miR-30a-5p调控USP22对MPP+诱导的SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨miR-30a-5p对1甲基4苯基吡啶(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 体外培养SK-N-SH细胞,分为对照组(NC组)、MPP+组(1 mmol/L MPP+作用细胞24 h)、MPP++miR-30a-5p组(1 mmol/L MPP+作用转染miR-...     

miR-30a-5p调控HDAC9对心肌细胞氧化应激损伤保护作用的机制研究

目的 探讨miR-30a-5p通过调控组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激的影响及作用机制.方法 本研究通过体外培养心肌细胞H9 c2,建立缺氧复氧损伤细胞模型,细胞分组为:Control组、H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-30a-5p组、H/R+si-NC组、H/R...     

FOXD3-AS1与miR-135a-5p的相互作用及对肾细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究FOXD3-AS1与miR-135a-5p的相互作用及对肾细胞癌(RCC)ACHN细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选取本院2017年1月—2019年12月RCC手术切除癌组织和癌旁组织60份,RT-qPCR检测组织和细胞中FOXD3-AS1和miR-135a-5p表达水平;ACHN细胞分别或联合转染si-NC、si-FOXD3-AS1-1、si-FOXD3-AS1-2、miR-NC、miR-135a-5p mimic、pcDNA3.1-FOXD3-AS1和miR-135a-5p inhibitor;行Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;行划痕闭合实验检测各组细胞迁移能力;行双荧光素酶实验检测靶向关系。建立裸鼠RCC移植瘤模型,分为si-FOXD3-AS1组和si-NC组,每组6只,建模后30 d处死测定移植瘤质量,采用免疫组织化学法检测Ki-67和E-cadherin阳性表达率。结果 与癌旁组织比较,癌组织中FOXD3-AS1表达显著上升,miR-135a-5p表达显著下降(P<0.01)。FOXD3-AS1干扰显著降低细胞活力、侵袭数目和划痕闭合率(P<...     

miR-891a-5p及miR-383-5p与激素受体阳性早期乳腺癌术后发生远处转移的关系探讨

目的 探讨微小RNAs(miRNAs, miR)-891a-5p及miR-383-5p与激素受体(HR)阳性早期乳腺癌术后发生远处转移的关系。方法 62例HR阳性早期(T1～2N0M0期)乳腺癌患者,根据术后是否出现远处转移分为远处转移组(28例,出现远处转移)和未远处转移组(34例,未出现远处转移)。收集两组的临床乳腺癌标本,并检测组织的miRNAs表达水平。比较两组miR-891a-5p、miR-383-5p、miR-1295a表达水平,分析miR-891a-5p、miR-383-5p、miR-1295a对乳腺癌远处转移的诊断效能;比较两组miR-661、miR-296-3p、miR-128-3p表达水平,分析miR-891a-5p、miR-383-5p、miR-1295a表达水平与无远处转移生存率(DMFS)之间的关系。结果 远处转移组miR-891a-5p、miR-383-5p、miR-1295a表达水平明显较未远处转移组减少,差异倍数分别为-2.519、-1.812和-1.443;远处转移组miR-891a-5p表达(1.099±0.899)明显低于未远处转移组的(2.768...     

