大鼠脊髓急性损伤后bax和bcl—2的表达

目的：检测大鼠脊髓损伤后凋亡相关基因的表达,以探讨神经细胞凋亡的分子机制。方法：大鼠脊髓（T8．9）经中度压迫损伤后,分别在30min、2h、4h、8h、24h、48h和72h处死取材（n=6)。主要应用免疫组化及原位杂交技术对脊髓组织进行标记,以检测bcl-2和bax的表达。结果：损伤4h后bax蛋白大量表达,而bcl-2蛋白仅有少量表达,bcl-2 mRNA未见表达。结论：脊髓损伤后凋亡基因bax大量表达,并可能在神经细胞的凋亡过程中起重要作用。     

神经生长因子对大鼠脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对脊髓损伤保护作用的分子机制.方法采用Allen's法以25 gcm力致伤大鼠T8脊髓,经蛛网膜下腔导管于术后即刻、2、4、8、12、24 h各注入NGF溶液,并与生理盐水组(NS组)和正常对照组作对照,采用免疫组织化学方法和末端单位标记法(TUNEL)原位末端标记法分别检测bcl-2、bax蛋白在脊髓神经元的表达及神经元凋亡情况.结果正常组中脊髓灰质bax蛋白阳性细胞吸光度(A)值为34.51±4.47,NS组中bax蛋白表达增加,以2 h及12 h最为显著,而NGF组与NS组相比,bax蛋白表达明显减少(P＜0.01).正常组中脊髓灰质bcl-2蛋白表达的A值为19.72±2.92,NS组中bcl-2表达下降,而NGF组与NS组相比较,bcl-2蛋白表达明显增多(P＜0.01).TUNEL检测结果显示,正常对照组中未见神经元凋亡,NS组中自2 h后可见神经元凋亡,NGF组与NS组相比,神经元凋亡指数明显减少(P＜0.01).结论NGF能通过抑制bax蛋白的表达,促进bcl-2表达抑制脊髓损伤后神经元凋亡,从而保护损伤的脊髓组织,这可能是NGF对脊髓损伤具有保护作用的机制之一.     

大鼠脊髓腹侧左迫损伤后神经营养素及受体表达的变化规律

目的：探讨脊髓损伤后脊髓功能恢复的分子生物学基础。方法：在制作脊髓腹侧压迫损伤的基础上,应用免疫组织化学的方法观察几种神经营养素及其受体表达的变化规律。结果：脊髓腹侧压迫损伤后BDNF,GNDF,NT3,NGF以及TrkA,TrkB,TrkC在伤后3h表达开始增加,伤后72h达到高峰,在伤后2周内其表达维持在相对较高的水平,且以BDNF及TrkB表达最明显。结论：脊髓损伤后这些内源性神经营养素及其受体的大量表达对受损伤脊髓的功能恢复起重要作用。同时也反映了受试动物的脊髓功能受损较重的特点。     

急性脑缺血／再灌注损伤与Bcl—2和Bax蛋白表达的关系

近几年来一些研究显示 ,脑缺血 /再灌注损伤迟发性神经元死亡过程中神经细胞可发生凋亡 [1 ]。细胞凋亡是受基因调控的 ,Bcl- 2、Bax基因是目前研究较明确的一对在功能上相互对立的凋亡调控基因。本研究采用全脑缺血模型 ,观察了再灌注损伤过程中 ,Bcl- 2、Bax蛋白在海马表达水平的变化 ,并探讨其意义。材料和方法选择健康雄性 SD大鼠 ,体重 (2 5 0± 2 0 ) g。根据再灌注时间的不同动物随机分为九组 (其中一组为假手术组 ) ,每一组又分为两个亚组 ,即 Bcl- 2 (n=5 )和Bax (n=5 )。动物模型制备采用 4VO法 [2 ] ,首先在第一颈椎横突处烧…     

