核酶对白血病耐药细胞株K562/A02耐药性逆转的研究

肿瘤耐药及其逆转是当今肿瘤治疗研究的热点。耐药的发生与多药耐药基因 (ｍｄｒ1)及其编码的Ｐ糖蛋白 (Ｐ ｇｐ)过度表达关系密切。我们采用电击基因导入法将特异切割ｍｄｒ1ｍＲＮＡ的锤头状核酶基因导入白血病耐药细胞株Ｋ5 6 2 Ａ0 2 ,研究该核酶抑制ｍｄｒ1基因及Ｐ ｇｐ表达 ,逆转肿瘤细胞耐药性的作用。材料和方法1　细胞株　Ｋ5 6 2细胞株系人红白血病细胞株[1 ] ,由上海血液学研究所提供。Ｋ5 6 2 Ａ0 2细胞株为阿霉素诱导Ｋ5 6 2细胞建立的多药耐药细胞株 ,由中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所提供。2　质粒　真核…     

汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

汉防己甲素 (Ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ,Ｔｅｔ)是防己科植物粉防己的主要活性成分 ,研究表明它可以调节多种Ｐ 糖蛋白 (Ｐ ｇｐ)介导的多药耐药 (ＭＤＲ)细胞株的耐药性[1] 。屈洛昔芬 (Ｄｒｏｌｏ ｘｉｆｅｎｅ,Ｄｒｏｌ)是他莫昔芬的衍生物 ,比他莫昔芬作用强、不良反应小。为探讨Ｔｅｔ和Ｄｒｏｌ联合逆转ＭＤＲ作用 ,观察了Ｔｅｔ和Ｄｒｏｌ单独或联合对Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞的体外耐药逆转作用。材料和方法1　细胞系和培养条件　Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞是具有ｍｄｒ1表型的耐药细胞系 ,由中国医学科学院血液学研究所提供 ,实验前无药培养 2周…     

六亚甲基二乙酰胺对人多药耐药白血病K562/ADM细胞的诱导分化作用

六亚甲基二乙酰胺 (ＨＭＢＡ)是一种杂合极性化合物类强效分化诱导剂 ,对小鼠及人红白血病ＭＥＬ细胞、Ｋ5 6 2细胞有很强的分化诱导作用[1 ,2 ] ,亦可诱导其它白血病 (肿瘤 )细胞成熟分化和凋亡[3 ,4] ,在大剂量时对Ｐ 糖蛋白 (Ｐ ｇｐ ,Ｐ170 )阳性的多药耐药 (ＭＤＲ)肿瘤细胞和Ｐ ｇｐ阴性的肿瘤细胞的增殖均有抑制作用[5] 。Ｋ5 6 2 ＡＤＭ细胞是经阿霉素诱导的ｍｄｒ1基因超表达的白血病多药耐药细胞[6] 。我们选用ＨＭＢＡ作为分化诱导剂 ,通过观察其对Ｋ5 6 2 ＡＤＭ细胞增殖活性、形态学、细胞功能、细胞周期和Ｐ ｇｐ表达的作用…     

伊马替尼耐药的K562细胞系的建立及其生物学特性研究

目的　体外建立一株对伊马替尼 (imatinib)耐药的白血病细胞并阐明其生物学特性。方法　以药物浓度递增的方法诱导人白血病细胞株K5 6 2对伊马替尼产生耐药性 ,以MTT法确定其耐药倍数及抗药谱。用RT PCR和Westernblot方法检测耐药细胞中bcr/abl及mdr1基因及其蛋白BCR/ABL和P gp的表达。用免疫共沉淀法检测耐药细胞中BCR/ABL的磷酸化活性。用双色荧光原位杂交法检测细胞中融合基因bcr/abl拷贝数。结果　建立了针对伊马替尼的人白血病耐药细胞系K5 6 2 /G0 1,耐药倍数为 (15 .2± 3.0 )倍 ,其对阿霉素、三尖杉酯碱和鬼臼乙叉甙具有不同程度的交叉耐药性。主要的耐药机制为上调bcr/abl融合基因及其融合蛋白BCR/ABL表达 ,增强BCR/ABL磷酸化活性。此外 ,多药耐药相关基因mdr1及其蛋白产物P gp高表达也参与了耐药性的形成。 结论　建立了我国第一株对伊马替尼耐药的人白血病细胞系K5 6 2 /G0 1,并阐明了部分耐药机制。     

