抑制P13K/PKB通路逆转胃癌耐药的作用及其机制

目的 观察抑制PI3K/PKB信号通路对胃癌耐药性的逆转作用,并探讨其可能机制. 方法 通过体内外实验方法检测长春新碱(vincristine,VCR)及联合LY294002(PI3K/PKB通路抑制剂)埘SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用;采用Western blot及RT-PCR分别检测细胞中PKB、磷酸化PKB的蛋白表达水平及MDR1、Bax、Bcl-2基因表达水平;流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 LY294002能明显增加SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性,促进VCR诱导细胞凋亡,使其耐药指数从40.45降至8.50;LY294002可明显降低耐药细胞中磷酸化PKB的蛋白表达和MDR1、Bcl-2的基因表达水平(P<0.01),促进Bax的基因表达(P<0.01);体内实验显示联合用药组的裸鼠移植瘤大小明显小于VCR组(P<0.01). 结论 抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控相关凋亡基因Bax和Bel-2的表达有关.     

沙培林诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及机制的研究

目的:观察沙培林在体外诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用,并探讨其分子机制. 方法:分别以不同浓度(0、0.001、0.01、0.1和0.5 KE/ml)的沙培林干预SGC7901细胞6、12、24和48h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测SGC7901细胞的生长情况;用膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)加碘化丙啶(PI)双染法观察沙培林作用后SGC7901细胞的凋亡情况;用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测沙培林干预后细胞survivin、caspase-3 的mRNA表达变化情况. 结果:沙培林处理后,胃癌SGC7901细胞生长受到抑制,抑制率在一定范围内呈剂量、时间相关性.沙培林作用48h后,流式细胞仪检测SGC7901细胞凋亡显示:随着沙培林浓度的提高,细胞的凋亡率也增加.半定量RT-PCR检测发现:沙培林可以使SGC7901细胞survivin mRNA表达减少,caspase-3 mRNA表达上升(P<0.05). 结论:沙培林在体外可抑制SGC7901细胞增殖,并诱导其发生凋亡,提示该药有治疗胃癌的潜在价值.沙培林诱导SGC7901细胞发生凋亡的生物学效应可能与survivin mRNA表达下调,caspase-3 mRNA表达上升有关.     

SKI-Ⅱ促胃癌SGC7901细胞凋亡的实验研究

目的:研究鞘氨醇激酶(sphingosine kinase,SphK)抑制剂SKI-Ⅱ对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,并探讨其具体作用机制.方法:常规培养人胃癌SGC7901细胞,SKI-Ⅱ单用或联合顺铂(DDP)干预,流式细胞术检测细胞凋亡率;电镜下观察用药后细胞超微结构的改变;免疫细胞化学、Western b...     

蚓激酶对胃癌SGC7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：探讨蚓激酶（LBK）对胃癌SGC7901细胞的调控作用,并阐明其作用机制。方法：取对数生长期SGC7901细胞,将细胞分为对照组和2、4、8 U·mL^-1LBK组。采用MTT法检测不同时间段（24、48和72 h）各组SGC7901细胞增殖抑制率,采用细胞划痕实验检测各组SGC7901细胞体外迁移能力,采用流式细胞术检测各组SGC7901细胞凋亡率和不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测各组SGC7901细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,作用24、48和72h后不同剂量LBK组SGC7901细胞增殖抑制率明显升高（P<0.01）。细胞划痕实验,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞划痕距离明显增加（P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,G₁期和S期细胞百分率明显降低（P<0.01）,G₂期细胞百分率明显升高（P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,8U·mL^-1LBK组SGC7901细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bax和caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：LBK可抑制胃癌细胞株SGC7901增殖和迁移能力,且能够诱导细胞凋亡,其可能的机制是通过调节Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达水平来实现的。     

多糖对人胃癌SGC7901细胞生长抑制的研究

目的研究多糖对人胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用。方法培养人胃癌SGC7901细胞,采用多糖处理后观察其形态变化、凋亡率、BCL－2蛋白及BAX蛋白的表达。结果多糖可以抑制入胃癌SCC7901细胞的增殖,并呈现出对剂量和时间的依赖性。用10mg／ml的多糖处理培养细胞48h后,细胞凋亡率达到39．72％;并出现明显的DNA片段化;BCL－2蛋白的表达下降,而BAX蛋白的表达增加。结论多糖可以通过诱导细胞发生凋亡来抑制入胃癌SGC7901细胞的生长,从而达到}台疗胃癌的目的。     

RAD001对胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用及分子机制

目的:研究mTOR特异性抑制剂RAD001对胃癌SGC7901细胞增殖的影响,并探讨survivin在其中的作用.方法:常规培养胃癌SGC7901细胞,RAD001单独或联合顺铂干预,MTT法测定RAD001对胃癌SGC7901细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率.免疫细胞化学和Western-blot检测药物作用...     

