应用2种TaqMan-荧光定量PCR法快速检测甲型H1N1流感病毒

[目的]应用达安基因H1和N1两对引物检测试剂盒及美国CDC四对引物探针法对流感样病例进行核酸检测,以快速排除甲型H1N1流感病毒的感染.[方法]采用达安基因H1和N1两对引物检测试剂盒对流感样病例进行核酸检测,这些样本同时以美国CDC公布的针对甲型H1N1流感病毒的探针和引物序列以及国家CDC提供的针对季节性流感病毒的探针和引物序列进行检测,与达安基因的甲型H1N1试剂盒进行特异性、准确性的比较.[结果]达安基因甲型H1N1试剂盒和美国CDC的甲型H1N1四对引物法对季节性流感甲1、甲3、乙型的扩增都为阴性,对甲型H1N1确诊病例的病毒核酸扩增都是阳性,应用国家CDC的探针和引物检测为流感病毒核酸阴性的样本用达安基因的甲型H1N1试剂盒及美国CDC的甲型H1N1四对引物法的检测结果也都为阴性.[结论]达安基因的甲型H1N1试剂金及美国CDC的甲型H1N1四对引物法对甲型H1N1流感病毒的检测有高度的特异性,可从疑似甲型H1N1流感患者鼻咽拭子中直接检测流感病毒核酸.     

三种实时荧光RT-PCR试剂在检测甲型H1N1流感病毒中的应用

〔目的〕结合WHO公布的甲型H1N1流感病毒的检测引物和探针,探索合适的实时荧光RT-PCR试剂应用于国境口岸甲型H1N1流感病毒疑似标本的检测。〔方法〕通过对连续梯度稀释阳性对照品进行检测,从而分析AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript 3种常用实时荧光RT-PCR试剂的灵敏度、信号强度、反应效率等因素。〔结果〕3种试剂的检测下限均为1:1000倍稀释阳性对照品;AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara One Step PrimeScript检测的线性斜率分别为-5.517、5.214和-4.600;信号强度上Qiagen QuantiTect相对于其他2种明显偏弱。〔结论〕为国境口岸输入性甲型H1N1流感病例的检测和监控提供了有力的技术保障。     

实时荧光定量PCR在流感病毒检测中的应用进展

流行性感冒病毒简称为流感病毒,属于一种RNA的病毒,呈现出丝状或者球形的状态.流感病毒可以分为甲型、乙型以及丙型流感病毒,主要是由凝血素以及神经氨酸酶共同组成,该病毒具有一定的抗原性,极易发生变异.目前感染人类的主要是甲型和乙型两种,甲型流感病毒则主要包含H以及N的变异,H有16个亚型,而N有9个亚型.乙型流感病毒则存...     

实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用效果。方法选取2009年9月—2013年12月在我州采集的流感样病例咽拭子2489件进行分析,采用实时荧光定量PCR对流感病毒核酸进行检测,观察检测阳性率和阳性样本的类型,以分析流感的流行趋势。结果 2009年9月—2013年12月共检出流感病毒核酸阳性676件,检测阳性率为27.16%;其中甲型H1N1病毒472件,占69.82%;季节性甲3亚型病毒126件,占7.54%;季节性甲1型病毒21件,占3.11%;乙型病毒6件,占0.89%;各类型流感病毒发生率之间差异具有统计学意义（P〈0.05）。每年6-9月甲型H1N1病毒流感呈上升趋势,在10-11月达到高峰期;6-9月以季节性甲3亚型病毒为主要流行病株,10-11月甲型H1N1病毒成为主要流行病株。结论实时荧光定量PCR是一种科学有效的检测方法,可对流感病毒核酸进行快速、准确的检测,分析流感病毒的流行规律,有效预防突发公共卫生事件的发生。     

实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的探讨在流感病毒核酸检测中,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)这种检测方法的应用效果,通过对哨点医院2014年6月-2016年6月所采集的1 553份流感样病例咽拭子的分析,了解流感病毒的流行趋势,为预防流感提供科学依据。方法选取2014年6月-2016年6月天津市第四中心医院送至北辰区疾病预防控制中心检测的1 553份流感样病例咽拭子,采用Real-time PCR的方法进行核酸检测,分析所选取标本的阳性率以及阳性标本的类型,了解流感病毒的流行趋势。结果在2014年6月-2016年6月送至该中心检测的1 553份咽拭子中,共检出阳性标本299份,检测阳性率为19.25%;甲型病毒183份,占61.20%;乙型病毒116份,占38.80%,各类型流感病毒阳性率之间差异具有统计学意义(P0.05)。结论 Real-time PCR可以快速有效地对流感病毒核酸进行检测,为分析流行趋势、预防流感提供科学有效的依据。     

