FTY720诱导多发性骨髓瘤细胞株U266自噬与凋亡的研究

目的 探讨新型免疫抑制剂FTY720对多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡及自噬的影响,并探讨相关的作用机制.方法 0、2.5、5.0、10.0及20.0μmol/L FTY720处理U266细胞24h后,应用CCK-8方法检测不同浓度FTY720对U266细胞生存率的影响;20.0μmol/L FTY720分别处理细胞0、2、6及24h,通过CCK-8方法检测FTY720作用不同时间对U266细胞生存率的影响.同时应用流式细胞术Annexin Ⅴ-FITC/PI染色检测相应的细胞凋亡率.不同浓度FTY720处理U266细胞后,应用Western blot法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)B的表达,明确应用FTY720后是否引起细胞发生自噬.FTY720单用或联合应用自噬抑制剂Bafilomycin A1处理U266细胞24h,检测细胞生存率及凋亡率,并检测其对抗凋亡因子survivin表达的影响.结果 应用FTY720后,U266细胞生存明显受抑制,可引起细胞发生凋亡,作用呈浓度及时间依赖性.LC3B-Ⅱ表达明显增加,呈浓度依赖性,表明FTY720可引起细胞发生自噬.应用自噬抑制剂Bafilomycin A1后,可解救FTY720引起的细胞生存抑制及凋亡,同时可解救FTY720引起的survivin表达下降.结论 FTY720可引起U266细胞发生凋亡及自噬,自噬对凋亡具有促进作用.其机制可能为通过自噬在溶酶体降解了survivin等抗凋亡因子或其上游调控因子,从而促进细胞凋亡.     

鞘氨醇-1-磷酸酯受体拮抗剂对抗肾小球基底膜肾炎的影响

目的观察鞘氨醇-1-磷酸酯受体拮抗剂720(sphingosine-1-phosphate receptor agonist 720,FTY720)对C57BL/6小鼠抗肾小球基底膜肾炎模型(Anti-GBM GN)的干预作用并对其作用机制进行探讨。方法选择健康雄性C57BL/6小鼠52只,给予兔IgG(500μg)加完全弗氏佐剂皮下注射进行预免疫,5d后从中随机抽取8只作为正常对照组,经尾静脉注射同剂量的非抗体性的正常兔血清,其余44只小鼠取灭活兔抗小鼠GBM抗血清0.3mL/20g经尾静脉注射。44只小鼠按随机化原则分组,FTY0.3mg/(kg·d)组(n=8)尾静脉注射6h后0.3mg/(kg·d)FTY720灌胃;FTY3mg/(kg·d)组(n=8)3mg/(kg·d)FTY720灌胃;FTY5mg/(kg·d)组(n=8)5mg/(kg·d)FTY720灌胃;FTY10mg/(kg·d)组(n=8)10mg/(kg·d)FTY720灌胃;Anti-GBM GN组(n=12)为模型组,同等剂量的无菌生理盐水灌胃。观察小鼠实验室指标及肾脏组织病理学改变情况。实时定量PCR检测小鼠脾脏鞘氨醇-1-磷酸脂(sphingosine-1-phosphate,S1P)受体S1P1～S1P5mRNA表达变化。流式细胞仪检测CD4+T细胞的凋亡情况。结果治疗组小鼠的尿蛋白、血肌酐、尿素氮和血胆固醇水平明显降低,血浆白蛋白明显增高;治疗组小鼠肾脏组织学病变明显减轻。与模型组相比,用药各组随着用药剂量增加S1P1、S1P2、S1P5的表达量逐渐减少,差异有显著性;S1P3、S1P4的表达量无明显变化,差异无显著性。流式细胞仪检测结果表明FTY720促进小鼠脾脏CD4+T细胞凋亡。结论 FTY720可能通过下调S1P1、S1P2、S1P5mRNA表达,促进CD4+T细胞凋亡,减轻抗肾小球基底膜肾炎模型的肾脏组织学改变,从而减少蛋白尿、稳定肾功能。     