miR-199a-5p和miR-206靶向调控SULF1并抑制卵巢上皮细胞对顺铂的敏感性

目的 SULF1是硫酸酯酶家族成员之一,主要发挥肿瘤抑制因子的作用,在多种肿瘤中低表达,本研究旨在筛选直接靶向SULF1的microRNAs,并验证候选microRNAs对SULF1表达的负调控作用。方法 利用TargetScanHuman 7.2、miRDB、DIANA和RNAhybrid数据库预测调控SULF1的microRNAs。利用实时荧光定量PCR和Western blotting实验探索microRNAs对SULF1表达的影响。双荧光素酶报告基因实验探究microRNAs和SULF1基因的直接结合能力。CCK-8实验验证microRNAs对铂类药物敏感性的影响。结果 利用数据库预测到两个microRNAs：miR-199a-5p和miR-206,二者均可靶向SULF1的3''-UTR区域。实时荧光定量PCR结果显示,与IOSE80细胞中的阴性对照相比,miR-199a-5p和miR-206对应的模拟物（mimics）分别使SULF1的mRNA表达水平降低至23.07%和20.11%,而它们的抑制剂（inhibitors）则分别使SULF1的mRNA表达水平升高3.62倍和3.09倍。Western blotting结果表明,miR-199a-5p和miR-206也可降低SULF1蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-206和miR-199a-5p均可直接结合SULF1的3''-UTR,且miR-206具有更强的调控作用。CCK-8实验结果表明,降低miR-199a-5p和miR-206的表达水平可显著增强IOSE80细胞对顺铂的敏感性（IC₅₀： 9.287 μmol·L^-1/11.32 μmol·L^-1 vs. 16.75 μmol·L^-1）,相反,二者过表达可显著降低IOSE80细胞对顺铂的敏感性。结论 miR-199a-5p和miR-206均可直接与SULF1的3''-UTR结合,下调SULF1表达,降低卵巢细胞对顺铂的敏感性。     

miR-199a-5p调控DDR1抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移

目的初步探究miR-199a-5p对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法选取U251细胞为实验对象,构建miR-199a-5p过表达U251细胞株。实验分组:对照组(无转染的U251细胞,Control)、阴性对照组(转染空载体质粒U251细胞,NC)以及实验组(转染miR-199a-5p成熟模拟物,mimics)。实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-199a-5p表达;CCK-8检测转染miR-199a-5p后细胞增殖;细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测各组U251迁移情况;Western blot检测DDR1表达;构建DDR1过表达U251细胞株,检测DDR1过表达对转染miR-199a-5p的U251细胞增殖和迁移的影响。结果mimics组细胞miR-199a-5p水平高于control组(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.01)。转染miR-199a-5p组细胞DDR1表达水平降低(P<0.01)。与mimins组相比,转染pcDNA3.1-DDR1组能够上调DDR1(P<0.01),增加细胞活力,促进细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论miR-199a-5p能够下调DDR1表达,抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移。     

lncRNAVIM-AS1靶向miR-126-5p调控肺癌细胞放射敏感性分子机制研究

目的 研究lncRNA VIM-AS1对肺癌A549细胞放射敏感性的影响和潜在的分子机制.方法 qRT-PCR检测lncRNA VIM-AS1和miR-126-5p在正常肺上皮细胞BEAS-2B及肺癌细胞A549、SPC A1和HCI-H596中的表达水平,克隆形成实验测定不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)处理后...     

黄连调控miR-26a-3p对急性胰腺炎胰腺细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨黄连提取物对急性胰腺炎(AP)胰腺细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 利用雨蛙素作用AR42J细胞建立AP细胞模型.不同浓度的黄连提取物作用雨蛙素诱导的AR42J细胞,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,流式...     

MiR-199a-5p and miR-375 affect colon cancer cell sensitivity to cetuximab by targeting PHLPP1

Objectives: We aimed to analyze the differentially-expressed miRNAs in colon cancer cells in order to identify novel potential biomarkers involved in cancer cell resistance.

Design and methods: We investigated the miRNA expression profile of GEO human colon carcinoma cells, sensitive to the EGFR inhibitor Cetuximab (CTX) and their CTX-resistant counterpart (GEO CR) by using a miRNA chip.

Results: We found 27 upregulated and 10 downregulated miRNAs in GEO CR compared with GEO cells with a fold change ≥ 2. Among the upregulated miRNAs, we focused on miR-199a-5p and miR-375. We report that their enforced expression promotes CTX resistance, whereas their silencing sensitizes to the same drug. The ability of miR-199a-5p and miR-375 to target PHLPP1 (PH domain and leucine-rich repeat protein phosphatase 1), a tumor suppressor that negatively regulates the AKT pathway, accounts, at least in part, for their drug-resistance activity. Indeed, restoration of PHLPP1 increases sensitivity of the GEO cells to CTX and reverts the resistance-promoting effect of miR-199a-5p and miR-375.