维生素K3和三氧化二砷在诱导白血病细胞凋亡中的协同作用

维生素Ｋ类药物作为止血药在临床应用已有多年。近年来的研究表明 ,维生素Ｋ类药物尚具有一定的抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用[1] 。最近 ,我们观察了维生素Ｋ3(ＶＫ3)对ＨＬ 6 0细胞的凋亡诱导作用及其与三氧化二砷 (Ａｓ2 Ｏ3)的协同作用 ,现将结果报道如下。材料和方法1　主要试剂　Ａｓ2 Ｏ3 购于哈尔滨医科大学附属第一医院 ,ＶＫ3 为无锡第七制药厂产品 ,小牛血清购自杭州四季青生物制品公司 ,ＡｎｎｅｘｉｎＶ/ＰＩ试剂盒购自法国Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ公司。2　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞系引自中国科学院上海细胞生物学研…     

细胞内钙与K562/A02细胞多药耐药相关性的研究

本研究旨在探讨白血病耐药细胞的发生及其逆转机制与细胞内钙离子浓度的关系。用甲基四唑蓝法(MTT)测定柔红霉素 (daunomycin ,DNR)的细胞毒性 ,用Fura 2 /AM方法测定耐药细胞株K5 6 2 /A0 2及其敏感株K5 6 2的静息 [Ca2 ]i水平 ,并观察了柔红霉素及耐药调节剂汉防己甲素 (Tetrandrine,Tet)、屈洛昔芬 (droloxifene,DRL)单独或联合应用后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果表明 :1μmol/LTet,5 μmol/LDRL均能增加DNR对耐药细胞系K5 6 2 /A0 2的细胞毒作用 ,IC50 (半数抑制量 )分别为 ( 7.2 8± 2 .0 6 ) μg/ml,( 7.5 8± 3.4 4 ) μg/ml,逆转倍数为 2 .94和 2 .82倍。两药联合作用明显增强 ,IC50 为 ( 1.6 6± 0 .4 1) μg/ml,逆转倍数达 12 .9倍。静息状态下K5 6 2 /A0 2细胞的游离钙离子浓度显著高于K5 6 2细胞。 1μmol/LTet,5 μmol/LDRL单独作用于K5 6 2 /A0 2细胞引起 [Ca2 ]i的明显升高 ,两者联合应用有拮抗作用。结论 :K5 6 2 /A0 2细胞内Ca2 浓度的增高可能是导致其耐药的原因之一 ,但耐药调节剂Tet,DRL对耐药细胞 [Ca2 ]i的影响在其逆转耐药中的作用有待进一步研究     

siRNA逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的　研究小分子干扰RNA片段 (smallinterferingRNAs,siRNA)对白血病多药耐药细胞系K5 6 2 A0 2mdr1基因和P 糖蛋白 (P gp)表达及功能的影响。方法　根据mdr1基因已知序列设计 3条含 2 1个碱基的siRNA(si mdr1 1,si mdr1 2 ,si mdr1 3)及阴性对照 (si neg) ,在脂质体的介导下转染K5 6 2 A0 2细胞 ;用RT PCR分析mdr1mRNA的表达 ;流式细胞术检测P gp表达和细胞内柔红霉素积累量 ;MTT法检测阿霉素对K5 6 2 A0 2细胞的半数抑制浓度 (IC50 )。结果　 3条siRNA均能不同程度地逆转K5 6 2 A0 2细胞的多药耐药。第 3条序列能更有效地封闭mdr1基因 ,使mdr1mRNA相对水平下降(5 8.0± 1 5 4 ) % ;P gp表达由处理前的 (76 .0± 1.0 ) %降到处理后的 (19.6± 1.9) % ;对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率为 70 .4 % ;同时使K5 6 2 A0 2细胞内柔红霉素积累量增加。结论　siRNA可逆转mdr1基因编码蛋白P gp介导的多药耐药。     