大鼠脊髓腹侧压迫损伤模型的研制

目的：研制一个理想的脊髓损伤动物模型。方法：利用杠杆原理设计了大鼠Ｔ１３ 脊髓腹侧压迫模型,为了验证其稳定性,本研究将４０ 只大鼠随机分为６ 组：对照组、假手术组、３４－５ｇ 压迫１ ｍｉｎ 组、３４－５ｇ 压迫４ ｍｉｎ 组、３４－５ｇ 压迫８ ｍｉｎ 组、固定脊柱再以３４－５ｇ 压迫４ ｍｉｎ 组,于伤后每天观察倾斜平面临界角,２ 周观察神经功能评分,并观察了３４－５ｇ压迫８ ｍｉｎ 组伤后３０ ｍｉｎ 、１ｈ 、４ｈ 、２４ｈ 、２ 周的组织学特点。结果和结论：该模型具有可重复性、可定量、模拟临床、简便易行、经济易取等优点。     

大鼠胚胎脊髓移植后对损伤脊髓神经营养因子表达的影响

目的：研究大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓神经营养因子表达的影响。方法：将孕１４ｄ大鼠胚胎脊髓组织移植到成鼠半切洞损伤的脊髓中,手术后采用免疫组织化学技术,对损伤脊髓组织中神经生长因子（ＮＧＦ）、脑源性神经生长因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子３（ＮＴ－３）、睫状神经生长因子（ＣＮＴＦ）进行定量分析。结果：移植组神经营养因子１周、２周、４周、都明显高于单纯损伤组,４周时移植组ＢＤＮＦ表达高于其它各组（Ｐ〈０     

脊髓干细胞移植对脊髓损伤后神经功能的影响

目的探讨胚胎脊髓神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复的意义。方法160只SD大鼠随机分为空白组,假手术组,脊髓损伤组,细胞移植组,分别在细胞移植后1、2、4周应用斜板实验和Tarlov评分对脊髓损伤后功能恢复进行评价,应用nestin标记观察移植后干细胞的存活情况。结果移植后1周、2周、4周,移植组和对照组斜板试验结果分别为(38．30±0．84)°、(18．50±0．76)°；jm(39．40±0．78)°、(19．70±0．66)°；(45．00±0．81)°、(22．30±0．69)°；Tarlov评分分别为3．37±0．45、2．32±0．34；3．45±0．38、2．41±0．43；3．63±0．47、2．45±0．48；有统计学意义(P＜0．01),免疫组织化学观察可见在损伤的脊髓组织中有神经干细胞的存活。结论胚胎脊髓干细胞移植对脊髓损伤后神经功能恢复有促进作用。     

bFGF对大鼠脊髓损伤后c-fos mRNA表达的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF)对大鼠脊髓损伤后c-fosmRNA表达的影响。方法：采用Allen's法造成大鼠Ts脊髓损伤模型,用原位杂交方法检测神经元c-fosmRNA的表达。结果：脊髓损伤后神经元c-fosmRNA表达较正常末损伤神经元显著增加,表达高峰出现在损伤后1h,bFGF能显著抑制损伤后神经元c-fosmRNA的异常表达。结论：应用外源性bFGF抑制了脊髓损伤后的c-fos基因表达,保护了神经元并抑制了继发性损害的发生,是bFGF保护脊髓损伤可能的作用机理。     

Bcl—2和Fas基因在瘢痕成纤维细胞中的表达

目的研究凋亡基因Fas/Apo-1和抑凋亡相关基因Bcl-2在瘢痕形成机制中的作用.方法采用免疫组织化学方法对10例正常皮肤、10例增生性瘢痕及10例瘢痕疙瘩成纤维细胞Fas/Apo-1和Bcl-2蛋白的表达进行检测.Fas蛋白稀释为1∶50;Bcl-2蛋白稀释为1∶40,阴性对照以PBS代替一抗.随机选择五个高倍视野,计算其细胞平均阳性率.结果Bcl-2蛋白在正常皮肤、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩中阳性率分别为6.78%、38.6%和83.2%.瘢痕疙瘩、增生性瘢痕的表达阳性率高于正常皮肤,有非常显著性差异(P＜0.01),而瘢痕疙瘩的表达阳性率明显高于增生性瘢痕(P＜0.01).Fas/Apo-1蛋白在正常皮肤、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩中阳性率分别为78.4%、80.4%和84.4%,三组间无显著性差异(P＞0.05).结论病理性瘢痕的形成与Bcl-2基因的过度表达有关,而对Fas基因介导的凋亡不敏感或凋亡受阻,亦是导致瘢痕过度增生原因之一.     

