利用原生质体诱变筛选L-异亮氨酸高产菌株

在捧杆菌原生质体制备中,以单一甘氨酸代替青霉素与溶菌酶进行细胞脱壁处理,以含0.3M蔗糖的普通肉汤培养基作为再生培养基。L-异亮氨酸产生菌A6在肉汤中培养至对数期,加入0.3M蔗糖和3%甘氨酸,继续培养8h,原生质体的形成率达98%。原生质体经洗涤后的再生率为81.6%,不经离心洗涤直接涂皿的再生率为81.2%。A6菌株的原生质体经紫外线诱变处理后,再生菌株的L-异亮氨酸产量高达14.3mg/ml,比原菌株产量提高30%左右。     

利用原生质体诱变筛选L—异亮氨酸高产菌株

在棒杆菌原生质体制备中,以单一甘氨酸代替青霉素与溶菌酶进行细胞脱壁处理,以含0.3M蔗糖的普通肉汤培养基作为再生培养基,L-异亮氨酸产生菌A6在肉汤中培养至对数期,加入0.3M蔗糖和3%甘氨酸,继续培养8h,原生质体的形成率达98%,原生质体经洗涤后的再生率为81.6%,不经离心直接涂皿的再生率为81.2%.A6菌株的原生质体经紫外线诱变处理后,再生菌株在L-异亮氨酸产量高达14.3mg/ml,比原菌株产量提高30%左右。     

L-异亮氨酸发酵的研究——1.L-异亮氨酸产生菌的菌种选育

以黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)T_(6-13)为出发菌株,经亚硝基胍(NTG)和紫外线诱变处理以及结构类似物的筛选后,得到一株抗AHV、AEC和Eth三重遗传标记突变株AS110。有关末端产物对其生长的抑制作用都有一定程度解除。可以积累L-异亮氨酸7.0mg/ml。     

L-赖氨酸高产菌株的选育及发酵培养基优化

目的以L 赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌 (Corynebacteriumcrenatum)D60 -95为出发菌株 ,提高L 赖氨酸产量。方法采用紫外线诱变处理 ,对大量抗七叶苷 (esculin)突变株进行初筛、复筛 ;在此基础上 ,利用均匀设计方法对发酵培养基成分进行优化组合。结果得到抗性突变株E0 9-3 7,其发酵液中L 赖氨酸产量较出发菌株提高 2 0 6 % ;发酵培养基主要成分最佳配比为葡萄糖 14 0g·L-1,硫酸铵 5 5 g·L-1,碳酸钙 5 0 g·L-1和盐酸豆饼水解液 18g·L-1。结论以上方法是选育L 赖氨酸高产菌株的有效途径。     

L-赖氨酸高产菌株筛选

本实验以Ｌ－赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｒｅｎａｔｕｍ）ＯＭ－４（ＨＳ＋，ＡＥＳｒ，Ｍｅｔｒ）为出发菌株，经硫酸二乙酯和氯化锂复合诱变处理，用ＡＥＣ（Ｓ－［２－氨乙基）－Ｌ－半胱氨酸）和苏氨酸定向筛选获得了高抗ＡＥＣ的突变株ＡＴ－５（ＨＳ＋，ＡＥＣｒ，Ｍｅｔｒ）菌株，再以ＡＴ－５为出发菌株经亚硝基胍诱变处理，获得一株产Ｌ－赖氨酸的ＴＡ（２－噻唑－ＤＬ－丙氨酸）抗性突变株（ＡＴＴ一６８号），菌株产酸量由原来ＯＭ一４菌株的４６．３ｍｇ／ｍＬ提高到７４．８ｍｇ／ｍＬ提高１６１．５％，在筛选结构类似物抗性突变株时采用小钢杯法，可大大节省结构类似物药品．     

钴60与紫外线复合诱变选育L-鸟氨酸高产菌株

目的 诱变选育L-鸟氨酸高产菌株.方法 以谷氨酸棒杆菌S9114为出发菌株,经60Co γ射线和紫外线复合诱变处理,选育出L-鸟氨酸的高产菌株,研究其最佳发酵条件.结果 选育出一株L-鸟氨酸的高产菌株HG106-25,遗传标记为精氨酸营养缺陷型 磺胺胍抗性(Arg- SGr).结论 突变株HG106-25在优化发酵条件后,摇瓶发酵4-5 d,L-鸟氨酸平均产量为14.7 g·L-1,达较高水平,可进行放大试验.     

利用离子交换法提取L-异亮氨酸的研究

利用离子交换法从Ｌ 异亮氨酸发酵液中分离提取Ｌ 异亮氨酸．考察了发酵液酸化ｐＨ值，不同浓度洗脱剂以及单柱与双柱串连吸附对Ｌ 异亮氨酸分离提取的影响．确定了发酵液酸化ｐＨ低于２５，双柱串连吸咐，用０２ｍｏｌ·Ｌ－１ＮＨ４Ｃｌ ０１ｍｏｌ·Ｌ－１ＮＨ４ＯＨ复合洗脱剂洗脱的分离效果较好．提取总收率可达４５％以上．     

利用原生质体诱变筛选L-亮氨酸高产菌株的研究

本实验以L-亮氨酸产生菌黄色短杆菌CF-435为出发菌株,制备原生质体,在原生质体形成率和再生率最佳的条件下,利用紫外线、利福平、氯化锂对原生质体进行复合处理,获得再生突变株,从中挑取单独菌落进行摇瓶发酵,筛选出高产菌株UV_3-29,在含有葡萄糖10%的培养基中发酵72h可积累L-亮氨酸26.73mg/ml,比原始菌种产酸量提高26%.     

