复方藤梨根制剂对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤NF-κB p65表达的影响

目的研究复方藤梨根制剂（FFTLG）对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤的抑制效应及其与瘤组织核转录因子（NF-κBp65）表达的关系。方法建立人胃癌裸鼠腹腔移植模型。24只裸鼠随机分为4组：FFTLG高、中、低剂量组和生理盐水组,分别观察荷瘤裸鼠腹腔移植瘤的生长情况,检测NF-κB p65的表达。结果生理盐水组、FFTLG低、中、高剂量组的抑瘤率分别为0、7.8%、30.0%和33.3%,FFTLG各组与生理盐水组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;腹腔瘤组织中NF-κB p65阳性表达细胞百分比分别为（39.67±19.82）%、（33.00±19.94）%、（29.20±17.68）%、（27.17±15.75）%。FFTLG组的中、高剂量组与生理盐水组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 FFTLG对裸鼠腹腔移植瘤生长具有抑制作用,且随着剂量的增加其作用增强,其作用途径之一可能是通过下调NF-κB p65的表达。     

吡柔比星对HL-60细胞NF-κB p65活性及细胞凋亡的影响

目的研究吡柔比星(perarubicin,THP)对髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡与核因子-κB p65(nucle-ar factor kappa B p65,NF-κB p65)活性的影响。方法指数生长期HL-60细胞置于96孔培养板内RPMI 1640培养液培养2 h后,分为两部分,第1部分又分为A、B 2组。A组加PBS液继续培养12 h,B组分别加1、10、100μmol/L(终浓度)的THP继续培养12 h;用DNA梯状凝胶电泳法(DNA ladder electrophoresis)和流式细胞检测技术(flow cy-tometry,FCM)分别检测HL-60细胞的凋亡率。第2部分也分为A、B 2组,A组加PBS液继续培养3 h,B组分别加1、101、00μmol/L(终浓度)的THP继续培养3 h;用FCM检测NF-κB p65活化率。结果1、10、100μmol/L的THP诱导HL-60细胞的凋亡率分别为(31.78±4.31)%(、47.25±5.27)%(、56.49±1.59)%,组间及与对照组(6.46±1.45)%比较差异有统计学意义(P<0.05);诱导的HL-60细胞NF-κB p65活化率分别为(16.21±1.20)%、(23.98±3.21)%(、32.44±2.89)%,组间及与对照组(8.44±2.20)%比较差异有统计学意义(P<0.05)。DNA梯状凝胶电泳Ladder出现从多到少的顺序为:100μmol/L THP1、0μmol/L THP、1μmol/L THP、对照组。结论THP在促进HL-60细胞凋亡的同时有诱导其NF-κB p65活化的作用,均存在剂量依赖。     

流体力学方法转染IκBαSR对人肝癌裸鼠原位移植瘤的抑制

目的:使用流体力学方法向人肝癌裸鼠原位移植瘤转染含突变型IκBα的重组逆转录病毒质粒pBABE-puro-IκBα super repressor(pBABE-puro-IκBαSR),观察其对移植瘤生长的作用及其相关机制?方法:使用人肝癌细胞株MHCC97-H?MHCC97-L,建立裸鼠人肝癌原位移植瘤模型,将荷瘤鼠分为MHCC97-H组(对照组)?MHCC97-H+IκBαSR组(转染组)?MHCC97-L组(对照组)和MHCC97-L+IκBαSR组(转染组),1周后,使用流体力学方法通过尾静脉向对照组注射pBABE-puro空载体质粒,向转染组注射pBABE-puro-IκBαSR质粒?每周1次,共3次?观察荷瘤鼠的生存率,检测原位移植瘤块的大小?重量?以及转移瘤数目,使用全自动生化检测仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)?天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平?采用免疫组化SP法分析核因子(NF)-κB p65蛋白表达,使用Western blot检测总蛋白中IκBα蛋白含量?结果:pBABE-puro-IκBαSR质粒显著提高荷瘤小鼠的生存率,转染组肿瘤的体积?重量显著小于对照组,抑瘤率分别为29.3%和33.0%(均P < 0.05);转染组荷瘤小鼠ALT和AST显著低于对照组(均P < 0.05);NF-κB p65在对照组胞浆中及在细胞核中均呈强阳性表达,在转染组胞浆中呈浅棕色,为弱阳性表达,胞核中极少或没有阳性表达,差异具有统计学意义(P < 0.01)?Western blot结果显示,转染组IκBα表达水平高于对照组(P < 0.05)?结论:通过流体力学方法向人肝癌原位移植瘤转染突变型IκBαSR质粒,可以抑制移植瘤的生长?其机制可能是IκBαSR抑制了NF-κB的活化?     

