汞、铅对小鼠睾丸和生殖细胞的亚慢性毒性

背景与目的: 研究重金属汞、铅对雄性小鼠睾丸和附睾精子的亚慢性毒性作用及其对生精细胞的遗传损伤。材料与方法:分别用高中低3种浓度氯化汞、醋酸铅经腹腔染毒4周龄雄性ICR小鼠,共10次,之后自由饲养23 d,于第50 d观察睾丸指数、附睾精子数量、精子活动率和精子头畸形率以及生精细胞微核率和减数分裂异常率。结果: 高浓度醋酸铅组小鼠睾丸指数低于对照组。中、高浓度氯化汞组、3种浓度醋酸铅组附睾精子密度低于对照组。中、高浓度醋酸铅组附睾精子活动率低于对照组。3种浓度氯化汞、醋酸铅致附睾精子畸形率升高。高浓度醋酸铅组生精细胞微核率高于对照组,3种浓度氯化汞和低、中浓度醋酸铅生精细胞微核率与对照组相比差异无显著性。各处理组减数分裂异常率与对照组差异均无显著性。 结论: 汞、铅暴露对小鼠精子具有亚慢性毒性作用,高浓度铅组影响生精细胞的微核率。     

Ad-Gax转染诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制

背景与目的细胞凋亡与肺癌的发生发展密切相关,诱导肺癌细胞凋亡是肺癌治疗的一大策略。本研究探讨生长终止特异性同源盒Gax(growth arrest-specific homeobox)基因转染对人肺腺癌A549细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法腺病毒介导Gax基因(adenovirus expressing Gax cDNA,Ad-Gax)转染A549细胞。以透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)观察转染前后A549细胞凋亡变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法测定细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果透射电镜观察到Ad-Gax转染后A549细胞凋亡现象明显增强。无Ad-Gax转染时,无或仅见极少量的TUNEL染色阳性细胞;Ad-Gax转染后,TUNEL染色阳性细胞显著增多,尤其在转染后24小时更明显。Ad-Gax转染后12h、24h和48h细胞凋亡率分别为12.57%、17.29%和15.03%,与未转染组(0.25%)比较有显著性差异(χ2值分别为7.357、11.126、9.943,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bcl-2蛋白平均积分光密度值(AOD)分别是2.02±0.07、1.79±0.02、1.25±0.51和1.21±0.24,转染组Bcl-2蛋白AOD随转染时间的延长逐渐降低,与未转染组相比呈显著性差异(t值分别为6.651、7.089、7.438,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bax蛋白AOD分别是3.12±0.42、4.49±0.61、4.24±0.37和3.95±0.43,转染组Bax蛋白AOD升高,与未转染组相比差异显著(t值分别为7.469、7.287、6.473,P值均小于0.01)。转染组A549细胞凋亡率与Bcl-2/Bax比值呈负相关关系(r=-0.49,P<0.01)。结论Ad-Gax转染可诱导A549细胞凋亡,其机制可能是通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2/Bax比值实现的。     

酒精对大鼠睾丸的亚慢性氧化损伤及维生素A的保护作用

背景与目的:观察亚慢性摄入酒精对大鼠睾丸结构和功能的损害及维生素A(VitaminA,VA)的保护作用。材料与方法:30只健康雄性成年SD大鼠随机分为对照组、酒精组、酒精 VA组,各组每日分别灌胃给予酒精0、7.5g/kg、酒精7.5g/kg VA50μg/kg,连续13周后对各组大鼠的精子计数、精子活动率、精子畸形率、血清睾酮(Serumtestosterone,T)进行检测,光、电镜观察睾丸生精上皮的组织学改变。同时测定睾丸线粒体中丙二醛(MalonaldehydeMDA)的产生量。结果:与对照组相比,酒精组大鼠精子计数减少,精子活动率下降,精子畸形率升高,血清T水平明显降低,睾丸生精上皮结构破坏,支持细胞和各级生精细胞均有退化变性,睾丸线粒体丙二醛含量明显升高;酒精 VA组较单纯酒精组精子计数、精子活动率有所上升,生精细胞退化变性程度减轻,睾丸线粒体MDA减少,但血清T仍低于对照组。结论:亚慢性摄入酒精抑制精子生成和睾酮合成,补充VA可以限制酒精引起的睾丸过氧化损伤,保护睾丸的生精功能,但是仍有间质细胞合成睾酮障碍。     

