不同容量一次性加样针对全自动Addcare ELlSA检测的影响

目的 评价不同容量一次性加样针对全自动Addcare ELISA检测结果的影响,特别是加样量属微量的试验.方法分别用300μl和800μl的一次性加样针分配纯水10μl、50μl和100μl,称重并计算相对误差和精密度;各选一份HBsAg、抗-HBs、 抗-HCV、 抗-HEV IgM以及抗-HEV IgG室内定值弱阳性质控品,在全自动Addcare ELISA 600分析系统分别用300μl和800μl一次性加样针进行检测,计算该五个项目各孔间S/CO值和CV值,并进行统计学分析.结果两种容量加样针分配10μl、50μl和100μl纯水的相对误差E和精密度CV均达到移液器国家计量基准,使用300μl容量加10μl和50μl的准确度明显优于800μl(P<0.05),加100μl差异无统计学意义(P>0.05),使用300μl容量三种加样量的CV值均小于800μl;两种容量加样针检测抗-HBs、抗-HCV和抗-HEV IgM的S/CO值有显著差异(P<0.05),HBsAg和抗-HEV IgG无显著差异(P>0.05),使用300μl容量加10μl项目各孔间S/CO值的CV值明显小于800μl.结论不同容量一次性加样针对加样量10μl和50μl的检测项目影响较为明显,在使用全自动Addcare ELISA检测时,应当选择适当容量的加样针以满足微量样本分配准确度和精密度的要求.     

不同容量一次性加样针对全自动Addcare ELISA检测的影响

目的评价不同容量一次性加样针对全自动Addcare ELISA检测结果的影响,特别是加样量属微量的试验。方法分别用300μl和800μl的一次性加样针分配纯水10μl、50μl和100μl,称重并计算相对误差和精密度;各选一份HBsAg、抗-HBs、抗-HCV、抗-HEV IgM以及抗-HEV IgG室内定值弱阳性质控品,在全自动Addcare ELISA 600分析系统分别用300μl和800μl一次性加样针进行检测,计算该五个项目各孔间S/CO值和CV值,并进行统计学分析。结果两种容量加样针分配10μl、50μl和100μl纯水的相对误差E和精密度CV均达到移液器国家计量基准,使用300μl容量加10μl和50μl的准确度明显优于800μl(P0.05),加100μl差异无统计学意义(P0.05),使用300μl容量三种加样量的CV值均小于800μl;两种容量加样针检测抗-HBs、抗-HCV和抗-HEV IgM的S/CO值有显著差异(P0.05),HBs Ag和抗-HEV Ig G无显著差异(P0.05),使用300μl容量加10μl项目各孔间S/CO值的CV值明显小于800μl。结论不同容量一次性加样针对加样量10μl和50μl的检测项目影响较为明显,在使用全自动Addcare ELISA检测时,应当选择适当容量的加样针以满足微量样本分配准确度和精密度的要求。     

酶结合物效价下降引起抗-HCV检测失控原因分析

20 0 2年 6月 ,笔者检测抗 -HCV时 ,先后出现 3次失控现象 ,均为阳性对照和质控物 OD值低于要求 ,经过对仪器、人员、试剂、质控物的排查 ,发现是由于试剂盒保存不当引起酶结合物失效 ,为引起同行和试剂厂家重视 ,报告如下。材料与方法1　检测对象　绍兴市无偿献血者。2　试剂与仪器　抗 -HCV检测试剂为国内某厂家生产 ,经中国药品生物检定所批批检定 ,批号 2 0 0 2 0 0 2 2 0 ,HCV 2NCU质控物由卫生部临检中心提供 ,批号 0 2 0 2 ,以上各种试剂均在有效期内使用 ;TECANRSP-1 5 0全自动加样器(瑞士 TECAN公司 ) ,TECAN全自动洗…     

