细胞色素C在Pim-3抗心肌急性损伤中的作用

目的:探讨原癌基因Pim-3对抗心肌急性损伤的作用是否与线粒体信号转导途径介导的细胞色素C(Cyt C)的释放有关.方法:采用大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为4组,对照组;缺氧复氧(A/R)组,建立A/R损伤模型;pcDNA3.1+A/R组,将pcDNA3.1转染入心肌细胞,24 h后进行A/R损伤;pcDNA3.1/Pim-3+A/R组,将Pim-3重组质粒(pcDNA3.1/Pim-3)转染入心肌细胞,24 h后进行A/R损伤.实验结束后,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性,四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,蛋白印迹检测Pim-3 蛋白表达水平,线粒体、胞浆Cyt C动态变化和caspase-3活性.结果:与对照组比较,A/R组细胞存活率明显下降,LDH值和凋亡指数明显升高,差异有统计学意义(P ＜ 0.01);与A/R组比较,pcDNA3.1/Pim-3+A/R组细胞存活率明显升高,LDH值和凋亡指数明显下降,并且Cyt C由线粒体向胞浆的释放明显被抑制,同时caspase-3活性也下降,差异有统计学意义(P ＜ 0.01).结论:Pim-3对抗心肌急性损伤的机制是通过抑制Cyt C易位释放入胞浆激活caspase-3而致.     

氯化镧对大鼠海马线粒体和死亡受体凋亡途径的影响

目的研究氯化镧(lanthanum chloride,LaCl3)对大鼠海马细胞凋亡和线粒体依赖的caspase-9、死亡受体依赖的caspase-8凋亡途径的影响,探讨LaCl3对海马产生毒性作用的机制。方法 40只Wistar雌性成年大鼠随机分成对照和低、中、高剂量LaCl3染毒组。对照孕鼠产仔后饮用蒸馏水,低、中、高剂量LaCl3染毒组孕鼠产仔后分别饮用0.25%、0.50%和1.00%LaCl3溶液。LaCl3染毒组子代大鼠断乳前吸吮母乳染镧,断乳后则通过自行饮用0.25%、0.50%和1.00%LaCl3蒸馏水溶液染镧,至断乳后1个月结束。取子代大鼠海马,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用比色法测定线粒体和胞浆内Cyt c含量,采用Western blot法检测Fas、FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达水平。结果 LaCl3染毒组子代大鼠海马细胞凋亡率显著高于对照组,且随染毒剂量增加而升高。低剂量LaCl3染毒组子代大鼠海马细胞线粒体内Cyt c含量显著低于对照组,而胞浆中Cyt c含量和caspase-3、caspase-9蛋白表达水平显著高于对照组;中剂量LaCl3染毒组子代大鼠海马细胞线粒体内Cyt c含量显著低于对照组和低剂量LaCl3染毒组,而胞浆中Cyt c含量和caspase-3、caspase-9蛋白表达水平显著高于对照组和低剂量LaCl3染毒组;高剂量LaCl3染毒组子代大鼠海马细胞线粒体内Cyt c含量显著低于对照组和低、中剂量LaCl3染毒组,而胞浆中Cyt c含量和caspase-3、caspase-9蛋白表达水平显著高于对照组和低、中剂量LaCl3染毒组。各LaCl3染毒组子代大鼠海马Fas、FasL和caspase-8蛋白表达水平均与对照组无显著性差异。结论 LaCl3染毒造成大鼠海马细胞凋亡过度的机制可能涉及线粒体caspase-9凋亡途径表达增强,而与死亡受体Fas依赖的caspase-8凋亡途径无关。     

