淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

【摘要】 目的 探讨淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌Hep-G2细胞;采用MTT比色法检测淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖的影响;将Hep-G2细胞分为：空白对照（Control)组、低剂量（2.5 μM/L)组、中剂量（5 μM/L)组和高剂量（10 μM/L)组;蛋白质印记检测增殖、凋亡相关蛋白Ki-67、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达情况;克隆形成实验检测各组肝癌细胞增殖情况;流式细胞仪检测Hep-G2细胞凋亡情况。结果MTT结果显示淫羊藿素对肝癌Hep-G2细胞的IC50为5.38 μM/L;与空白对照组相比,低剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）;与低剂量组相比,中剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）;与中剂量组相比,高剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）。结论淫羊藿素可以抑制肝癌Hep-G2细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达以及增强caspase-3的活性相关。     

牛黄参含药血清调控Bax、Bcl-2表达诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的实验研究

目的观察牛黄参胶囊含药血清对人肝癌细胞HepG-2的Bax、Bcl-2的调控作用。方法建立并分为空白对照组,环磷酰胺组和牛黄参胶囊5%、10%和20%含药血清组。采用实时定量PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA的表达水平;免疫组织化学法检测HepG-2细胞Bax、Bcl-2的表达;Western blotting检测Bcl-2蛋白的表达水平。结果牛黄参胶囊20%含药血清能在基因和蛋白水平明显上调Bax表达(P0.01),明显抑制Bcl-2的表达(P0.01),并具有明显的剂量依赖性。结论牛黄参胶囊含药血清能明显上调Bax表达,同时下调Bcl-2表达,可能是其诱导肝细胞凋亡的机制之一。     

柚皮素- 铜络合物对Hep- G2细胞增殖与凋亡的影响

目的观察柚皮素-铜络合物在体外对人肝癌Hep-G2细胞增殖与凋亡的影响,探究其作用机制。方法将不同浓度柚皮素-铜络合物作用于体外培养的Hep-G2细胞,采用甲基噻唑基四唑法检测细胞生长抑制率;荧光显微镜下观察柚皮素-铜络合物对DAPI染色的Hep-G2细胞凋亡的影响;应用流式细胞仪检测凋亡率;Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的变化。结果柚皮素-铜络合物可显著地抑制Hep-G2细胞增殖,且在一定的范围内呈浓度依赖性。荧光显微镜下观察显示,柚皮素-铜络合物作用的Hep-G2细胞出现显著的凋亡特征,呈剂量依赖性地增加细胞凋亡率。柚皮素-铜络合物可上调Hep-G2细胞中Bax、Caspase-3蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达,且呈一定的剂量依赖性。结论柚皮素-铜络合物可抑制Hep-G2细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达有关。     

放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2蛋白表达水平的影响.方法:6MV-X射线照射细胞,采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2的表达.结果:Bax和Bcl-2的表达在照射时间和照射剂量之间存在交互作用(F=1.733,P=0.042;F=1.700,P=0.048).4Gy照射剂量作用细胞48h后,Hep-G2细胞中Bax的表达达高峰、Bcl-2的表达至低谷.结论:放射线可能通过促进Bax表达和抑制Bcl-2表达诱导肝癌细胞凋亡.     

臭牡丹含药血清对人肝癌MHCC97-H细胞周期和凋亡的影响

目的观察臭牡丹含药血清对B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达及人肝癌MHCC97-H细胞周期、凋亡的影响,探讨其抗肝癌的可能机制。方法 15%臭牡丹高、中、低剂量含药血清作用于MHCC97-H细胞,显微镜下观察细胞形态的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果不同剂量臭牡丹含药血清作用于细胞后,细胞形态发生稀疏杂乱、折光性增强等改变;流式细胞术结果显示,随含药血清浓度的增加,细胞的凋亡比例和G2/M期细胞比例亦相应增加,S期细胞比例降低,中、高剂量组与模型组比较,差异显著(P0.05);Western blot法结果显示不同浓度臭牡丹含药血清干预下各组Bax蛋白的表达水平上调,Bcl-2蛋白的表达降低(P0.01)。结论臭牡丹含药血清可以促进MHCC97-H肝癌细胞凋亡并阻止其细胞周期,机制可能与上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白,影响Bax/Bcl-2比值有关。     

