吗啡对体外培养人子宫内膜基质细胞ERmRNA表达的影响

目的　研究吗啡对体外培养的人子宫内膜基质细胞的雌激素受体信使核糖核酸 (ERmRNA)表达的影响。方法　体外分离培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞 ,并通过免疫细胞化学的方法进行鉴定 ;将基质细胞给予 17 β雌二醇或吗啡及纳洛酮干预 ,通过RT PCR的方法半定量分析吗啡对基质细胞ERmRNA表达的影响。结果　雌激素上调基质细胞ERmRNA的表达 ,吗啡作用 2 4h ,呈剂量依赖性抑制基质细胞ERmRNA的表达 ,r =- 0 .94 6 (P <0 .0 5 )。结论　外源性阿片类药物吗啡抑制基质细胞雌激素受体mRNA的表达。     

紫草素对子宫内膜异位症大鼠内膜细胞凋亡影响实验研究

目的:观察紫草素对子宫内膜异位症模型大鼠内膜细胞凋亡过程的作用。方法:建立子宫内膜异位症大鼠模型,以紫草素高、中、低剂量与生理盐水灌胃处理,观察异位内膜病理改变,TUNEL法检测内膜细胞凋亡情况,通过免疫组化检测内膜Bax、Bcl-2表达,RT-PCR法检测Bax、Bcl-2 m RNA表达,Western blotting检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:高剂量紫草素处理能改善移植内膜细胞病理性状;经紫草素处理后的异位内膜细胞凋亡率较高,尤以高剂量组最为显著。高剂量组异位内膜组织中Bax表达较高,其m RNA及蛋白表达也较高;Bcl-2表达减少,其m RNA及蛋白表达也较低;Bax/Bcl-2比值升高。结论:紫草素对移植的子宫内膜细胞具有促凋亡作用。     

人子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞分离方法的研究

目的 探索子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞分离的新方法。方法 通过胶原酶阶梯消化(0．25％，0．15％，0．1％，0．08％)、不同目次的筛网过滤、重力沉降等技术得到高纯度的人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。结果 应用浓度逐渐降低的胶原酶消化子宫内膜组织，可提高细胞的存活率及细胞收集量。筛网过滤和重力沉降法，可提高子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的纯度，腺上皮细胞可达90％，基质细胞可达96％以上。结论 采用此方法可得到大量高纯度的子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞，为体外研究子宫内膜提供模型。     

叶秀英运用通补二法辨治薄型子宫内膜经验

薄型子宫内膜的病机大致为精血亏虚、胞宫失养,瘀血阻滞、胞脉不畅,以及奇经受损、胞脉瘀阻3种类型。临证时先审导致薄型子宫内膜的原发疾病,以其刻下本质性、关键性的病理学特点为中医药治疗切入点,病证结合,辨证为基,审因论治。灵活运用“通补二法”,或以补为主,治以补肾填精养血,滋养胞宫;或以通为主,治以活血化瘀,畅通胞脉;或通补兼施,治以填精养血,培补奇经,兼活血化瘀,畅通胞脉,并根据月经周期气血阴阳的变化规律施治。     

人子宫内膜基质细胞的分离纯化和体外培养方法研究

目的：分离和纯化人子宫内膜基质细胞用于宫腔粘连发病机制的研究。方法通过二次酶消化、一次网筛和差时贴壁等方法,分离和纯化人子宫内膜基质细胞,体外培养传代,通过免疫组织化学法进行细胞表型鉴定。结果基质细胞在接种后30 min开始贴壁,可见梭形和多角形2种形态的细胞。免疫组织化学显示这2种细胞具有波形蛋白免疫反应性,反应率可达95％以上,而细胞角蛋白无免疫反应性,提示其为来源于内膜基质的基质细胞。分离出的子宫内膜基质细胞可以在体外进行增殖。结论采用二次酶消化、一次网筛和差时贴壁纯化等方法,可成功分离人子宫内膜基质细胞,且基质细胞可以有限的传代。     