抑制NF-κB的表达对人癌裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响

目的探讨抑制NF-κB的表达对人癌裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响。方法裸鼠皮下接种人宫颈癌HeLa细胞，建立人宫颈癌裸鼠模型。将成瘤的40只裸鼠分为实验组，瘤周注射特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂（PDTC）50mg／kg；对照组，不加PDTC，两组均给予直线加速器照射，剂量分别为0、2、4、6Gy。应用免疫组化方法检测放疗及用药前后人癌裸鼠移植瘤组织NF—κBp65的表达，流式细胞仪检测细胞凋亡百分率，光镜下观察细胞凋亡情况。结果射线诱导的NF—κB表达的增加可以被PDTC抑制；抑制NF—κB的表达使细胞凋亡指数增加。结论放疗诱导的人癌裸鼠移植瘤细胞胞浆内NF-κB的高表达可以通过抑制剂PDTC得到抑制；抑制NF-κB的表达增加了人癌裸鼠移植瘤细胞的放疗敏感性。     

裸鼠人肝癌原位移植瘤模型的建立

目的 探讨利用人肝癌细胞系,建立裸鼠人肝癌原位移植瘤模型,在肝细胞癌自杀基因治疗的应用价值.方法 取人肝癌细胞系Be17402和HepG2,制备皮下移植瘤,后将肿瘤组织接种于裸鼠肝内,建立裸鼠肝原位移植瘤模型.HE染色进行病理形态学观察.结果 裸鼠皮下成瘤率为100.0％(4/4).肝内接种肿瘤,裸鼠存活率100.0％(32/32),成瘤率81.3％(26/32);镜下观察肿瘤细胞成浸润性生长;肺、肠系膜淋巴结等组织器官未见肿瘤转移灶.结论 应用人肝癌细胞系建立的裸鼠肝原位移植瘤模型可以很好地模拟人肝癌的解剖学特征,但肝癌转移模型的建立方法尚需探讨.     

Wnt2B通过NF-κB/p65调节乳腺癌细胞的凋亡

目的研究分析Wnt2B对乳腺癌细胞株MDA-MB 231凋亡的影响。方法通过免疫组化技术检测80例乳腺癌组织标本中的Wnt2B的表达;通过凝胶电泳迁移实验(英简EM-SA)、共聚焦显微镜、Western blot检测下调Wnt2B表达后对NF-k B/p65的表达及活性的影响。结果与Wnt2B阴性表达的正常乳腺组织相比,70例乳腺癌组织表达表现为强阳性,同时出现核浆转移。Wnt2B的si RNA沉默成功下调MDA-MB-231内的Wnt2B表达后,癌细胞凋亡率显著增多,同时NF-k B/p65的活性及表达降低。通过NF-k B/p65特异性的抑制剂(即为PDTC)进行阻断,然后Wnt2B si RNA诱导细胞凋亡作用被阻断。结论 Wnt2B si RNA可以通过NF-k B/p65通路对乳腺癌细胞系的MDAMB-231的凋亡进行抑制,发挥了较强的抗瘤作用,Wnt2B可作为临床治疗乳腺癌的一个有效靶点。     

Wnt2B通过NF-κB/p65调节乳腺癌细胞的凋亡

目的研究Wnt2B对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响,探讨其在乳腺癌发生发展过程中的重要作用。方法应用免疫组化技术检测40例乳腺癌组织标本中Wnt2B的表达;应用Western blot检测乳腺癌配对细胞系MDA-MB-231和MCF-7中Wnt2B蛋白水平;通过瞬时转染Wnt2B特异的siRNA沉默高表达Wnt2B的MDA-MB-231细胞系后,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡水平;应用Western blot、共聚焦显微镜和凝胶电泳迁移实验(EM-SA)检测下调Wnt2B表达后对NF-κB/p65的表达和活性的影响。结果相对于Wnt2B阴性表达的正常乳腺组织,35例乳腺癌组织的表达呈强阳性并且存在核浆转移现象;在高转移细胞系MDA-MB-231中Wnt2B表达明显高于低转移细胞系MCF-7;针对Wnt2B的siRNA沉默成功下调MDA-MB-231中Wnt2B表达后,细胞凋亡率明显增加并伴随NF-κB/p65的表达下降和活性降低;应用NF-κB/p65特异性的抑制剂PDTC阻断此通路后,Wnt2BsiRNA诱导细胞的凋亡效应被阻断。结论 Wnt2BsiRNA通过NF-κB/p65通路抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的凋亡而产生抗瘤作用,Wnt2B可能成为乳腺癌有效治疗靶点之一。     