大鼠脊髓急性损伤后神经细胞凋亡及相关基因表达△

目的研究脊髓急性损伤后神经细胞的凋亡及相关基因的表达.方法大鼠脊髓(T8、T9)经中度压迫损伤后,分别在30min、2h、4h、8h、24h、48h、72h、7d、14d和21d处死取材(各时间组n=4).应用HE染色、免疫组化及凋亡细胞原位末端标记法对脊髓组织进行标记.结果损伤4h后,在损伤段及邻近段可见末端标记阳性神经元,损伤段灰质中阳性细胞数8h达高峰,24h白质中阳性胶质细胞数量达高峰.相邻节段阳性细胞数72h达高峰.损伤后P53及Bax大量表达,而Bcl-2仅少量表达.结论脊髓损伤后神经细胞的凋亡是继发损伤期的重要病理变化.     

中药黄芪对实验性脊髓损伤的神经保护作用

目的探讨黄芪(AR)对脊髓继发性损伤的保护作用,并与甲基强地松龙(MP)进行对照.方法 Wistar大鼠60只,以改良Allen氏法制备脊髓打击伤模型,随机分为三组.测定不同药物处理后4 h、8 h、24 h脊髓组织线粒体SOD活性和MDA浓度以及血液流变学改变;光镜观察用药后1、2周黄芪对病理学改变的影响,同时进行联合行为学评分(CBS).结果黄芪处理后脊髓组织MDA浓度明显低于各时相点对照组,SOD活性显著升高(P＜0.01),与MP治疗组无明显差异(P＞0.05).血液流变学指标也有所改善.病理检查发现黄芪治疗组髓鞘受损轻微,组织赦免范围增大.结论黄芪治疗可以缓解脊髓损伤后的脂质过氧化反应,改善微循环,从而发挥脊髓保护作用.     

川芎嗪对预防犬急性脊髓损伤神经保护作用的实验研究

目的研究川芎嗪对犬急性脊髓损伤模型的神经保护作用。方法Allen’s法打击犬胸13节段脊髓制成急性脊髓损伤模型，所有动物均行介入下选择性动脉插管至伤椎水平肋下动脉，留置导管作为局部给药途径。实验动物随机分为正常对照组、脊髓损伤组、川芎嗪治疗组。术后采用胥少汀脊髓功能评分标准对脊髓神经功能进行评分、MRI检查、血清和脑脊液中髓鞘碱性蛋白(MBP)和S-100B蛋白的测定来衡量脊髓损伤程度和药物治疗效果。结果川芎嗪治疗组在各时间点的神经功能评分高于脊髓损伤组并且在1W有统计学意义。核磁共振检查发现川芎嗪治疗组的相对信号值低于脊髓损伤组，在72h、1W有统计学意义。川芎嗪治疗组血清和脑脊液中MBP低于脊髓损伤组，并且MBP在72h时差异有显著性。结论川芎嗪对于急性脊髓损伤具有神经保护作用。     

脊髓损伤后急性期甲基强的松龙干预对脊髓神经细胞凋亡的影响

目的:观察脊髓损伤后即刻甲基强的松龙干预治疗对脊髓神经细胞凋亡的影响,探讨该药物促进脊髓神经功能修复的机制。方法:采用改良Allen′s法建立脊髓损伤(SCI)兔动物模型,实验动物随机分为假手术组(S组)36只,单纯损伤组(C组)与MP治疗组(T组)各36只,分别于损伤后8h、24h、72h、7d、14d和28d时随机取6只动物灌注固定取材,HE染色观察损伤区脊髓组织的病理改变,TUNEL法检测各组脊髓标本细胞凋亡情况;分别于损伤后1d、3d、7d、14d及28d观察各组动物运动神经功能情况,包括Rivlin斜板试验和BBB评分。结果:术后C组和T组斜板试验临界角度值和BBB评分值随时间点延长均逐渐升高,损伤7d及之后各时间点,T组均高于C组,但小于S组(P<0.05)。HE染色S组脊髓组织在各时间点未见明显异常;T组及C组损伤后8h、24h及72h时脊髓组织结构紊乱,可见不同程度出血、神经细胞水肿、坏死,灰质中空泡形成,炎症细胞浸润,两组无明显区别;损伤后7d、14d及28d,T组脊髓组织较C组恢复较好,整体损伤程度轻,血肿逐渐吸收,空泡减少,灰质和白质坏死吸收并胶原纤维组织增生,胶质细胞减少,可见较多神经细胞。TUNEL法检测凋亡细胞,S组未发现阳性细胞,C组及T组在损伤后8h可见阳性细胞,24h达到高峰,3d时仍较多,术后7d渐渐减少,14d及28d时阳性细胞数明显降低。两组对比,在损伤后8h、24h、3d及7d四个时间点,T组阳性细胞明显少于C组(P<0.05),14d及28d时两组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:MP在脊髓损伤急性期干预治疗,有利于损伤的脊髓神经功能恢复,可能通过抗细胞凋亡机制产生作用。     