表皮生长因子对人子宫内膜细胞GJIC影响的体外研究

[目的]探讨表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)对人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间隙连接细胞间通讯(Gap Junction htercellular Communication,GJIC)及连接蛋白(Connexin,Cx)43、32表达的影响.[方法]采用划痕染料标记示踪技术,以荧光黄染料在细胞同的扩散作为评价间隙连接通讯的指标,观察EGF对原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC的影响,采用激光共聚焦显微镜扫描技术,观察EGF对Cx43、Cx 32表达的影响.[结果]EGF可显著抑制人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC功能(P＜0.01);增强Cx43、Cx2表达(P＜0.05).[结论]EGF可显著抑制人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC功能,提示其在子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色;EGF增强子宫内膜Cx43、Cx2表达,提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能.     

TNF-α、sTNFRⅠ对子宫内膜异位症在位内膜基质细胞的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)和可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFRⅠ)对体外培养的子宫内膜异位症患者(EMs)在位内膜基质细胞的影响,探索EMs生物治疗的靶标。方法:对10例EMs患者的在位子宫内膜组织进行分离纯化、体外培养、鉴定。将基质细胞接种于96孔板中,用不同浓度的TNF-α和sTNFRⅠ处理。用MTT法(溴化钾噻唑基四唑显色法)观察基质细胞的生长情况,并收集细胞上清液,利用ELISA法(双抗体夹心法)检测细胞培养上清液中白介素-8(IL-8)的水平。结果:TNF-α以剂量依赖方式促进EMs基质细胞的增殖,并促进基质细胞表达IL-8(P<0.05);sTNFRⅠ能阻断TNF-α的促增殖作用,但剂量必须很大。结论:TNF-α在EMs的病理生理过程中起了较大的作用,sTNFRⅠ可考虑作为EMs生物治疗的新方向。     

人子宫内膜细胞纯化方法的研究

目的探讨一种人子宫内膜细胞体外分离培养的方法。方法将离体子宫内膜组织立即放入无菌瓶中,冲洗、剪碎,0.1%Ⅰ型胶原酶消化2h,100目和300目细胞筛分离上皮细胞和间质细胞,分别离心（前者700r/min,离心5min,后者1000r/min,离心10min）,应用含20%胎牛血清的DMEM培养基体外培养,并通过免疫细胞染色进行鉴定。结果胶原酶消化及细胞筛过筛后离心可以完全分离子宫内膜上皮细胞和间质细胞,并分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗组化染色为阳性。结论该方法简单,费用低廉,能达到完全分离子宫内膜细胞的目的。     

姜黄素抑制子宫内膜细胞及对雌激素生成影响的实验研究

目的:研究姜黄素在抑制异位子宫内膜细胞增殖过程中的影响,并且探讨该效果是否通过降低雌二醇(estradiol,E2)的生成所介导。方法:对异位内膜间质细胞、正常子宫内膜间质细胞、异位内膜腺上皮细胞和正常子宫内膜腺上皮细胞进行分离与培养。测定各组E2分泌量和姜黄素干预对细胞增殖的影响。结果:电化学发光免疫法结果表明,异位内膜腺上皮细胞E2生成水平高于异位内膜间质细胞生成水平(P<0.05),同时正常子宫内膜间质和腺上皮细胞E2生成水平都极低。WST-8结果显示,与正常子宫内膜间质细胞相比较,异位内膜间质细胞生长速率更高。分别用10、30、50μmol/L浓度的姜黄素干预0⁹6 h后,异位内膜间质细胞的数量和生长速率比正常子宫内膜细胞减少;E2的生成水平比正常子宫内膜细胞低,尤其是在姜黄素浓度为30μmol/L和50μmol/L组中。结论:异位内膜局部雌激素高水平生成是异位内膜发生发展的重要因素,异位内膜腺上皮细胞在E2分泌中占主导地位。姜黄素能通过减少E2分泌来抑制异位子宫内膜细胞的增殖。     