菟丝子含药血清对TNF-α诱导凋亡蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

[目的]观察菟丝子含药血清对TNF-α诱导人凋亡蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,以期从蜕膜细胞凋亡的角度探讨菟丝子安胎的机理.[方法]体外常规进行人蜕膜细胞的培养,选用适宜浓度的TNF-α诱导建立人蜕膜细胞异常凋亡模型,用菟丝子含药血清干预,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测对照组、模型组(TNF-α)、治疗组(TNF-α+菟丝子含药血清)凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.[结果]与对照组比较,模型组细胞促凋亡蛋白Bax的表达明显增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低,均有显著性差异(P＜0.05);与模型组比较,治疗组促凋亡蛋白Bax的表达明显降低,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达明显增加,均有显著性差异(P＜0.05).[结论]菟丝子含药血清可降低异常凋亡蜕膜细胞Bax水平,升高Bcl-2水平,从而可抑制早期蜕膜细胞的异常凋亡,起到保胎作用.     

化痰法结合补气、活血法促进肝星状细胞系HSC-T6凋亡的实验研究

目的:观察化痰法结合补气、活血法对肝星状细胞系HSC-T6生长的抑制作用及对相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法:制备相关化痰法药物血清,采用MTT法检测各组含药血清对HSC-T6细胞增殖的影响;AnnexinⅤ/PI双染法,流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot方法检测细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果:MTT结果表明化痰法结合补气、活血法可有效抑制肝星状细胞HSC-T6的增殖;AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测结果表明化痰法结合补气、活血法可以促进HSC-T6细胞凋亡;Western blot结果显示化痰法结合补气、活血法能降低细胞中Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且Bcl-2/Bax明显下降。结论:化痰法结合补气、活血法可通过抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达来诱导HSC-T6细胞凋亡,进而发挥抗肝纤维化作用。     

隐丹参酮对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮(CPT)对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Real Time RT-PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21 mRNA表达的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21表达的变化。结果 CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901 24 h后,可明显抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡;在转录水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53 mRNA的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达;在翻译水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 CPT对人胃癌细胞SGC-7901具有诱导凋亡的作用,其机制可能与线粒体途径相关。     

Mechanism of Hewei Jiangni Capsule(和胃降逆胶囊)Regulating Proliferation and Apoptosis of Human Gastric Cancer AGS Cells Through PI3K/AKT Signaling Pathway

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况.结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P＜0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义.在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低.各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P＜0.05),且呈现出浓度相关性.结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡.     

龙胆苦苷对博来霉素诱导肺泡上皮细胞凋亡的抑制作用

目的研究龙胆苦苷(gentiopicroside,GPS)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导肺泡上皮细胞A549凋亡的影响。方法体外培养A549细胞,流式细胞术检测龙胆苦苷对BLM诱导A549细胞凋亡的影响,免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 BLM能诱导肺泡上皮细胞A549凋亡,龙胆苦苷能抑制BLM诱导的肺泡上皮细胞凋亡(P<0.05)。龙胆苦苷能明显下调博来霉素诱导的肺泡上皮细胞A549的促凋亡基因Bax蛋白表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达(P<0.05)。结论龙胆苦苷能抑制BLM诱导肺泡上皮细胞凋亡,其机制与下调促凋亡基因Bax蛋白表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。     

鱼藤素对小细胞肺癌的体外抗肿瘤效果评价及相关机制分析

目的:研究鱼藤素对小细胞肺癌体外抗肿瘤效果?方法:0?5?10?20?50 μmol/L鱼藤素作用于NCI-H446细胞24 h,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)分析鱼藤素对细胞活力的影响?据CCK8结果,以0?5?10?20 μmol/L鱼藤素作用于NCI-H446细胞,EdU掺入法检测细胞增殖,DAPI染色及流式细胞术测定细胞凋亡?据流式结果,20 μmol/L鱼藤素作用NCI-H446细胞0?0.5?2.0?4.0 h,蛋白质印迹法检测细胞内凋亡相关蛋白的表达?结果:鱼藤素呈剂量依赖性地抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖?诱导其凋亡,作用不同时间后可上调促凋亡蛋白Bax?下调抗凋亡蛋白Bcl-2水平?结论:鱼藤素体外抗小细胞肺癌效应可能通过上调促凋亡蛋白Bax?下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,诱导细胞凋亡实现?     