菟丝子醇提物对胃癌SGC7901细胞的生长抑制作用研究

目的探讨菟丝子(CCL)醇提物对人胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用。方法以不同浓度(10、50、100 mg/L)的菟丝子作用于人胃癌SGC7901细胞,同时设二甲基亚砜(DMSO)和RPMI1640培养液作为对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测菟丝子对人胃癌SGC7901细胞的生长抑制情况,通过对SGC7901细胞周期测定,探讨菟丝子对细胞增殖作用的影响。结果菟丝子对SGC7901细胞生长有明显抑制作用,且随着剂量的增高(10~100 mg/L)及作用时间的延长,细胞增殖抑制率亦增高(P<0.01)。100 mg/L的菟丝子作用不同时间(12、24、36 h),处于G0/G1期、S期的细胞所占百分率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论菟丝子醇提取物能够抑制人胃癌SGC7901细胞的生长。可能是通过影响人胃癌SGC7901细胞内DNA复制和合成,抑制细胞正常分裂,阻滞细胞进入S期,从而使细胞在G1期堆积,出现G2/M期阻滞,有丝分裂终止,从而抑制细胞增殖。     

羊栖菜多糖体外抗肿瘤作用及其诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 通过体外抗肿瘤实验观察羊栖菜多糖(SFPS)对6种不同组织肿瘤的抑制作用及其对肿瘤治疗的组织特异性，同时揭示其作用机制。方法 采用MTT法和集落形成实验法观察SFPS的体外抗肿瘤作用；采用流式细胞仪观察SFPS对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 SFPS对人胃癌细胞SGC-7901和人直肠癌CO—LO—205有较好的疗效。SFPS可阻滞SGC—7901人胃癌细胞由G0／G1期进入S期，升高细胞凋亡指数(APO)。结论SFPS对人胃癌细胞和直肠癌细胞效果较好，这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡达到的。     

阿司匹林抑制胃癌干细胞的机制研究

目的 探讨阿司匹林对胃癌干细胞有无抑制作用及可能机制。方法 用RMPI-1640培养液培养人胃癌细胞株SGC7901,无血清培养基悬浮培养抽提富集微球体。MTT法检测阿司匹林对SGC7901细胞微球体生长的抑制情况。平板克隆实验观察阿司匹林对SGC7901微球体细胞克隆形成的影响。Transwell小室实验观察阿司匹林对SGC7901微球体迁移侵袭能力的影响。Western blot检测经过阿司匹林孵育后胃癌干细胞E2F1和Sox2蛋白的表达情况。结果 阿司匹林对人胃癌细胞株SGC7901微球体细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力具有显著的抑制作用。阿司匹林可剂量依赖性下调胃癌干细胞中E2F1和Sox2蛋白的表达。结论 阿司匹林对人胃癌细胞株SGC7901微球体细胞的恶性行为具有抑制作用,其抑制作用与E2F1和Sox2蛋白表达下降有关。     

白藜芦醇联合化疗药物抑制胃癌SGC-7901细胞增殖作用研究

目的分别探讨白藜芦醇(Res)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)在体外对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的作用及其机制,为将来临床上以Res基础的联合用药提供理论和实验依据。方法分别采用不同浓度的5-FU单独或与半抑制浓度(IC50)的Res联合处理SGC-7901细胞24、487、2 h后,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖抑制率,计算5-FU单独或与Res联合处理对SGC-7901细胞增殖抑制的中效浓度,以检测二者有无联合增效作用;以MTT法检测细胞增殖抑制率;以流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡等,观察联合应用对肿瘤细胞的抑制作用。结果 MTT法显示:5-FU单独作用于SGC-7901细胞,其IC5011.44μg/mL,而与150μmoL/L Res联合作用时,则IC506.65μg/mL,说明两种药物联合应用有协同增效作用;FCM结果显示:5-FU分别与Res联合应用,其凋亡率15.68%,与5-FU单独应用相比(11.60%),差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法显示:联合应用与单独应用相比,细胞核明显棕黄色深染,且阳性染色细胞数目明显增多,表明5-FU与Res联合作用,凋亡细胞明显增加。结论 Res联合5-FU可显著抑制肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡,说明Res与5-FU具有协同作用。     

rhIL-24刺激PBMC产生IFN-γ、IL-6的初步研究

目的 研究重组人白细胞介素24(rhlL-24)对外周血单个核细胞产生γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)的刺激效应。方法 正常人的外周血单个核细胞(PBMC)经含有rhlL-24的CHO细胞表达上清刺激48 h、72 h,取其刺激PBMC培养上清液用酶联免疫吸附试验((ELISA)法测定IFN-γ和IL-6含量。结果 加含rhlL-24的CHO细胞表达上清的实验组上清中IFN-γ和IL-6含量明显高于对照组(P<0.01)。结论 rhlL-24对外周血单个核细胞分泌IFN-γ和IL-6具有刺激效应,说明rhlL-24具有明显的免疫调节功能。导师。     