Synergistic neuroprotective effects of hyperbaric oxygen and methylprednisolone following contusive spinal cord injury in rat

ObjectiveRecent studies revealed the neuroprotective effects of hyperbaric oxygen (HBO) on spinal cord injury (SCI). Meanwhile, the use of methylprednisolone (MP) is one of the current protocols with limited effects in SCI patients. Accordingly, the aim of the present study was to investigate the effect of combined HBO and MP treatment on SCI.DesignThe present study was conducted on five groups of rats each as follows: Sham group (underwent laminectomy alone at T9 level vertebra); SCI group (underwent moderate contusive SCI); MP group (underwent SCI and received MP); HBO group (underwent SCI and received HBO); HBO + MP group (underwent SCI and simultaneously received MP and HBO). Blood serum and Spinal cord tissue samples were taken 48 h after SCI for analysis of serum ferric reducing antioxidant power (FRAP) and tissue malodialdehyde (MDA) levels as well as immunohistochemistry of caspase-3 and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α). Neurological function was evaluated by the Basso–Beattie–Bresnehan (BBB) locomotion scores until the end of experiments. Additionally, histopathology was assessed at the end of the study.SettingMazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran.ResultsCombination therapy with HBO and MP in the HBO + MP group significantly decreased MDA as well as increased FRAP levels compared to other treatment groups. Meanwhile, attenuated TNF-α and Caspase-3 expression could be significantly detected in the HBO + MP group. At the end of treatment, the neurological outcome was significantly improved and the extent of injured spinal tissue was also significantly reduced in the HBO + MP compared to other treatment groups.ConclusionThe results suggest that combined therapy with MP and HBO has synergistic effects on SCI treatment.     

淫羊藿苷在大鼠脊髓损伤中的神经保护作用

目的:研究淫羊藿苷在大鼠脊髓损伤中的神经保护作用。方法:108只SPF级雄性3月龄SD大鼠按随机数字表法分为实验组、对照组及假手术组3组,每组36只。对照组和实验组采用改良Allen法制作脊髓损伤模型,假手术组仅切开椎板不损伤脊髓。术后即刻实验组给予淫羊藿苷(100 mg/kg)灌胃,对照组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,每日2次。术后1、2、3 d采用BBB评分法评定大鼠运动功能;术后72 h采用分光光度法检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白介素(interleukin,IL)-1β的含量,免疫组化染色检测MPO、TNF-α、IL-1β的表达;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用TUNEL法检测细胞凋亡并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);光镜观察脊髓损伤后组织病理学的改变并行组织病理学评分。结果:术后各时间点对照组和实验组大鼠BBB评分均显著低于假手术组(P0.05);术后2、3 d实验组大鼠BBB评分均显著高于对照组(P0.05)。术后72 h,对照组和实验组MPO活性和TNF-α、IL-1β的含量显著高于假手术组(P0.05);实验组显著低于对照组(P0.05)。对照组和实验组MPO、TNF-α、IL-1β的表达显著高于假手术组(P0.05);实验组显著低于对照组(P0.05)。对照组和实验组MDA含量显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P0.05);对照组和实验组SOD活性显著低于假手术组,实验组显著高于对照组(P0.05)。对照组和实验组脊髓组织中AI显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P0.05)。对照组和实验组脊髓组织病理学评分均显著高于假手术组,实验组均显著低于对照组(P0.05)。结论:淫羊藿苷能够抑制脊髓损伤后的炎症、脂质过氧化和细胞凋亡,减轻脊髓组织病理学损伤,改善脊髓损伤大鼠的运动功能,有效保护脊髓组织,具有明显的神经保护作用。     

