3例ABO血型鉴定正反不符患者基因序列分析——附1个新的ABO等位基因突变点位的发现

目的 探讨导致3例ABO血型正反定型不符的分子机制。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的6、7外显子;采用测序方法对ABO6、7外显子进行直接测序。结果 血型血清学试验结合基因测序证实3例标本为分别为：AwB(1例)、Ael(2例)。基因直接测序发现先证者1在A等位基因第7外显子发生了476C>T、595C>T突变,在B等位基因第7外显子526C>G、657C>T、703G>A、796C>A、803G>C、930G>A突变;先证者2、3在A等位基因第7外显子发生了476C>T和767C>T突变,两标本突变点符合Ael₀₅。以上的基因位点改变均导致了ABO血型的血清学表型变化,表现为ABO亚型。先证者3的母亲及女儿都携带Ael₀₅等位基因。结论 本研究揭示了3例ABO亚型的分子遗传背景,并发现1个新的ABO血型等位基因,即：c.595C>T单基因位点突变。     

1例A3B亚型的血清学和分子生物学结果分析及家系调查

目的 分析1例ABO血型A亚B型标本的血清学和分子生物学特征,探讨ABO亚型鉴定的准确方法。方法 采用常规血清学方法分析了1例标本ABO表型,首先使用PCR-SSP方法对样本进行ABO基因分型,再采用直接测序的方法对样本的第6、第7外显子测序确定其基因型。结果 血型血清学检测结果为A亚B型;PCR-SSP分型结果为A₁B型;测序发现标本ABO基因的第6和第7外显子存在突变：第6号外显子发生297A>G突变,第7号外显子发生467C>T、526C>G、657C>T、703G>A、745C>T、796C>A、803G>C及930G>A突变,该样本基因型为A307/B01。先证者母亲血型血清学检测结果疑似为A亚型;基因测序结果为A₃型。先证者父亲血型血清学检测结果为B型。结论 血清学实验结合分子生物学方法可准确鉴定ABO亚型,分子生物学方法还有助于探索ABO亚型的形成机制。     

一例B(A)血型的血清学及分子生物学鉴定

摘要：目的?对1例血型血清学正反定型不符的标本进行ABO血型鉴定。方法?运用血型血清学方法鉴定标本ABO血型；用PCR-序列特异性引物(SSP)基因定型和ABO基因直接测序的方法确定该标本的基因型。结果?血型血清学检测结果表现为B(A)亚型的特点；PCR-SSP分型结果定为B(A)04/O1型；测序发现标本ABO基因的第6和第7外显子存在变异：第6外显子存在261delG、297A>G；第7外显子存在526C>G、640A>G、657C>T、703G>A、796C>A、803G>C、930G>A，判断该样本血型为B(A)04/O01血型。结论?该血型血清学初步鉴定为B(A)的标本用PCR-SSP法和ABO基因直接测序法确认为B(A)04/O01型。     

2个新的ABO血型等位基因的发现和序列分析

目的 探讨4例ABO血型正反定型不符标本的遗传背景。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的7个外显子;采用测序方法对7个外显子进行直接测序。结果 血型血清学试验证实4例标本为ABO亚型,分别为:Bx(1例);ABx(1例);Ax(2例)。基因直接测序发现Bx和ABx在ABO~*B.01基础上1～6外显子未发生改变,仅在B等位基因第7外显子发生了449位核苷酸AG的突变;2例Ax在ABO~*A1.01基础上1～6外显子未发生改变,仅在A等位基因第7外显子发生了467位核苷酸CT的突变和798位插入了一个碱基T,以上的基因位点改变均导致了ABO血型的血清学表型变化,表现为ABO亚型。结论 研究揭示了4例ABO亚型的分子遗传背景。发现2个新的ABO血型等位基因,即:c.449AG单基因位点突变,c.467CT的突变和c.798insT单碱基插入。     

Bx02等位基因的鉴定及家系遗传分析

目的:对ABO正反定型不符的疑难标本进行血型鉴定,并对其家系的ABO基因的分子生物学特点进行探讨。方法:采用PCR-SSP对血清学方法定型为B亚型的先证者及其家系共5份样本做基因分型,并对其ABO血型基因第6、7外显子扩增后进行直接测序及单倍型测序,分析后确定其基因型。结果:该家系中3份标本ABO基因序列与ABO*B101相比,在第905位碱基发生了AG的突变。结合血清型学表现,先证者ABO基因型可定为Bx02/O102。结论:采用DNA序列分析法可以对ABO血型血清学正反定型不符的标本进行验证,并能阐述ABO血型正反定型不符或弱表达现象的分子基础。     

