分泌型人白细胞介素18重组质粒的构建及其真核表达

目的：构建带IL—12 P40信号肽序列的分泌型IL—18质粒，使其在真核细胞中稳定表达。方法：根据IL—12 P40的信号肽cDNA序列及人成熟IL—18序列设计4条特异性引物，用RT—PCR法自人树突状细胞中分别扩增IL—12 P40信号肽序列(片段A)及成熟IL—18基因(片段B)，用重叠延伸PCR法拼接和扩增融合基因(片段C)，连接制备pGEM—T克隆载体，亚克隆至pcDNA3．1^ 。转染NCI—H460人肺癌细胞株，经RT—PCR和Western blot检测IL—18的表达。结果：表达质粒的酶切图谱符合预期的结果，测序结果与预期的cDNA序列完全一致，转染细胞株表达了IL—18。结论：成功地构建了含IL—12 P40信号肽序列的IL—18表达质粒，并在人肺癌细胞株中得到了表达。     

IL-18基因转染人乳腺癌细胞系的建立及其表达的研究

目的　建立转人白细胞介素 -18(h IL -18)基因的乳腺癌细胞株 ,并研究 h IL -18的表达情况。方法　将携带人白细胞介素 -18的质粒 pc DNA3 .1-h IL -18转导入人乳腺癌细胞系 Bcap3 7中 ,通过药物 G-418进行筛选 ,利用 RT-PCR和 EL ISA法对白细胞介素 -18(IL-18)的表达进行检测。结果　 IL-18基因成功地转导入 Bcap3 7细胞中并能顺利表达。RT-PCR电泳结果显示 IL -18基因在 m RNA水平有表达 ;EL ISA结果显示 ,10 6个转导细胞在 2 4小时内分泌 IL-18的含量为 (186.3± 15.7) pg;空载体转染的细胞未检测到 IL-18。结论　人 IL-18基因成功地整合到乳腺癌细胞系 Bcap3 7细胞基因组中 ,且能持续大量表达     

白细胞介素—18及其抗肿瘤作用研究现状

白介素－１８是新发现的细胞因子,具有诱生ＩＦＮ－γ,增强ＮＫ和ＣＴＬ细胞活性,促进Ｔ细胞增殖,诱发Ｔｈ１类细胞因子产生,促进免疫细胞表达ＦａｓＬ,增强Ｆａｓ介导的细胞毒作用等多种生物学功能,具有明显的抗肿瘤作用,以肿瘤治疗和肿瘤基因治疗方面具有潜在的应用前景。     

IL—18的抗肿瘤作用

白细胞介素－18（IL－18）是近年发现的新型细胞因子,具有诱生IFN－γ,增强NK细胞活性,增强Th1型免疫反应,抗肿瘤作用等多种生物学功能,是一种应用前景较好的抗肿瘤细胞因子,综述IL－18的发现与来源,理化特性,生物学活性及抗肿瘤机理。     

白细胞介素-18及其抗肿瘤作用

白细胞介素-18（IL-18）是新近发现的一种多效能细胞因子,在刺激T细胞增殖,增强Th、细胞毒性T细胞和自然杀伤细胞等活性,抗肿瘤、免疫调节等方面有着积极的作用,有潜在广阔的应用前景。进一步研究IL-18抑制肿瘤的机制及其生物学作用具有重要的意义。     

IL-18的抗肿瘤作用

白细胞介素 18(IL 18)是近年发现的新型细胞因子 ,具有诱生IFN γ、增强NK细胞活性、增强Th1型免疫反应、抗肿瘤作用等多种生物学功能 ,是一种应用前景较好的抗肿瘤细胞因子。综述IL 18的发现与来源、理化特性、生物学活性及抗肿瘤机理。     

小鼠白介素-12真核表达质粒的构建及其表达

目的:构建能在真核细胞内稳定表达小鼠白介素-12(mIL-12)的质粒,为进一步研究mIL-12的免疫调节机制及其抗肿瘤作用奠定基础。方法:通过聚合酶链反应(PCR)扩增质粒pORF-mIL-12(Elas-ti),双酶切后将目的片段mIL-12连接到真核表达载体pcDNA3.1( )质粒上,mIL-12受pcDNA3.1( )中mCMV启动子驱动,将mIL-12全长转录至同一mRNA上,对重组质粒进行鉴定后将其转染小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)测其表达。结果:PCR成功扩增出mIL-12片段,PCR鉴定、酶切鉴定及测序均证实pcDNA3.1( )-mIL-12质粒构建成功,RT-PCR及ELISA证实重组质粒在mRNA及蛋白质水平均高表达mIL-12。结论:pcDNA3.1( )-mIL-12真核表达质粒构建成功并能在LLC细胞中稳定表达。     