川芎嗪调控肝癌HepG2细胞凋亡及对相关蛋白表达的影响

目的 通过研究川芎嗪（Tetramethypyrazine,TMP）对肝癌HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨TMP抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法 通过实时细胞分析技术（Real-time cell analyzer,RTCA DP）检测TMP对HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测TMP对HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响;通过全自动Western blot实验检测TMP对p53蛋白及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。结果 TMP对肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间剂量依赖关系;TMP可显著诱导肝癌HepG2细胞凋亡,显著增加G0/G1期细胞,且呈一定的时间相关性;TMP能够显著促进p53蛋白的表达（P<0.01）和降低Bcl-2/Bax表达比值（P<0.01）。结论 TMP具有抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用,其机制可能与影响肝癌HepG2细胞周期,导致细胞周期阻滞有关;同时TMP可促进p53蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达从而降低Bcl-2/Bax表达比值,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肝癌细胞的增殖。      

半枝莲提取物抗人肝癌Hep-G2细胞增殖及其机制研究

目的探讨半枝莲提取物（ESB）对人肝癌Hep-G2细胞体外增殖的影响及其作用机制。方法以MTT法检测ESB对Hep-G2细胞增殖的影响；光镜、电镜观察ESB作用后Hep-G2细胞形态的变化；流式细胞仪检测ESB作用后Hep-G2凋亡细胞、细胞周期的变化及凋亡相关蛋白Bcl-2，Bax，Fas表达。结果ESB能明显抑制Hep-G2细胞的增殖，荒有剂量效应及时间效应关系。ESB作用Hep-G2细胞72h后，呈现凋亡早期的形态学改变；凋亡细胞增多；S期细胞减少，G0／G1期细胞增多；Fas表达增强，Bcl-2及Bax表达变化不明显。结论ESB可抑制Hep-G2细胞增殖，阻滞细胞周期，促进细胞凋亡，可能与激活FNFR超家族有关。     

扶正消瘤颗粒含药血清对肝癌HepG2细胞体外增殖和凋亡相关蛋白的影响

目的:观察扶正消瘤颗粒含药血清对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡相关蛋白的影响。方法:60只雄性SD大鼠,随机分为6个组,每组10只,分别为扶正消瘤颗粒低剂量组、扶正消瘤颗粒中剂量组、扶正消瘤颗粒高剂量组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组、联合组、对照组。中药各剂量组给予不同剂量扶正消瘤颗粒灌胃;5-FU组给予5-FU腹腔灌注;联合组给予中剂量的扶正消瘤颗粒灌胃,同时给予5-FU腹腔灌注;对照组给予生理盐水灌胃。采用四甲基偶氮唑盐比色法检测肝癌HepG2细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测肝癌HepG2细胞凋亡;Western-Blot法观察各组肝癌HepG2细胞P53蛋白、Bcl-2蛋白和Survivin蛋白的表达。结果:扶正消瘤颗粒含药血清可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性;其中联合组对肝癌HepG2细胞的抑制率最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);不同浓度扶正消瘤颗粒含药血清均可诱导肝癌HepG2细胞的凋亡,联合组凋亡率最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,各扶正消瘤颗粒含药血清组均可下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达,增强P53蛋白的表达。结论:扶正消瘤颗粒含药血清可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用可能是通过抑制Bcl-2和Survivin蛋白的表达,增强P53蛋白的表达实现的。     