不同容量规格一次性加样针对抗-HCV酶联免疫吸附实验的影响

目的 评估帝肯Freedom EVO 150全自动加样仪使用1 000与200 μL两种不同容量规格的一次性加样针对抗-HCV酶联免疫吸附实验的影响.方法 选1份抗-HCV弱阳性标本和稀释后血清标准物质作为待检样本,用两种酶免试剂在全自动加样仪上使用不同规格的一次性加样针进行加样检测,并对检测结果进行灵敏度、孔间精密度和符合性对比分析.结果 应用200与1 000 μL两种不同容量规格一次性加样针加样后,在两种抗-HCV酶免试剂检测各孔间S/CO值统计结果CV值差异有统计学意义(P<0.05).结论 应用全自动加样仪进行加样时,应选用满足微量样本移取精度要求的一次性加样针,避免因使用不当容量规格的一次性加样针而导致血液检测质量事故的发生.     

小型血站实验室设备性能比对方法探讨

目的探讨小型血站血液检测实验室设备性能比对的方法。方法比较2台不同型号的全自动加样仪、2台同系列全自动酶免后处理系统检测性能的一致性:使用4种ELISA检测试剂,分别检测HBs Ag、抗-HCV、抗-HIV、梅毒定值质控品和20份常规献血者标本,应用χ2检验和Kappa检验,比较上述2组设备检测结果的一致性。结果1)2台全自动加样仪抗-HCV、抗-HIV定性检测加样的一致性较好。2)2台同系列全自动酶免后处理系统,4种试剂一致性均为100%(40/40),经χ2检验一致性无统计学差异(P0.05)。结论小型血站实验室可以通过对定值质控品,和常规献血者标本的检测结果进行处理分析,比对酶免检测设备之间的性能是否一致。     

抗-HCV免疫测定室内质控图连续性的应用

目的探讨不同ELISA检测试剂室内质控图连续性使用的方法。方法不同批试剂同时测定系列质控血清，得系列质控血清的S／CO值，根据系列质控血清的浓度及其S／CO值之间的关系，分别得不同批号试剂的直线回归方程（y=a＋bX），从而得不同批号试剂之间的换算关系，即可将新批号试剂测定同一批号、同一浓度质控血清的S／CO值换算回原批号试刺所测的S／CO值，可在原质控图上连续描点。结果针对同一质控血清不同批号试剂的检测结果，应用统计学的直线回归与相关分析，可使室内质控图连续性使用。结论室内质控图的连续性使用，可解决由于试剂的更换而更换质控图的问题，避免“即刻法”质控本身固有的缺陷，为室内质控工作带来方便。     

影响FAME全自动酶免分析系统检测因素探讨

目的　探讨 3种常见的影响全自动酶免分析系统检测结果的因素 ,提高 ELISA法检测结果的准确性。方法　 ( 1 )随机选择对照组和实验组各 44份无偿献血者血样 ,分别进行两种不同方式的抗凝 ,应用 FAME全自动酶免分析系统进行 HBs Ag、抗 -HCV、抗 -HIV、TP4个项目检测 ,比较两组检测结果。 ( 2 )在全自动加样仪的加样高度设置中 ,不断增加加样高度 ,观察 FAME对 4个质控血清平行孔的检测效果。( 3 )在不同温度的 FAME洗液下 ,对 88份正常的无偿献血者血样进行 4个项目检测 ,观察不同温度的洗液对检测结果的影响。结果　 ( 1 )除抗 -HCV外 ,实验组中其他 3项检测结果均有假阳性出现 ,且阴性标本的 S/CO值明显高于对照组 ( P<0 .0 0 1 )。( 2 )当加样高度低于 9.1 mm时 ,抗 -HCV有假阴性出现 ,4项检测的 CV值均较高 ,均一性差。 ( 3 )洗液温度低于 1 4℃时 ,除抗 -HCV外 ,其他 3项检测结果有假阳性出现 ,CV值较高 ,均一性差。结论　标本的抗凝效果、全自动加样仪的加样高度和洗液温度对全自动酶免检测结果均有影响 ,只有在血样充分抗凝、加样高度和洗液温度适当等条件下 ,才能获得准确的检测结果     