LC3B真核表达载体构建及其在293细胞的表达

目的:构建重组人LC3B的真核表达载体,建立稳定表达EGFP、EGFP-LC3B的293细胞系.方法:基因克隆方法构建pcDNA3-N-EGFP-LC3B的真核表达载体,应用脂质体介导的转染技术将该重组质粒及pcDNA3-N-EGFP空载体质粒导入293细胞,用G418筛选稳定表达的细胞系.293细胞中EGFP、EGFP-LC3B的表达用倒置荧光显微镜方法检测.结果:成功扩增LC3B基因大小片段,克降测序结果与NCBI收录的LC3B序列完全一致.获得转染并经G418反复筛选稳定表达EGFP、EGFP-LC3B的293细胞系.结论:成功建立EGFP、EGFP-LC3B稳定表达的293细胞系,并且具有正常的生物学功能,从而为后续研究提供有用的细胞研究模型.     

IL-18促进肺癌细胞转移的功能鉴定

目的 探讨IL-18是否具有促进肺癌细胞转移的功能以及通过何种途径发挥作用。方法 以人肺巨细胞癌高、低转移株为肿瘤转移的研究模型,采用Western blot和半定量RT-PCR结合Northern blot法检测IL-18蛋白或mRNA在肺臣细胞癌高、低转移株的差异表达;随后采用基因转染技术将IL-18的正义或反义表达质粒分别转染肺巨细胞癌低或高转移株,比较IL-18稳定转染细胞转移表型的改变。采用：MICS系统检测稳定转染细胞体外迁移和侵袭能力的改变,采用Western blot法检测稳定转染细胞转移表型相关指标的改变,从而确定IL-18通过何种途径促进肺癌细胞转移。结果 由于IL-18蛋白和mRNA仅在肺巨细胞癌高转移株检测到,因此,将IL-18正义表达质粒转染肺巨细胞癌低转移株后,可检测到IL-18融合蛋白的表达,且稳定转染细胞出现了细胞体外迁移能力的显著上调和上皮细胞间黏附分子E-cadherin蛋白的显著下调;相反,将IL-18反义表达质粒转染肺巨细胞癌高转移株后,可检测到内源性IL-18蛋白和mRNA水平的下调,且稳定转染细胞出现了细胞体外侵袭能力的显著下调和E-cadherin蛋白的显著上调。结论 IL-18可能通过抑制上皮细胞问黏附分子E-cadherin蛋白的表达来促进肺癌细胞的转移。     

Slp2反义真核表达载体的构建及功能研究

背景与目的 肺癌相关基因的研究一直是研究的热门课题，S1p2基因是通过cDNA微阵列技术筛选出的肺癌差异表达基因之一，本研究旨在对S1p2基因在肺癌细胞系中的表达及其功能进行初步研究。方法 提取肺癌细胞系A549、GLC-82、NCI-H446、NCI-H460的细胞总RNA，用RT-PCR方法检测肺癌细胞系中S1p2基因mRNA水平的表达；构建S1p2反义基因，通过离子脂质体将克隆的S1p2反义基因导入肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460，用半定量RT-PCR检测转染目的基因对肺癌细胞系S1p2表达的影响；通过四唑盐比色法绘制细胞生长曲线以及流式细胞分析、软琼脂细胞克隆形成试验，观测转染S1p2反义基因对肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460生长速度、细胞周期以及细胞增殖能力的影响。结果 在4个肺癌细胞系中，S1p2基因均为阳性表达；转染S1p2反义基因后的肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460的细胞生长速度明显减慢；在流式细胞分析直方图上表现为G2期的细胞增多，并曾在转染目的基因的NCI-H446细胞流式直方图中观察到了位于G0／G1期左侧的“亚Gt峰”的出现；转染S1p2反义基因后肺癌细胞系的软琼脂培养细胞克隆形成率明显低于未转染细胞。结论 S1p2基因与肺癌细胞的生长、增殖力密切相关，有必要进行深入研究和探讨。     