1-磷酸鞘氨醇对心肌缺血再灌注损伤所致细胞凋亡的影响及其与PI3K/Akt/GSK3β通路的相关性研究

目的 研究1-磷酸鞘氨醇（sphingosine 1-phosphate,S1P）对心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia/reperfusioninjury,MIRI）所致细胞凋亡的影响及其与PI3K/Akt/GSK3β信号通路的相关性。方法 缺血30 min后,进行再灌注损伤120 min,建立大鼠MIRI模型。采用TTC染色方法测定心肌梗死面积,采用TUNEL染色方法观察心肌凋亡指数,采用酶联免疫方法测定血浆CK-MB活性。采用Western blot方法测定Akt、GSK3β磷酸化情况以及cleaved caspase-3水平,并测定细胞色素C释放情况。结果 S1P可明显减少心肌梗死面积、降低细胞凋亡指数。同时增加Akt、GSK3β磷酸化程度,降低cleaved caspase-3水平,减少胞浆细胞色素C易位。S1P的保护作用可被PI3K抑制剂LY294002所阻断。结论 S1P可通过抑制线粒体蛋白细胞色素C释放、减少caspase激活,减弱MIRI所致心肌细胞凋亡以及心肌梗死,该作用与PI3K/Akt/GSK3β信号通路活化有关。     

线粒体通透性转换孔对红景天苷减轻心肌缺血再灌注损伤的作用

目的探讨线粒体通透性转换孔(mPTP)在红景天苷减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用和机制。方法使用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型。将60只SPF级健康雄性成年SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、红景天苷组(Sal组)和环孢菌素A组(CsA组)。用Western Blot法检测细胞色素C(Cyt-c)分别在细胞浆和线粒体中的表达情况;用免疫组化法检测活化型半胱天冬酶-9(cleaved caspase-9)和活化型半胱天冬酶-3(cleaved caspase-3)在各组心肌组织的表达水平;用线粒体肿胀实验法评估各组心肌的mPTP开放程度;酶联免疫分析(Elisa)法测定各组大鼠心肌组织中线粒体细胞色素C氧化酶(COX)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性。结果与Sham组比较,I/R组心肌组织中大量Cyt-c由线粒体释放到细胞浆中,cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达水平均显著上升,线粒体吸光度下降率明显升高,COX和SDH活性降低(P<0.05);与I/R组比较,Sal组和CsA组Cyt-c释放和线粒体吸光度下降均受抑制,cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达水平均下降,COX和SDH活性均升高(P<0.05)。结论红景天苷可通过抑制mPTP开放、保护线粒体功能来发挥心肌保护作用,其具体机制与减少Cyt-c的释放、抑制caspase-9和caspase-3的激活及提高COX和SDH的活性有关。     

舒芬太尼对非停跳冠状动脉搭桥术大鼠模型的保护作用

目的 探究舒芬太尼对非停跳冠状动脉搭桥术大鼠模型中心肌细胞及肾功能的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组(只完成开胸穿线,不结扎冠状动脉)、模型组(构建缺血灌注模型)、低剂量实验组(构建缺血灌注模型+0.5μg·kg^-1舒芬太尼)、高剂量实验组(构建缺血灌注模型+1μg·kg^-1舒芬太尼)。术后6 h处死小鼠,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌细胞和肾细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的表达,用蛋白质印迹法检测心肌细胞和肾细胞凋亡相关蛋白的表达,用血清肾功能试剂盒检测血清肾功能指标。结果 假手术组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组的心肌细胞的TNF-α表达水平分别为(50.41±6.03)、(136.61±21.73)、(102.36±12.84)和(74.21±16.32)pg·mg^-1,心肌细胞半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达水平分别为0.31±0.02、1.26±0.18、0.83±0.12和0.67±0.08,尿素氮(BUN)水平分别为...     

杨梅素和二氢杨梅素对氧化应激损伤模型心肌细胞的保护作用研究

目的:研究杨梅素和二氢杨梅素对氧化应激损伤模型心肌细胞的保护作用机制。方法:取Wistar乳鼠心肌细胞分为对照(常规培养液)组、模型(常规培养液)组、杨梅素(50μmol/L)组、二氢杨梅素(50μmol/L)组。不同药液培养心肌细胞1 h后,用100μmol/L H2O2培养16 h以复制心肌细胞氧化应激损伤模型。通过荧光染色法观察心肌细胞的形态,并测定凋亡率;流式细胞仪测定细胞线粒体膜电位变化;Western blot法检测细胞胞浆中细胞色素(Cyt)C、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Caspase-9蛋白的表达。结果:与模型组比较,杨梅素组心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05);杨梅素组、二氢杨梅素组心肌细胞线粒体膜电位下降,Cyt C、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达减弱(P<0.01或P<0.05)。结论:杨梅素和二氢杨梅素对体外心肌细胞氧化应激损伤有保护作用,其机制与通过线粒体途径抑制线粒体膜电位下降、抑制Cyt C从线粒体释放及活化Caspase-3和Caspase-9有关。     