探讨振荡方式与进板时间对全自动酶免检测抗-HCV的影响

目的 分析反应板的不同振荡混匀方式与延迟进板时间对FAME全自动酶免分析仪检测弱反应性丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）的影响,提高酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗-HCV结果的准确性.方法 选择ELISA法双试剂检测抗-HCV弱反应性标本16例,用STAR全自动样品分配仪加样.振荡方式一：1号反应板加样后,立即振荡混匀,延迟进入FAME孵育箱时间.振荡方式二：2号反应板延迟振荡,振荡结束立即进入FAME孵育箱.振荡方式三：3号反应板不振荡,延迟进入FAME孵育箱时间.后处理由FAME全自动酶免分析仪自动完成,每个标本检测3次,取均值,结果用S/CO值表示.结果 振荡方式和延迟进板时间对弱反应性抗-HCV检测结果的影响均有统计学意义（F=140.18,P＜0.01;F=62.39,P＜0.01）.振荡方式与延迟进板时间的交互作用具有统计学意义（F=2.94,P＜0.05）.结论 STAR加样结束,反应板要立即振荡混匀,尽量不要拖延振荡混匀和进入FAME孵育箱时间,以避免假阳性结果的出现.     

酶联免疫吸附试验中HBsAg室内质控参考品的制备和应用

目的建立室内质控参考品以鉴别诊断试剂的质量和控制操作误差,提高乙型肝炎病毒表面抗原的检测准确度.方法以国家标准品为标准制备灵敏度系列参考品、特异性参考品及精密性参考品.检测其稳定性,并进行同厂家、不同批号试剂的比较及不同厂家、三批试剂的比较.结果制备的室内质控参考品在-20℃与4℃保存3～4周检测结果无统计学差异.采用同一厂家、不同批号的HBsAg诊断试剂检测室内质控参考品,结果无统计学差异.采用不同厂家、同一批号的HBsAg诊断试剂检测结果有统计学差异.结论我们建立的室内质控参考品适宜作HBsAg室内质控,提醒我们在更换试剂厂家时应特别注意室内质控参考品的变化.     

酶联免疫吸附试验中HBsAg室内质控参考品的制备和应用

目的建立室内质控参考品以鉴别诊断试剂的质量和控制操作误差,提高乙型肝炎病毒表面抗原的检测准确度。方法以国家标准品为标准制备灵敏度系列参考品、特异性参考品及精密性参考品。检测其稳定性,并进行同厂家、不同批号试剂的比较及不同厂家、三批试剂的比较。结果制备的室内质控参考品在-20℃与4℃保存3～4周检测结果无统计学差异。采用同一厂家、不同批号的HBsAg诊断试剂检测室内质控参考品,结果无统计学差异。采用不同厂家、同一批号的HBsAg诊断试剂检测结果有统计学差异。结论我们建立的室内质控参考品适宜作HBsAg室内质控,提醒我们在更换试剂厂家时应特别注意室内质控参考品的变化。     

抗肺炎支原体IgG定性测定的室内质控物浓度的选择和批间连续质控延续方法的建立

目的建立抗肺炎支原体IgG定性测定的室内质控物浓度的选择方法和批间连续质控的延续方法。方法选择系列质控血清中S/CO值减去精密度测定中得到的3倍批间CV与该S/CO值的乘积仍大于1.0者用来监测试验重复性,选择S/CO处于1.5左右的质控血清以判断试剂盒测定下限的有效性。使用新旧两个批号试剂盒同时检测系列质控血清得到线性回归的直线方程,计算得到换算因子,用以将新批号试剂测定值换算至原批号试剂测定值,继续使用原质控图。结果通过实验能够选择合适浓度的质控物用以判断检测重复性和试剂盒测定下限的有效性。能够得到不同批号间质控测定的换算因子用以有效延续质控图。结论通过上述方法能够有效选择抗肺炎支原体IgG定性测定的室内质控物浓度,并建立批间连续质控的延续方法。     

