circ＿0011385和miR-330-3p在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞恶性行为的影响

目的:探讨结肠癌组织中circ＿0011385和miR-330-3p表达情况,研究circ＿0011385靶向miR-330-3p对结肠癌细胞(SW1116)恶性行为的影响。方法:RT-q PCR检测circ＿0011385和miR-330-3p在结肠癌组织中表达情况,并分析circ＿0011385和miR-330-3p表达水平与结肠癌患者临床病理特征的关系。皮尔森相关分析确定circ＿0011385和miR-330-3p表达的相关性。circ＿0011385和miR-330-3p的关系通过双荧光素酶报告实验来确定。将si-circ＿0011385、si-NC、si-circ＿0011385+anti-miR-NC、si-circ＿0011385+anti-miR-330-3p分别转染SW1116细胞,Transwell、流式细胞术分析细胞迁移、侵袭和凋亡。结果:结肠癌组织中circ＿0011385呈高表达,miR-330-3p呈低表达,二者的表达水平呈负相关关系(r=-0.8924)。circ＿0011385和miR-330-3p表达水平与结肠癌患者年龄、肿瘤大小无相关性(P>...     

基于Jurkat细胞分析circ＿0006689对系统性红斑狼疮中IL2的作用及机制研究

目的：在Jurkat细胞基础上初步探讨circ＿0006689在系统性红斑狼疮（SLE）中调控白介素2(IL2)的作用机制。方法：使用慢病毒转染Jurkat细胞构建circ＿0006689低表达株。用PMA、PHA活化低表达组（si-circ＿0006689组）、病毒空载组（si-NC组）及未转染组（control组）细胞后通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组IL2、miR-95-5p的相对表达量；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞IL2浓度；生物信息学分析预测circ＿0006689的目标miRNA及IL2的目标miRNA；双荧光素酶报告实验检测circ＿0006689与miR-95-5p、miR-95-5p与IL2的靶向关系。结果：Jurkat细胞活化后IL2分泌显著增加（P<0.05）；下调circ＿0006689后细胞IL2表达及分泌减少（P<0.05）,miR-95-5p表达水平显著升高（P<0.05）。双荧光素酶报告实验提示circ＿0006689与miR-95-5p、miR-95-5p与IL2存在结合作用。结论：在Jurkat细胞中...     

环状RNA circ＿0020123靶向调控微小RNA-145影响胰腺癌细胞SW-1990增殖、侵袭与转移实验研究

目的:探讨环状RNA circ＿0020123靶向调控微小RNA(miR)-145对胰腺癌细胞SW-1990增殖、侵袭与转移的影响。方法:选择胰腺癌细胞株SW-1990,分为si-NC组、si-circ＿0020123组、si-circ＿0020123+anti-miR-145组，进行细胞转染。采用MTT法检测细胞增殖能力。采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭与迁移能力。采用反转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ＿0020123和miR-145相对表达量。采用Western blot检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)。采用双荧光素酶报告实验分析circ＿0020123与miR-145的靶向作用。结果:与si-NC组比较，si-circ＿0020123组和si-circ＿0020123+anti-miR-145组细胞增殖、侵袭及迁移能力明显降低(均P<0.05)。与si-circ＿0020123组比较，si-circ＿0020123+anti-miR-145组细胞增殖、侵袭及迁移能力明显...     

circ＿0072088靶向miR-578促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的机制研究

目的:探讨circ＿0072088对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的影响及其对miR-578的调控作用。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常滑膜组织、类风湿关节炎患者滑膜组织中circ＿0072088和miR-578的表达量;原代分离培养类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,将细胞分为si-NC组、si-circ＿0072088组、miR-NC组、miR-578组、si-circ＿0072088+anti-miR-NC组、si-circ＿0072088+anti-miR-578组;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circ＿0072088与miR-578的相互作用。结果:与正常滑膜组织比较,类风湿关节炎患者滑膜组织中circ＿0072088的表达水平升高(P<0.05),miR-578的表达水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-circ＿0072088组细胞活力降低(P<0.05),克隆形成数及侵袭细胞数减...     