阿魏酸对蛛网膜下腔出血模型大鼠脑干组织和基底动脉细胞凋亡的影响

目的:探讨阿魏酸对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑干组织神经细胞和基底动脉细胞凋亡的影响。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、SAH模型组,阿魏酸低(20 mg·kg^-1)、中 (40 mg·kg^-1)和高(80 mg·kg^-1)剂量组,采用枕大池内新鲜自体动脉血二次注入法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型,术后各治疗组灌胃给药7 d,假手术组和模型组均给予等体积生理盐水。分别采用TUNEL技术和免疫组化法观察脑干组织神经细胞凋亡和基底动脉细胞中caspase-3的表达。结果:与假手术对照组比较,SAH大鼠脑干组织中神经细胞凋亡阳性率明显升高(P<0.01),基底动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞中caspase-3表达显著增加(P<0.01),而SAH大鼠灌胃服用阿魏酸7 d后,阿魏酸低、中和高剂量组(20,40,80 mg·kg^-1)大鼠脑干组织中神经细胞凋亡率均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),动脉基底血管内皮细胞和平滑肌细胞中caspase-3阳性表达率明显降低。结论:阿魏酸通过抑制脑干组织和基底动脉细胞中凋亡相关基因的表达,从而达到对SAH大鼠脑功能的保护作用。     

罗氟司特对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的 研究罗氟司特对急性心肌梗死(AMI)大鼠的治疗作用及其可能的作用机制。方法 将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组(AMI)、低剂量实验组(AMI+1 mg·kg^-1罗氟司特)、高剂量实验组(AMI+3 mg·kg^-1罗氟司特),对照组(AMI+0.9 mg·kg^-1倍他乐克),每组10只,连续药物干预10 d后进行AMI造模。造模成功7 d后检测大鼠心功能指标水平,以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清因子水平,以试剂盒检测心肌组织氧化应激相关指标水平,以原位末端标记法(TUNEL)法检测大鼠心肌组织心肌细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测心肌组织蛋白表达水平。结果 假手术组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和对照组大鼠的左心室射血分数(EF)水平分别为(64.44±3.65)%、(36.12±2.50)%、(41.91±3.92)%、(49.90±2.48)%、(53.28±3.22)%,肌酸激脢同工酶(CK-MB)水平分别为(19.15±0.91)、(77.86±5.92)、(61.58±4.78)、(43...     

实验性糖尿病大鼠脑细胞凋亡的探讨

目的 :研究糖尿病对脑细胞凋亡的影响。方法 :采用四氧嘧啶制造糖尿病大鼠模型 ,差速离心法提取脑线粒体并分析细胞色素 C(Cyt C)含量。用原位细胞凋亡 TUNEL法观察糖尿病大鼠脑细胞凋亡情况。结果 :与正常对照组相比 ,糖尿病大鼠脑线粒体 Cyt C含量明显升高 (P <0 .0 5 )脑神经细胞凋亡数显著升高 (P <0 .0 5 )。结论 :糖尿病对大鼠脑细胞凋亡有显著影响 ,可能由 Cyt C触发引起     