血液保养液对抗-HCV检测影响的探讨

目的探讨CPD血液保养液(以下简称CPD)对抗-HCV检测的影响。方法用CPD以5%的幅度对3种浓度的抗-HCV阳性质控物进行梯度稀释后用ELISA方法进行平行检测,观察S/CO值变化情况。随机抽取抗-HCV阳性和阴性献血者各60名,对其试管样本和血袋管样本做ELISA检测比较。结果阳性质控实验组的S/CO值均随保养液的量增加而逐渐降低;阳性物浓度降低5%,S/CO值均有明显降低(P(0.05);其中阳性物浓度95%的S/CO值降低极显著(P(0.01)。试管和血袋管的抗-HCV阳性样本检测结果有差异,弱阳性样本较为明显。结论CPD对ELSIA检测抗-HCV弱阳性样本影响明显,易造成弱阳性样本的漏检。     

抗-HCV结果分析及灰区范围设置的探讨

目的分析酶联免疫吸附试验(ELISA)筛查丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)结果,探讨实验室ELISA中灰区范围设置的必要性。方法回顾性分析34 942例患者抗-HCV筛查结果,比较抗-HCV与HCV-RNA及临床确诊丙型肝炎患者间的关系;以初筛S/CO值在0.4~2.0范围内的标本为灰区样本,进行不同厂家试剂复检及HCV-RNA检测,探讨设置抗-HCV检测灰区范围的必要性。结果抗-HCV筛查阳性率0.61%;31~50岁阳性率最高;男性高于女性,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。S/CO≥10时抗-HCV与HCV-RNA检测结果符合程度高,S/CO≥3.8时抗-HCV与临床确诊丙型肝炎符合程度高。灰区样本的阳性率0.38%,双试剂双孔复检后阳性率0.20%和0.05%。结论抗-HCV筛查阳性率在不同地域、性别及年龄段存在差异;S/CO值越大,HCVRNA阳性率越高,与临床丙型肝炎的确诊符合程度越高,而抗-HCV筛查落在灰区范围的样本应复检并检测RNA,以减少实验室漏检或假阳性结果的产生。     

温育时间对全自动酶免疫分析系统检测的影响

全自动酶免疫系统存在进板后降温再升温的过程,使ELISA检测板在37℃条件下实际温育时间缩短,可导致弱阳性样本漏检。为此,我们记录了温育塔内温度变化情况,并改变温育时间,观察不同温育时间下检测结果。1材料及方法1.1样本来源HBsAg质控品(1 IU/mL)、抗-HCV质控品(2 NCU/mL)、抗-HIV质控品(2 NCU/mL)、抗-TP质控品(1NCU/mL)均购自北京康彻思坦公司,HBsAg质控品批号为     

核酸转录介导的扩增中室内质控方法的探讨

目的 比较箱体图法和Levey-Jennings质控图法在转录介导的扩增中对室内质控的监测情况.方法 每天使用同一台机器检测同一批号的HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA室内质控品的待测物信号/临界值(S/CO值).使用SPSS17.0软件绘制箱体图并判断离群值,并用K-S检验判断室内质控品S/CO值是否服从正态分布;使用Excel软件连续测定前20次室内质控品的S/CO值为参数绘制Levey-Jennings质控图.结果 共收集86组HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA室内质控品S/CO值,箱体图法分别出现2次、0次、1次离群值;Levey-Jennings质控图法分别出现4次、4次、6次失控值;室内质控品S/CO值经过K-S检验服从正态分布(P>0.05),适用于Levey-Jennings质控图的绘制.结论 应用外部质控品S/CO值绘制的Levey-Jen-nings质控图法相对于箱体图法,更有助于检验核酸检测体系的稳定性.     

