分泌抗人精子单克隆抗体杂交瘤细胞的建立

用人精子免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤技术制备出9株抗人精子单克隆抗体。经酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光实验证明,9株抗人精子单克隆抗体均能与人精子产生特异性免疫反应。连续传代及液氮中保存的杂交瘤细胞分泌抗人精子单克隆抗体的滴度持续稳定。     

抗人精子单克隆抗体对生殖的影响

本文报告9株抗人精子单克隆抗体在体外对生殖的影响。TAT、SIT、SCMC和精子—地鼠去透明带穿卵实验表明:3株IgM类抗人精子单克隆抗体主要引起精子的头—头凝集,对精子有较强的补体依赖性细胞毒作用;6株IgG类抗人精子单克隆抗体主要引起精子的尾—尾凝集,并能阻止精子在宫颈粘液中的前向性运动;4/9株抗人精子单克隆抗体对精子穿卵有明显抑制作用,且两株联合应用有协同效应,提示有效而可靠的精子避孕疫苗应具有多个抗原决定簇。     

抗人精子单克隆抗体的制备及特性研究

用杂交瘤技术制备了两株分泌抗人精子单克隆抗体的细胞株，经酶联免疫吸附试验证明两株细胞株所分泌的单克隆抗体均能与人精子产生特异反应，并有明显的精子凝集和制动作用     

抗人精子单克隆抗体HZ4对人精子的作用

用人精子抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠制备抗人精子单克隆抗体。对其中ＨＺ４株进行抗生育作用测试。ＨＺ４使Ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ诱导的人精子顶体反应率由７３．３％降至２８．５％；使人精子仓鼠卵穿透率由２４％降至０；但对精子免疫制动、精子顶体蛋白酶活性无影响。     

抗人精子单克隆抗体的制备和特性鉴定

用杂交瘤技术制备了12株稳定地分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用间接免疫荧光法观察这些抗体分别结合到精子不同部位,有7个抗体使精子产生头—头凝集或尾—尾凝集,有4个抗体使精子制动,只有1个抗体与淋巴细胞有交叉反应。测定了10个单克隆抗体的免疫球蛋白亚类,7个属于IgG,13个属于IgM。     

人精子单克隆抗体抑制精子穿透无透明带田鼠卵

本工作观察了4个人精子单克隆抗体(BAS_(1—4))对人精子穿透无明带田鼠卵的影响。取获能人精子加入不同稀释度的人精子单克隆抗体处理30min,再加入无透明带的田鼠卵15—20枚,经孵育3h后,观察精子穿卵情况。空白对照组和血清对照组分别用BWW液和灭活小鼠血清代替人精子单克隆抗体。用统计学处理比较实验组和血清对照组受精率及受精指数的差异。结果表明,4个人精子单克隆抗体中,除BAS_4对精子穿卵无抑制作用外,其余3个均有明显抑制作用。以上结果表明,我们所制备的人精子单克隆抗体不仅具有免疫学活性,也具有生物学活性。我们的初步结果为利用人精子单克隆抗体纯化人精子膜抗原,研究精子结构与功能的关系,以及发展一种可能用于局部的新型避孕方法或免疫避孕提供了基础。     

人精子单克隆抗体的制备及其特性鉴定

用杂交瘤技术制备出了五个人精子单克隆抗体。经酶联免疫试验,内标记结合试验及间接免疫荧光试验等,证明这五个单抗均能与人精子产生特异的免疫反应,并特异性地结合于人精子的不同部位。其中一个抗体具有明显的精子凝集和制动作用。在所检测的四个人精子单克隆抗体中,有三个对人精子穿卵具有明显的抑制作用。     

精子处理方法对免疫荧光检测抗精子单克隆抗体的影响

本文比较了用活精子、精子涂片不加固定及不同固定方法对间接免疫荧光检测效果的影响和精子抗原性保存问题。应用免疫荧光法筛选分泌抗精子单克隆抗体杂交瘤细胞系,各种精子处理方法均可采用。但用活精子常因操作中精子丢失而失败;检测与精子尾部结合的单克隆抗体,最好不加固定;检测与精子头部结合的单克隆抗体,用丙酮或4℃乙醇固定为佳;涂片不加固定抗原性易改变,而固定后其抗原性可保持6个月以上。     