Conclusion: This study proposes miR-199a-5p and miR-375 as contributors to CTX resistance in colon cancer and suggests a novel approach based on miRNAs as tools for the therapy of this tumor.     

Cadmium induces ferroptosis and apoptosis by modulating miR-34a-5p/Sirt1axis in PC12 cells

Cadmium (Cd) is a potent neurotoxic metal present in the environment and food. In this study, CdCl₂ (2 or 4 μM) induced cytotoxicity and neurotoxicity in PC12 cells, causing decreases in cell viability and NEP protein expression and increase in p-tau protein expression. For the first time, CdCl₂-initiated injury was found to result from the induction of not only apoptosis but also ferroptosis, as evidenced by the increased iron content, ROS production, and mitochondrial membrane potential along with changes in the expressions of iron death-related genes (FTH1, GPX4, ASCL4, PTGS2, and NOX1) and levels of caspase9, Bax, and Bcl-2 proteins. The molecular mechanisms leading to apoptosis and ferroptosis at least included the participation of the miR-34a-5p/Sirt1 axis, in which miR-34a-5p promoted CdCl₂-induced neurotoxicity through targeting Sirt1. Knocking out miR-34a-5p attenuated CdCl₂-induced damage of PC12 cells, cytotoxicity and neurotoxicity. This research provides the underlying molecular mechanisms of CdCl₂-induced damage and asserts the role of miRNAs as critical regulators.     

计算机断层扫描联合血清三叶因子1、微RNA-130a-5p检测对肺癌的诊断价值分析

目的 探究计算机断层扫描(CT)联合血清三叶因子1(TFF1)、微RNA-130a-5p(miR-130a-5p)检测对肺癌的诊断价值。方法 选取2015年2月至2016年9月石家庄市人民医院收治的94例肺癌病人为肺癌组,85例同期确诊的肺良性病变病人为良性病变组。对所有受试者进行CT检查,并分析CT对肺癌病人的诊断效能;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TFF1水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清miR-130a-5p相对表达量;ROC曲线分析血清TFF1、miR-130a-5p对肺癌的诊断价值;分析CT、TFF1、miR-130a-5p单独检测及联合检测对肺癌的诊断价值。结果 CT诊断肺癌误诊16例,19例漏诊。CT诊断肺癌的灵敏度为79.79%,特异度为81.18%,准确度为80.45%,误诊率、漏诊率分别为18.82%与20.21%。与良性病变组相比,肺癌组病人血清TFF1显著上升,miR-130a-5p水平显著下降(P<0.05)。血清TFF1、miR-130a-5p对肺癌诊断价值的曲线下面积(AUC)分别为0.85、0.83,截断值分别为1.1...     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