醋酸甲孕酮对雄性大鼠骨髓嗜多染红细胞和生精细胞微核的影响

背景与目的:观察单独使用不同剂量的醋酸甲孕酮(Meddroxy progesterone acetate,MPA)对雄性大鼠骨髓和生精细胞微核的影响.材料与方法:50只大鼠分组后,给予每月一次MPA(37.5或75或150 mg/kg)肌肉注射;另以等体积生理盐水为对照,共3个月,每组中的一半动物在停药后即处死,另一半动物在停药9个月后处死.测定各组大鼠给药后骨髓与生精细胞微核率和精子计数及形态.结果:与对照组相比,各实验组大鼠生精功能均明显受到抑制.各实验组大鼠骨髓嗜多染红细胞的微核发生率无明显升高.各实验组生精细胞微核率明显增加,同时附睾精子观察不仅精子数量下降,而且畸形率升高,其中大剂量MPA组生精细胞微核率增加和精子畸形率升高最为明显;但停药9个月后各实验组生精细胞微核率下降至空白对照水平,同时附睾精子数量增加,畸形率减低.结论:单独使用MPA对雄性大鼠体细胞无致突变效应;虽然可以引起生精细胞微核率明显增加,但停药9个月后恢复.     

西妥昔单抗诱导人鼻咽癌细胞株CNE凋亡实验研究

目的观察西妥昔单抗诱导人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的效果,并初步探讨其可能机制。方法CNE细胞经10μg/mL西妥昔单抗处理48 h后,以Hochest33258荧光染色显微法、透射电镜观察其凋亡形态学变化,流式细胞术检测凋亡率,Western Blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 CNE细胞经西妥昔单抗处理后,荧光显微镜及透射电镜下均可见典型的凋亡形态学及超微结构改变;流式细胞术显示凋亡率为(15.30±0.95)%,显著高于对照组(P0.05);Western Blot检测显示Bax蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调、Bax/Bcl-2比值增加。结论西妥昔单抗对人鼻咽癌细胞株CNE有显著的凋亡诱导作用,这可能通过上调Bax并下调Bcl-2而实现,其确切机制仍有待进一步探讨。     

IP6对结肠癌裸鼠皮下移植瘤细胞生长抑制及其机制的探讨

目的:研究肌醇六磷酸(IP6)对HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:建立HT-29细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组(生理盐水组)、低剂量IP6组和高剂量IP6组,用药20 d后处死小鼠.比较各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,透射电镜观察移植瘤细胞形体变化,TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况,并运用RT-PCR、蛋白质印迹法检测移植瘤Bcl-2及Bax基因和蛋白的表达.结果:IP6组出现典型凋亡现象,PCR及蛋白检测也显示IP6可显著上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05);在移植瘤质量和体积方面,用药组与对照组差异无统计意义,P＞0.05,但用药组移植瘤呈现下降趋势.结论:IP6可能通过促进细胞凋亡而起到抑制和延缓肿瘤生长的作用,其机制可能与上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对小鼠睾丸损伤及 p-CREB蛋白 表达的影响

目的：探讨邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）对小鼠睾丸损伤及睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（p-CREB）表达的影响。方法：选用ICR初断乳雄性小鼠40只,随机分为对照组（玉米油）和DEHP染毒组（250、500、1 000 mg/kg）,经口灌胃,1次/天,6天/周,连续8周,于末次染毒24 h后处死动物,称取睾丸、附睾质量计算脏器系数并进行精子计数,检测睾丸组织形态学改变,采用免疫组织化学SP法检测睾丸组织p-CREB蛋白的表达。结果：与对照组相比,250、500和1 000 mg/kg DEHP染毒组小鼠附睾脏器系数及精子计数均明显降低（P < 0.05）,1 000 mg/kg组小鼠睾丸系数亦明显下降,差异有统计学意义（P < 0.05）。各DEHP染毒组小鼠睾丸曲细精管上皮细胞出现层次减少、排列疏松、紊乱等改变;随着染毒剂量升高,睾丸组织中p-CREB蛋白表达下降,DEHP 500和1 000 mg/kg组较对照组差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：DEHP可致小鼠曲细精管生精上皮细胞损伤、精子数下降、p-CREB蛋白表达减少。     