FTY720治疗多发性硬化的疗效与安全性系统评价

目的系统评价FTY720治疗复发缓解型多发性硬化(RRMS)的疗效与安全性,为临床应用提供参考。方法计算机检索MEDLINE、EMbase、Cochrane Liabrary、CBM、CNKI,查找有关FTY720治疗复发缓解型多发性硬化的随机对照试验(RCT),检索时限均为从2001年1月1日至2010年12月31日。按纳入排除标准选择文献、提取资料,并以改良Jadad量表评价纳入研究的质量后,采用RevMan 5.1软件进行Meta分析。结果共纳入3个高质量RCT。Meta分析结果显示:①与对照组相比,口服FTY720可显著降低和减少年化复发率[OR=–6.67,95%CI(–10.75,–2.60),P=0.001]、残疾恶化进展患者比例[OR=0.64,95%CI(0.47,0.87),P=0.004]和核磁共振脑部钆强化病变的患者比例[OR=0.28,95%CI(0.21,0.37),P<0.000 01]。②0.5 mg/d和1.25 mg/d FTY720组间疗效差异无统计学意义(P=0.55)。③3种不同剂量(5 mg/d、1.25 mg/d、0.5 mg/d)的FTY720的安全性比较,FTY720 0.5mg/d组安全性最好。结论 FTY720治疗RRMS的安全性好,可显著降低RRMS患者的年化复发率,减少残疾恶化进展和核磁共振脑部钆强化病变。不同剂量的FTY720治疗RRMS无剂量-效应关系,其中以口服0.5 mg/dFTY720安全性最好。     

FTY720诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡的机制研究

目的:探讨FTY720对多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的影响及相关作用机制。方法:FTY720 2.5、5、10及20μmol/L处理U266细胞24 h后,流式细胞术Annexin-V-FITC/PI染色检测细胞凋亡。应用FTY720 20μmol/L分别处理U266细胞0、6、16及24 h,检测细胞凋亡率。二甲基亚砜(DMSO)及FTY720 20μmol/L分别处理U266细胞24 h,DAPI染色5 min,将细胞滴于载玻片上,在荧光显微镜下观察细胞核形态。FTY720 5μmol/L单用或/和泛Caspase抑制剂Z-VAD-fmk 12.5、25、50μmol/L合用处理U266细胞,CCK-8方法检测细胞生存率。FTY720 0、2.5、5、10及20μmol/L处理U266细胞24 h后,使用Western bolt方法检测Cleaved Caspase-3的表达。FTY720 0、5、10及20μmol/L处理U266细胞24 h后,应用Western blot检测M CL-1、survivin、BCL-2、BID、BAX、BAK和P-ERK的表达。结果:FTY720明显增加U266细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性(r=0.98,r=0.97,P0.05),在荧光显微镜下可观察到,FTY720处理的细胞的细胞核出现核固缩及碎裂,发生凋亡的改变,而在DM SO组未观察到此现象。Z-VAD-fmk可逆转FTY720引起的细胞凋亡,呈浓度依赖性(r=0.97,P0.05)。FTY720可引起U266细胞M CL-1、Survivin、BCL-2表达下降,同时引起BID裂解,而对BAX,BAK,P-ERK的表达没有影响。结论:FTY720可引起U266细胞凋亡,该凋亡为Caspase-3依赖性死亡。FTY720诱导产生的凋亡是通过下调抗凋亡蛋白MCL-1、survivin、BCL-2及激活促凋亡蛋白BID实现的。     

雷帕霉素干预TRALI大鼠肺组织mTOR信号通路下游蛋白p70s6k/p-p70s6k表达与肺病理变化研究

目的建立SD大鼠输血相关急性肺损伤(TRALI)模型,探讨雷帕霉素干预TRALI大鼠肺组织m TOR信号通路下游蛋白p70s6k/p-p70s6k表达与对肺损伤病理变化的影响。方法 SD大鼠30只随机分成3组(10只/组),TRALI模型组:LPS 2 mg/kg腹腔注射+人血浆5 m L/kg静脉注射;雷帕霉素干预组(Rapa组):Rapa 10 mg/kg连续3 d灌胃+TRALI模型;对照组:假手术处理。观察各组大鼠临床症状、肺组织病理变化及p70s6k/p-p70s6k蛋白表达情况。结果 TRALI大鼠的主要临床表现为呼吸困难及内毒素样等症状,症状出现率TRALI组较对照组明显增加(P0.05),Rapa组较TRALI组无明显变化(P0.05)。TRALI组、Rapa组和对照组大鼠肺损伤病理综合评分分别为9.30±2.21 vs 6.60±1.78 vs 2.60±1.82(P0.01)。TRALI组、Rapa组和对照组大鼠肺组织的磷酸化蛋白p-p70s6k表达的Western blot条带半定量结果分别为0.566 4±0.032 9 vs 0.114 2±0.006 4 vs 0.438 4±0.022 1(P0.01)。结论 TRALI病程中m TOR信号通路明显活化,应用Rapa可有效抑制m TOR信号通路过度活化状态,并能部分缓解肺组织病理损伤程度。     