hsa-miRNA-30a-5p促进肺癌细胞A549增殖的机制研究

目的 研究hsa-miRNA-30a-5p促进肺癌细胞A549增殖的调控机制。方法 收集临床肺癌标本及癌旁组织5对,用荧光定量法（real time-PCR）和蛋白质印迹法（Western blotting）分别检测肿瘤及其癌旁组织中hsa-miRNA-30a-5p和SCARA5的蛋白含量;生物信息学预测hsa-miRNA-30a-5p与SCARA5基因3''UTR区结合位点,并通过荧光素酶报告基因法进行结合位点验证;构建SCARA5基因沉默表达载体pshRNA-SCARA5,脂质体瞬时转染pshRNA-SCARA5及hsa-miRNA-30a-5p阻遏物（miRNA-30a-5p inhibitor）到A549细胞,转染后48 h,real time-PCR检测细胞内hsa-miRNA-30a-5p含量,Western blotting检测细胞中SCARA5蛋白含量;MTT法检测转染后A549细胞对数期增殖活性。结果 肺癌组织中SCARA5蛋白表达量明显低于癌旁组织,组间差异显著（P<0.05）;肺癌组织中hsa-miRNA-30a-5p含量则明显高于癌旁组织,组间差异显著（P<0.05）。荧光素酶实验显示,与报告基因表达载体单独转染组比较,miRNA-30a拟似物（miRNA-30a-5p mimics）和miRNA-30a-5p inhibitor与野生型荧光素酶报告基因共转染组可以明显抑制或增强荧光素酶活性（P<0.05）;miRNA-30a-5p inhibitor转染细胞后48 h,与转染对照组比较,细胞内hsa-miRNA-30a-5p含量明显降低（P<0.05）,阴性对照（miRNA-30a-5p NC）转染组和转染对照组细胞内hsa-miRNA-30a-5p含量无显著差异（P>0.05）。转染后24~72 h,miRNA-30a-5p inhibitor转染组A549细胞增值活性明显降低（P<0.05）,而pshRNA-SCARA5转染能够逆转miRNA-30a-5p inhibitor增强A549细胞增殖活性的趋势,共转染组与miRNA-30a-5p inhibitor单独转染组及转染对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 Hsa-miRNA-30a-5p通过抑制SCARA5基因表达,增强A549细胞的增殖活性,转染miRNA-30a-5p inhibitor,可以抑制A549细胞增殖活性。     

羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞生物学行为的影响

目的 探讨羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）NCI-H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将体外培养的NCI-H1299细胞分为正常对照（NC）组（未处理）、低剂量组（12.5μmol/L羽扇豆醇）、中剂量组（25μmol/L羽扇豆醇）、高剂量组（50μmol/L羽扇豆醇）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-100-5p组（转染miR-100-5p）、anti-miR-NC+高剂量组（转染anti-miR-NC后用50μmol/L羽扇豆醇处理）、anti-miR-100-5p+高剂量组（转染anti-miR-100-5p后用50μmol/L羽扇豆醇处理）。CCK-8和克隆形成实验检测NCI-H1299细胞增殖;Transwell法检测NCI-H1299细胞迁移和侵袭。荧光定量PCR(q PCR)检测miR-100-5p表达;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白的表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组NCI-H1299细胞活力、细胞克隆数、迁移数、侵袭数、CyclinD1、...     

LncRNA OIP5-AS1调节miR-25-3p/SOX4轴对高糖诱导的人肾小管上皮细胞生物学过程的影响

目的 探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA OIP5-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2,分为正常葡萄糖组（NG组）、高糖组（HG组）、HG+si-NC组、HG+si-OIP5-AS1组、HG+miR-NC组、HG+miR-25-3p组、HG+si-OIP5-AS1+inhibitor-NC组、HG+si-OIP5-AS1+miR-25-3p inhibitor组。转染48 h后,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中lncRNA OIP5-AS1、miR-25-3p和性别决定区Y框蛋白4(SOX4)m RNA水平;CCK-8法检测细胞活力;检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;检测细胞中丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）的产生;Western blot实验检测细胞中SOX4、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）...     