Immunomodulatory and antitumor effects of interleukin-21 in patients with renal cell carcinoma

Interleukin (IL)-21 is a class I cytokine with sequence homology to the IL-2 cytokine superfamily. IL-21 signals through a heterodimer of a unique IL-21 receptor and the common γ-chain cytokine receptor. Preclinical murine models suggested strong antitumor activity of IL-21 in renal cell carcinoma, melanoma and other tumor models. IL-21 antitumor activity was superior to IL-2 in these tumor models. A Phase I clinical trial of IL-21 in humans with metastatic renal cell carcinoma or melanoma began in May 2004. Clinical regressions were observed in renal cell carcinoma. Preliminary immunological and clinical findings of patients receiving IL-21 will be reviewed.     

白细胞介素-18转导人大肠癌细胞株的建立及其生物学活性的研究

目的 :建立转白细胞介素 18(IL 18)基因人大肠癌细胞株 ,并研究IL 18的表达情况。方法 :将携带人白细胞介素 18的质粒pcDNA3 1 hIL 18转染到人大肠癌细胞系SW 4 80中 ,通过药物GENETI CIN(G 4 18Sulfate)进行筛选 ,利用PCR、RT PCR及ELSIA法对IL 18的表达进行检测。结果 :IL 18基因成功的转导入SW 4 80细胞中 ,10 6个转染细胞在 2 4h内分泌IL 18的含量是 112 9± 17 6pg ;空载体转染的细胞和未转染的SW 4 80细胞不产生IL 18。结论 :人IL 18基因成功的整合到大肠癌细胞系SW 4 80细胞基因组中 ,且能持续大量表达     

人IL-12重组质粒对S-180荷瘤小鼠的治疗作用

目的：探讨人白细胞介素（imerleukin,IL）-12重组质粒对荷瘤小鼠的基因治疗作用．并进行初步的安全性评价。方法：建立肉瘤细胞（8-180）荷瘤小鼠模型,随机分为3组,每组10只,分别于注射瘤细胞后的第4、7、10、14和17天给予人IL-12重组质粒（pcDNA6-p70,100μg／只）、环磷酰胺（40mg／kg）及生理盐水（100μL／只）瘤体内注射。观察小鼠的存活时间;于致瘤后第21天处死小鼠,测肿瘤大小及质量,计算脾和胸腺指数;乳酸脱氢酶法检测NK杀伤活性;MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应;ELISA法检测小鼠血清IFN-γ水平。对pcDNA6p70小鼠体内运用进行初步的安全性评价。结果：与生理盐水组相比．pcDNA6-p70瘤体内注射可显著延长荷瘤小鼠存活时间,P=0．03;缩小肿瘤体积,抑瘤率为30％,生理盐水组为0;增加脾（P=0．04）及胸腺（P=0．019）指数．增强其NK活性（P=0．001）及淋巴细胞增生反应（P=0．000）,提高荷瘤血清IFN-γ水平（P=0．000）。安全性检测结果显示,pcDNA6p70在小鼠体内应用无明显毒副作用．P=0．58。结论：人IL-12重组质粒可通过增强机体的细胞免疫功能发挥对肿瘤的基因治疗作用。     

Anxa5真核表达质粒构建及其对小鼠肝癌Hca—P细胞增殖影响观察

目的：构建pcDNA3。1-V5／HisB—Anxa5真核表达质粒,获得膜联蛋白A5（AnnexinA5,Anxa5）表达稳定上调的小鼠肝癌Hca—P细胞株,探究Anxa5上调对Hca—P增殖的影响。方法：利用RT—PCR扩增小鼠全长Anxa5编码序列,将其克隆到pcDNA3．1-V5／HisB载体中,并将构建的pcDNA3．1-V5／HisB-Anxa5表达质粒转入Hca—P细胞。采用（;418筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,观察细胞形态变化。蛋白质印迹法分析Anxa5表达情况,CCK-8法检测相应Hca—P细胞的增殖能力。结果：酶切及测序结果显示,pMD R 18-T—Anxa5克隆质粒和pcDNA3．1-V5／HisB-Anxa5表达质粒构建成功;获得了Anxa5表达稳定上调的单克隆细胞株;与正常Hca-P比较,Anxa5蛋白在pcDNA3．1一V5／HisB-Anxa5-Hca-P单克隆细胞中上调了59．5％,P一0．016;pcDNA3．1-V5／HisB～Anxa5-Hca—P增殖显著加快,P=0．002。结论：成功构建了Anxa5真核表达质粒并获得Anxa5表达稳定上调的小鼠肝癌Hca—P细胞株,Anxa5上调对Hca—P细胞的增殖具有促进作用,为后续研究提供实验基础。     