K562细胞定向分化时Bcl-6的表达

Bcl 6 (Bcelllymphoma 6 )是原癌基因bcl 6的表达产物 ,决定着正常淋巴细胞的发育及淋巴组织生发中心形成[1] 。最近研究表明 ,Bcl 6还在其它许多正常及肿瘤细胞的增殖、分化过程中发挥着十分重要的生物学功能[2 ,3 ] 。人红白血病细胞株K5 6 2具有在不同诱导剂作用下分别向红细胞系、巨核细胞系及巨噬细胞系定向分化的特征[4] ,是研究白血病细胞分化及其机制的理想细胞系 ,了解Bcl 6在K5 6 2细胞定向分化过程中的表达及功能 ,对进一步了解白血病的发病机制 ,揭示Bcl 6新的生物学功能有重要意义。材料和方法1　材料　白血病细胞系K5 6 2…     

rhIL-3影响K562细胞对阿糖胞苷敏感性的研究

我们以前的研究表明,在体外重组人白细胞介素3(ｒｈＩＬ3)能增强急性髓系白血病(ＡＭＬ)细胞对柔红霉素(ＤＮＲ)的敏感性[1]。阿糖胞苷(ＡｒａＣ)是国际ＡＭＬ化疗的标准方案(ＤＡ方案)中的主要药物,且ＤＮＲ和ＡｒａＣ对白血病细胞的作用机制不同。我们以ＡＭＬ细胞株Ｋ562细胞为模型,观察ｒｈＩＬ3联合ＡｒａＣ对Ｋ562细胞集落(ＣＦＵＬ)生长的影响,并通过3ＨＡｒａＣ掺入和测定白细胞分化抗原ＣＤ14、ＣＤ15表达,探讨其影响的机制和意义。材料和方法1　Ｋ562细胞株　引自重庆医科大学组织胚胎教研室。2　试剂　ｒｈＩＬ3,日本Ｋｉｒｉｎ…     

蛋白激酶C在K562/AO2细胞多药耐药中作用的初步研究

蛋白激酶Ｃ在Ｋ５６２／ＡＯ２细胞多药耐药中作用的初步研究赵春亭杨纯正邵晓枫熊冬生许元富齐静杨天楹多药耐药（ＭＤＲ）的产生与多种因素有关，有关蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）是否在ＭＤＲ中起作用国内未见报道，国外尚存在争议，ＰＫＣ分布...     

HL-60及COC1细胞亲代及耐药细胞系中细胞外调节蛋白激酶与端粒酶活性变化

我们研究了急性早幼粒细胞白血病细胞系ＨＬ 6 0及其耐药细胞系ＨＬ 6 0 Ｅ6、卵巢癌细胞系ＣＯＣ1及其耐药细胞ＣＯＣ1 ＤＤＰ中细胞外调节蛋白激酶 (ＥＲＫ)及端粒酶活性的改变 ,以了解ＥＲＫ信号传导途径和端粒酶在白血病和卵巢癌耐药形成中的意义。材料和方法1　细胞培养　ＨＬ 6 0、ＣＯＣ1和ＣＯＣ1 ＤＤＰ细胞引自武汉大学中国典型培养物保藏中心。ＨＬ 6 0 Ｅ6细胞系是采用周期间歇小剂量表阿霉素作用于ＨＬ 6 0细胞建立的多药耐药细胞系[1 ] 。上述细胞培养采用含 10 %胎牛血清、10 0Ｕ ｍｌ青霉素、10 0 μｇ ｍｌ链霉素的ＲＰ…     