甲型H1N1流感病毒实时荧光RT-PCR检测法的建立及其在南京地区甲流防控早期的应用

[目的]建立并应用Taqman探针实时荧光RT-PCR法10μl检测体系对91例输入性甲型H1N1流感疑似病例及密切接触者进行病毒核酸特异、灵敏、快速的检测和感染排除。[方法]采用美国CDC公布的探针和引物序列,比较了两种反应条件(无预扩增、有预扩增)和10μl、12.5μl及25μl3种反应体系的扩增效率;用预扩增10μl体系对季节性流感病毒核酸进行扩增;用预扩增程序及10μl体系对南京市91例输入性疑似病例及密切接触者的样本进行扩增,同时设置阳性对照和阴性对照。[结果]应用美国CDC公布的探针和四对引物序列,3种反应体系对甲型H1N1流感病毒都可以获得有效扩增,而且应用3种反应体积的扩增CT值没有统计学差异(P﹥0.05)。增加预扩增的反应条件下敏感度有显著提高(P﹤0.05)。用10μl反应体系及增加预扩增程序对季节性流感病毒核酸进行扩增,第2对引物(猪流感通用引物)与第3对引物(甲型H1N1流感引物)未获得阳性扩增曲线,甲1、甲3亚型病毒核酸的扩增只有第一对引物(甲型通用引物)与第四对引物(阳性内参)获得阳性扩增曲线,对乙型流感病毒核酸的扩增只获得阳性内参的扩增曲线。对南京市91例输入性甲流疑似病例及密切接触者进行了有效检测和感染排除,并检测到第一例输入性甲型H1N1流感病毒感染病例,其四对引物扩增结果均为阳性。[结论]该检测方法对甲型H1N1流感病毒有高度的特异性,对甲型流感病毒有通用性,10μl反应体系及增加预扩增程序可从疑似甲型H1N1流感患者鼻咽拭子中直接检测甲型H1N1流感病毒核酸,该方法可用于甲型H1N1流感病毒的日常检测并大大降低检测成本。     

双荧光探针实时RT-PCR检测不同样品中甲型H1N1病毒核酸的临床意义

目的采用双荧光探针实时RT-PCR方法检测甲型H1N1流感病毒感染患者不同样品中H1N1病毒核酸,了解其对甲型H1N1流感的快速诊断及病程进展的关系。方法用双荧光探针实时RT-PCR法分别检测118例H1N1患者发病48 h后和（或）恢复期咽拭子、血浆及下呼吸道分泌物中H1N1病毒核酸。结果 118例H1N1患者发病48 h后咽拭子H1N1病毒核酸阳性;57.5%（23/40）重症患者下呼吸道分泌物中H1N1病毒核酸阳性,恢复期3例阳性;37.5%（15/40）重症患者血浆中检测到H1N1病毒核酸。结论双荧光探针实时RT-PCR法可以快速检测H1N1病毒感染,血浆中H1N1病毒核酸阳性可能是重症患者的标志。     

北京市甲型H1N1流感病毒病原学监测分析

目的 分析北京市2009年5-12月甲型H1N1流感病毒检测结果,探讨流感大流行时期甲型H1N1流感病原流行病学特征.方法 2009年5月1日至2009年12月27日,共采集101 852份咽拭子样本,北京市传染病网络实验室利用荧光定量PCR方法检测,并做统计分析.结果 101 852份检测样本中,甲型H1N1流感病毒核酸阳性9843份,总阳性率为9.66%,其中5-6月阳性率为2.85%,7-8月阳性率为3.32%,9-10月阳性率为8.35%,11月阳性率为29.67%,12月阳性率为24.33%.可疑病例排查阳性率为8.40%,病例密切接触者阳性率为4.75%,门诊流感样病例(ILI)阳性率为11.46%,聚集性发热病例及其他病例阳性率为7.33%.年龄分布以5～14岁和15～24岁年龄段为主,男女性别构成比为1.5:1.结论 北京市2009年5-11月甲型H1N1流感病毒感染呈持续上升,12月呈下降趋势,具有一定的流行病学特征.     

荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控效果分析

目的:探究流感病毒核酸检测中采用荧光实时定量PCR法的质控效果分析.方法:于2017年3月～2018年3月,选取本院收治的流感病例576例,全部患者都借助实时荧光定量P C R法检测流感病毒核酸,并对阳性率与阳性样本类型进行检测与总结.结果:全部病例576例经流感病毒核酸检测有136例呈阳性,阳性率23.61％;所有阳...     