抗人精子膜80KD蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的：探索避孕疫苗的制作并为不育病人提供抗精子抗体的诊断方法。方法：用0．5％NP－40提取经SDS－PAGE电泳分离纯化获得的人精子膜80KD蛋白免疫BALB／C小鼠,取其脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得12株阳性单克隆细胞株,并对其中4株进行了初步鉴定。结果：免疫双散法结果显示,3株为IgG型,1株为IgM型;免疫荧光定位试验显示4株单克隆抗体主要与人精子顶体后、颈和尾中段结合;Western blot试验结果显示,4株单克隆抗体均识别人精子80KD蛋白。结论：4株单克隆抗体对人精子膜80KD蛋白是特异的。     

抗人3型副流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其活性鉴定

目的制备抗人3型副流感病毒核衣壳蛋白特异性单克隆抗体,为研发3型副流感病毒新型诊断试剂提供基础。方法利用重组克隆表达技术,获得可溶性的重组核衣壳蛋白;采用纯化的重组核衣壳蛋白免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人3型副流感病毒核衣壳单克隆抗体;采用ELISA及间接免疫荧光法筛选并鉴定可识别天然3型副流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体。结果获得9株分泌抗重组核衣壳蛋白的特异性单克隆抗体的细胞株,其中2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能识别天然的3型副流感病毒核衣壳蛋白。结论利用重组核衣壳蛋白作为免疫原制备出了识别天然核衣壳蛋白的单克隆抗体,并且具有较高的反应性。     

利用重组人VEGF165制备单克隆抗体的研究

目的：制备抗重组人血管内皮生长因子（VEGF）165单克隆抗体。方法：构建人VEGF165原核表达载体pET-3a/VEGF165,并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化表达产物。用初步纯化的rhVEGF165免疫小鼠制成杂交瘤细胞,小鼠腹腔接肿,收集腹水纯化后制成抗rhVEGF165单克隆抗体。结果：VEGF165诱导的内皮细胞增殖可被本研究制备的单克隆抗体中和,并表现出较好的剂量依赖关系。结论：本研究利用DNA重组技术制备人VEGF165,并利用它进一步制备了抗重组人VEGF165单克隆抗体。     

抗人子宫颈癌单克隆抗体的制备及其特征的初步研究

应用单克隆抗体技术制备具有未经纯化的肿瘤细胞抗原中某种特异或相对特异抗原的单克隆抗体,这对肿瘤免疫的理论研究和实际应用均有重要意义。关于人宫颈癌单克隆抗体国外已有报道并已有人—人细胞融合产生的抗宫颈癌单克隆抗体,但国内尚无报道.本研究以人子宫颈癌细胞株CC-801为抗原免疫小鼠,制备出抗人子宫颈癌杂交瘤细胞株CEB9,并对其分泌的单克隆抗体进行了初步的鉴定.     

利用重组人VEGF165制备单克隆抗体的研究

目的 :制备抗重组人血管内皮生长因子 (VEGF) 16 5单克隆抗体。方法 :构建人 VEGF16 5原核表达载体 p ET- 3a/ VEGF16 5 ,并使其在大肠杆菌中高效表达 ,纯化表达产物。用初步纯化的rh VEGF16 5免疫小鼠制成杂交瘤细胞 ,小鼠腹腔接种 ,收集腹水纯化后制成抗 rh VEGF16 5单克隆抗体。结果 :VEGF16 5诱导的内皮细胞增殖可被本研究制备的单克隆抗体中和 ,并表现出较好的剂量依赖关系。结论 :本研究利用 DNA重组技术制备人 VEGF16 5 ,并利用它进一步制备了抗重组人VEGF16 5单克隆抗体。     

抗人膀胱癌双功能抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人膀胱癌双功能抗体(BfAb)并进行体外实验与鉴定.方法:提取膀胱癌抗原,应用膀胱癌抗原通过杂交瘤技术制备抗人膀胱癌单克隆抗体,后者经胃蛋白酶水解后制备抗人膀胱癌单克隆抗体的F(ab′)2片段.然后将该片段通过二次杂交制备杂交瘤,用其免疫新西兰白兔,血清经凝胶纯化后获抗人膀胱癌BfAb,应用ELISA和免疫组化方法进行鉴别.结果:抗人膀胱癌BfAb与抗人膀胱癌单克隆抗体呈阳性反应,与BALB/C小鼠γ球蛋白呈阴性反应;BfAb可以同时结合靶细胞的肿瘤抗原和效应细胞表面的触发分子,引发正常细胞对肿瘤细胞的防御机制.结论:BfAb既能竞争性地与膀胱移行细胞癌抗原结合,又具有激活淋巴细胞的功能,从而特异性的直接杀伤癌细胞并诱发一系列的免疫应答反应.     