毛蕊花苷对心肌缺血再灌注大鼠Notch信号通路及Sirt3的影响

目的 探究毛蕊花苷对心肌缺血再灌注(MI/R)大鼠Notch信号通路及沉默信息调节因子3(Sirt3)的影响。方法 用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h建立MI/R模型。按照体质量将SD大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、阳性对照组和毛蕊花苷低、高剂量组,每组12只。毛蕊花苷低、高剂量组分别腹腔注射毛蕊花苷10和20 mg·kg^-1,阳性对照组腹腔注射5.4 mg·kg^-1曲美他嗪,假手术组和模型组分别注射等量的0.9%NaCl。再灌注开始时进行给药,共1次,假手术组分离左冠状动脉前降支,不结扎。用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法检测大鼠心肌梗死面积,用TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡指数,用试剂盒检测血浆中乳酸脱氢酶(LDH)含量及心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,用流式细胞仪检测心肌组织内活性氧ROS的水平,用蛋白质印迹法检测心肌组织中Notch1、发状分裂相关增强子-l(Hes-1)和Sirt3蛋白的表达水平。结果 假手术组、模型组、阳性对照组、毛蕊花苷高剂量组大鼠的心肌梗死面积百分比分别为0、(35...     

丙泊酚抑制GRP78/PERK/CHOP通路改善PE诱导H9C2细胞凋亡的研究

目的:研究丙泊酚对苯肾上腺素(phenylephrine, PE)诱导H9C2心肌细胞的影响及机制。方法:H9C2细胞均分为5组,PE诱导细胞凋亡模型,用0.5,1,1.5 mmol·L^-1丙泊酚预处理。采用流式细胞术检测凋亡率;RT-qPCR检测GRP78/PERK/CHOP通路的mRNA表达;蛋白质印迹检测GRP78/PERK/CHOP通路蛋白、caspase-12、caspsae-3、SERCA2a的表达;定磷法检测SERCA2a活性。结果:PE诱导心肌细胞凋亡率升高,GRP78/PERK/CHOP通路mRNA及蛋白表达升高,caspase-12、caspsae-3表达升高,SERCA2a蛋白表达及活性降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。中、高浓度的丙泊酚可明显逆转PE诱导的上述指标变化,且差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:丙泊酚通过恢复SERCA2a的活性及表达量、抑制GRP78/PERK/CHOP通路,降低PE诱导的心肌细胞凋亡。     

羟考酮与吗啡对大鼠心肌缺血再灌注损伤时氧化应激的影响

目的:比较羟考酮与吗啡对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)时氧化应激的影响。方法:雄性SD大鼠80只,随机分组(每组16只):假手术组(S组)、MIRI组(I组)、羟考酮组(O组)、吗啡组(M组)、羟考酮+κ受体拮抗剂组(K组)。MIRI模型制作方法为结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注180 min。S组只穿线不结扎;O组和M组、K组分别于再灌注前5 min经尾静脉注射羟考酮0.5 mg·kg^-1、吗啡 1.5 mg·kg^-1、羟考酮0.5 mg·kg^-1+κ受体拮抗剂0.5 mg·kg^-1。分别测定心肌梗死面积(ARI)、血清肌钙蛋白(cTnI)浓度、心肌组织学改变及Mn-SOD阳性细胞比例。结果:与S组比较,I组cTnI升高(P＜0.05),ARI增大(P＜0.05),心肌组织病理损伤重,Mn-SOD阳性细胞减少(P＜0.05);与I组比较,O组和M组血清中cTnI降低(P＜0.05),ARI减少(P＜0.05),心肌组织病理损伤较轻,Mn-SOD阳性细胞升高(P＜0.05);与O组比较,M组、K组血清中cTnI升高(P＜0.05),ARI增大(P＜0.05),心肌组织病理损伤较重,Mn-SOD阳性细胞减少(P＜0.05)。结论:羟考酮可更显著抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌氧化应激反应,减轻心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与羟考酮与心肌细胞膜上κ受体结合来抑制心肌组织氧化应激反应有关。     

南瓜多糖对糖尿病大鼠胰岛Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察南瓜多糖(PP)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax表达的影响。方法建立链脲佐菌素性糖尿病模型,PP(150、300、600mg.kg-1)灌胃进行治疗。3wk后检测大鼠空腹血糖值;采用免疫组化的方法探讨PP对链脲佐菌素性糖尿病大鼠Fas和Fas-L蛋白表达的影响;采用RT-PCR的方法观察PP对实验性糖尿病大鼠胰岛凋亡调控基因Bax和Bcl-2表达的影响。结果PP(300、600mg.kg-1)能明显降低STZ诱导的糖尿病大鼠的空腹血糖值;PP(150、300、600mg.kg-1)治疗后大鼠胰腺组织中Fas/Fas-L蛋白的表达率明显低于STZ模型组;PP(150、300、600mg.kg-1)给药3wk后,大鼠Bcl-2基因的表达明显增加,PP(300、600mg.kg-1)治疗后大鼠Bax基因的表达明显下降,Bcl-2与Bax的比值明显增加。结论PP对实验性糖尿病大鼠有降血糖作用,其作用与降低大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L蛋白的表达、调节Bcl-2与Bax基因的表达有关。     