B(A)血型鉴定及其临床输血策略研究

目的:通过血清学及分子生物学检测分析1例先证者ABO血型正反不符的原因,以明确其血型及遗传规律并制定合理的输血策略。方法:根据血清学结果,利用PCR-SSP方法对1例患者及其家庭5位成员的外周血进行ABO基因外显子测序,综合分析血型结果。结果:先证者血型正反不符,分子生物学检测结果与B101对比多一个c.700C>G,符合B(A)02亚型,基因型为B(A)02/O02型;其哥哥检测结果同先证者;先证者侄子亦检测出c.700C>G,基因型为A102/B(A)02型。结论:标准血型血清学鉴定ABO血型出现正反定型不符时,利用分子生物学检测技术发现突变点是证实ABO亚型的有效方法,为临床输血提供安全保障。     

利用三代测序技术鉴定c.586T>C突变导致的Bel亚型

目的 利用PacBio三代测序技术鉴定c.586T>C突变导致的Bel亚型,并分析Bel亚型家系的血型血清学特点。方法 ABO血型表型检测使用血清学方法,对ABO正反定型不符的家系标本进行ABO基因第6、7号外显子Sanger测序。利用PacBio三代技术对先证者及其子女的3例样本进行ABO基因全长单体型分析。结果 先证者血清学表型为Bel亚型,测序技术鉴定ABO基因序列第7外显子存在c.586T>C位点突变,三代测序单体型鉴定先证者ABO基因型为ABO*BEL(c.586T>C)/O01.02,其长子和长女基因型为：ABO*A1.02/BEL(c.586T>C)、ABO*B.01/BEL(c.586T>C)。结论 c.586T>C位点突变是导致本例Bel的分子基础,PacBio三代测序技术能够精准鉴定ABO亚型单体型。     

血型血清学ABO亚型95例的分子机制研究

目的研究95例中国人群血型血清学ABO亚型个体的分子机制。方法 2013年11月—2017年10月采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行检测;采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)及第6、7外显子基因测序方法进行基因分型,其中部分标本采用了第1—7外显子的测序。结果对血型血清学方法确认的95例(73例先证者,22例家系成员)ABO亚型标本。经PCR-SSP和基因测序检测,73例ABO亚型先证者中检出A亚型基因的个体13例(17.8%),检出B亚型基因的个体17例(23.3%),检出B(A)型基因的个体22例(30.1%),共52例(71.2%,52/73);22例家系成员中检出ABO亚型基因者18例。先证者中未检出ABO亚型基因者21例(28.8%,21/73),且21例中5例(6.8%,5/73)检出O基因但表达弱A或弱B抗原;22例家系成员中4例未检出ABO亚型基因,共25例(25/95)。结论 ABO亚型的基因型与表型不完全符合,且同1个血型血清学表型对应不同的基因型,同1个基因型又表现为不同的血型血清学结果。     

1例B3亚型的分子机制及家系调查

目的分析B3亚型家系成员的血型血清学特点及分子机制。方法应用常规血型血清方法进行血型鉴定;采用PCR-SSP法进行ABO初步基因分型检测,并对ABO基因第6和第7外显子的核苷酸序列进行扩增、测序和分析。结果本家系中2人为A₁B₃亚型,血清中含有抗-B抗体;3人为B3亚型,血清中不含抗-B抗体。基因分析第7外显子上存在1054C>T突变,导致多肽链第352位精氨酸被色氨酸替换。结论基因点突变1054C>T是导致B₃亚型的分子遗传基础,且在家系中能够稳定遗传,采用分子生物学技术和人源抗血清可正确鉴定B₃亚型。     