大剂量甲基强的松龙与东莨菪碱治疗急性脊髓损伤的临床观察

目的比较甲基强的松龙(MP)与东莨菪碱(SCP)治疗急性脊髓损伤(ASCI)的治疗效果.方法将44例ASCI患者随机分为3组,伤后8h以内患者随机分入大剂量MP治疗组及SCP治疗组,受伤时间超过8h的患者分人对照组.分别于入院时、伤后6周和6个月时对脊髓功能进行评分.结果两治疗组的感觉功能在伤后6周和6个月时均有明显好转,运动功能MP治疗组在伤后6周时即有明显好转,而SCP治疗组在伤后6个月时才有明显好转.对照组患者脊髓功能恢复不明显.结论MP与SCP均是治疗ASCI有效的药物,MP能够早期促进运动功能的恢复,对ASCI患者的康复有重要意义.     

不同时间点减压对环扎法所致损伤脊髓Bcl-2、Bax蛋白的表达及意义

目的:探讨不同时间点减压环扎法所致损伤脊髓中神经细胞凋亡及Bax、Bcl-2的表达及其意义。方法:成年SD大鼠84只,随机分为4组:A组,仅行椎板减压及硬脊膜囊周长测量;采用环扎法建立大鼠脊髓损伤模型,B组于环扎术后8h行脊髓减压;C组于环扎术后72h行脊髓减压;D组环扎术后不行脊髓减压。各组分别于术后1d、7d、14d、21d取材,所得脊髓标本行HE染色、Tunel染色及免疫组化法检测Bax、Bcl-2阳性细胞数等情况,并采用BBB评分评价大鼠后肢神经功能变化。结果:Bax染色:B组和C组术后1d开始阳性细胞数增加,7d时达高峰,14d时仍较明显,21d降低;D组术后阳性细胞数持续升高。Bcl-2染色:B组和C组术后阳性细胞数持续升高;D组术后1d阳性细胞数最多,之后持续降低。Tunel染色:B、C及D组术后1d开始出现凋亡细胞,7d时达高峰,以后逐渐减少,21d时仍可见。Bcl-2/Bax值与Tunel阳性细胞数关系:B组和C组二者存在负相关;D组二者呈正相关。BBB评分:A组术后1周后肢运动功能恢复正常;B组和C组术后逐渐升高(P<0.05);D组术后1天开始逐渐降低,7天时最低,然后逐渐升高。结论:环扎法可以建立稳定的大鼠脊髓损伤模型;早期减压能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡,有利于神经功能恢复。     

急性脊髓损伤后促红细胞生成素受体的表达及其意义

目的探讨急性脊髓损伤后促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPO-R)在脊髓内的表达。方法Wistar大鼠69只,随机分为三组：正常对照组(5只,不手术,作为后两组的对照)、假手术组(仅行椎板切除术)和脊髓损伤组。根据术后时间点不同后两组又分为1h、6h、12h、24h、3d、7d、14d和28d八个亚组(每组4只)。采用RT-PCR、Western blot免疫印迹法和免疫组织化学染色法检测EPO及EPO-R的表达。结果正常对照组、假手术组和脊髓损伤组在各时相点均未发现有EPO表达。正常对照组、假手术组未发现EPO-R的表达,脊髓损伤组在伤后1h未见EPO-R mRNA和蛋白的表达,6h开始有表达,12h有明显的表达,至24h达到高峰,3d和7d时仍维持在高表达水平,未见减弱,14d开始下降,至28d时仍有EPO-R蛋白的表达。免疫组化显示EPO-R阳性细胞主要位于神经元、少突胶质细胞、血管内皮细胞和脊髓中央管内室管膜细胞。结论大鼠急性脊髓损伤后脊髓内大量表达EPO-R,这是外源性EPO与EPO-R结合产生神经保护作用的分子基础。