重组人白细胞介素24蛋白的纯化及其对胃癌细胞凋亡的影响

目的 纯化人白细胞介素24的原核重组表达质粒pET-21a（＋）-IL-24在大肠杆菌BL（DE3）中的表达产物rhIL-24，并观察重组表达蛋白rhIL-24在体外对胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响。方法IPTG诱导原核表达载体pET-21a（＋）-IL-24在大肠杆菌中表达rhIL-24，经纯化、复性后作用于人胃癌细胞株SGC-7901。MTT法检测rhIL-24对细胞生长的影响。流式细胞仪检测凋亡峰，荧光染色观察细胞凋亡形态。结果rhIL-24对体外培养的胃癌细胞SGC-7901有明显的生长抑制作用，且呈时间、剂量依赖性。rhIL-24蛋白30μg／ml作用于SGC-7901细胞24h后。流式细胞仪检测结果显示有明显的凋亡峰出现，荧光染色后显示染色质固缩。细胞核呈致密浓染或呈碎块状致密浓染。结论本实验成功纯化IL-24原核表达产物rhIL-24．对体外培养的胃癌细胞株SGC-7901有明显的生长抑制、诱导凋亡作用。     

紫杉醇对人胃癌MGC803细胞形态和增殖的影响

目的 研究紫杉醇对人胃癌MGC803细胞的细胞形态的影响和相关增殖因素的变化.方法 采用MTT法测定药物敏感性;光镜、电镜、MTT法活细胞计数、流式细胞仪等方法观察其生物学特征的改变.结果 0.1mg/mL、0.2mg/mL紫杉醇可以抑制MGC803细胞于S期,紫杉醇能抑制MGC803细胞生长增殖,并且呈浓度依赖性.结论 0.1mg/mL、0.2mg/mL紫杉醇能明显地抑制MGC803细胞的增殖.     

IL-24 cDNA转染人喉癌细胞系的建立及其表达的研究

目的 建立转染人白细胞介素-24(hIL-24)基因的喉癌细胞株,并研究hIL-24的表达情况.方法 将携带人白细胞介素-24的质粒peDNA3.1( )-hIL-24转导入人喉表皮样癌细胞Hep-2中,G418筛选阳性克隆,RT-PCR、Western blot和ELISA法对hIL-24的表达进行检测.结果 IL-24基因成功地转导入Hep-2细胞中并能高效表达.RT-PCR电泳结果显示hIL-24基因在mRNA水平有表达;ELISA法测得106个转染阳性细胞24h内培养上清液中hIL-24的含量为162.8±15.4 pg/mL,空载体转染及未转染的细胞未检测到hIL-24.结论 hIL-24基因成功转染人喉癌细胞系Hep-2细胞且能持续大量表达.     

Effects of Sunitinib Malate on Growth of Human Bladder Transitional Cell Line T24 In Vitro

Objective To investigate the growth-inhibitory effect of sunitinib malate on human bladder transitional cell carcinoma(TCC) in vitro. Methods Human bladder TCC cell line T24 was cultured and exposed to graded concentrations of sunitinib malate for 72 hours in vitro to determine the sensitivities to drug. Cell viability was measured by MTT assay. Cell apoptotic morphology was observed by fluorescence microscope following DAPI staining. Band expressions of Fas, Fas ligand, poly(ADP-ribose) polymerase(PARP) and β-actin were analyzed by Western blot. Wound healing process of T24 cells exposed to sunitinib malate was assayed. Results Sunitinib malate exerted a concentration-dependent and time-dependent inhibitory effect on the T24 cell lines. Fluorescence microscopy showed that small vacuoles appeared in the nuclei of T24 cells and the vacuoles were bigger with higher drug concentrations. The expressions of Fas ligand and PARP in T24 cells treated with sunitinib malate exhibited a concentration-dependent increase. Moreover sunitinib malate suppressed the wound healing process in a concentration-dependent manner. Conclusion Sunitinib malate exerted marked inhibitory activity against bladder cancer cell line T24.     

