甘西鼠尾草总酚酸提取物对嘌呤霉素氨基核苷大鼠足细胞损伤的保护作用

目的:研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用。方法:建立PAN肾病大鼠动物模型,给予他克莫司和SPE干预治疗,分别在第5、10、15、21天留取血尿标本,同时采用肾组织病理观察大鼠肾小球组织形态学改变,透射电镜观察肾小球足细胞超微结构改变,并分别从mRNA和蛋白水平分析足细胞裂孔膜蛋白的表达水平。结果:(1)除正常组外,各组大鼠尿蛋白定量第5天时已明显升高,第10天上升至高峰,而后开始下降,第15天时仍明显高于正常。给予药物干预后,可降低大鼠的尿蛋白排泄量,且阳性对照组与SPE高剂量组降低尿蛋白的程度较为接近。(2)光镜下未见肾小球形态异常。电镜结果显示第5天时已出现肾小球足细胞足突融合,第10天时足突融合最明显,随后开始恢复,第21天基本恢复正常;SPE高剂量组和阳性对照组的足突融合程度较轻。(3)阳性对照组和SPE组大鼠的nephrin、podocin蛋白表达水平高于模型对照组。第5天时各组大鼠蛋白表达低于正常,第10天时下降更为明显,第15天蛋白表达已开始回升,至第21天时恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组大鼠蛋白表达均明显高于其余三组。(4)大鼠nephrin、podocin的mRNA表达量在第5天时已下降,至第10天明显下降至最低水平,而后开始上升,直至第21天恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组的表达水平明显高于其他各组(P0.05)。结论:SPE对PAN大鼠肾小球足细胞损伤有一定的保护作用,可降低PAN大鼠蛋白尿。     

膜性肾病肾活检组织中nephrin和podocin表达改变及其意义

目的:检测膜性肾病(MN)患者肾活检组织中nephrin、podocin的表达和分布,分析MN蛋白尿与nephrin和podocin表达改变的关系,探讨肾小球足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin在MN蛋白尿发生中的作用. 方法:选取2005年1月至2008年1月经肾穿刺活检病理确诊为II、III期MN的患者22例,其中肾病综合征组15例(MN-A组),非肾病综合征组7例(MN-B组),临床上排除系统性红斑狼疮、乙肝相关性肾病、糖尿病肾病以及肿瘤等继发性肾脏疾病;另取5例因肾脏肿瘤行一侧肾切除的远端相对正常肾脏组织作为对照(对照组).收集并分析患者的主要临床表现、内生肌酐清除率(Ccr)、尿常规、24h尿蛋白定量、血清白蛋白(Alb)、血脂等相关临床资料;按常规方法取肾组织制备3 μm厚石蜡切片,行HE、PAS、PASM、Masson染色普通光镜以及免疫组化(IgG、IgA、IgM、C3、C4、C1q)检查;各组肾组织行nephrin、podocin及IV型胶原α3链免疫荧光双套色染色,激光共聚焦显微镜下观察nephrin、podocin在两组MN及对照组肾组织中表达及分布的改变,以计算机图像分析系统进行半定量分析. 结果:22例MN病理分期分别为II期14例,III期8例;肾小球内免疫球蛋白及补体的沉积以IgG和C3为主,呈颗粒状沿毛细血管袢弥漫性分布.对照组肾组织免疫荧光染色可见nephrin和podocin沿肾小球毛细血管袢呈均匀连续线样分布;MN患者肾小球内nephrin与podocin表达皆明显减弱,免疫荧光强度降低,分布不均,部分区域有节段性缺失,部分由线状分布变成颗粒状分布,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);MN-A组与MN-B组比较,MN-A组肾小球nephrin和podocin的平均表达量均低于MN-B组,差异有统计学意义(P<0.05),且尿蛋白量与nephrin或podocin表达呈负相关. 结论:MN患者肾小球内nephrin和podocin表达量均降低,分布形式亦发生改变,部分呈节段性缺失或不连续颗粒状分布,并与尿蛋白排泄量呈负相关,提示nephrin和podocin表达的减少及分布异常可能与蛋白尿发生及蛋白尿程度有关;但其损伤的始动因素仍需进一步探讨.     

