中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品的研制

 目的 建立中国仓鼠卵巢细胞DNA残留量定量测定用国家标准品。方法 使用QIAGEN Genomic-tip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备了中国仓鼠卵巢细胞基因组DNA作为标准品原料,通过紫外分光光度法和电泳进行纯度和含量测定后分装,采用紫外分光光度法对我国第一批中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品进行协作标定,并评价其稳定性和适用性。结果 中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品经检测,A₂₆₀/A₂₈₀均在1.7～1.9之间,电泳图谱只有单一条带,符合规定。该标准品经6家实验室协作标定共90次,几何平均含量为93.63 μg·mL^-1,平均含量的95%可信区间为92.86～94.40 μg·mL^-1,单次测定的95%参考值范围为86.51～100.89 μg·mL^-1,平均可信限率为0.81%。加速热稳定实验表明,该标准品在-20、4、25、37 ℃条件下放置4个月,DNA含量无明显改变,但37 ℃条件下A₂₆₀/A₂₈₀有下降趋势;-20、4、25 ℃条件下电泳结果为单一条带,37 ℃条件下DNA有降解条带。-20 ℃贮存1年的长期稳定性结果显示,标准品DNA浓度及A₂₆₀/A₂₈₀无显著性差异,电泳条带单一,因此-20 ℃条件下长期保存标准品稳定性较好。在标准品适用性研究中,利用该标准品进行荧光染色法测定,标准曲线r值为0.999 0以上,在0.781～100 ng·mL^-1之间线性良好,各稀释度RSD均小于10%;利用该标准品进行定量PCR法测定,标准曲线r值为0.990 0以上,在10^-2～10³ pg之间线性良好,熔解曲线可见单一峰出现。结论 该批中国仓鼠卵巢细胞DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于荧光染色法和定量PCR检测中国仓鼠卵巢细胞DNA残留量,含量定为93.63 μg·mL^-1,批号为270026-201101。     

彗星试验检测雄黄对中国仓鼠肺细胞DNA的损伤作用

目的检测含砷中药雄黄对中国仓鼠肺细胞（CHL细胞）DNA的损伤作用。方法测定雄黄对CHL细胞的半数抑制浓度（IC50）,根据IC50设立不同剂量组,进行彗星试验,观察并比较不同组别不同损伤等级细胞数的差异。结果给药干预后,各剂量组及阳性对照组DNA损伤细胞数明显增加,且各剂量组随着给药浓度的增加,Ⅲ、Ⅳ级（中、重度）损伤细胞数增多。结论中药雄黄可引起CHL细胞DNA损伤。     

牡丹皮苷/酚组分对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用及其机制研究

通过建立高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠模型,以肾功能参数和病理组织学检查(HE染色、透射电镜)评价牡丹皮苷/酚组分对DN大鼠肾损伤的保护作用,并对其可能的作用机制进行探索。研究发现,与模型组相比,牡丹皮苷/酚组分高、低剂量组(0.808,0.404 g·kg-1·d-1)能够显著改善血肌酐、血尿素氮、尿蛋白等肾功能参数的异常情况。从HE染色和透射电镜的结果得知模型组大鼠的肾小球基底膜大部分增厚,系膜细胞明显增殖以及足细胞结构破坏,然而牡丹皮苷/酚组分干预后能够有效保护肾小球结构损伤。此外,为了探讨该组分对抗DN大鼠肾损伤的作用机制,实验通过Western blot和免疫组化方法测定了各组大鼠肾组织中TGF-β1,纤连蛋白(FN)以及Ⅳ胶原蛋白的表达量,并对TGF-β1下游效应因子Smad2/3,p38MARK的磷酸化水平进行研究。结果表明,牡丹皮苷/酚组分能够有效拮抗TGF-β1的活性,下调其诱导的细胞外基质(ECM)中纤连蛋白(FN)以及Ⅳ胶原蛋白的表达,对抗肾小球基底膜增厚。更重要的是,其作用机制可能为干预Smad,MARK通路的传导对抗TGF-β1诱导的ECM堆积,从而保护DN大鼠肾损伤。     