circRNA001653对急性心肌梗死心肌细胞凋亡的作用及机制

目的 探讨环状RNA(circRNA)＿001653 (circ＿001653)对急性心肌梗死(AMI)心肌细胞凋亡的作用及机制。方法 采用生物信息学分析AMI时差异表达的circRNA;大鼠心肌细胞分别培养于常氧(Normoxia组)和缺氧12 h(Hypoxia 12 h组)、24 h(Hypoxia 24 h组)、48 h(Hypoxia 48 h组)条件下,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测上述4组细胞中circ＿001653、微小RNA (microRNA)-324-5p、ELAV样RNA结合蛋白1(ELAVL1)的表达;选取缺氧48 h的心肌细胞转染sh-NC(sh-NC组)、sh-circ＿001653(sh-circ＿001653组)、circ-NC(circ-NC组)、circ＿001653(circ＿001653组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-324-5p mimic(miR-324-5p mimic组)、circ＿001653+miR-NC(circ＿001653+miR-NC组)、circ＿001653+miR-324-5p mimic(ci...     

circAFF2通过调节PI3K/AKT通路对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨circ＿AFF2通过调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/蛋白激酶B(AKT)通路对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)滑膜成纤维细胞的增殖、迁移、侵袭的作用机制。方法：采用qRT-PCR检测健康对照滑膜组织和RA滑膜组织中circ＿AFF2相对表达量。通过体外培养RA滑膜成纤维MH7A细胞，将细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-circ＿AFF2组(转染si-circ＿AFF2)和si-circ＿AFF2+IGF-1组(转染si-circ＿AFF2后，采用50 ng/mL的PI3K/AKT通路激活剂IGF-1处理)。然后通过qRT-PCR检测各组细胞circ＿AFF2相对表达量；MTT检测各组细胞活力；Western blotting检测各组细胞Ki-67、PCNA、MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和PI3K/AKT通路相关蛋白的表达；Transwell检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果：与健康对照滑膜组织相比，circ＿AFF2相对表达量在RA滑膜组织中明显增加(P<0.05)。与si-NC组相比，si...     

山慈菇提取物调控circ＿0003998/miR-330-5p表达对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的 研究山慈菇提取物对口腔鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生物学行为的影响,分析其作用机制是否与调控circ＿0003998和miR-330-5p表达有关。方法 采用集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室法分析不同剂量山慈菇提取物对口腔鳞癌细胞CAL-27增殖、迁移和侵袭的影响。实时定量PCR分析CAL-27细胞中circ＿0003998和miR-330-5p表达情况。双荧光素酶报告基因实验用于确定circ＿0003998和miR-330-5p之间靶向关系。分别转染circ＿0003998小干扰RNA、miR-330-5p模拟物至CAL-27细胞,分析干扰circ＿0003998或过表达miR-330-5p对CAL-27细胞生物学行为的影响。结果 山慈菇提取物作用后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量和circ＿0003998表达量显著降低(P<0.05),而miR-330-5p表达量显著升高(P<0.05)。circ＿0003998与miR-330-5p直接结合,干扰circ＿0003998可上调miR-330-5p表达(P<0.05)。干扰circ＿0003998或过表达miR-330-5p后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量显著降低(P<0.05)。过表达circ＿0003998或抑制miR-330-5p均可减弱山慈菇提取物对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论 山慈菇提取物能够降低口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与下调circ＿0003998/miR-330-5p分子轴有关。     

miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及作用

目的探讨miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及其作用。方法使用LPS诱导人肾小管上皮细胞HK-2细胞建立脓毒症性急性肾损伤细胞疾病模型，用CCK-8法检测细胞活力，实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测IL-6 mRNA和miR-23a-3p的相对表达量。将实验细胞分为3组： 正常对照组、LPS＋空白对照(NC)组和LPS＋miR-23a-3p模拟物（mimic）组，采用Western印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5的表达水平。结果LPS可以抑制HK-2的细胞活力并增加炎症因子IL-6 mRNA的表达水平，同时，miR-23a-3p在LPS诱导的HK-2细胞中表达下降。与正常对照组相比，LPS增加了p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5蛋白的表达水平，而转染miR-23a-3p模拟物可以逆转以上这些变化。结论miR-23a-3p模拟物可以显著减轻LPS诱导的HK-2细胞的炎症和凋亡水平，其作用机制可能与靶向抑制Usp5有关。     

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的：探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法：采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果：与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<...     