不规则趋化蛋白在嘌呤霉素氨基核苷肾病模型中的表达

目的：检测CX3C族趋化因子不规则趋化蛋白(fractalkine,Fkn)在嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside，PAN)肾病中的表达，进一步阐明肾病的发病机制，为肾病的治疗提供新的靶点。方法：从Wistar大鼠的颈静脉给予PAN，对照组给予等量生理盐水，在不同的时间点观察PAN引起的尿蛋白改变和肾脏炎性细胞浸润情况，并于第l、3、5、7、10天处死动物，制作肾组织匀浆和冰冻切片，分别用于RT-PCR和免疫组化研究，观察在：PAN注射的不同时间点肾组织中Fkn mRNA和蛋白质的表达情况；同时在体外用白介素-1β（IL-1β）刺激培养的肾小管上皮细胞观察Fkn的表达。结果：：PAN注射后第5天尿蛋白开始升高，持续增加直至第10天，同时伴有肾间质中CD4^ T细胞，CD8^ T细胞和单核／巨噬细胞的增加。RT-PCR和免疫组化均显示Fkn在第7、第10天表达升高，第3天主要分布在肾小球，以后主要在肾小管上皮细胞表达。用IL-1β刺激后1h体外培养的肾小管上皮细胞即开始表达FknmRNA，在4～6h达到高峰。结论：本文首次观察到Fkn在PAN肾病模型中表达增高，其特征为先出现于肾小球，后移行至肾小管，并早于肾组织中白细胞浸润及蛋白尿的发生。提示：Fkn可能是肾病发病和进展过程中的另一重要的相关分子。     

嘌呤霉素肾病大鼠肾小球足细胞相关分子表达的共定位分布

目的:研究嘌呤霉素肾病大鼠肾小球足细胞相关分子在病变过程中的表达与分布的关系及变化.方法:42只SD大鼠随机分为实验组和对照组,建立嘌呤霉素肾病模型,并在24h、24h、2天、5天、10天、15天、20天七个不同的时间点,应用免疫荧光双标记的方法,通过激光共聚焦显微镜对足细胞相关分子nephrin、podocin,α-actinin-4以及CD2AP两两之间的分布关系及变化进行研究.结果:正常大鼠肾小球中CD2AP与nephrin及podocin的染色沿肾小球血管襻有部分重叠,而两者的分布模式略有不同,但这种共定位关系不随病变的发展而变化;CD2AP与α-actinin-4的分布也有部分重叠关系,且随着病变进展,其荧光重叠程度增加;α-actinin-4与nephrin及podocin在正常时有极小部分重叠,随着病程变化,两者的分布模式与分布量的变化均不同步.结论:足细胞相关分子nephrin、podocin及CD2AP之间以功能复合体的形式相互联系并参与蛋白尿的发生发展,而足细胞相关分子的分子行为可能在蛋白尿的发生中起重要作用.     

雷公藤甲素对嘌呤霉素模型足细胞病变的影响

目的：研究雷公藤甲素对非免疫因素介导的、单纯足细胞病变模型——嘌呤霉素氨基核苷（PAN）肾病模型的疗效及其对足细胞病变的影响。方法：采用PAN单次颈静脉注射法建立PAN肾病模型。大鼠分为正常对照组，模型组，雷公藤甲素预防组和治疗组。分别在1天、3天、5天、10天、14天和21天收集血尿标本，并处死大鼠留取肾组织标本。检测24h尿蛋白排泄量、血生化指标，行肾组织光镜和电镜观察肾小球病变和足突超微结构。采用定量学方法测定足突宽度。免疫荧光染色观察足细胞裂孔膜分子Nephrin和Podocin表达和分布变化。结果：雷公藤甲素无论是预防还是治疗性用药均能明显改善PAN肾病大鼠的肾病综合征状况，明显减少尿蛋白，加快血清白蛋白回升和血脂水平恢复。与此同时，雷公藤甲素预防组和治疗组大鼠在各观察点足突融合程度和范围均比PAN肾病大鼠明显减轻，至第14天仅见少数足突融合，第21天足突形态已基本恢复正常。雷公藤甲素预防性和治疗性用药均能够增加足细胞裂孔膜分子Nephrin和Podocin表达，促进其分布异常的修复。在第10天，Nephrin和Podocin不仅表达较PAN肾病大鼠明显增多，而且大部分血管袢已开始呈现连续的线状分布，以Podocin更为明显；两者的表达和分布在第14天已基本恢复，至第21天已完全恢复正常。结论：雷公藤甲素对PAN导致的足细胞损伤模型具有明显的预防和治疗作用，表现为减少蛋白尿，改善足突融合，恢复足细胞相关蛋白的表达及其分布，逆转足细胞病变。     