长期摄入酒精对大鼠生精细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察长期摄入酒精对大鼠生精细胞增殖和凋亡的影响,以探讨酒精致生精功能障碍的机制。方法：40只健康雄性成年SD大鼠随机分为3个不同酒精剂量的实验组（2.7、4.5、7.5g/kg）和1个对照组（蒸馏水）,共4组。各组每日分别灌胃给予受试物,连续13周,末次给予受试物24h后处死大鼠。在光镜下观察睾丸组织形态学,采用原位末端标记（TUNEL）法检测睾丸生精细胞凋亡,用流式细胞术（FCM）检测生精细胞凋亡率和计数各级生精细胞。用Western blot检测睾丸中Caspase-3以及核增殖抗原PCNA的表达。结果：光镜观察显示酒精组,尤其是7.5g/kg剂量组动物睾丸出现生精细胞核固缩、变性等细胞凋亡形态学改变,曲细精管腔中脱落细胞增多,且随酒精剂量的增加生精细胞的损伤加重。酒精4.5、7.5g/kg剂量组生精细胞凋亡率明显升高,FCM检测单倍体和四倍体细胞群计数下降（P〈0.05或P〈0.01）,PCNA表达降低（P〈0.05）,Caspase-3表达明显增强（P〈0.05或P〈0.01）。结论：长期摄入酒精可以诱导生精细胞凋亡增加和PCNA表达减弱,这可能是酒精致生精功能障碍的机制之一。     

HpD—PDT对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的:研究血卟啉衍生物(hematoporphrphyrin derivative,HpD)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制,为HpD-PDT治疗乳腺癌提供理论依据.方法:体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231分为4组:A组(空白对照)、B组(单纯激光)、C组(单纯光敏剂)、D组(激光+光敏剂).应用流式细胞术分析HpD-PDT对细胞周期的影响,免疫组织化学技术检测HpD-PDT对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:HpD-PDT作用后,乳腺癌细胞内G0/G1期细胞比显著高于对照组(P<0.05);PCNA阳性表达率明显低于对照组(P<0.01);Bcl-2蛋白的阳性表达率明显下降(P<0.05);Bax蛋白阳性表达率各组间均无统计学差异;实验组HpD-PDT作用后Bax/Bcl-2比值增高,呈时间依赖性变化.结论:HpD-PDT的作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡有关.     

RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖、抑制其凋亡的相关研究

目的:探究RNA干扰RhoBTB1基因表达对结肠癌HT29细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Lipofectamine 2000将siRNA RhoBTB1或siRNA NC转入HT29细胞中，实验分为Control组、转染对照组和siRNA Rho组，噻唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测细胞的的活力和凋亡率，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞中RhoBTB1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组相比，HT29细胞转染siRNA RhoBTB1后，细胞中RhoBTB1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05），细胞活力显著升高（P<0.05），凋亡率显著降低（P<0.05），Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著增加（P<0.05）。结论:RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖，抑制其凋亡，可能通过调节线粒体凋亡通路相关蛋白的表达量发挥作用。     

Effects of Testicular Irradiation on Stem Cell Survival, Hormonal Environment and Spermatogenic Cells in Wistar Rats

Adult male Wistar rats were exposed to 3.0 Gy local testicular irradiation. Testes of irradiated and non-irradiated rats were examined histologically and flow cytometrically, at several intervals up to 78 days after irradiation. Concentrations of follicle-stimulating hormone, luteinizing hormone and testosterone determined at these intervals were not different from those of controls. The survival of stem cells were measured 11 weeks after irradiation (with doses varying from 1.0 Gy to 6.0 Gy at 0.6 Gy/min) by means of the repopulation index and by the number of haploid cells (spermatids). Correlation between both methods and relation to stem cell survival were discussed. The dose response curves yielded D₀ values of stem cell survival of 2.33±0.06 Gy (repopulation index) and 2.08±0.08 Gy (number of haploid cells). The D₀ value of the rat was not much different from that found in mice. It was concluded that the used parameters can offer insight when studying hormonal substances during irradiation.     

NCI-H446人小细胞肺癌细胞株细胞亚群克隆与肿瘤干细胞的实验研究

目的 探讨NCI-H446人小细胞肺癌细胞株细胞不同克隆细胞异质性机制与肿瘤干细胞的关系.方法 采用有限稀释法克隆培养NCI-H446人小细胞肺癌细胞株细胞,免疫组化染色检测干细胞标志物CD133、ABCG2,流式细胞术测定各克隆细胞周期.结果 15个单细胞克隆生长形成克隆,形态上大致分为2种克隆.克隆A共染色6片次,CD133 、ABCG2表达阳性率为66.67%(4/6)、33.33%(2/6);克隆B共染色26片次,CD133 、ABCG2表达阳性率为15.38%(4/26)、7.69%(2/26).克隆A细胞处于G0/G1者多于克隆B,分别是70.13%和54.61%.结论 NCI-H446人小细胞肺癌细胞株细胞存在异质性肿瘤细胞克隆,可能来源于肿瘤干细胞的分化.     