体外诱导K562细胞尼洛替尼耐药及其机制的初步探讨

目的 体外建立对尼洛替尼(nilotinib)耐药的白血病细胞株,并初步探讨其耐药机制.方法 以尼洛替尼浓度递增的方法诱导人白血病细胞系K562细胞对其产生耐药株,命名为K562-RN,MTT法确定其耐药倍数.流式细胞术检测细胞凋亡.采用荧光原位杂交(FISH)法检测K562-RN细胞中bcr-abl融合基因表达.实时荧光定量PCR (RQ-PCR)和Western blot法检测bcr-abl、HO-1、mdr1、Bcl-2和caspase-3 mRNA和相关蛋白在耐药和敏感细胞中的表达.结果 成功建立了针对尼洛替尼耐药的人白血病细胞株K562-RN.尼洛替尼对K562、K562-RN细胞的半数抑制浓度(IC50值)分别为(12.320±1.720) μmol/L和(24.742 ±2.310)μmol/L,K562-RN细胞相对于K562细胞的耐药倍数为2.01倍,且对阿霉素、高三尖杉酯碱、鬼臼乙叉甙和伊马替尼具有不同程度的交叉耐药性.在不同浓度尼洛替尼诱导下,K562-RN细胞凋亡率均较K562细胞明显下降.FISH法分析结果显示K562-RN细胞中bcr-abl融合基因阳性率为92％.K562-RN细胞中bcr-abl、HO-1 mRNA及其相应蛋白高表达,而促凋亡基因caspase-3 mRNA及蛋白呈低表达,与K562细胞相比表达水平差异有统计学意义(P＜0.05),多药耐药基因mdr1及其编码蛋白P-gp在K562-RN细胞中呈高表达.结论 通过药物浓度递增法成功建立了对尼洛替尼耐药的人白血病细胞株K562-RN,初步探讨了其耐药机制可能与bcr-abl、HO-1及mdr1高表达,同时下调caspase-3 mRNA及其蛋白的表达有关.     

多药耐药K562/A02和敏感K562细胞来源的树突状细胞介导抗白血病效应对比研究

本研究探讨多药耐药(MDR)白血病K562/A02细胞和敏感K562细胞诱导树突状细胞(DC)分化及介导的抗白血病效应。采用慢性粒细胞白血病(CML)P170糖蛋白(Pgp)高表达的MDRK562/A02细胞、敏感K562细胞在含细胞因子GMCSF(1000U/ml)、IL4(500U/ml)和TNFα(100ng/ml)的RPMI1640完全培养液中诱导分化成DC,以光镜观察细胞形态、流式细胞术检测细胞表型,异基因混合淋巴细胞反应(alloMLR)检测T细胞增殖活性,MTT法测定细胞毒作用。结果表明:培养14天的K562/A02细胞和K562细胞均出现典型的DC形态特征,表达DC的相关分化抗原及共刺激分子CD1a、CD83、HLADR、CD80、CD86。alloMLR检测中,K562/A02DC较K562DC具有更强的刺激异基因T细胞增殖能力(P<0.05)。两种DC激活的CTL分别对K562/A02和K562细胞较HL60细胞具有显著的杀伤活性(P<0.01);更重要的是,K562/A02DC较K562DC激活的CTL对Pgp高表达的MDRK562/A02细胞、HL60/VCR细胞具有更强的细胞毒作用,杀伤活性分别为(40.7±1.3)%、(28.4±0.9)%(P<0.01)和(24.9±1.1)%、(8.2±0.7)%(P<0.01)。结论:Pgp高表达的MDR白血病细胞K562/A02和敏感K562细胞都可在GMCSF、IL4和TNFα作用下诱导分化为成熟DC,均可活化CTL产生特异的抗白血病效应;尤其K562/A02细胞来源的DC可介导针对Pgp高表达的多药耐药白血病的特异细胞毒作用。     

K562细胞及其耐药细胞株K562/A02细胞白血病耐药相关microRNA筛选

目的 通过检测慢性粒细胞白血病急变细胞系K562及其阿霉素耐药株K562/A02的微小RNA(microRNA、miR)表达差异,探讨microRNA与白血病化疗耐药的关系.方法 MTT法检测K562/A02及其亲本细胞系K562的耐药性能;流式细胞术检测K562与K562/A02细胞的P-gp表达;运用microRNA芯片技术筛查K562与K562/A02细胞之间差异表达的microRNA,随后用实时荧光定量RT-PCR方法进一步证实.结果 阿霉素耐药株K562/A02相对于其亲本细胞系K562对阿霉素的耐药倍数为180倍;K562细胞P-gp的表达率为0.2%,K562/A02细胞P-gp的表达率为86%;microRNA芯片结果显示K562/A02与K562细胞之间有22种microRNA表达存在显著的差异(P<0.01),表达差异在2倍以上的有9种,其中miR-221、miR-155、miR-451在K562/A02细胞表达上调,而miR-98、miR-181a、let-7f、miR-424、let-7g和miR-563则表达下调.实时荧光定量RT-PCR进一步证实了上述结果,并显示miR-451、miR-155、miR-221、let-7f、miR-424在两种细胞中表达差异显著.结论 K562/A02与K562细胞存在microRNA表达差异,其中miR-451、miR-155和miR-221在K562/A02中表达显著上调,而let-7f、miR-424则显著下调,提示microRNA可能参与白血病耐药形成,差异表达的microRNA可能为逆转白血病耐药提供新的作用靶点.     