肾病综合征患儿肾小球中nephrin、podocin、α-actinin及WT1的表达

目的 :检测肾病综合征 (NS)患儿肾小球足细胞中nephrin、podocin、α actinin及WT1的表达和分布特征 ,以探讨这些分子在蛋白尿发生中的可能作用。　 方法 :用免疫荧光染色 ,激光扫描共聚焦显微镜采集图像及图像分析的方法 ,检测 2 5例NS患儿 [其中肾脏病理为微小病变 (MCD) 2例 ,系膜增生性肾小球肾炎 (MsPGN) 17例 ,局灶节段性肾小球硬化 (FSGS) 5例 ,新月体性肾小球肾炎 (CREGN) 1例 ]、9例单纯性血尿患儿及 9例对照肾组织中nephrin、podocin、α actinin及WT1的表达。　 结果 :(1)NS患儿肾小球中podocin的表达量 (82 9± 2 1 5 )与单纯性血尿组 (10 3 6± 2 0 2 )及对照组 (110 8± 15 4 )比较差异显著 (P =0 0 12 ,P =0 0 0 1) ;WT1的表达量 (6 1 3± 9 2 3)与对照组 (6 9 7± 9 2 7)比较差异也显著 (P =0 0 37) ;nephrin和α actinin表达量 (12 9 3± 2 2 6 ,10 4 3± 19 0 )与单纯性血尿组(132 1± 7 4 0 ,94 9± 13 0 )及对照组 (133 9± 8 5 ,10 3 6± 15 0 )比较差异均不显著 (P >0 0 5 )。 (2 )对照组肾组织中nephrin和podocin的染色均见于肾小球毛细血管壁 ,呈均匀、线状分布 ;α actinin主要沿肾小球毛细血管壁呈点状分布 ;WT1的染色主要集中于肾小球细胞核。 (3)病理表现为MsPG     

足细胞特异性因子nephrin及肿瘤蛋白-1在肾小球硬化过程中表达变化

目的：应用嘌罗霉素氨基核苷（PAN）模型，通过观察临床、病理指标及足细胞特异性因子nephrin和肿瘤蛋白-1（WT-1）在足细胞的表达，了解足细胞损害在肾小球硬化过程中的重要作用。方法尾静脉注射PAN制作大鼠肾病模型，测定不同时间点的生化指标，处死大鼠，取其肾脏，石蜡包埋切片，PAS及免疫组化染色，测定肾小球硬化指数（GSI），肾小球面积（GA），nephrin及WT-1的表达，进行统计学分析。结果 PAN组在早期（第8天）表现为典型肾病综合征，后期（20周）表现为慢性肾炎。形态学方面，PAN组的GSI在4，14，20周均明显高于对照组（P＜0.05）。PAN组GA在14周时大于对照组（P＜0.01），但在20周时小于对照组（P＜0.001），并且20周时GSI与GA之间呈强负相关关系。PAN组nephrin表达在4，14，20周时与对照组比较均有所减少（P＜0.05），与此同时，WT-1的表达在14和20周时较对照组明显减少（P＜0.001）。结论（1）在肾炎发展中，随着时间延长，GSI增高，GA缩小，并且GSI和GA之间呈负相关。（2）在肾小球硬化发展中， nephrin和WT-1的表达进行性减少，说明有明显足细胞数量的减少。因此，足细胞的损伤与肾小球硬化密切相关。     

斑马鱼抗podocin抗体的制备、鉴定及在足细胞损伤模型中的应用

目的:利用合成的podocin多肽制备针对斑马鱼podocin的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用于斑马鱼足细胞损伤研究中。方法:(1)设计、合成斑马鱼podocin抗原多肽,将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联,免疫新西兰大白兔制备抗血清,protein A亲和纯化得到抗podocin多克隆抗体;(2)ELISA和免疫组化检测抗体效价及组织特异性;(3)构建足细胞特异性表达硝基还原酶(NTR)的转基因斑马鱼Tg(pod:Gal4;UAS:NTR-m Cherry),NTR/MTZ(甲硝唑)系统特异性地诱导足细胞损伤;用podocin反义寡核苷酸阻断正常斑马鱼胚胎podocin mRNA的翻译过程,利用抗podocin抗体对上述两种疾病模型进行免疫荧光染色以验证合成的podocin抗体能否应用于斑马鱼足细胞研究中。结果:(1)化学合成的多肽纯度为92.6%,达到免疫用抗原标准;(2)ELISA和免疫组化染色结果表明抗体效价分别达1∶5.12×105和1∶106;(3)免疫荧光染色表明无论在斑马鱼前肾还是中肾,podocin均特异性地表达于足细胞,且沿着毛细血管袢呈连续、线性分布,表明抗体具有良好的组织特异性;(4)MTZ诱导足细胞损伤24h后见podocin呈粗糙的颗粒状分布,48h后阳性表达面积占整个肾小球面积比值明显下降;(5)显微注射podocin反义寡核苷酸的斑马鱼胚胎出现心包水肿、体轴弯曲的表型,第3天时几乎无Podocin表达,随后逐渐恢复至正常,第5天时表达与正常组无异。结论:所制备的斑马鱼抗podocin抗体效价高、组织特异性强,能够反应足细胞损伤情况,是斑马鱼足细胞研究的有力工具。     