输血相关急性肺损伤对大鼠血浆和肺组织血管生成素-2表达的影响

目的探讨输血相关急性肺损伤(TRALI)时血浆和肺组织中血管生成素-2(Ang-2)的表达及其意义。方法选择60只SD大鼠,按随机数字表法分为生理盐水(NS)对照组、脂多糖(LPS)对照组、TRALI模型组、急性肺损伤(ALI)对照组,每组15只。采用"LPS-血浆二次打击"法复制TRALI大鼠模型。NS对照组腹腔注射NS 2 mL,移除大鼠血液1 mL后输注等体积NS。LPS对照组大鼠腹腔注射2 mg/kg LPS(1 min内注完)1 mL 2 h后静脉输注等体积NS。TRALI模型组腹腔注射2 mg/kg LPS 1 mL,2 h后静脉输注血浆1 mL。ALI对照组静脉输注5 mg/kg LPS 1 mL诱导ALI。制模完成后处死大鼠取肺组织观察病理学改变并进行肺损伤评分;取支气管肺泡灌洗液(BALF)检测细胞总数、中性粒细胞比例(NEUT);用蛋白质免疫印迹试验(Western Bolt)检测血浆中Ang-2蛋白表达;免疫组化法观察肺组织中Ang-2阳性表达;实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肺组织中Ang-2 mRNA表达水平。结果光镜下可见,NS对照组大鼠肺组织结构清楚,肺泡壁结构完整,肺泡内未见炎性细胞渗出及肺泡萎陷,肺泡间隔均一无增宽;LPS对照组肺泡间隔轻度增宽、有少量炎性细胞浸润;TRALI模型组肺泡间隔增宽、中等量出血并有较多炎性细胞浸润;ALI对照组肺内大量炎性细胞浸润,间质水肿加重,伴出血、微血栓及灶性肺不张。ALI对照组、TRALI模型组血浆Ang-2蛋白和肺组织Ang-2 mRNA表达均显著高于NS对照组、LPS对照组[Ang-2蛋白(灰度值):0.58±0.09、0.43±0.07比0.12±0.03、0.20±0.05,Ang-2 mRNA(2~(-ΔΔCt)):0.39±0.10、0.29±0.09比0.10±0.05、0.16±0.04,P均0.01];ALI对照组、TRALI模型组BALF细胞总数(×10~6/L:361±78、310±76比101±63、165±65)、NEUT(0.396±0.125、0.335±0.115比0.098±0.035、0.114±0.041)均明显高于NS对照组和LPS对照组(P均0.05);ALI对照组、TRALI模型组病理学评分、肺湿重/体重比值和动脉血氧分压(PaO_2)均显著高于NS对照组和LPS对照组(P均0.05)。ALI对照组与TRALI模型组各项指标比较差异无统计学意义(P均0.05)。结论TRALI大鼠肺组织和血浆中Ang-2的表达升高,提示Ang-2可能参与了TRALI病理生理过程。     

新型免疫抑制剂FTY720在器官移植及眼科中的应用

FTY720是冬虫夏草提取物ISP-Ⅰ经过修饰合成的新型免疫抑制剂,不同于环孢素A、FK506等其他免疫抑制剂,具有独特的作用机制和很强的免疫抑制活性.文章从FTY720的免疫抑制机制入手,以FTY720诱导淋巴细胞凋亡和调节外周成熟淋巴细胞游走的免疫抑制机制为基础,并探讨FTY720的药理作用,证实了FTY720在器官移植动物模型中、免疫性疾病模型中、肿瘤疾病模型中、缺血再灌疾病模型中起着重要的作用,但FTY720在眼科的应用还处于基础阶段.     