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组蛋白诱导肿瘤细胞体内外凋亡及其分子机制

目的 探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂（snake venom cystatin,sv-cystatin）重组蛋白对肿瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 将sv-cystatin重组蛋白（10,25,50,100,200 mg·L^–1）作用于B16F10和MHCC97H细胞,C57BL/6小鼠尾静脉注射B16F10细胞建立黑色素细胞荷瘤模型并给予25,50 mg·kg^–1的sv-cystatin重组蛋白干预,建立MHCC97H细胞BALB/c–nude裸鼠腋下皮内成瘤模型并给予25,50,100 mg·kg^–1的sv-cystatin重组蛋白干预,分别检测体内外细胞凋亡,检测重组蛋白体外作用后肿瘤细胞Bcl-2、Bcl-w和Bax的基因与蛋白表达,检测Cyto C蛋白表达和caspase-2、caspase-3酶活性。结果 与对照组相比,25,50,100,200 mg·L^–1的sv-cystatin重组蛋白能够增强2种肿瘤细胞的体外凋亡能力（P<0.05）;C57BL/6小鼠肺转移结节中B16F10细胞（50 mg·kg^–1）和BALB/c-nude腋下皮内肿瘤组织中MHCC97H细胞（100 mg·kg^–1）的凋亡增强（P<0.05）;体外处理B16F10和MHCC97H细胞后Bcl-2和Bcl-w的基因与蛋白表达均下降,Bax表达则增强（P<0.05）,Cyto C蛋白表达增强（P<0.05）,caspase-2和caspase-3的活性上调（P<0.05）。结论 Sv-cystatin重组蛋白能够促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。     

Urantide对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡的作用及机制研究

目的观察urantide对大鼠缺血/再灌注心肌组织氧化应激损伤的作用和心肌细胞凋亡的影响及其与PI3K/Akt及PKC信号通路的关系。方法可逆性冠脉左前降支结扎造成心肌缺血/再灌注模型,给予大鼠心脏缺血30 min再灌注90 min。80只大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注(I/R)组、urantide低、中、高剂量组(3,10,30μg.kg-1)、维拉帕米对照组(1.6 mg.kg-1)、urantide+CHE组(30μg.kg-1+1 mg.kg-1)、urantide+LY294002组(30μg.kg-1+0.3 mg.kg-1)。Urantide低、中、高剂量组中urantide于缺血前5 min舌下静脉1 min内一次性推注,urantide+CHE组与urantide+LY294002组中,在穿线稳定后舌下静脉分别快速推注CHE与LY294002,5 min后舌下静脉快速推注uran-tide 30μg.kg-1,稳定10 min后再行缺血/再灌注操作。实验结束后测定大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活力和丙二醛(MDA)含量以及一氧化氮(NO)含量。TUNEL法检测凋亡细胞指数(AI),免疫组化法检测心肌组织Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果与I/R组相比,urantide 30μg.kg-1能明显升高SOD活性(P<0.01),明显减少血清中MDA的含量(P<0.05),明显提高NOS活力(P<0.01),使NO含量增加(P<0.01);Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡指数降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05);urantide+CHE组与urantide+LY294002组与urantide30μg.kg-1组相比,SOD活力和NO含量下降,MDA含量上升,心肌组织中Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡指数上升,而Bcl-2蛋白表达下降,与I/R组比较差异无统计学意义(P>0.01)。结论 Urantide能够通过激活PKC和PI3K/Akt信号转导通路,减少心肌组织氧自由基的含量,进一步调控Bcl-2和Bax蛋白的表达,抑制心肌缺血/再灌注大鼠心肌细胞的凋亡,从而对大鼠心肌缺血/再灌注具有一定保护作用。     