白藜芦醇对人皮肤癌细胞株A431生长抑制机制实验研究

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人皮肤癌细胞株A431和正常角质形成细胞株HaCaT体外生长的影响及其机制;并与顺铂(DDP)比较,评价Res作为天然抗肿瘤药物的潜在价值。方法培养A431细胞和HaCaT细胞,使用不同浓度Res或单独DDP处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其对细胞的增生抑制率;相差显微镜下观察细胞的形态改变;流式细胞术分析细胞凋亡情况;免疫组织化学染色法检测Bcl-2和Caspase-3蛋白。结果①Res和DDP均能明显抑制A431细胞的增生,并呈时间——剂量依赖性;在各自相应半数抑制浓度(IC50),DDP对HaCaT细胞的增生抑制率高于Res(P<0.05);②镜下观察可见Res处理后A431细胞呈现凋亡的形态特征;流式细胞检测发现A431细胞的凋亡呈时间——剂量依赖性;免疫组织化学染色可见Bcl-2蛋白着色减弱、Caspase-3蛋白表达增强。结论Res对A431的增生具有一定的抑制作用,且不良反应较DDP弱;Res也可诱导A431发生凋亡,可能与抑制Bcl-2表达、促进caspase-3表达有关。     

猫眼草提取物对人胃癌细胞BCG-823增殖影响的实验观察

目的 观察猫眼草提取物对人胃癌细胞株BCG-823增殖的影响并探讨其可能的机制.方法 人胃癌细胞株BCG-823分别给予猫眼草提取物10.0,1.0,0.1mg/L培养48h,采用MTT法和台盼蓝染色法检测猫眼草提取物对胃癌细胞株增殖的影响.结果 MTT法测定结果显示,猫眼草提取物各浓度组对BCG-823细胞增殖均有明显抑制作用且具有良好的量效关系(P<0.05);台盼蓝法计数结果显示,给予猫眼草提取物后,活细胞数随培养时间的延长而减少,对胃癌细胞株C-823增殖的抑制具有良好的时效关系(P<0.05).结论 猫眼草提取物对人胃癌细胞株BCG-823增殖具有明显的抑制作用,其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增.     

吐温化合物对人胃癌MGC803细胞生长的影响

目的　研究吐温化合物对人胃癌MGC80 3细胞生长的影响 ,确定诱导分化剂二烯丙基二硫 (DADS)的溶媒。方法　采用MTT比色、生长曲线分析、细胞活力检测和流式细胞仪观察溶媒Tween2 0、Tween 80与二烯炳基二硫 (DADS)对MGC80 3细胞生长的影响。结果　Tween 80稀释浓度由 1 0 0 0倍～ 1 60 0 0倍时 ,其他浓度组均具有抑制作用 ,并呈浓度依赖性 (IR 6.2 %～ 92 .6% ,P <0 .0 5 )。Tween2 0稀释浓度由 5 0 0 0倍～ 30 0 0 0倍时 ,均对MGC80 3细胞具有促生长作用 (PR 3.6%～ 1 6.1 % ,P <0 .0 5 )。Tween 80稀释浓度 32 0 0 0倍对MGC80 3细胞生长、生长曲线、细胞群体倍增时间、细胞周期均无影响 ,与对照组、DADS处理组细胞存活率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而以此作为溶媒的不同浓度DADS具有抑制MGC80 3细胞生长的效果 ,与对照组和Tween 80组的差异均具有显著性 (P <0 .0 5 ) ,抑制率呈现时间 -效应依赖关系 (P <0 .0 5 ) ,对细胞群体倍增时间延长 (P <0 .0 5 ) ,并且可阻滞MGC80 3细胞于G2 /M期。结论　Tween 80具有抑制MGC80 3细胞生长作用 ,而Tween2 0对MGC80 3细胞具有促生长作用。选择Tween 80稀释浓度 32 0 0 0作为DADS溶媒 ,用于DADS对人胃癌MGC80 3细胞影响的研究比较合适。     

那可丁对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及机制探讨

目的 探讨那可丁对宫颈癌HeLa细胞株的抑制作用及其机制.方法 体外培养人宫颈癌HeLa细胞株,梯度浓度那可丁干预后,MTT测定细胞存活率,软琼脂克隆形成实验检测细胞成瘤能力,Western blot检测Caspase-3、PARP(多聚ADP-核糖聚合酶)蛋白水平变化,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布.结果 M...     

加温结合化疗对人胃癌细胞株的影响

通过检测MKN28人胃癌细胞株~3H-胸腺嘧啶核苷掺人情况,在体外实验研究加温和抗癌药物顺氨氯铂、5-氟脲嘧啶之间的协同作用。结果表明(1)顺氨氯铂的细胞杀伤作用具有温度-药物浓度依赖性;(2)5-氟脲嘧啶合并加温未见有显著协同作用,反见削弱其抗肿瘤效应;(3)单纯加温与合并应用中等剂量的顺氨氯铂或5-氟脲嘧啶的比较中发现,效果最佳的为加温加顺氨氯铂,其次是单纯加温;(4)加温加顺氨氯铂、5-氟脲嘧啶组合治疗效果最佳。为临床应用治疗胃癌的腹腔广泛转移提供了理论依据。