鲜姜有效部位对H2O2致血管内皮细胞ECV-304氧化损伤的保护作用

目的研究鲜姜有效部位对离体培养的血管内皮细胞ECV-304氧化损伤的保护作用。方法取健康大鼠每日ig不同剂量(200、400、800mg/kg)鲜姜有效部位或洛伐他汀(40mg/kg),共4d,取含药血清作为受试药物。采用H2O2建立离体培养的ECV-304细胞氧化应激的损伤模型,测定细胞存活率、内皮细胞培养液中LDH、MDA水平及细胞中MDA水平。结果鲜姜有效部位含药血清能够显著提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,降低受损内皮细胞培养液中LDH,并减少细胞培养液及细胞中MDA。结论鲜姜有效部位具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻内皮细胞的氧化损伤。     

刺五加有效部位对MPP~+损伤PC12细胞的保护作用

目的:对刺五加有效部位进行体外药效学评价。方法:采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡率,紫外可见分光光度计测LDH的漏出量以及SOD、MDA、NO、NOS的活性和含量。结果:刺五加有效部位可以发挥良好的神经元保护作用,能提高MPP+损伤PC12细胞的存活率(P0.01),降低细胞凋亡率(P0.01),降低LDH的漏出量以及NO、NOS、MDA的含量和降低SOD活性,有统计学意义(P0.05)。结论:刺五加有效部位对MPP+损伤PC12细胞具有一定的保护作用,其作用机制可能是通过降低PC12细胞NO、NOS、MDA的含量和LDH的漏出量,引起胞内SOD的活性增强,从而降低细胞凋亡率,提高细胞存活率而实现的。     

刺五加有效部位对MPP~+诱导PC12细胞损伤的保护作用(英文)

目的:探讨刺五加有效部对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:以不同浓度、不同作用时间的MPP+作用于PC12细胞,MTT法检测细胞存活率,考察其量效关系和时效关系。用不同浓度的刺五加有效部位处理后,与MPP+共同孵育,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪测凋亡率,紫外-可见分光光度计测LDH,NO,NOS,MDA含量,考察刺五加有效部位的保护作用。结果:刺五加有效部位终浓度达到200,400mg·mL-1时,可明显提高PC12细胞存活率,抑制细胞凋亡率,降低LDH,NO,NOS,MDA的含量,有统计学意义(P0.05)。结论:刺五加有效部位对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能是通过减少LDH漏出,降低NO,NOS,MDA的含量,从而抑制细胞凋亡,提高细胞存活率而实现的。     

葛根总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制

目的:研究葛根总黄酮对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:以HUVECs为研究对象,实验分为空白组、模型组、阳性药组(10μmol·L~(-1)依达拉奉)和葛根总黄酮10,20,40,80,160 mg·L~(-1)组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测葛根总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)及NO含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中内皮素-1(ET-1)含量;采用二氯荧光乙酰乙酸盐(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P0.01),SOD活性,NO水平和e NOS蛋白表达显著降低(P0.01),MDA,ET-1水平,细胞ROS水平和VCAM-1蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,葛根总黄酮(40,80,160 mg·L~(-1))可以显著提高氧化应激损伤的HUVECs的存活率(P0.05,P0.01),葛根总黄酮(20,40,80 mg·L~(-1))可显著增加SOD活性,升高NO水平,显著降低MDA,ET-1水平,显著降低细胞ROS水平,显著升高e NOS,降低VCAM-1的表达(P0.05,P0.01)。结论:葛根总黄酮对H2O2诱导HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD,MDA,ET-1,NO氧化应激相关因子,调控内皮细胞功能相关蛋白e NOS,VCAM-1的表达有关。     