ROS在FTY720诱导U266细胞死亡中的作用机制研究

本研究探讨活性氧（ROS）在FTY720诱导多发性骨髓瘤U266细胞株凋亡及自噬中的作用。不同浓度FTY720处理U266细胞24 h后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot检测LC3B的表达。结果显示：应用FTY720可引起U266细胞发生凋亡及自噬,自噬的发生可促进细胞死亡。自噬抑制剂Bafilomycin A1可降低FTY720导致的细胞生存率下降。应用ROS抑制剂NAC或Tiron后,FTY720引起的细胞凋亡减轻,联合应用NAC或Tiron和FTY720后LC3B-Ⅱ表达较单用FTY720明显下降。结论：FTY720可诱导U266细胞发生凋亡及自噬,ROS是FTY720引起的多发性骨髓瘤细胞凋亡及自噬的共同调节剂。     

内皮祖细胞移植对输血相关急性肺损伤小鼠模型保护作用的研究

目的建立输注人类血浆小鼠输血相关急性肺损伤(TRALI)模型,观察内皮祖细胞(EPC)移植对小鼠肺部炎性免疫反应及组织病理特点的影响。方法 BALB/C雄性小鼠36只,随机分为TRALI组(n=12):腹腔注射脂多糖(LPS),每代谢体质量用量为2mg,2h后经过静脉输注人血浆,注射量为每只1mL;EPC组(n=12):同TRALI组的方法造模后,经尾静脉注入EPC(3×10~6个);正常对照组(n=10):采用假手术处理。光镜分析各组小鼠肺组织病理及湿干比变化。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果 TRALI模型组小鼠肺组织出现肺泡间隔增厚、肺泡内纤维蛋白浸润、肺泡内出血、支气管壁增厚等病理变化,肺组织湿干比增高,EPC组以上病理变化较TRALI组不明显,肺组织湿干比也低于TRALI组,高于正常对照组(P0.05)。TRALI组实验动物的BALF中IL-10、IL-1β、TNF-α含量均显著高于正常对照组和EPC组(均P0.05),EPC组BALF中IL-10、IL-1β、TNF-α含量高于正常对照组(P0.05)。结论 EPC移植对TRALI小鼠模型具有保护作用,减轻肺部炎性免疫反应及组织病理学损伤的程度。该试验为临床治疗TRALI提供新的视角和思路。     

非抗体介导输血相关急性肺损伤的研究进展

输血相关急性肺损伤(TRALI)是输血相关性死亡的主要原因之一。在TRALI发病机制的"二次打击"学说中, 根据第2次打击因素不同, 可将TRALI分为抗体介导和非抗体介导TRALI。抗体在TRALI发病中的作用较为明确, 而生物活性脂质、可溶性CD40配体(sCD40L)、微粒等非抗体因素在血液成分保存过程中虽有积累, 但是其在TRALI发病中的确切机制尚无定论。笔者拟就生物反应调节剂(BRM)和血液成分的贮存损伤等非抗体因素在TRALI中的研究进展进行综述, 旨在为TRALI的防治提供新思路。     

不同剂量FTY720 对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 表达及细胞凋亡的影响

目的比较不同剂量FTY720 对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 的表达及神经细胞凋亡的影响。方法雌性SD 大鼠200 只,随机分为5 组,每组40 只。A 组大鼠不打击脊髓,缝合切口后立即以0.3 ml 生理盐水灌胃。B、C、D、E 组大鼠制作Allen'sT9脊髓损伤模型。B组造模后立即以0.3 ml 生理盐水灌胃,C、D、E 组分别以FTY720 按1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg 生理盐水稀释至0.3 ml 灌胃。分别于术后6 h、12 h、24 h、48 h 和72 h 取损伤段脊髓超薄切片,行SP 免疫组化染色观察Caspase-3 表达及TUNEL 染色观察细胞凋亡情况,并计算相应时间点免疫组化学染色阳性细胞比值。结果A组各时间点几乎见不到Caspase-3 和细胞凋亡阳性表达。B、C、D、E 组均在伤后6 h 开始出现凋亡细胞表达,伤后24 h 达高峰,伤后48 h 开始减弱,伤后72 h 进一步减少。伤后各时间点细胞凋亡表达均为B 组>C 组>D 组=E 组(P>0.05)>A 组(P<0.05)。Caspase-3 表达与细胞凋亡同步。相关性检验显示B、C、D组中,FTY720 的剂量与Caspase-3 表达、细胞凋亡表达呈负相关(P<0.05)。D组和E 组中,FTY720 剂量与上述指标不相关(P>0.05)。结论FTY720 可以显著减少大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 的表达及神经细胞凋亡。FTY720 的剂量与其减轻Caspase-3 表达和细胞凋亡效果之间存在一定量效关系。3 mg/kg 是FTY720 治疗大鼠急性脊髓损伤的最适剂量。     