雷公藤内酯醇对雄性大鼠生殖毒性的机制研究(Ⅱ)

目的：考察雷公藤内酯醇对大鼠睾丸细胞相关凋亡基因mRNA表达的影响,研究雷公藤内酯醇生殖毒性的分子机制。方法：以低（0.025 mg·kg^-1）、中（0.05 mg·kg^-1）、高（0.1 mg·kg^-1）剂量的雷公藤内酯醇对健康雄性Wistar大鼠连续灌胃染毒30 d,每天一次,于末次染毒24 h后处死大鼠,取睾丸组织进行病理学检查,并通过实时荧光定量PCR测定Bcl-2、Bax、Fas、FasL、CREM和Caspase-3基因mRNA的表达情况。结果：与阴性对照组相比,雷公藤内酯醇染毒组睾丸组织生精细胞明显减少,精索内几乎无精子;高剂量组Bcl-2、CREM mRNA表达降低;而Bax mRNA表达水平在中、高剂量组时呈显著地高表达;Fas和FasL mRNA表达水平在高剂量组显著上升;Caspase-3 mRNA表达水平呈现依赖剂量的高表达,中、高剂量时呈现显著性差异。结论：提示在本实验染毒剂量范围内,特别是高剂量的雷公藤内酯醇能够使生殖细胞相关凋亡基因Bcl-2、Bax、Fas、FasL、CREM和Caspase-3不同程度的表达异常,这很可能是雷公藤内酯醇诱导大鼠生殖细胞凋亡的重要原因,为进一步深入阐述雷公藤内酯醇雄性生殖毒性的分子机制提供了依据。     

Ghrelin protects H9c2 cardiomyocytes from angiotensin II-induced apoptosis through the endoplasmic reticulum stress pathway

Ghrelin, a gastric hormone, exerts cardioprotective function by increasing myocardial contractility and vasodilation. Previous studies have reported that angiotensin II (Ang II) production increased in heart failure, which can induce cardiomyocyte apoptosis. In this study, we investigated the effect of ghrelin on Ang II-induced H9c2 cardiomyocyte apoptosis. The results showed that Ang II inhibited H9c2 cell viability, which was blocked by ghrelin. By annexin V-propidium iodide dual staining and 2'-deoxyuridine 5'-triphosphate nick end-labeling analysis, we found that Ang II induced H9c2 cell apoptosis, whereas coincubation of ghrelin with Ang II significantly reduced H9c2 cell apoptosis induced by Ang II. Simultaneously, the results revealed that ghrelin regulated the Ang II-induced imbalance of Bax and Bcl-2 expression and reduced Ang II-induced caspase-3 expression. Moreover, mRNA expressions of endoplasmic reticulum stress-related molecules GRP78, caspase-12, and C/EBP homologous protein were significantly upregulated by Ang II. However, their expressions were significantly inhibited by ghrelin. In addition, we found that ghrelin markedly inhibited Ang II-induced Ang II type 1 receptor expression. These data suggest that ghrelin may play an antagonistic role in Ang II-induced cardiomyocyte apoptosis via decreasing Ang II type 1 receptor expression and inhibiting the activation of endoplasmic reticulum stress pathway.     