As2O3对裸鼠移植人乳癌组织NF-κB p65,p53,c-Myc和hTERT表达的影响

目的: 探讨三氧化二砷(As2O3)对裸鼠移植人乳腺浸润性导管癌组织中NF-κB p65,p53,c-Myc和hTERT蛋白表达的影响.方法: 复制人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤模型22例,随机分为4组.用免疫组化法检测上述组织中各蛋白的表达.结果: NF-κB p65,p53,c-Myc和hTERT蛋白在人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤阴性对照组中的阳性表达均高,且有一致性;实验组1、实验组2的p65阳性表达随着As2O3剂量的增加而下降(P<0.01),与阳性和阴性对照组的表达比较呈明显下降趋势(P<0.01).p53,c-Myc和hTERT蛋白在四组中的表达无差异性(P>0.05).结论: As2O3通过抑制核因子NF-κBp65的活性抑制人乳腺浸润性导管癌细胞的生长作用,而对p53,c-Myc和hTERT蛋白无影响.     

As2O3对裸鼠移植人乳癌组织NF-κB p65,p53,c-Myc和hTERT表达的影响

目的: 探讨三氧化二砷(As2O3)对裸鼠移植人乳腺浸润性导管癌组织中NF-κB p65,p53,c-Myc和hTERT蛋白表达的影响.方法: 复制人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤模型22例,随机分为4组.用免疫组化法检测上述组织中各蛋白的表达.结果: NF-κB p65,p53,c-Myc和hTERT蛋白在人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤阴性对照组中的阳性表达均高,且有一致性;实验组1、实验组2的p65阳性表达随着As2O3剂量的增加而下降(P<0.01),与阳性和阴性对照组的表达比较呈明显下降趋势(P<0.01).p53,c-Myc和hTERT蛋白在四组中的表达无差异性(P>0.05).结论: As2O3通过抑制核因子NF-κBp65的活性抑制人乳腺浸润性导管癌细胞的生长作用,而对p53,c-Myc和hTERT蛋白无影响.     

羟基红花黄色素A对小鼠肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响

目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠H22肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响.方法 建立H22移植性肝癌小鼠模型50只,随机分为HSYA高剂量组(4.5 mg/kg)、HSYA中剂量组(2.25 mg/kg)、HSYA低剂量组(1.125 mg/kg)、阳性对照组(50 mg/kg)和生理盐水对照组,给药14 d.免疫印迹检测核转录因子-κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκB-α)及NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的水平.结果 HSYA高、中、低剂量组能够下调细胞核p65蛋白的表达,抑制活化p65核移位,抑制IκB-α的磷酸化和胞质内IκB-α的降解即降低NF-κB的转录活性,尤以中剂量组效果最显著.结论 HSYA能抑制小鼠肝癌移植瘤NF-κB的转录活性.     

E1A基因对裸鼠移植瘤细胞凋亡及Survivin、Caspase-3基因表达的影响

目的探讨E1A基因对裸鼠移植瘤肿瘤细胞凋亡的影响及其相关作用机制。方法采用免疫组织化学染色检测E1A基因对裸鼠移植瘤肿瘤细胞凋亡及Survivin基因和Caspase-3基因表达的影响。结果免疫组织化学染色显示：EIA基因组肿瘤细胞凋亡数量较多，Caspase-3基因呈高表达，Survivin基因表达较弱；而Heh和Hela—vect组肿瘤细胞凋亡数量较少，Survivin基因呈高表达，Caspase-3基因表达较弱。结论EIA基因能够明显促进裸鼠移植瘤肿瘤细胞的凋亡，该作用可能与EIA基因激活Caspase-3基因和抑制Survivin基因的表达有关。     