茶多酚对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的研究茶多酚(tea polyphenols,TP)对H2O2所致大鼠嗜铬细胞PC12细胞损伤的保护作用。方法 PC12细胞用TP及H2O2处理,MTT法观察细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,流式细胞术测定细胞周期分布,BrdU免疫荧光法检测细胞周期相S期DNA合成。结果 500μmol/L H2O2作用PC12细胞2 h,细胞出现明显损伤,细胞活力下降,培养上清液中LDH量增加,DNA合成减少;5、10、20μmol/LTP预处理可有效提高细胞存活率,减少LDH渗漏,提高S期DNA合成。结论 TP对H2O2所致的PC12细胞损伤有保护作用。     

芝麻素对高糖损伤SH-SY5Y细胞的保护效果及机制

目的研究芝麻素(sesamin)对高糖所致人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用及其机制。方法SH-SY5Y细胞接种于含100 mmol/L葡萄糖的培养基并与10、20、40μmol/L芝麻素共同孵育36 h,MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平,ELISA检测DNA片段及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性。2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的水平,试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和还原型谷胱甘肽(GSH)活性。光度法检测细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性,实时荧光定量检测NADPH氧化酶亚基p47phox mRNA表达。Western blot法检测p47phox蛋白表达。结果芝麻素可增加高糖作用下SH-SY5Y细胞的存活率,抑制细胞LDH释放,阻止高糖诱导的DNA断裂,降低Caspase-3活性。同时芝麻素能够增加高糖作用下SH-SY5Y细胞内SOD、CAT和GSH的活性,清除细胞内的ROS,抑制NADPH氧化酶活性及p47phox mRNA和蛋白的表达。结论芝麻素对高糖诱导SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抗氧化和抑制NADPH氧化酶活性有关。     

安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马CA1区细胞结构及神经元损伤的保护作用

目的:探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马神经元及相关蛋白表达的影响.方法:通过随机数字表法将SD大鼠分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组.空白与模型组给予等容生理盐水,安寐丹组给药9.09 g·kg-1·d-1.褪黑素组给药0.27 g·kg-1·d-1.自制睡眠剥夺箱造模4周.Ethovision XT视频分析系统监测大...     

Partial agonistic effect of yokukansan on human recombinant serotonin 1A receptors expressed in the membranes of Chinese hamster ovary cells

Ethnopharmacological relevance

Yokukansan (YKS) is a traditional Japanese medicine consisted of seven medicinal herbs and has been used for treatment of neurosis, insomnia, and behavioral and psychological symptoms of dementia (BPSD) in Japan.

Aim of the study

The aim of the present study is to clarify the intrinsic activity of YKS on serotonin (5-HT)1A and 5-HT2A receptors and also to determine the constituent herbs which are responsible for the effect of YKS.

Materials and methods

The dry powdered extracts of YKS, seven constituent herbs, and YKS-analogues which were produced by eliminating one of the constituent herbs from YKS in the manufacturing process, were used for the evaluation. Competitive binding assays for 5-HT receptors and [³⁵S]GTPγS binding assays for the evaluation of agonistic/antagonistic activity were performed using Chinese hamster ovary cell membranes stably expressing human recombinant 5-HT1A or 5-HT2A receptors.

Results

YKS (6.25–400 μg/ml) concentration-dependently inhibited the binding of [³H]8-OH-DPAT to 5-HT1A receptors. The IC₅₀ value was estimated to be 61.2 μg/ml. In contrast, YKS failed to inhibit the binding of [³H]ketanserin to 5-HT2A receptors. Only Uncaria hook (3.13–50 μg/ml), of the seven constituent herbal extracts, inhibited the [³H]8-OH-DPAT binding to 5-HT1A receptors in a concentration-dependent manner, and the IC₅₀ value was estimated to be 7.42 μg/ml. The extracts of YKS or Uncaria hook increased [³⁵S]GTPγS binding to 5-HT1A receptors to approximately 50% of that of a full agonist, 5-HT. Both the competitive binding and [³⁵S]GTPγS binding of YKS to 5-HT1A receptors were remarkably attenuated by eliminating Uncaria hook from YKS, but it was almost unchanged when one of the other constituent herbs was eliminated from YKS.

Conclusion

These results suggest that YKS has a partial agonistic effect on 5-HT1A receptors, which is mainly attributed to Uncaria hook.