曲美他嗪对犬急性心肌梗死后延迟再灌注中缺血区心肌细胞凋亡的影响

目的探讨曲美他嗪(trimetazidine)在犬急性心肌梗死后延迟再灌注中对梗死周边缺血区心肌细胞的保护作用及其机制。方法24只健康成年犬随机平均分为3组:假手术组、单纯延迟再灌注组(late reperfusion group,LR)、延迟再灌注预加曲美他嗪组(late reperfusion+trimetazidinegroup,LR+TMZ)。假手术组和LR组灌服生理盐水,LR+TMZ组灌服曲美他嗪(2mg·kg-1.d-1)共14d。所有犬于d14灌药2h后开胸,假手术组不结扎冠状动脉;LR和LR+TMZ在高位结扎左冠状动脉前降支10h,再灌注10h,制成AMI延迟再灌注模型。采用TUNEL法测心肌细胞凋亡指数(AI),免疫组化法测Bcl-2、Bax、细胞色素C和AIF蛋白表达。结果与LR组相比,LR+TMZ组心肌细胞AI明显降低,Bax、细胞色素C和AIF蛋白的表达明显减少(P<0.01),而Bcl-2蛋白的表达明显增高(P<0.01);分别与假手术组比较,差异均有显著性(P<0.01)。结论曲美他嗪在急性心肌梗死后延迟再灌注中可减少梗死周边缺血区心肌细胞的凋亡,其机制可能与增加Bcl-2蛋白的表达,减少Bax、细胞色素C、AIF蛋白的表达有关。     

蜂胶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤Fas、Bax和Bcl-2基因蛋白表达的影响

目的研究蜂胶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤相关基因蛋白表达的影响。方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,研究Fas、Bax、Bcl2、p53基因蛋白表达。结果缺血30min,再灌注48h后,模型组和蜂胶总黄酮组的大鼠心肌Fas基因蛋白表达均明显高于假手术组,差异有显著性;且蜂胶总黄酮组的Fas表达均低于模型组,证明蜂胶总黄酮对Fas表达具有明显的抑制作用。Bax基因的蛋白表达:模型组与蜂胶总黄酮组均高于假手术组,但蜂胶总黄酮组与模型组之间并无差异。Bcl2基因蛋白的表达:模型组与蜂胶总黄酮组均高于假手术组,其中蜂胶总黄酮高剂量组与假手术组比较差异有显著性,而其它各组间比较差异无显著性。p53基因蛋白表达:各组切片经免疫组化反应后,均未见明显的p53基因蛋白表达迹象。结论蜂胶总黄酮通过抑制Fas蛋白表达,上调Bcl2蛋白表达而减少了心肌细胞的凋亡,保护了心肌组织的结构与功能。     

三七皂苷R1调控AMPK/Nrf-2/HO-1信号通路缓解冠心病大鼠心肌损伤的研究

目的 研究三七皂苷R1对冠心病模型大鼠心肌损伤的作用及机制。方法 将大鼠随机分为对照组,模型组,三七皂苷R1低、中、高剂量组,每组9只;采用饲喂高脂饲料联合垂体后叶注射液腹腔注射的方法建立冠心病大鼠模型;三七皂苷R1低、中、高剂量组分别灌胃给予50,100和200 mg·kg^-1的三七皂苷R1,每天给药1次,连续4周。HE染色观察心肌损伤,Western blotting检测活化的半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）的表达水平,测定平均动脉压、心率和左室收缩压水平,ELISA检测心损标记肌红蛋白（myoglobin,Mb）、肌酸激酶同工酶（creatine kinase isozyme,CK-MB）和肌钙蛋白（cardiac troponin,cTnΙ）表达水平及炎症因子白介素-6（interleukin-6,IL-6）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）含量,试剂盒检测心肌细胞丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和谷胱甘肽（glutathione,GSH）表达水平,Western blotting检测腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activeted protein kinase,AMPK）的磷酸化及转录因子NF-E2相关因子（Nrf2）、血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）表达水平。结果 三七皂苷R1能降低冠心病大鼠心肌损伤程度,抑制心肌凋亡蛋白caspase-3、caspase-9的活化（P<0.05）,上调心脏功能指标平均动脉压、心率和左室收缩压水平（P<0.05）,抑制心损标记物CK-MB、cTnΙ和Mb高表达（P<0.05）,降低氧化应激指标SOD、GSH、LDH和MDA的含量（P<0.05）,抑制炎症因子IL-6、IL-1β、iNOS和TNF-α含量表达上调（P<0.05）,上调AMPK/Nrf-2/HO-1信号通路蛋白的表达（P<0.05）。结论 三七皂苷R1能改善冠心病大鼠心肌损伤,抑制心肌细胞凋亡、氧化应激、炎症反应,这与调控AMPK/Nrf-2/HO-1信号通路激活有关。