A205亚型1例的分子生物学鉴定及家系调查

目的探讨A205亚型个体的分子生物学及家系遗传特征。方法选择2020年8月因术前血型筛查正反定型不符拟行进一步血型鉴定的1例先证者及其父母、弟弟为研究对象。先证者为男性, 17岁。采用标准血型血清学方法对受试者进行ABO亚型鉴定, 并且应用Sanger测序法确定ABO基因突变情况。并且根据血清学和分子生物学检测结果, 分析先证者血型在家系中的遗传特征。本研究经福建医科大学附属泉州第一医院伦理委员会批准(泉一伦[2021]124号), 受试者及家属均知情同意并签署知情同意书。结果① ABO血型鉴定结果显示, 先证者及其母亲的血清学分型为Ax亚型, ABO基因分型为A205/O01, Sanger测序结果显示存在c.28+5859T>G、c.261delG、c.467C>T、c.1009A>G。先证者父亲及弟弟的血清学分型为均O型。②家系调查结果显示, 先证者与其母亲ABO血型分型、ABO基因分型及测序结果一致, 先证者的ABO基因突变遗传自母亲。结论 ABO基因c.28+5859T>G单核苷酸突变可抑制A基因的转录, 而同时存在c.467C>T、c.1009...     

a-1，3-N-乙酰半乳糖胺转移酶基因EXON7突变形成A311血型基因亚型

本研究对1例产生抗A抗体的血清学正反定型不符的A血型标本进行血型血清学分析及基因分析,以了解其分子基础。采用试管法进行血型血清学的检测,采用PCR—SSP对A基因进行扩增分析,采用Sanger测序法对A血型糖基转移酶基因进行测序分析。结果表明：血清学正反定型不符,初定为A亚型;PCR-SSP扩增检测结果有O、A血型基因的存在;对ABO基因第6外显子测序发现存在c．261delG,显示有O基因;对A、O基因第7外显子进行特异性扩增测序分析显示,在A单倍型基因第7外显子出现C．467C〉T、c．626G〉A的突变,在O单倍型基因第7外显子出现C．646T〉A、681G〉A、771C〉T、829G〉A等突变。结论：该献血者在A基因第7外显子的c．626G〉A是新的等位基因突变,C．467C〉T是SNP;新突变的GenBank序列号是KC690281,被BGMUT命名为1个新的A等位基因亚型A311。     

在A型个体中发现ABO~* A213等位基因

目的鉴定A抗原弱阳性个体的血型血清学特点及基因特征。方法对1名A抗原弱阳性个体采用正反定型鉴定其ABO血型,并用PCR技术对ABO基因的7个外显子和启动子分别扩增后测序。结果血型血清学鉴定该个体表达弱A抗原,测序结果显示ABO合子型为A/O型,其中ABO*A等位基因第7外显子742位为T碱基。结论在A型个体中发现A213等位基因。     

B亚型中Bx新等位基因的鉴定

目的对ABO血型中B亚型分子遗传背景的研究,发现并鉴定ABO新等位基因。方法对5份血型血清学鉴定为B亚型的样本,采用PCR-SSP、ABO基因第6及第7外显子直接测序方法进行基因定型;并对目的B亚型样本进行RT-PCR、巢式PCR扩增、测序,分析其cDNA结构的差异。结果5份血清学为B亚型的样本中,血清学鉴定为Bx的个体发现了一个新的B等位基因。该等位基因与B101等位基因相比,差异仅在于第7外显子的B基因序列中nt721位C>T突变。其余4份B亚型样本的ABO基因第6、7外显子都未发现新的点突变。结论首次在中国汉族人中发现一个721C>T新变异的B等位基因,该等位基因nt721位由C转变为T,241位氨基酸由精氨酸转变为色氨酸,可导致糖基转移酶活性的降低,表明ABO基因的第241位氨基酸对决定糖基转移酶活性是至关重要的。     

ABO血型系统中Aw基因分子遗传背景的研究与分析

目的:研究一个含有Aw亚型中国汉族家系的ABO基因的遗传机制。方法:对1例血型血清学鉴定为Aw亚型的样本及有关家系,采用PCR-SSP扩增、DNA测序方法,以A101一致序列进行比对,对其ABO等位基因的第6外显子、第6内含子及第7外显子进行基因克隆和单倍体测序分析。结果:血清学为Aw型样本中ABO基因序列与ABO*A101相比有两个位点发生了突变467C>T,543G>T),文献中未见报道,为一个新的A等(位基因,该样本的家系5人中,2人带有这个新变异的A等位基因。结论:543位突变倒致编码ABO糖基转移酶的156位氨基酸由脯氨酸(Pro)变为亮氨酸Leu),大大降低了酶活性;这个位点对转移酶的活性(是至关重要的。     

