具有相对肿瘤靶向性。GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入后能有效抑制上皮性卵巢癌的生长。     

脂质体-C-erbB_2反义寡核苷酸对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤的作用

目的：探讨经脂质体—硫代磷酸化修饰的Ｃ－ｅｒｂＢ２反义脱氧寡核苷酸（Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ）作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下的成瘤能力及形态学变化。方法：利用离体途径将Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ导入卵巢上皮癌细胞，然后接种于裸鼠皮下，观察肿瘤体积的变化，并计算抑瘤率。用透射电镜观察肿瘤形态变化。结果：经脂质体－Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低，最大抑瘤率可达４１．７％。超微结构显示实验组肿瘤细胞异染色质增多，分化增高。结论：Ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因的反义调控能降低卵巢上皮癌的成瘤能力，抑制肿瘤生长，在卵巢上皮癌的基因治疗中有一定作用     

Experimental combination chemotherapy with vincristine and carboquone in human ovarian cancer transplanted into nude mice

The tumor killing effects of combination chemotherapy with vincristine (VCR) and carboquone (CQ) administrated either simultaneously or sequentially with time intervals of up to 36 hours were studied in serially transplantable human ovarian cancer (JOG-1) in nude mice. Using 3H-thymidine pulse labeling, some tumor cell kinetic parameters were estimated as 13.8 hours for Ts and 42.2 hours of Tc, respectively. The induction of partial synchronization after treating with VCR in vivo was confirmed by estimating both the labeling index and the mitotic index. Sequential treatment with VCR followed by CQ at intervals of 24 hours was the most effective anti-tumor schedule in this treatment system. This sequence of drug administration also resulted in either weight loss nor toxic death of the animals during the schedule. These results indicate that the sequential administration of VCR followed by CQ chemotherapy is strongly recommended for clinical application.