不同剂量促红细胞生成素对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨不同剂量促红细胞生成素在大鼠肺缺血再灌注时对单核细胞趋化蛋白(MCP)-1表达的影响,研究大鼠肺缺血再灌注损伤的机制。方法将85只健康的雄性Wistar大鼠随机分为5组(n=17):缺血再灌注组(I/R),促红细胞生成素低剂量组(L组)、中剂量组(M组)、高剂量组(H组),假手术组(S组)。缺血前24 h,L、M、H组分别腹腔注射重组促红细胞生成素1 000、3 000和5 000 U/kg,I/R组注射生理盐水;该4组予以阻断左侧肺门部血流60 min,再灌注90 min后(S组只开胸不阻断左肺门),处死大鼠,取左肺标本,观察各组中肺脏颜色、有无出血点等,测动脉血气分析,测量肺的湿干重比(W/D),制作石蜡切片,苏木精-伊红(HE)染色电镜下观察肺组织病理变化,免疫组化染色检测肺组织中MCP-1的含量。结果与S组比较,缺血再灌注各组肺组织MCP-1表达水平和W/D值均上升(P均<0.01),动脉血Pa O2值下降(P均<0.01),且均以I/R组明显;促红细胞生成素不同剂量组间比较,M组肺组织MCP-1表达水平较L、H组降低(P均<0.05),W/D值较L、H组降低(P均<0.05),动脉血Pa O2值较L、H组上升(P均<0.05)。结论不同剂量促红细胞生成素对大鼠肺缺血再灌注损伤保护作用不同,保护作用最佳剂量为3 000 U/kg,该保护作用可能是通过抑制MCP-1介导的过度炎症反应来实现的。     

芬戈莫德静电纺丝膜(PLGA/FTY720)联合神经干细胞(NSC)促进脊髓损伤功能恢复

目的脊髓损伤可以导致损伤水平以下严重的感觉和运动功能障碍。芬戈莫德(FTY720)可能在脊髓损伤修复中具有一定效果,但全身应用芬戈莫德会引起粒细胞减少等不良反应。为了减少全身应用芬戈莫德导致的不良反应,本实验对芬戈莫德对神经干细胞(NSC)增殖分化的影响和局部应用FTY720联合NSC治疗脊髓损伤的效果进行了探究。方法本研究通过静电纺丝技术制备了PLGA/FTY720静电纺丝膜,同时通过MTT和RT-PCR等方法探究了载药纺丝膜对神经干细胞增殖分化的影响。通过构建大鼠脊髓损伤全切模型,探究了PLGA/FTY720联合神经干细胞对脊髓损伤恢复的效果。结果实验结果表明,PLGA/FTY720静电纺丝膜能够促进神经干细胞的增殖与分化,同时PLGA/FTY720联合神经干细胞对治疗脊髓损伤具有更好的恢复效果。结论本研究表明,FTY720可以很好地与PLGA相结合,搭载神经干细胞的PLGA/FTY720静电纺丝膜作为一种生物支架在治疗脊髓损伤上有一定的应用前景。     

输血相关急性肺损伤SD大鼠血管生成素2和白介素10的变化

目的分析患输血相关急性肺损伤(TRALI)的SD大鼠肺组织中血管生成素2(Ang-2)和白介素10(IL-10)基因相对表达量与血浆、肺组织Ang-2、IL-10浓度变化。方法 SD大鼠20只,随机分为TRALI组(n=10):腹腔注射脂多糖(LPS)(2 mg/kg)2 h后静脉输注人血浆(约1 mL/只);正常对照组(n=5):采用假手术处理;阳性对照组(n=5):静脉输注LPS(5 mg/kg)诱导急性肺损伤。应用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠肺组织Ang-2、IL-10基因相对表达量,以管家基因b-actin为对照,2-(△△Ct)法计算目的基因相对表达情况;应用ELISA法检测大鼠血浆、肺组织中Ang-2和IL-10浓度。结果与正常对照组肺组织Ang-2、L-10基因相对表达量相比,TRALI组肺组织Ang-2基因相对表达量下调(0.28±0.06),IL-10基因相对表达量上调(22.40±1.19)。TRALI组血液、肺组织中Ang-2和IL-10浓度分别为(133.83±0.81)、(22.81±0.40)和(106.54±1.92)、(33.35±6.84)(mg/L),较正常对照组上升(P<0.05)。结论 TRALI SD大鼠血浆、肺组织中Ang-2、IL-10浓度明显高于正常对照SD大鼠,随TRA-LI病程发展,IL-10逐渐发挥其拮抗炎症作用,对Ang-2基因表达可能有反馈抑制作用。     