The Expression OF Peptide Hormones in Normal Cells and Tumour Cells

Insight in the mechanisms of peptide hormone expression has grown explosively by elucidation of gene, mRNA and. preprohor-mone structures for most hormone systems during the 1980s. in addition, information about the structure and substrate specificity of many prohormone processing enzymes is rapidly accumulating in these years. the preprohormones vary considerably in size and organization from poly- to monoprotein structures. According to the structural organization and sequence homology the hormones are grouped in families. the prohormones are processed to bioactive peptides by multiple enzymatic modifications during the intracellular transport from the rough endoplasmatic reticulum to the mature secretory granules. the modifications comprise different proteolytic cleavages and amino acid derivatizations. the same prohormone may be expressed in several different cell types that process the precursor in entirely different ways. Awareness of such cell-specific processing patterns is important for the understanding of ectopic synthesis in neuroendocrine tumours.     

干细胞、癌症与癌症干细胞

干细胞被认为是一种未分化的细胞,具有永远增殖和自我更新能力.大量研究证明,癌症中存在对化疗更具抵抗性的癌症干细胞.识别癌症干细胞和普通癌症细胞之间的差异,可以发展更有效的癌症分类、诊断和治疗方法.     

结直肠癌肿瘤实质和肿瘤间质中MMP-2的表达

目的　探讨结直肠癌肿瘤实质及肿瘤间质中基质金属蛋白酶 -2 (MMP -2 )的表达及其病理学意义。方法　采用免疫组化LSAB法对 13 7例结直肠癌进行免疫组化检测 ,取 12例大肠腺瘤样息肉及 8例正常大肠粘膜组织作对照。结果　结直肠癌肿瘤实质细胞MMP -2的阳性表达率 ( 4 2 .3 % ,5 8例 )高于对照组 ( 15 .0 % ,3例 ) (P <0 .0 5 ) ;发生转移的结直肠癌肿瘤实质细胞其MMP -2阳性表达率明显高于无转移者 (P <0 .0 1) ;低 (未 )分化结直肠癌MMP -2阳性表达率高于高、中分化大肠癌 (P <0 .0 1及P <0 .0 5 )。肿瘤间质中MMP -2阳性表达率 ( 60 .6% ,83例 )明显高于肿瘤交界的正常肠粘膜间质 ( 10 .2 % ,14例 ) (P <0 .0 1)。结论　MMP -2表达与结直肠癌的分化程度及转移密切相关 ,与性别、年龄、肉眼类型、病变部位无明显相关性。     

侧群细胞与肺癌肿瘤干细胞

侧群(side population,SP)细胞是一小群能够将染料Hoechst 33342排出从而在流式细胞图上呈现Hoechst 33342低染的细胞,研究者已在多种肿瘤组织和细胞系中检测出了SP细胞并验证这些SP细胞具有强干细胞活性。现有试验结果证实多种肺癌组织和肺癌肿瘤细胞系中也存在具有类干细胞特性的SP细胞,这些SP细胞的鉴别与分离对于肺癌肿瘤干细胞的研究有何意义?本文将整合现有研究资料就这一问题进行阶段性综述。     

人绒癌细胞JEG-3和人卵巢畸胎瘤细胞PA-1染色体着丝粒点变异的研究

背景与目的:探讨染色体着丝粒点(cd)的变异与人绒癌细胞JEG-3和人卵巢畸胎瘤细胞PA-1染色体非整倍性畸变的关系.材料与方法:肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛细胞染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究JEG-3细胞和PA-1细胞染色体Cd的变异.结果:JEG-3细胞染色体Cd缺失率为1.43%、Cd迟滞复制率为0.21%、小Cd率为1.52%、Cd-NOR融合率为1.16%、与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,JEG-3细胞染色体Cd缺失、Cd-NOR融合率显著升高(P＜0.0125),而与小Cd、Cd迟滞复制率问差异无统计学意义(P＞0.0125).PA-1细胞染色体Cd缺失率为1.22%、Cd迟滞复制率为0.95%、小Cd率为1.81%、Cd-NOR融合率为1.03%、与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,PA-1细胞染色体Cd缺失率、Cd迟滞复制率、Cd-NOR融合率均显著升高(P＜0.0125),而与小cd的差异无统计学意义(P＞0.0125).结论:JEG-3细胞染色体非整倍性畸变可能主要与Cd缺失、Cd-NOR融合有关;PA-1细胞染色体非整倍性畸变可能主要与Cd缺失、Cd迟滞复制和Cd-NOR融合有关.