微 RNA-196a-1-3p靶向 Ras响应元件结合蛋白调控胆管癌细胞增殖的机制研究

目的探讨转化生长因子 β(TGF-β)调控人胆管癌细胞系 RBE细胞增殖的关键微 RNA(miRNA)及其潜在的机制。方法该研究起止时间为 2020年 1月至 2022年 1月。磷酸盐缓冲液( PBS)处理为对照组, TGF-β处理为 TGF-β组, TGF-β抗体处理为抗体组。检测三组 RBE细胞的增殖水平。 miRNA高通量测序检测三组 RBE细胞的 miRNA调控变化,并进行 miRNA模拟物过表达筛选鉴定受 TGF-β调控的影响 RBE细胞增殖水平的关键 miRNA。miRNA数据库( miRDB)在线分析 miRNA的潜在底物,并通过小干扰 RNA(siRNA)敲低筛选鉴定影响 RBE细胞增殖水平的关键底物。结果相比于对照组, TGF-β组 RBE细胞的增殖水平上升( 1.62±0.07比 2.35±0.09,P<0.05)抗体组 RBE细胞的增殖水平下降( 1.62±0.07比 1.11±0.08,P<0.05)。过表达微 RNA-196a-1-3p(miR-196a-1-3p)时, RBE细胞的增,殖水平下降( P<0.05)。敲低 Ras响应元件结合蛋白( RREB1)时, RBE细胞的增殖水平下降( P<0.05)。过表达 miR-196a-1-3p后, RBE细胞中 RREB1的信使 RNA(mRNA)和蛋白水平下降( P<0.05)。敲低 miR-196a-1-3p后, RBE细胞中 RREB1与 SMAD家族蛋白 3(SMAD3)的相互作用增加。敲低 SMAD3后, RBE细胞的增殖水平下降( P<0.05)。与仅敲低 SMAD3相比,敲低 SMAD3的同时过表达 RREB1的 RBE细胞的增殖水平无显著变化,并且同时敲低 SMAD3和 miR-196a-1-3p的 RBE细胞的增殖水平无显著变化。结论 TGF-β能够通过 miR-196a-1-3p/RREB1/SMAD3轴促进 RBE细胞增殖; miR-196a-1-3p和 RREB1可作为潜在的治疗胆管癌的靶标,为针对该靶标的新药研发奠定了基础。     

过表达微小 RNA-877-5p通过靶向叉头框转录因子 M1调控胃癌细胞活力和凋亡

目的探讨微小 RNA-877-5p(miR-877-5p)对胃癌细胞活力、凋亡的影响及其分子机制。方法本研究时间为 2020年 1—7月。胃癌和正常胃黏膜上皮细胞株购自美国典型培养物保藏中心。实时定量基因扩增荧光检测( qPCR)检测胃癌细胞株 HGC-27、SUN-1、AGS和正常胃黏膜上皮细胞株 GES-1中 miR-877-5p和叉头框转录因子 M1(FOXM1)信使核糖核酸( mRNA)表达。建立 miR-877-5p过表达或抑制 FOXM1表达细胞株,观察其在 HGC-27细胞的活力、凋亡中的作用。 MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法( Western blotting)检测 FOXM1、细胞周期蛋白 D1(cyclinD1)、细胞周期依赖性激酶抑制因子 p21、p27、B细胞淋巴瘤 /白血病 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(cleaved-caspase 3)蛋白表达。 TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析 miR-877-5p和 FOXM1的靶向关系。共转染 miR-877-5p模拟物和 FOXM1过表达载体( pcDNA-FOXM1),研究 FOXM1过表达对 miR-877-5p过表达诱导的 HGC-27细胞增殖和凋亡的影响。结果与正常胃黏膜上皮细胞 GES-1比较,胃癌细胞 HGC-27、SUN-1、AGS中的 miR-877-5p表达下调( 1.00±0.08比 0.34±0.03,0.51±0.05,0.44±0.04,P<0.05)FOXM1 mRNA和蛋白表达上调( 1.00±0.09比 2.41±0.23,2.58±0.24,2.26±0.23,P< 0.05)。 miR-877-5p过表达显著降低 HGC-27细,胞 48 h、72 h的细胞活力( P<0.05),明显提高细胞凋亡率、 p21、p27、Bax、cleaved-caspase3蛋白的水平( P<0.05)显著减少 cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量( P<0.05)。抑制 FOXM1表达显著降低 48 h、72 h的细胞活力( P<0.05)提高细胞凋亡率、 p,21、Bax蛋白水平( P<0.05),减少 cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量( P<0.05)。 miR-877-5p靶向调控 FOXM1的表达,。FOXM1过表达后, miR-877-5p过表达对 HGC-27细胞增殖、 cyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用被逆转,其对细胞凋亡、 p21、Bax蛋白表达的促进作用也被逆转。结论过表达 miR-877-5p通过靶向调控 FOXM1表达抑制胃癌细胞的活