A抗原特异性自身抗体鉴定策略探讨1例

目的对A抗原特异性自身抗体引起的正反不符进行ABO血型鉴定及经验总结。方法均采用试管法进行血型血清学检测;对ABO血型基因第6、7外显子扩增后进行直接测序。结果血型血清学鉴定正定检出A抗原反定检出抗-A,自身吸收放散证明存在A抗原特异性自身抗体。基因检测结果 A102/A102。结论血型为A型,由A抗原特异性自身抗体引起ABO正反不符至定型困难;A抗原特异性自身抗体引起的ABO正反不符可按照ABO疑难血型三步分析法进行血型鉴定。     

cisAB03血型鉴定及家系分析

目的对罕见的ABO亚型标本进行ABO血型鉴定及家系调查分析。方法采用血型血清学方法对家系标本进行ABO血型鉴定,正反定型不符的标本采用ABO血型基因检测及cisAB与B(A)血型基因分型等分子生物学方法,并分析血型遗传规律。结果该家系调查发现2例血清学结果正反定型结果不符,1例血清学正定型为AB型,反定型为O型,ABO基因型为cisAB03/O2型。另1例标本正定型为AB型,反定型为B型,ABO基因型为cisAB03/B型。结论对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,并能阐述ABO血型弱表达现象的分子基础。     

ABO亚型B(A)04鉴定及家系调查

目的对罕见的ABO亚型标本进行ABO血型鉴定及家系调查分析。方法采用血型血清学方法对家系标本进行ABO血型鉴定,同时采用PCR-SSP方法检测红细胞ABO血型基因及ABO cisAB与B(A)血型基因分型,并分析血型遗传规律。结果该家系调查发现2例血清学结果正反定型结果不符,均为血清学结果为正定型AB型,反定型B型,ABO基因型为B(A)04/O2型。结论对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,并能阐述ABO血型弱表达现象的分子基础。     

疑似AB3亚型的罕见开米拉血型的研究——附1例报道

目的进行1例疑似AB₃亚型的献血者血型分子生物学研究。方法用常规血型血清学方法进行ABO血型鉴定;对ABO基因的外显子6和外显子7扩增后进行直接测序和单克隆测序;通过短串联重复序列检测分析14个基因位点。结果该献血者血清学表现为AB₃亚型,而ABO基因分型、序列测定以及STR-PCR检测的多个位点均存在2个以上的等位基因。结论该献血者非AB₃亚型,而是罕见的卡米拉血型。     

Bx02等位基因的鉴定及其编码GTB酶3D建模

目的 对2例ABO正反定型不一致的血液标本进行鉴定并探索其分子机制。方法 采用血清学标准方法对2例ABO正反定型不一致的标本进行ABO血型鉴定,采用PCR-SSP技术进行ABO基因分型,并对ABO基因外显子6和7进行直接测序和克隆测序。应用Pymol软件模拟3D结构模型并预测GTB蛋白突变对结构影响。同时采集先证者父亲的血液标本进行检测。结果 先证者红细胞检测有B抗原,血清中有抗-B。PCR-SSP基因分型结果为O1/B。直接测序显示第6外显子261delG/G、297A/G,第7外显子526C/G、646A/T、657C/T、681A/G、703A/G、771C/T、796A/C、803C/G、829A/G、905A/G、930A/G和1096A/G杂合,基因型为Bx02/O02。克隆测序结果与ABO*B. 01等位基因相比较,905位存在A>G突变。3D结构模拟提示Asp302Gly可能造成GTB酶活性或功能改变。结论鉴定了2例Bx02等位基因,血清学和基因分型的方法联合检测对于准确鉴定ABO血型有重要意义。     

血清学鉴定与基因检测互补验证ABO疑难血型的应用探讨

目的:探讨血型基因检测结合血清学方法在ABO疑难血型鉴定中的应用。方法:对7例ABO疑难血型标本进行血清学正反定型(必要时增加唾液ABH血型物质测定或吸收放散试验),采用PCR扩增、直接测序法进行ABO、H、SE基因检测。结果:7例ABO疑难血型标本的血清学表型为,类孟买血型3例,B(A)2例,Bw 2例。基因检测发现,3例类孟买血型均存在H基因突变的等位基因,分别为1例FUT1*01N.13/01N.13,2例FUT1*01N.06/01N.06;3例ABO血型亚型存在相应亚型等位基因,分别为1例BA.04/O.01.02,1例BA.04/O.01.01,1例B3.03/O.01.01;还有1例ABO亚型未检出ABO基因突变。结论:H基因与ABO基因第6、7外显子直接测序对类孟买血型和包括B(A)亚型在内的部分ABO亚型具有明确的鉴定意义,应在各级医院输血科建立及推广。