不同季节流感病毒核酸检测结果分析

目的 分析和观察流感病毒核酸监测的结果,探寻甲型HINI流感病毒与季节性的流感病毒在临床上的流行规律,并研究甲型HINI流感和季节性流感之间的关系.方法 通过对本地区从2012年8月-2013年7月流感监测点流感样病人的咽拭子标本,使用Real-time RT-PCR的方法进行检测,并对检测出的数据进行详细的分析和对比.结果 本研究检测流感样病例咽拭子标本共930份,总阳性率是20.3％,男、女阳性率分别是22.2％～25.9％,其差别没有统计学意义（P＞0.05）,在各年龄组中,0～5岁年龄组所采集的标本最多,而60岁以上组所采集的标本最少.60岁以下阳性率和60岁以上年龄组阳性率对比,其差别有统计学意义（P＜0.05）.在时间分布上,流感样患者就诊出现了两个暴发高峰,甲流H1N1流感病例出现在2012年10月～11月,随后就呈现出逐月下降的趋势,而季节性流感的就诊高峰出现在2013年2月.结论 流感主要的发病群体是中小学生和青年群体;作为季节性流感的流行趋势株仍是乙型流感病毒,甲型HINI流感病毒的出现,并没有造成季节性流感的流行特征出现变化.     

甲型H1N1流感患者血液与尿液样本病毒核酸检测与分析

目的探讨和分析甲型H1N1流感患者血液与尿液样本中是否存在传染性病毒颗粒。方法采用复合探针实时荧光RT-RCR方法,对35例确诊患者血、尿标本中的RNA进行检测。结果35例患者中4例(11.43%)血标本阳性,3例(8.57%)尿标本阳性,PCR产物经测序证实为甲型H1N1病毒的基因序列,同时发现此7例患者的最高体温均39℃,且6例出现蛋白尿,5例合并感染。结论甲型H1N1流感患者血液与尿液样本中有病毒核酸的存在,提示可能存在感染性病毒颗粒,并引起重症化临床表现,在临床诊疗过程中医、护、技均应加强生物安全防护,避免医院感染。     

甲型H1N1病毒HA、NA氨基酸序列比较及抗原性表位预测

目的：比较新型甲型H1N1流感病毒分离株HA、NA氨基酸序列之间的差异,分析HA、NA蛋白可能的抗原性细胞表位。方法：从GenBank中选取28株世界各地的新型甲型H1N1流感病毒分离株并下载各株HA、NA的氨基酸序列;使用ClustalX和MEGA2.0软件对氨基酸序列的进行进化树分析;用Protean软件预测HA、NA蛋白的B细胞表位;用NetMHCⅡ2.2预测T细胞抗原表位。结果：世界范围的毒株之间氨基酸序列相对保守,HA及NA均只有少数位点的变异,HA蛋白氨基酸序列之间较NA蛋白氨基酸序列之间变异较大;预测HA蛋白具有8个B细胞表位和10个T细胞表位;NA蛋白有12个B细胞表位和7个T细胞表位。结论：HA、NA蛋白的少数区域抗原性相对比较稳定,可以作为检测以及疫苗研究的靶区域。     

白山市甲型H1N1流感病毒感染状况调查

目的掌握白山市不同时期甲型H1N1流感病毒感染水平;了解本市甲型H1N1流感病毒感染的动态变化趋势。方法按照卫生部2009年相关要求,分别于2010年1、3月在白山市抽取5个县(市、区)的人口开展横断面调查。采用多阶段分层随机抽样法,两次横断面共调查1 000人。采用Epidata 3.1软件建立调查数据库,利用SPSS 17.0软件进行分析;采集血清由中国疾病预防控制中心病毒病所统一使用血凝抑制(HI)方法对标本进行检测。结果随时间推移白山市甲型H1N1流感抗体水平阳性率有所下降。5个年龄组抗体水平差异有统计学意义(χ2第1次调查=60.501,P<0.001;χ2第2次调查=14.299,P<0.005)。6～15和16～24岁年龄组人群抗体水平阳性率明显高于平均水平,老年人抗体水平较低,学生抗体阳性率高于其他人群,有疫苗接种史人群抗体水平明显高于无疫苗接种史人群(χ2第1次调查=93.698,P<0.001;χ2第2次调查=63.803,P<0.001)。结论本市人群免疫屏障尚未建立。应进一步加强疫情监测,加强疫苗接种,尤其是老年人的预防接种工作。     