黄芪注射液对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠核转录因子-κB表达的影响

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)在重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤发病机制中的作用及黄芪注射液对胰腺炎相关性急性肺损伤(PALI)的潜在防治作用.方法 将96只SD大鼠随机分为假手术组、SAP组及黄芪低、高剂量组,各组再分制模后6、9、12 h 3个时间点,每个时间点8只.通过逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠建立PALI大鼠模型.黄芪低、高剂量组在制模前12 h、24 h及制模后即刻经大鼠尾静脉注射黄芪注射液2 ml/kg或4 ml/kg.各组于相应时间点处死大鼠,取肺组织检测NF-κB p65蛋白表达和湿/干重(W/D)比值,并观察胰腺、肺组织病理改变.结果 与假手术组比较,SAP组各时间点肺组织NF-κB p65蛋白表达水平和肺W/D比值均明显升高(P<0.05或P<0.01).与SAP组比较,黄芪低、高剂量组NF-κB p65蛋白表达水平明显下降,肺W/D比值也显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);且胰腺和肺组织损伤程度也较SAP组明显减轻.黄芪低、高剂量组间NF-κB p65蛋白表达水平和肺W/D比值比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 SAP时NF-κB活化并参与了SAP并发肺损伤病理损害的发生发展;黄芪注射液能抑制NF-κB p65蛋白在SAP时肺组织中的表达,并对SAP肺损伤具有防治作用.     

大鼠异体肢体移植后存活时间与FK506和FTY720的联合免疫抑制作用

目的：观察联合应用小剂量免疫抑制剂FK506和FTY720对大鼠同种异体肢体移植术后急性移植排斥反应的发生和延长移植肢体存活时间的作用。方法：实验于2003-06／2004-10在哈尔滨医科大学附属第一医院实验动物中心完成。选择雄性Wistar大鼠为供体、SD大鼠为受体，以FK506和FTY720为免疫抑制剂，进行了140例异体肢体移植动物实验。对照组为术后不用药组，实验组根据用药剂量和药物不同分为6组：FK5061mg／(kg&;#183;d)组，FK5062mg／(kg&;#183;d)组，FTY7200．03mg／(kg&;#183;d)组，FTY7200，1mg／(kg&;#183;d)组，FTY7200．5mg／(kg&;#183;d)组，小剂量联合用药组FK506[mg／(kg&;#183;d)]+FTY720[1mg／(kg&;#183;d)]。各组用药时间均为术前1d开始，直至肢体坏死。术后通过观察大鼠伤口情况、异体移植肢体的血运变化，判定各组移植肢体急性排斥反应的发生时间和移植肢体存活时间(以在移植肢体皮肤出现红斑水肿持续24h视为急性排斥反应的发生时间，以皮肤脱落或出现干性坏疽为移植肢体坏死标准为)；对照组于术后第5天、各实验组于术后第10天切取皮肤，进行组织病理学检查，按B&;#252;ttemeyer肢体移植组织排斥反应分级标准进行分级(0级为无排斥，1级为轻度排斥，2级为中度排斥，3级为重度排斥)，计算平均排斥反应级别。结果：每组纳入结果分析的动物均为20只。①排斥反应出现时间和移植肢体存活时间：各用药组均长于对照组(t=2．89～4．18．P&;lt;0．01)；小剂量联合用药组明显长于其他用药组(t=4．04～5．79，P&;lt;0．01)。②移植肢体皮肤组织平均排斥反应分级：各用药组均低于对照组(1．87&;#177;0．42，1．31&;#177;0．31，2．21&;#177;0．36，1．69&;#177;0．33，1．34&;#177;0．28，0．35&;#177;0．24和2．86&;#177;0．38；t=2．74～4．74，P&;lt;0．05)，小剂量联合用药组明显低于其他用药组(t=3．75～5．12，P&;lt;0．01)。结论：①单独口服FK506或FTY720能使移植肢体存活时间不同程度地较对照组延长。②给予FK506和FTY720进行联合免疫抑制时，应用的剂量较小，所产生的副作用也较轻时，仍可使移植肢体存活时间明显延长。     