STAR加样器加抗-HCV稀释液引起整排污染解决方法

目前，国内STAR采用钢针加样引起拖带污染已有报道，但是，最近笔者发现STAR加样钢针加抗-HCV稀释液可引起整排污染，为此，笔者对STAR钢针进行分析研究并提出改进方法，可克服STAR加样钢针引起的抗-HCV整排污染，报告如下。     

应用即刻性进行抗-HCV检测的室内质控

目前国内检测抗 -HCV的 ELISA法大多参照生化的质控方法 ,即选择弱阳性标本为质控物 ,以 x质控图法控制日常工作的精密度 ,判断实验的有效性。但由于 ELISA检测试剂有效期短 (一般为 6个月 ) ,用同一批号试剂盒连续常规检测 2 0次难度大 ,有一定的局限性。笔者结合 x质控图和“即刻性”质控的优点 ,建立了抗 -HCV的即刻性 x质控图方法 ,现介绍如下。材料与方法1　试剂与质控物　试剂为厦门新创公司生产 ,批号 2 0 0 2 0 45 80 5。 2 Ncu/ml低值质控物购自上海市血液中心 ,批号2 0 0 1 0 81 5。阴性质控物则取 A值在 0 .0 2～ …     

抗-HCV酶免诊断试剂质量探析

抗-HCV酶免诊断试剂广泛应用于临床血液标本的检测,为了选择灵敏性高、特异性强、适合本实验室的试剂,本院对五个厂家的国产试剂进行了招标,采用检测丙型肝炎诊断试剂国家参考品与预期结果比较,运用2NCU/ML抗-HCV定值血清S/co值,并使用抗-HCV ELlSA试剂进行漏检抗体谱分析的方法进行,以选择适合本实验室的试剂。1材料与方法1.1试剂5个厂家的国产抗-HCV ELISA试剂分别来自北京、上海、珠海的酶免诊断试剂厂,均经过卫生部批批检定合格,且用代号H1-H5表示。批号分别为20030906、20030808、20030916、20030718和20030915。1.2参考品…     

STAR超细加样尖在抗-HCV ELISA检测中的应用

目的探讨分析STAR超细加样尖（300μl SLIM Tips）在抗-HCVELISA检测中加样的可靠性。方法全自动加样器利用STARSLIM超细加样尖吸取混合浆10μl，称重并计算精密度和偏差范围；分配1NCU／ml抗-HCV血清1份为16孔（A组），用正常样本血浆倍比稀释1NCU／ml抗一HCV血清为1；2、1：4及1：8各1份并均分配为16孔（A1-A3组）；1份抗-HCV可疑样本分配为16孔（B组）及1份抗-HCV阴性样本分配为8孔（C组），然后用FAME24／20全自动酶免分析仪进行检测并分析。结果加样的精密度和偏倚范围均可满足检测要求，所有样本符合率100％，重复性和均一性满足试验要求。结论STAR全自动加样仪可以使用300μl超细加样尖进行抗-HCVELISA检测。     

加样针污染致不同项目拖带情况分析

目的探讨不同项目、不同值域的拖带规律,为制订拖带克服措施和献血者(血液)保留淘汰策略提供依据。方法各个项目均用RSP100(4针型)全自动加样仪加样,用同样的冲洗程序和冲洗量进行加样针冲洗,用FAME16/20全自动酶免分析仪进行后处理,从第2列开始,以列为序,阳性孔后每间隔3孔有1孔有反应,取原标本和重采标本经手工加样复检阴性即纳入拖带污染统计。将阳性孔按S/CO值进行分组,对不同阈值造成拖带的情况进行评价。结果不同项目的拖带程度和频率有明显差异,抗-HIV项拖带最为严重,抗-HCV项次之,TP和HBsAg最低,拖带率随着S/CO值的升高而升高,当样本测定值在Cut off值的20倍以上时,抗-HIV项可有80%的样本发生拖带,抗-HCV项可有40%的样本发生拖带。结论加样针老化是造成拖带率逐年上升的主要原因,各项目拖带情况不一与样本的阳性程度、试剂灵敏度、加样量有关,拖带的预防应从做好仪器维护保养、加大加样针的洗涤时间和洗涤量、推广使用一次性加样针、献血前进行快速检测筛除阳性程度较高的标本等方面进行考虑。