小鼠子宫内膜基质细胞分离培养及鉴定

目的寻求一种简便有效的早孕小鼠子宫内膜基质细胞的培养方法。方法采用胰蛋白酶消化与机械振荡相结合分离小鼠子宫内膜基质细胞,接种后通过光镜观察其形态学特征,并采用免疫细胞化学进行细胞鉴定。结果接种24h后大部分细胞已贴壁,培养3d后细胞排列紧密、形态为长梭形。经过免疫细胞化学鉴定,成功获得了小鼠子宫内膜基质细胞。结论胰蛋白酶消化与机械振荡相结合可成功分离并原代培养小鼠子宫内膜基质细胞。     

TGF-β1对小鼠子宫内膜基质细胞 MMP-9表达的影响

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对小鼠子宫内膜基质细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法分离和纯化小鼠子宫内膜基质细胞,在此细胞培养体系中加入不同浓度的 TGF-β1,终浓度为0．1、2．5、5．0、10．0、20．0 ng／mL ,培养48 h 后通过 ELISA 法检测培养液中 MMP-9的含量。结果与对照组比较,实验组随 TGF-β1浓度的增加,小鼠子宫内膜基质细胞 MMP-9表达上升,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论小鼠子宫内膜基质细胞体系中,TGF-β1可能通过调控 MMP-9的表达,参与调节细胞外基质代谢。     

人蜕膜基质细胞条件培养液对滋养细胞浸润功能的影响

胎盘滋养细胞的适度浸润是成功妊娠过程中胚胎植入与胎盘形成的必要条件。有研究表明母体的蜕膜微环境能影响滋养细胞的浸润能力。然而,目前滋养细胞有节制侵入子宫内膜的机制尚不明确。本研究通过体外培养人早孕正常蜕膜基质细胞,收集基质细胞条件培养液（DSCM）用以处理正常人早孕滋养细胞系（B6Tert）,     

miR-145通过调控人子宫内膜基质细胞OCT4的表达促进子宫内膜异位症的发展机制

目的 通过体外细胞试验探讨miR-145在子宫内膜异位症（Endometriosis,EMs）中的调控机制。方法 蛋白印迹检测OCT4等相关蛋白的表达水平,通过相关分析和双荧光素酶报告试验用于评估miR-145和OCT4之间的关联,CCK8试剂盒检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,通过Transwell法检测hESCs的迁移。结果 前期临床试验发现异位子宫内膜组织miR-145表达上调,OCT4表达下调。在细胞实验中,miR-145过表达可显著促进hESCs的增殖和迁移（P <0.01）,但抑制hESCs的凋亡（P <0.05）。miR-145模拟物转染hESCs后,OCT4、Bax和MMP1等蛋白表达水平降低（P <0.01）,Bcl-2蛋白表达水平升高（P <0.05）。敲除miR-145逆转了上述结果,并通过靶向OCT4显著抑制了hESCs的增殖（P <0.05）。结论 研究结果表明,miR-145表达增加通过抑制OCT4蛋白表达,可能通过促进子宫内膜基质细胞上皮细胞间质转化（Epithelial-mesenchymal Transition,EM...     

人脐带间充质干细胞培养上清对米非司酮处理的人子宫内膜基质细胞存活、凋亡和子宫内膜容受性的影响

目的：探讨人脐带间充质干细胞培养上清（hUCMSCs-Sup）对米非司酮（Ms）处理的人子宫内膜基质细胞（hEndoSCs）增殖、凋亡和子宫内膜容受性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：体外培养hEndoSCs,分为对照组和40、60、80及100μmol·L-1 Ms组,MTT法检测各组细胞存活率。hEndoSCs分为对照组、40μmol·L-1 Ms组和60μmol·L-1 Ms组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平并计算Bcl-2/Bax比值。hUCMSCs-Sup作用后,hEndoSCs分为对照组、Ms组、Ms+hUCMSCs-Sup组和Ms+hUCMSCs-Sup+3-甲基腺嘌呤（3-MA）组,MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）和微管相关蛋白1轻链3B-Ⅰ（LC3B-Ⅰ）蛋白表达水平并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值,实时荧光定量P...     