以糖类利用能力变化选育红霉素高产菌株

目的 根据代谢网络理论,利用可能对红霉素产生菌Saccharopolyspora erythraea的代谢物流产生影响的糖类建立理性化的筛选模型.方法 建立葡萄糖、果糖、乳糖等抑制性筛选模型和麦芽糖、木糖等利用性筛选模型.将诱变处理后的菌株通过这些模型,找出利用率发生改变的菌株.结果 结果显示葡萄糖、麦芽糖模型的筛选效果较好,用此方法筛选出的菌株Er071610-1比原始出发菌株增产53.7%.结论 以糖类利用能力变化选育红霉素高产菌株是一条可行的筛选方法.     

青霉素高产菌株的选育

采用紫外线与2-去氧-D-葡萄糖复合诱变的方法,选育霉素高产菌株,使发酵效价与总产量分别提高了12.2%和10.9%。     

红霉素高产菌株的选育

以红霉素链霉菌0－11－26为出发菌株，经LiCl和紫外线复合诱变处理，再用含有4种不同结构类似物的培养基定向筛选，获得4株突变株，其中M－03－59摇瓶效价6876u/ml，比起始菌株（5328u/ml）提高29.1%，在10t发酵罐上连续6批验证，平均发酵效价7016u/ml，比原生产水平（5652u/ml）提高24.1%，并且质检全部合格，对生产实际具有重要意义。     

链激酶高产菌株的选育

对原始出发菌株-S1P1 C1.727交替使用亚硝基胍（NTG）及紫外线（UV）进行诱变处理，以过纯化，再用超声波和UV复合处理，纯化得到一株高产菌株-Cou2‘11,使摇瓶单位提高了七倍，五立升玻璃发酵罐单位达到1000u/ml以上。     

利用亚硝酸诱变原生质体筛选L-亮氨酸高产菌株的研究

本实验以L-亮氨酸产生菌黄色短杆菌CFN-19为出发菌株。我们首先对CFN-19菌株制备原生质体,原生质体制备率为95.1%,再生率为25%,然后对原生质体进行亚硝酸、利福平、氯化锂复合诱变处理,从再生菌株中筛选出一株高产菌株H_(6-66),产酸量由原来的23.1mg/ml提高到32.6mg/ml,提高率达41%.同时又对H_(6-66)菌株进行遗传稳定性考察,考察结果H_(6-66)菌株是高产稳定菌株。     

L-异亮氨酸细菌内毒素检查法

目的:建立L-异亮氨酸的细菌内毒素检查方法 方法:按2000年版中国药典二部附录《细菌内毒素检查法应用指导原则》进行供试品的干扰试验。结果:供试品浓度为25mg·ml~(-1)时对TAL与内毒素的反应无干扰作用。     

L-异亮氨酸发酵的研究

用黄色棒状短杆菌产L-异亮氨酸菌种,经过一级种子扩大培养,二级发酵培养,以葡萄糖为主要原料,无机盐为辅料,用2000L发酵罐,进行发酵培养,产酸率达24.32mg/ml。     

L-异亮氨酸发酵的研究

用黄色棒状短杆菌产L-异亮氨酸菌种,经过一级种子扩大培养,二级发酵培养,以葡萄糖为主要原料,无机盐为辅料,用2000L发酵罐,进行发酵培养,产酸率达24.32mg/ml。     

青霉素高产菌株的推理选育

抗生素产生菌的推理选育是建立在抗生素生物合成机制已知或较清楚的基础上按需要定向选育的一种方法。近几年研究较多,应用较广,成效亦较为显著。就青霉素而言,经过多年的研究,其代谢机理已较清楚。实践证明,推理选育在青霉素育种上的应用其效果远比传统的随机筛选优越得多,只需适量筛选,即可达到所期望的目的。１　材料与方法１．１　材料１．１．１　菌株　青霉素产生菌Ｈ－１０６＃。１．１．２　培养基斜面分离培养基（％）蛋白胨：０．６,葡萄糖：１．５,ＮａＣｌ：０．５,ＫＣｌ：０．０５,ＫＨ２ＰＯ４：０．０３,ＭｇＳ…     

吉他霉素高产菌株的选育

以吉他霉素产生菌Ｒ－０１－１０５菌株为出发菌株，经紫外线、Ｃｏ６０、色氨酸、异亮氨酸和２－ＤＯＧ复合处理，获得４株高产突变株，其中Ｔ－１１－１２０的摇瓶效价（１５３０２ｕ／ｍｌ）比出发菌株（８５００ｕ／ｍｌ）提高８０．１％，在１０吨发酵罐上连续８批验证，平均发酵效价１２３８８ｕ／ｍｌ，比原生产水平（７４００ｕ／ｍｌ）提高６７．４％，并且质检全部合格，对生产实际具有重要意义     

多粘菌素E高产菌株的选育

以多粘类芽胞杆菌（Paenibacillus polymyxa）18－3为出发菌株，采用紫外线诱变，并以重金属Cu^2 作为筛选因子，获得一株遗传稳定且多粘菌素E发酵效价比出发菌株提高45％的菌株。对该菌株再采用亚硝基胍（NTG）诱变，以缬氨酸结构类似物α－氨基丁酸作为筛选因子时得到一株产量提高34％的菌株。