NF-κB decoy寡核苷酸联合阿霉素诱导裸鼠肝癌细胞HepG_2凋亡

目的:探讨NF-κB decoy寡核苷酸协同阿霉素对裸鼠肝癌细胞HepG2的作用及机制。方法:接种传代培养的人肝癌细胞HepG2于裸鼠皮下,局部注射NF-κB decoy寡核苷酸和/或阿霉素进行治疗。观测裸鼠瘤体大小变化,计算抑瘤率;HE染色观察肝癌组织结构和细胞形态改变;TUNEL法检测细胞凋亡。结果:NF-κB decoy寡核苷酸联合阿霉素治疗组裸鼠肝癌细胞的生长受到明显抑制,抑瘤率为80.52%;肿瘤重量、体积明显小于单用NF-κBdecoy寡核苷酸、阿霉素治疗组及对照组;联合组癌组织凋亡增加,凋亡指数为(39.8±1.6)%,与其余3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:NF-κB decoy寡核苷酸协同阿霉素能抑制NF-κB活性,促进肝癌细胞凋亡,增加其对化疗药物的敏感性。     

肠复方对裸鼠人大肠癌原位移植瘤增殖和凋亡影响

目的:研究肠复方对人大肠癌增殖和凋亡的影响。方法:采用瘤块接种法建立人大肠癌裸鼠原位移植瘤模型,将造模成功的50只裸鼠随机分组至肠复方高、中、低剂量组,氟尿嘧啶(5-Fu)组和模型对照(NS)组,每组10只。给药4周后,取下瘤体。采用HE染色,在光镜下观察细胞凋亡形态,TUNEL法原位缺口末端标记检测细胞凋亡,免疫组化原位检测细胞增殖细胞核抗原PCNA表达状态。结果:与模型对照组比较,肠复方高、中、低剂量组与氟尿嘧啶组瘤体细胞均有不同程度凋亡,其中肠复方高剂量组、中剂量组,5-FU组与模型对照组差异有统计学意义(P0.01),肠复方低剂量组与模型对照组差异有统计学意义(P0.05)。与模型对照组相比,肠复方中剂量组、5-FU组PCNA的表达均有所降低,与模型对照组差异有统计学意义(P0.05)。肠复方高剂量组明显抑制细胞PCNA的表达,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:肠复方能够诱导肠癌原位移植裸鼠移植瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖,可能为肠复方抑瘤作用的机制之一。     

p27mt对裸鼠肝癌移植瘤组织VEGF表达的影响

目的:研究外源性突变型p27基因(p27mt)对裸鼠皮下肝癌移植瘤血管生长的影响。方法:用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721构建人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将腺病毒介导的突变型p27(Ad-p27mt组)注射瘤体2,1d后观察移植瘤的血管变化,免疫荧光法检测组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。结果:Ad-p27mt组移植瘤血管单支、纤细,VEGF表达低于对照组和Ad-Lac Z组(P<0.05)。结论:p27mt抑制裸鼠皮下移植瘤滋养血管生成可能通过降低血管中VEGF表达完成。     

胃癌中HSP70、NF-κB p65的表达及临床意义

目的探讨热激蛋白70(HSP70)、核因子κB(NF-κB)p65在胃癌中的表达及其意义。方法收集2011年8月至2012年5月益都中心医院经病理诊断确诊为胃癌并行胃癌根治术的胃癌组织标本60例,采用免疫组织化学法检测60例胃癌患者癌组织及癌旁组织中HSP70、NF-κB p65的表达,并分析两者与胃癌病理特征的关系。结果胃癌组织中HSP70的阳性表达率显著高于癌旁胃组织(78.3%vs 13.3%)(P<0.05);NF-κB p65阳性表达率显著高于癌旁胃组织(63.3%vs 30.0%)(P<0.05);HSP70、NF-κB p65与胃癌组织分化程度、肿瘤的浸润深度以及淋巴结转移有关(P<0.05);HSP70、NF-κB p65在胃癌中的表达呈正相关(P<0.05)。结论 HSP70、NF-κB p65可能通过调节细胞凋亡及细胞增殖参与胃癌的发生、发展,监测HSP70、NF-κB p65在一定程度上有助于胃癌的治疗及预后判断。     