1,25-(OH)_2D_3对阿霉素肾病模型大鼠足细胞损伤及podocin表达缺失的影响

目的研究活性维生素D3[1,25-(OH)_2D_3]对阿霉素(ADR)肾病模型大鼠足细胞的作用及对podocin表达的影响。方法 90只雄性SD大鼠随机选取30只作为对照组,其余60只被一次性尾静脉注射ADR 7.5 mg/kg。建模成功后,随机均分为ADR组、治疗组,治疗组每日给予1,25-(OH)_2D_3 0.25μg/kg灌胃,对照组及ADR组每日给予等量的花生油灌胃。于治疗第2、4、6、8、10周末收集24 h尿,进行生化分析;取肾组织进行后续的组织学观察和分子水平检测。结果与对照组相比,ADR组24 h尿蛋白显著增加(P0.05),1,25-(OH)_2D_3显著减少24 h尿蛋白含量(P0.05)。苏木素-伊红(HE)染色结果显示,对照组肾小球形态完好,ADR组肾小球基底膜增厚、肾间质纤维化、大量炎性细胞浸润,1,25-(OH)_2D_3治疗减轻了肾小球损伤。电镜观察显示:与对照组比较,模型组足细胞超微结构发生改变,出现细胞空腔、细胞核畸形,基底膜呈节段性增厚、足突被压扁且融合;1,25-(OH)_2D_3治疗后,足细胞损伤减轻。免疫组织化学检测显示:podocin主要定位于细胞膜,在正常肾小球中高表达,而ADR组表达较低(P0.05);1,25-(OH)_2D_3治疗后,podocin的表达显著增高(P0.05)。荧光定量PCR和Western印迹结果显示:podocin mRNA和蛋白水平具有高度的一致性,与对照组相比,ADR组表达显著降低(P0.05);1,25-(OH)_2D_3治疗后,podocin表达有所恢复。结论 1,25-(OH)_2D_3能够改善ADR肾病模型大鼠肾脏足细胞损伤,逆转podocin蛋白表达缺失,从而减少24 h尿蛋白,发挥重要的肾脏保护作用。     

依普利酮对急性肾病大鼠尿蛋白含量及肾小球足细胞标记蛋白表达的影响

目的：观察依普利酮对急性肾病大鼠尿蛋白含量及肾小球足细胞标记蛋白表达的影响,探讨其肾脏保护机制。方法采用随机数字表法将32只SD大鼠分为对照组（C组）、模型组（M组）和干预组（E组）,后两组均单次腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷（ PAN）制备急性肾病模型,C组注射等体积生理盐水。造模后第3天开始,E组予依普利酮灌胃,余两组给予等量蒸馏水灌胃,均连续2周。期间每天测定24 h尿蛋白定量;实验结束后麻醉大鼠,自心脏抽取血液检测血清白蛋白（Alb）、总胆固醇（TC）及尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）;大鼠左心室灌注生理盐水,留取肾组织于光镜和电镜下观察形态学改变,实时定量PCR法和Western blotting法检测Nephrin蛋白和mRNA,免疫荧光法检测Podocin、Podocalyxin蛋白表达。结果实验第7～14天,M组和E组24 h尿蛋白定量均高于C组,但E组低于M组（P均＜0．05）;M组和E组血清Alb均显著低于C组,TC、BUN、Cr均高于C组（P均＜0．05）。光镜下M组和E组符合微小病变肾病（ MCD）病理表现;电镜下M组足突广泛融合、消失,局部基底膜裸露,E组较之超微结构改善、仍有足突融合。 M组、E组的Podocin及Podocalyxin 蛋白、Nephrin蛋白及mRNA表达均明显低于C组,尤以M组为著（ P均＜0．05）。结论依普利酮能够明显减少PAN肾病大鼠的尿蛋白,可能机制为上调足细胞标记蛋白表达和活性。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.