吲哚美辛对结肠癌细胞HCT116中细胞周期蛋白的影响

目的揭示吲哚美辛抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡的分子机理，探讨其抗结肠肿瘤的作用机制。方法不同浓度的吲哚美辛作用于结肠癌细胞株HCT116细胞24h，采用Western蛋白印迹技术检测CDK2、CDK4、Bcl-2、Bax及p21^WAE1/CIP1蛋白表达。结果吲哚美辛能降低CDK2、CDK4及Bcl-2的表达，同时上调p21WAE1／CIP1蛋白的表达且呈剂量依赖方式，而对促凋亡蛋白bax的表达无影响。结论吲哚美辛可通过降低CDK2、CDK4、Bcl-2蛋白，上调p21^WAF1/CIP1蛋白的表达来抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡，从而实现其抗肿瘤作用。     

脂联素对PDGF诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：探讨脂联素（adiponectin,ADPN）对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax表达的影响。方法：脂联素预孵系膜细胞,采用PDGF-BB刺激系膜细胞,应用MTT法检测细胞增殖,应用Western法检测增殖细胞核抗原PCNA、凋亡抑制蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达。结果：（1）脂联素抑制PDGF-BB所致的系膜细胞增殖,与单用PDGF-BB组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。（2）脂联素抑制PDGF-BB所致系膜细胞Bcl-2的表达,促进Bax蛋白的表达,与PDGF-BB组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：PDGF-BB能够促进系膜细胞增殖,使凋亡抑制蛋白Bcl-2表达增加,而促凋亡蛋白Bax表达减少。加入脂联素干预后通过下调Bcl-2,上调Bax的表达而抑制了由PDGF-BB引起的系膜细胞增殖。     

山楂酸抑制食管鳞癌细胞增殖、迁移与诱导凋亡的作用研究

目的 探讨山楂酸对食管鳞癌细胞增殖、迁移与诱导凋亡的影响及可能机制。方法 分别以不同浓度的山楂酸处理ECA-109细胞,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Annexin V-FITC/PI双染凋亡法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2和p53蛋白的表达。结果 山楂酸剂量依赖性抑制ECA-109细胞的增殖和迁移,Annexin V-FITC/PI双染检测到细胞经给药后发生凋亡,且细胞中Bax、p53蛋白表达上升,Bcl-2蛋白表达下降。结论 山楂酸对食管鳞癌细胞的增殖和迁移有抑制作用,且通过上调Bax、p53和下调Bcl-2的表达来诱导该细胞凋亡。     

重建中气抗癌汤含药血清抑制胃癌SGC7901细胞作用及机制研究

目的探讨重建中气抗癌汤含药血清对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响及机制。方法 Wistar大鼠随机分为空白组,重建中气抗癌汤低、中、高剂量(1.55、3.1、6.2 g/kg)组及5-氟尿嘧啶(5-FU)组制备含药血清。含药血清作用SGC7901细胞后,采用流式细胞术观察细胞凋亡率,梯度聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3) mRNA活性;蛋白质印迹法(Western Blot)检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况。结果与对照组比较,经加味重建中气抗癌汤各浓度组处理后,各实验组SGC7901细胞的凋亡率显著高于对照组;重建中气抗癌汤处理后的促凋亡基因Caspase-3、Bax mRNA及蛋白表达均升高,抗凋亡基因Bcl-2的mRNA及蛋白表达均降低(P0.05)。结论重建中气抗癌汤含药血清能够诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,其机制可能与增强Caspase-3活性、上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。     

蟾蜍毒素诱导结肠腺癌细胞HT-29凋亡中对相关蛋白的影响

目的 探讨蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡及其机制.方法 MTI检测蟾蜍毒素对结肠腺癌细胞HT-29增殖抑制;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞凋亡;Western-Blot检测livin、Bcl-2、Bax及Capase-3蛋白的表达.结果 蟾蜍毒素抑制HT-29细胞增殖,呈时间、剂量依赖关系;蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡,形态学观察到典型的凋亡小体;流式细胞仪检测到明显亚二倍体凋亡峰;蟾蜍毒素诱导细胞凋亡过程中下调livin、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,并活化Caspase-3蛋白.结论 蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡可能与下调livin、Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白表达并活化Caspase-3有关.