NF-κB和Caspase-9在胰腺癌中的表达及临床意义

目的探讨NF-κB和Caspase-9在胰腺癌生长、浸润、转移过程中的作用,为对患者进行预后判断及生物治疗提供理论依据。方法应用免疫组织化学技术S-P法,检测NF-κB和Caspase-9在53例胰腺癌、10例非肿瘤性胰腺组织中的表达,并分析它们与胰腺癌临床病理参数及患者生存率的关系。结果（1）NF-κB在非肿瘤性胰腺组织、胰腺癌中的阳性表达率分别为10.00%、79.20%,两者间的差异具有统计学意义（P〈0.01）。NF-κB的表达强度与临床分期及淋巴结有无转移呈正相关（P〈0.01）。（2）Caspase-9在非肿瘤性胰腺组织、胰腺癌中的阳性表达率分别为10.00%、52.83%,两者间的差异具有统计学意义（P〈0.05）。Caspase-9的表达强度与临床分期、淋巴结有无转移呈正相关（P〈0.05）,与组织学分级呈负相关（P〈0.05）。（3）NF-κB和Caspase-9在胰腺癌组织中存在协同作用。结论NF-κB在胰腺癌生长、浸润和转移过程中发挥一定作用,其检测可对胰腺癌的预后判断提供必要的理论依据;Caspase-9作为影响细胞凋亡过程因子,在胰腺癌的发展进程中也起一定作用;二者存在协同作用。     

乳腺癌组织血清NF-κB p65表达分析及临床意义

目的检测乳腺癌患者血清和组织NF-κB p65的表达,探讨NF-κB p65血清与组织表达是否一致;血清表达与乳腺癌发生发展的关系。方法采用RT-PCR和Western blotting检测41例乳腺癌及癌旁组织NF-κB p65的表达。ELISA法检测80例乳腺癌、60例正常和良性肿块患者血清NF-κB p65水平。分析血清与组织NF-κB p65表达关系及血清表达与临床病理结果的关系。结果 41例乳腺癌患者组织RT-PCR和Western blotting结果表明NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平均高于癌旁和良性组(P<0.05),高表达率为(87.9%,82.9%);血清NF-κB p65的阳性率为85.4%,血清和组织表达一致性检验发现两者具有统计学意义(Kappa=0.458),表达一致率为73.2%。80例乳腺癌患者血清NF-κB p65表达与病理结果相关性分析表明血清NF-κB p65表达与乳腺癌患者的淋巴结是否转移及Her-2高表达明显相关(P<0.05)。结论血清NF-κB p65浓度可反映乳腺癌患者组织NF-κB p65表达水平,同时可反应乳腺癌患者转移和Her表达情况,为临床诊断乳腺癌提供了新的思路。     

大鼠酒精性肝病细胞凋亡中Caspase-3、NF-κB的表达

目的:观察大鼠酒精性肝病组织病理形态学改变,探讨细胞凋亡与Caspase-3、NF-κB的表达及意义。方法:采用灌胃法制备大鼠酒精性肝病(ALD)模型,模型组用40%酒精8g/(kg·d)分两次灌胃共12周,对照组灌等量的生理盐水,实验第8、12周末分批处死动物。用HE染色和电镜分别观察肝组织病理变化和肝细胞超微结构变化,用TUNEL法检测肝细胞的凋亡,用免疫组化法检测Caspase-3、NF-κB的表达。结果:模型组肝细胞凋亡明显增多,主要分布在中央静脉周围,点状、灶状坏死区;Caspase-3、NF-κB主要分布在中央静脉及肝细胞坏死灶周围细胞的胞质中,模型组Caspase-3、NF-κB表达强度明显高于对照组,且NF-κB的表达与Caspase-3的表达呈正相关。结论:大鼠酒精性肝病的发生、发展过程中Caspase-3、NF-κB参与肝细胞凋亡。     

siRNA介导的NF-κB P65沉默诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡

目的 研究siRNA介导的NF-κBP65沉默诱导肝癌细胞凋亡相关机制。方法实验以肝癌SMMC772l细胞株为材料,分为空白对照（Con）、脂质体对照（LP）以及siRNA干扰实验（siRNA）3组。以体外转录法合成dsRNA,并用脂质体转染SMMC7721细胞株;Westernblotting检测NF．KBP65表达水平,MTT检测细胞增殖情况,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,免疫组化检测Bcl-2和Bax表达。结果与Con和LP组相比,siRNA具有抑制SMMC7721细胞NF-κBP65表达的作用,NF-κBP65表达抑制率分别达到64．74％和34．52％。siRNA明显抑制SMMC．7721细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,晚期凋亡细胞分别是Con组和LP组的8倍和7倍。siRNA引起Bcl-2表达下调,而Bax表达上调。结论siRNA可以有效抑制NF-κBP65蛋白表达,并通过调节Bcl-2和Bax诱导SMMC7721细胞的凋亡。