姜辣素对脂多糖诱导的大鼠急性呼吸窘迫综合征肺泡过度促凝及纤溶抑制的防治作用

目的 探索姜辣素对脂多糖（LPS）诱导的急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠肺泡过度促凝和纤溶抑制的防治效果及可能机制。方法 雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、LPS组、不同剂量姜辣素组（10、20、30 m/kg），共5组。采用LPS气管内雾化吸入复制大鼠ARDS模型，腹腔内注射不同剂量姜辣素处理。通过HE染色观察大鼠肺组织病理学变化；评价肺组织损伤程度；计算肺组织湿/干比，评价肺水肿情况；通过实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测促凝及纤溶相关指标组织因子（TF）和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的mRNA表达；通过蛋白质免疫印迹实验检测TF、PAI-1蛋白表达及NF-κB通路相关蛋白p-p65、p65、p-IKKβ、IKKβ的活性表达。结果 与对照组比较，LPS组肺泡壁增厚、结构破坏；肺泡间隔明显增宽、炎症细胞浸润增多；肺损伤评分明显升高；肺水肿明显加重。肺组织中TF、PAI-1的mRNA水平明显升高；同时组肺组织TF、PAI-1、p-p65及p-IKKβ的蛋白表达水平均明显增加。与LPS组比较，不同剂量姜辣素组大鼠肺泡壁增厚及结构破坏相对减少，肺泡间隔增宽程度减轻，肺组织...     

FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡影响的研究

目的探讨FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养MCF-7细胞,将其培养液中加入不同浓度的FTY720,继续培养48小时,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况;瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测FTY720对MCF-7细胞的细胞周期、凋亡率的影响。结果当FTY720浓度为6 400 ng/ml时,体外培养MCF-7细胞的增殖受到明显抑制,抑制率为62.0%（P〈0.05）,而且抑制率呈浓度依赖性;镜下可见细胞出现凋亡的形态;流式细胞仪检测分析显示FTY720可将MCF-7细胞阻滞于G1期,并促进其发生凋亡,凋亡率呈浓度依赖性。结论在体外培养的MCF-7细胞培养液中加入一定浓度的FTY720,能明显抑制该细胞的增殖,调节该细胞周期并诱导其凋亡。     

芬戈莫德的非免疫抑制效应研究进展

<正>芬戈莫德(FTY720)是一种新型的免疫抑制剂,是从冬虫夏草(子囊菌亚门赤僵菌)中提取出来的抗菌药物成分多球壳菌素(ISP-1)经过化学修饰改造而成。关于FTY720的免疫抑制效应一直是研究的热点,如FTY720在多种器官移植模型及自身免疫病、肿瘤等疾病研究中均显示了良好的效果[1-3]。2010年9月美国食品药品监督管理局(FDA)已经批准     

小窝蛋白-1、IL-8在机械通气致大鼠急性肺损伤中的作用研究

目的通过观察不同时间段肺组织中小窝蛋白-1(cav-1)及IL-8的表达水平,探讨二者在机械通气所致肺损伤(VILI)发生中的作用?方法雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为3组:对照组、大潮气量通气0.5 h组(H-VT0.5 h组)和大潮气量通气2 h组(H-VT2 h组)。在光镜下观察各组大鼠肺组织病理学改变,测定BALF总蛋白(TP)含量和肺湿/干重比值(W/D),采用免疫组织化学染色法测定肺组织cav-1及IL-8的表达水平,并进行相关性分析。结果 H-VT0.5 h组大鼠肺组织cav-1蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01),而BALF总蛋白含量、W/D比值及肺组织IL-8表达水平与对照组比较无统计学意义(P>0.05),且肺组织无明显病理损伤改变。H-VT2 h组大鼠BALF总蛋白含量、W/D比值及肺组织cav-1和IL-8蛋白表达量均明显高于对照组和H-VT0.5 h组(均P<0.01),同时肺组织可见明显病理损伤改变。相关性分析结果显示,各组大鼠肺组织cav-1蛋白表达水平与IL-8表达水平之间呈正相关(r=0.737,P<0.01)。结论 cav-1在VILI发生中的作用可能具有两面性,早期以保护作用为主,后期以损伤作用为主,而损伤作用可能与IL-8的释放激活中性粒细胞有关。