桂楼复方对子宫腺肌病异位内膜细胞迁移和侵袭的影响研究

背景 子宫腺肌病（AM）是妇科常见的疑难病,但其具体机制尚未明确。中医药治疗AM有一定优势,前期研究显示,桂楼复方宫内缓释系统可明显降低AM模型大鼠子宫内膜细胞增殖、侵袭能力。目的 探讨桂楼复方对子宫腺肌病异位内膜细胞（AMDC）迁移、侵袭的影响,并研究其对Rho/ROCK信号通路的影响。方法 本研究于2021年10月—2023年4月在山东中医药大学附属医院实验中心完成。使用CCK-8法检测AMDC细胞活力并筛选最佳药物浓度。设置空白组,使用桂楼复方（50、100 mg/L）处理AMDC,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,免疫印迹法Western Blotting）/实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2在蛋白和mRNA水平的表达情况。Rescue实验中使用激动剂U-46619(1μmol/L)和桂楼复方（100mg/L）处理AMDC,Western Blotting法检测RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达改变情况。结果 与空白组比较,100 mg/L桂楼复方干预后AMD...     

消瘤方对子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞NF-κB/MAPK信号通路的影响

目的:探讨中药消瘤方对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位和异位内膜基质细胞核转录因子(NF)-κB/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:采用改良筛网法原代分离、培养EMs患者在位、异位及正常人子宫内膜基质细胞;将分离出的子宫内膜细胞分为正常组、在位组和异位组,其中在位和异位组再随机分为空白对照组(生理盐水组)、西药对照组(孕三烯酮组)、中药低剂量组(消瘤方提取物5 g/L组)及高剂量组(消瘤方提取物10 g/L组),各组分别加入相应药物干预后采用RT-PCR方法检测内膜细胞NF-κB/MAPK因子的表达水平。结果:药物干预后发现,消瘤方高剂量组和西药组可抑制在位及异位子宫内膜细胞的NF-κB/MAPK p38信号因子的激活,降低NF-κB/MAPK p38因子的表达,差异具有统计学意义(P0.01,P0.05)。结论:子宫内膜异位症的发生与NF-κB/MAPK信号通路的激活密切相关,消瘤方可通过抑制子宫内膜细胞NF-κB/MAPK信号通路因子的表达,从而阻止内异灶的形成而起到治疗的作用。     

活血化瘀、软坚散结法对子宫内膜异位症IL-6影响的实验研究

目的:观察活血化瘀、软坚散结法(妇痛宁颗粒)治疗子宫内膜异位症临床疗效.方法:采用手术移植法制备大鼠子宫内膜异位症模型.实验共分6组.实验结束检测各组大鼠腹腔液IL-6水平.结果:造模后大鼠腹腔液IL-6水平明显上升,与空白对照组比较P＜0.05.各组腹腔液IL-6含量均较模型对照组下降,妇痛宁中、低剂量组、丹那唑组疗后IL-6水平与空白对照组比较,P＞0.05,无明显差异.妇痛宁中剂量组与高剂量组比较P＜0.05.结论:妇痛宁颗粒冲剂能降低其腹腔液IL-6水平,取得了较好的疗效.     

人子宫内膜基质细胞及腺上皮细胞的分离纯化和体外培养

目的：建立人子宫正常内膜、内膜异位症在位及异位子宫内膜的基质及腺上皮细胞分离、培养的方法，为进一步研究子宫内膜异位症发生、发展的分子生物学机制提供一个理想的实验模型。方法：15例正常子宫内膜、15例在位子宫内膜及10例异位内膜经胶原酶消化、筛网过滤、差时贴壁等技术进行分离、纯化和体外培养，光镜观察，应用鼠抗人波形蛋白抗体、鼠抗人细胞角蛋白单克隆抗体免疫组化染色对间质及上皮细胞进行鉴定。结果：正常子宫内膜和子宫内膜异位症在位子宫内膜标本分离、培养均成功；5例异位内膜标本获得成功．基质细胞和腺上皮细胞纯度均可达95％以上，并均可传代。结论：采用酶解、筛网分离及贴壁能获得纯度较高的基质与腺上皮细胞。人子宫内膜细胞分离体外培养的成功，有助于研究子宫内膜异位症的发病机制．为临床实验提供重要的理论依据．