K562细胞及其耐药细胞株K562/A02细胞白血病耐药相关microRNA筛选

目的 通过检测慢性粒细胞白血病急变细胞系K562及其阿霉素耐药株K562/A02的微小RNA(microRNA、miR)表达差异,探讨microRNA与白血病化疗耐药的关系.方法 MTT法检测K562/A02及其亲本细胞系K562的耐药性能;流式细胞术检测K562与K562/A02细胞的P-gp表达;运用microRNA芯片技术筛查K562与K562/A02细胞之间差异表达的microRNA,随后用实时荧光定量RT-PCR方法进一步证实.结果 阿霉素耐药株K562/A02相对于其亲本细胞系K562对阿霉素的耐药倍数为180倍;K562细胞P-gp的表达率为0.2%,K562/A02细胞P-gp的表达率为86%;microRNA芯片结果显示K562/A02与K562细胞之间有22种microRNA表达存在显著的差异(P<0.01),表达差异在2倍以上的有9种,其中miR-221、miR-155、miR-451在K562/A02细胞表达上调,而miR-98、miR-181a、let-7f、miR-424、let-7g和miR-563则表达下调.实时荧光定量RT-PCR进一步证实了上述结果,并显示miR-451、miR-155、miR-221、let-7f、miR-424在两种细胞中表达差异显著.结论 K562/A02与K562细胞存在microRNA表达差异,其中miR-451、miR-155和miR-221在K562/A02中表达显著上调,而let-7f、miR-424则显著下调,提示microRNA可能参与白血病耐药形成,差异表达的microRNA可能为逆转白血病耐药提供新的作用靶点.     

K562细胞及其耐药细胞株K562/A02细胞白血病耐药相关microRNA筛选

目的 通过检测慢性粒细胞白血病急变细胞系K562及其阿霉素耐药株K562/A02的微小RNA(microRNA、miR)表达差异,探讨microRNA与白血病化疗耐药的关系.方法 MTT法检测K562/A02及其亲本细胞系K562的耐药性能;流式细胞术检测K562与K562/A02细胞的P-gp表达;运用microRNA芯片技术筛查K562与K562/A02细胞之间差异表达的microRNA,随后用实时荧光定量RT-PCR方法进一步证实.结果 阿霉素耐药株K562/A02相对于其亲本细胞系K562对阿霉素的耐药倍数为180倍;K562细胞P-gp的表达率为0.2%,K562/A02细胞P-gp的表达率为86%;microRNA芯片结果显示K562/A02与K562细胞之间有22种microRNA表达存在显著的差异(P<0.01),表达差异在2倍以上的有9种,其中miR-221、miR-155、miR-451在K562/A02细胞表达上调,而miR-98、miR-181a、let-7f、miR-424、let-7g和miR-563则表达下调.实时荧光定量RT-PCR进一步证实了上述结果,并显示miR-451、miR-155、miR-221、let-7f、miR-424在两种细胞中表达差异显著.结论 K562/A02与K562细胞存在microRNA表达差异,其中miR-451、miR-155和miR-221在K562/A02中表达显著上调,而let-7f、miR-424则显著下调,提示microRNA可能参与白血病耐药形成,差异表达的microRNA可能为逆转白血病耐药提供新的作用靶点.     