抗人精浆蛋白McAb的制备及其特性研究

本文报道用杂交瘤技术建立了２株分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的细胞株Ｄ１和Ｃ１２。Ｄ１株分泌的抗体为ＩｇＭ，Ｃ１２株为ＩｇＧ３。这两株均能与正常人精浆和无精子症患者的精浆产生特异性免疫反应。Ｄ１株单抗具有补体依赖性制动人精子的作用，间接免疫荧光试验表明，它能结合到人精子颈部和顶体后区。这充分说明２株单抗是特异性抗人精浆的，Ｄ１是精子制动抗体，其相应的精子抗原属于精子外套抗原成分之一。     

应用抗甲胎蛋白单克隆抗体对AFP抗原性的研究(摘要)

<正> 应用淋巴细胞杂交瘤技术制备出11株抗人AFP单克隆抗体。根据抗不同决定簇的单克隆抗体与其相应抗原结合过程中不相互竞争的原理,应用交叉二位夹心固相放射免疫分析法,鉴别出AFP分子上至少有四个不同的抗原决定簇。一种单克隆抗体与胃蛋白酶分解的一个片断特异性结合。两种单克隆抗体与小牛     

抗人精子外套抗原单抗的纯化及相应抗原的提纯和鉴定

目的：研究人类精浆中一类特异性的抗原成份（精子外套抗原sperm－coatingantigens，SCA）。方法：本实验用已制备得的一株抗人精浆来源的精子外套抗原单克隆杂交瘤细胞株D1．在小鼠腹腔增殖生产大量腹水单克隆抗体，通过快速蛋白液相层析仪（FPLC）系统的羟基磷灰石柱，一次性从小鼠腹水中纯化此抗体，并制备免疫亲和层析柱，从精浆中分离到相应的抗原成份。结果：经鉴定该抗原成份分子量为20kD，来源于精囊腺，具有器官特异性。结论：该SCA的提纯，为抗精子避孕疫苗的研制提供了基础实验材料，并且有助于进一步研究其在生殖活动和免疫不孕病因中的作用。     

人高尔基体蛋白GP73基因的克隆?表达?单克隆抗体的制备及鉴定

目的:高尔基体蛋白73(Golgi protein 73,GP73)是新近发现的肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的重要血清学标志物?通过克隆?表达人GP73,制备抗GP73单克隆抗体并鉴定其特性?方法:克隆GP73基因,构建GP73原核表达载体pComb3XSS-GP73,诱导表达,以HisFF Trap亲和层析柱纯化GP73-6×His重组融合蛋白?以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗GP73单克隆抗体?以间接法ELISA检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测肝癌患者血清中GP73表达水平?结果:成功表达并纯化了GP73-6×His重组蛋白;获得5株稳定分泌抗人GP73单克隆抗体杂交瘤细胞株;免疫共沉淀证实抗GP73 单克隆抗体能与肝癌患者血清中GP73蛋白特异性结合,GP73水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高?结论:成功制备了抗人GP73单克隆抗体,为后期建立检测人GP73的双抗体夹心ELISA方法打下基础?     

抗GSTAl单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备鼠抗人谷胱甘肽S转移酶A1(GSTAI)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用纯化后的GSTAl融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备抗GSTAl的单克隆抗体(mAb)。用ELISA法测定鼠抗人GSTA1血清的效价;用Western blot方法鉴定抗血清的特异性。结果:筛选到l株可稳定分泌抗人GSTAlmAb的细胞株。腹水效价为12 800。Western blot显示在相对分子量(Mr)约25KD处出现特异性条带。说明制备的mAb可特异地识别成人肝细胞中相对分子量(Mr)约25KD的GST-GSTA1。结论:获得一株能特异性识别抗人GSTAI的单克隆抗体,可用于肝损伤性疾病的诊断。     

鼠抗人TCR/CD3单克隆抗体的制备及其初步应用

目的应用B淋巴细胞杂交瘤技术,制备鼠抗人CD3单克隆抗体,并用于T淋巴细胞亚类检测。方法以本室纯化的CD3蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地获得1株抗人CD3单克隆抗体。经间接ELISA测定,杂交瘤细胞培养腹水的抗体效价。结合SDS-PAGE实验考察单克隆抗体对CD3促T淋巴细胞增殖活性的作用。结果杂交瘤细胞培养腹水的抗体含量为20 mg/mL,效价为10-7,并对T淋巴细胞有促增殖活性,检测正常人外周血阳性T细胞百分率为（73&#177;7）%。结论制备的抗人CD3单克隆抗体具备较高的纯度和活性,可用于T细胞亚类的检测。