白介素-18基因修饰SW480细胞肿瘤原性改变及抗瘤作用研究

白介素-18(Interleukin-18,IL-18)能诱导T细胞和NK细胞产生IFN-λ,是参与启动细胞免疫反应的重要细胞因子,具有显著的抗肿瘤效应[1]。将细胞因子基因如IL-2等转移到肿瘤细胞制成的肿瘤瘤苗,能够诱导机体内抗肿瘤免疫功能[2]。我们将人白细胞介素-18(hlL-18)基因转导入大肠癌细胞系SW480细胞中,观察IL-18基因转染后,SW480细胞分泌IL-18的水平及SW480细胞致瘤性的改变。     

脂质体介导质粒DNA细胞转染的优化研究

Objective:The development of gene carriers for efficient gene delivery into cells has attracted growing attention in recent years.The aim of this study was to achieve a better outcome of AAV-293 cells transfection by plasmid DNA.Methods:We studied the optimal condition for higher efficiency of cationic lipid-mediated cell transfection.Four experimental groups were set.Plasmid DNA and liposome were mixed in each groups at different ratios(μg:μL),1:2.5,1:3.5,1:4.0 and 1:5.0,respectively.LacZ gene functioned a...     

白细胞介素18与内皮抑素联合基因导入治疗肿瘤的研究

目的选用白细胞介素18(IL-18)和内皮抑素(ES)联合以物理方法导入治疗肿瘤,以探索一种肿瘤基因治疗的新途径。方法①采用脂质体包被肌肉注射法将作者构建的质粒pSecTag2B- mIL-18和pES1424-mES分别和联合转入Balb/c小鼠,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两种基因蛋白在动物体内的表达情况;②将小鼠分为4组:pSecTag2B-mIL-18转入组、pES1424-mES转入组、pSecTag2B-mlL-18与pES1424-mES联合转入组和对照组,观察各组肿瘤的生长情况。结果①RT-PCR和ELISA检测证明两种质粒均能够在小鼠肌肉中表达,特别是将两种质粒同时转入同一小鼠肌肉后,能够同时在小鼠肌肉中表达;并将表达的蛋白分泌到外周血液循环中,分泌量与单独基因转入分泌表达量的差异没有统计学意义。②IL-18、ES单独应用都能明显抑制肿瘤的生长,而两基因联合治疗抑制肿瘤的效果明显好于单基因治疗组。结论联合IL-18和ES基因治疗比两种基因单独应用能够更好地抑制肿瘤生长。     

白细胞介素18与内皮抑素联合基因导入治疗肿瘤的研究

目的：选用白细胞介素18（IL-18）和内皮抑素（ES）联合以物理方法导入治疗肿瘤，以探索一种肿瘤基因治疗的新途径。方法：①采用脂质体包被肌肉注射法将作者构建的质粒pSecTag2B-mIL-18和pES1424-mES分别和联合转人Balb／c小鼠，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测两种基因蛋白在动物体内的表达情况；②将小鼠分为4组：pSecTag2B-mIL-18转入组、pES1424-mES转入组、pSecTag2B—mIL-18与pES1424-mES联合转入组和对照组，观察各组肿瘤的生长情况。结果：①RT-PCR和ELISA检测证明两种质粒均能够在小鼠肌肉中表达，特别是将两种质粒同时转入同一小鼠肌肉后，能够同时在小鼠肌肉中表达；并将表达的蛋白分泌到外周血液循环中，分泌量与单独基因转入分泌表达量的差异没有统计学意义。②IL-18、ES单独应用都能明显抑制肿瘤的生长，而两基因联合治疗抑制肿瘤的效果明显好于单基因治疗组。结论：联合IL-18和ES基因治疗比两种基因单独应用能够更好地抑制肿瘤生长。