姜黄素对K562细胞STAT5信号分子的影响

目的　了解姜黄素对信号分子的影响 ,探讨其抗白血病的分子机制。方法　用MTT比色法检测细胞增殖活性。用原位杂交法检测细胞STAT5mRNA的表达。用免疫印迹法 (Westernblot ting)检测细胞STAT5蛋白的表达。结果　①姜黄素抑制K5 6 2细胞增殖与作用时间及姜黄素浓度分别呈依赖关系 ,最适作用时间为 12h ,最适作用浓度为 2 5 μmol L。②姜黄素组K5 6 2细胞STAT5mRNA表达的阳性率为 19% ,与K5 6 2细胞组 (31% )相比明显减少 (P <0 .0 1)。③姜黄素组K5 6 2细胞STAT5蛋白的表达 (A值为 15 2 6 6± 76 9)与K5 6 2细胞组 (A值为 2 5 781± 12 4 0 )相比明显减低 (P <0 .0 1)。结论　姜黄素能抑制K5 6 2细胞STAT5信号分子的活化及表达 ,进一步抑制白血病细胞的增殖。     

共转染抑癌基因p16、p53对白血病细胞株HL-60及K562的抑制作用

人类髓系白血病细胞株ＨＬ 6 0、Ｋ5 6 2同时有ｐ16、ｐ5 3抑癌基因的缺失[1,2 ] 。已有研究将正常的ｐ5 3或ｐ16基因单独导入这两种细胞 ,可以不同程度地抑制肿瘤细胞的生长[1,2 ] 。如果同时将缺失的ｐ16、ｐ5 3两种基因导入ＨＬ 6 0及Ｋ5 6 2细胞中 ,可能有更好的抑制作用。材料和方法1　质粒与试剂　含野生型ｐ16ｃＤＮＡ的质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ｐ16由ＧｏｒｄｏｎＰｅｔｅｒｓ教授 (ＩｍｐｅｒｉａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄ .Ｌｏｎｄｏｎ)惠赠 ,含野生型ｐ5 3ｃＤＮＡ的质粒ｐＣ5 3 ＳＮ3及真核表达载体ｐＣＮｅ…     

环孢菌素D衍生物PSC 833逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的 证实PSC833逆转剂的高效性，探讨PSC833逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法 以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562／A02（耐阿霉素）为实验研究对象，采用MTT法检测细胞毒性；直接免疫荧光测定法检测P糖蛋白（P-gp）表达水平；RT－PCR法检测mdr1 mRNA水平，以流式细胞术测定两种细胞系内柔红霉素（DNR）的潴留来的反映P-gp的外排功能。结果 与K562细胞系相比，K562／A02耐药细胞系mdr1 mRNA及P－gp高表达，DNR潴留减少。1μmol/L的PSC833对K562／A02铁mdr1 mRNA及P－gp表达水平无明显影响（P＞0.05），PSC833对K562／A02细胞的DNR细胞毒性有剂量依赖性增敏作用，其增敏作用至少是环孢菌素A（CsA）、维拉帕米（Ver）的3倍。PSC833能增加K562／A02耐药细胞系的DNR潴留。1μmol/L的PSC833能使K562／A02细胞内DNR潴留量恢复至K562细胞的100.9%，而10μmol/L CsA只恢复至K562细胞的86.9%，PSC833对K562细胞系的DNR细胞毒性及DNR潴留均无明显影响（P＞0.05）。结论 PSC833较CsA、Ver逆转活性至少高3－10倍，其逆转K562／A02多药耐药的机制可能是通过抑制P－gp功能，而非直接下调mdr1 mRNA及P-gp水平。     

小剂量雷公藤内酯醇对K562细胞端粒酶活性的影响

雷公藤内酯醇是从福建省泰宁县产的雷公藤根皮中分离提取的,经实验及临床Ⅰ、Ⅱ期研究发现对急性白血病有较好的疗效[1]。我们发现小剂量的雷公藤内酯醇对Ｋ562细胞的端粒酶有明显的影响,现报告如下。材料和方法1　细胞培养　2×105ｍｌＫ562细胞在含体积分数为10%胎牛血清的ＲＰＭＩ1640(Ｇｉｂｃｏ公司)培养基中,与1,3和6ｎｇｍｌ雷公藤内酯醇,在体积分数为5%的ＣＯ2、饱和湿度和37℃条件下培养72ｈ。2　端粒酶活性测定　按照Ｋｒｕｐｐ改良的荧光素标记的端粒重复扩增方法(ＴＲＡＰ)[2]进行半定量测定。2.1　细胞抽提物的制备:将培养72ｈ…