茂名市首例甲型H1N1流感病例的实时荧光RT—PCR检测

[目的]对茂名市首例甲型H1N1流感病例进行病毒核酸检测,为甲型H1N1流感疫情的防控提供参考。[方法]采用实时荧光逆转录PCR法对采集的病人咽拭子标本进行甲型H1N1流感病毒核酸检测。[结果]共采集病人2份咽拭子标本,其中1份咽拭子标本的实时荧光RT—PCR检测结果显示H1及N1的RT—PCR反应体系扩增曲线有明显对数增长且Ct值分别为25．21（H1）和25．07（N1）,为甲型H1N1流感病毒核酸阳性;另1份咽拭子标本则呈阴性。后采集第3份咽拭子标本连同第1分标本送广东省疾控中心复检,结果2份标本的甲型H1N1流感病毒核酸检测均为阳性。[结论]这名病人为福建省第2例甲型H1N1流感病毒感染者的密切接触者,由于及时采用灵敏度高,特异性强,检测时间短的实时荧光逆转录PCR方法检测,快速确诊了病例,为疫情的控制争取了时间,防止了2代病例的出现。     

免疫渗滤法在甲型流感病毒筛查中的应用

目的评价免疫渗滤法在筛查临床甲型H1N1流感病毒感染中的诊断效率。方法收集2009年6月-10月医院发热门诊流感样病例咽拭子标本297例,分别用免疫渗滤法和实时荧光定量PCR检测,以评价免疫渗滤法的诊断效率。结果在297份咽拭子标本中,实时荧光定量PCR法检测为甲型H1N1流感166份,免疫渗滤法检出115份,两种方法检测均为阳性91份,均为阴性107份,灵敏度为54.82%,特异度为81.86%,阳性预测值为79.1%,阴性预测值为58.8%,总符合率66.67%,两种方法在甲型流感病毒检测中差异无统计学意义。结论免疫渗滤法可用于甲型流感病毒筛查,显示出良好的临床应用前景。     

深圳市龙岗区流感监测结果分析

目的了解深圳市龙岗区2009年4月-2010年5月流感流行规律,为有效防制提供依据。方法通过流行病学、血清学和病原学监测,对深圳市龙岗区流感流行情况进行分析。结果深圳市龙岗区2009年4月-2010年5月监测流感样病例(ILI)43 249例,占监测就诊病例总数的8.42%;全年均有病例发生,6月和7月ILI病例数最多;流感样病例主要集中在0～和5～岁年龄组,占79.4%;采集ILI鼻咽拭子标本520份,分离出91株流感病毒,阳性率为17.5%,新甲型H1N1 19株,H1N1亚型7株,H3N2亚型14株,B(Victoria)亚型51株。流感暴发疫情主要发生在中、小学校,占81.2%。核酸检测以季节性甲流和新甲型H1N1流感为主(81.2%)。结论深圳市龙岗区全年均有流感样病例发生,以夏季和冬季为高发季节,主要流行株为甲型H1N1流感病毒株和B型流感病毒(Victoria系),流感监测对预防流行有重要意义。     

荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸

目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT-PCR方法用于检测乙型流感病毒核酸.方法根据GenBank登录的流感毒株序列,应用生物学软件进行序列比对,在乙型流感病毒核蛋白(NP)基因的保守区设计引物和TaqMan探针进行筛选,对荧光定量RT-PCR反应条件进行优化,检测该方法的特异性和灵敏度.此外还对疑似乙型流感含漱液标本进行检测.结果该方法对乙型流感病毒的检测有高度的特异性,对甲1型、甲3型、禽流感病毒H5、SARS病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.01 TCID50,可从疑似流感患者含漱液中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3 h左右.结论本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR是一种快速检测乙型流感病毒特异、敏感的新方法.     

流行性感冒监测

1982至1990年6月,上海市共经历7次甲₃型和4次甲₁型中小程度的流感流行,分离到不同的病毒变种。甲₃型和甲₁型变种在本市交替流行间隔为1~2年左右。夏秋季和冬春期是本市流感活动高峰期。夏秋季流行的流感病毒亚型至冬春期常在我国北方和北半球一些国家引起流行。夏秋季流感疫情较平静,至冬春季流感病毒可出现进一步变异,引起较广泛流行。提供流感流行预测,为及时制备疫苗进行有效预防的依据。     

珠海市2008年H1N1亚型流感病毒血凝素HA1基因特征分析

目的了解2008年珠海地区流行的H1N1亚型流感病毒血凝素重链区HA1基因特征。方法按照时间不同选取7株2008年珠海市分离到的H1N1亚型流感毒株,选取的毒株进行血凝素HA1片段序列测定并推导出其氨基酸序列进行基因进化特性分析。结果H1N1亚型流感毒株为珠海市2008年的优势株,与该年WHO推荐疫苗株比较有多个氨基酸发生了替换,造成抗原性发生一定的变化。结论2008年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对该年珠海市H1N1亚型流感预防效果并不理想,导致2008年珠海市H1N1亚型的流行强度增加。