circ＿0086414通过miR498-/PCK1轴对口腔鳞状细胞癌生物学行为的影响

目的 研究circ＿0086414通过miR-498/PCK1轴对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinomas, OSCC)生物学行为的影响。方法 收集手术切除的OSCC组织及配对的癌旁组织27对,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测组织中circ＿0086414和PCK1的表达。将SJG-1细胞分为pcDNA组、pcDNA circ＿0086414组、miR-498 NC组、miR-498 mimic组、OE-NC组、OE-PCK1组、miR-498 NC+pcDNA组、miR-498 NC+pcDNA circ＿0086414组、miR-498 mimic+pcDNA组、miR-498 mimic+pcDNA circ＿0086414组,细胞计数试剂盒(cell counting kit, CCK8)法检测SJG-1细胞增殖,流式细胞术检测SJG-1细胞凋亡,Transwell实验检测SJG-1细胞侵袭;蛋白免疫印迹(Western blot, WB)实验检测上皮间质转化情况,双荧光素酶报告基因...     

miR-150-5p与NCAPG的靶向关系及其对肝细胞肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的：探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G (NCAPG)的靶向关系及其对肝细胞肝癌(HCC)细胞生物学功能的影响,为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。方法：通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照(mimic NC)组、miR-150-5p模拟物(miR-150-5p mimic)组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照(miR-150-5pmimic+ovNC)组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG(miR-150-5p mimic+ovNCAPG)组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平,5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测各组细胞EdU阳性率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性...     

溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p、肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响

目的探讨溪黄草对circ_0091579/miR-515-5p及肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。 方法将肺癌A549细胞分为对照组、溪黄草(20、40、80 mg/L)组、si-circ_0091579组、si-NC组、pcDNA-circ_0091579组、pcDNA组、溪黄草+pcDNA-circ_0091579组。CCK-8、平板克隆实验、流式细胞术检测A549细胞抑制率、克隆形成数以及凋亡率。qRT-PCR检测circ_0091579和miR-515-5p表达。双荧光素酶报告实验验证circ_0091579和miR-515-5p相互作用。 结果溪黄草显著降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调及circ_0091579下调,且呈质量浓度依赖性。下调circ_0091579可降低A549细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡,诱导cleaved-Caspase-3表达上调。上调circ_0091579可逆转溪黄草对A549细胞的增殖抑制和凋亡促进功能。circ_0091579和miR-515-5p直接特异性结合。 结论溪黄草可抑制肺癌细胞A549增殖,诱导其凋亡,其机制与下调circ_0091579/miR-515-5p途径有关。     

黄芪甲苷对脂多糖诱导的MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的：探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对脂多糖(LPS)诱导的成骨细胞前体细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用,阐明其相关机制。方法：将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组和不同浓度(10、25、50及100 mg·L^-1)AS-Ⅳ组,采用CCK-8法检测各组细胞活性。将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+LY294002 [磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂]组,采用流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,采用相关试剂盒检测各组细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中血红素加氧酶1 (HO-1) mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中HO-1、 PI3K、磷酸化Akt (p-Akt)、核因E2相关因子2(Nrf2)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果：CCK-8法检测,与对照组比较,LPS组细胞活性明显降低(P...     

miR-216b-5p对喉癌TU686细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的：探讨miR-216b-5p对喉鳞状细胞癌(LSCC) TU686细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,分析其在喉癌细胞中的靶基因及其可能的作用机制。方法：TU686细胞分为对照组和miR-216b-5p组,对照组细胞通过慢病毒感染无义序列,miR-216b-5p组细胞通过慢病毒感染过表达miR-216b-5p。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组细胞中miR-216b-5p表达水平,克隆形成实验检测2组细胞克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测2组细胞凋亡率。通过TargetScan网站预测miR-216b-5p的潜在靶基因,采用RT-qPCR法检测靶基因mRNA表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p与靶基因间的靶向关系。结果：慢病毒感染后,与对照组比较,miR-216b-5p组细胞中miR-216b-5p表达水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,miR-216b-5p组细胞克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01...     

环状RNA hsa＿circ＿0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响

目的：探讨环状RNA hsa＿circ＿0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法：取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、 MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa＿circ＿0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa＿circ＿0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa＿circ＿0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa＿circ＿0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度(0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^-1)雷帕霉素组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测胃癌组织和细胞中hsa＿circ＿0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,W...     

miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其靶向调控CTDP1基因表达机制

目的：探讨miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的分子机制。方法：取经病理诊断确诊为胃癌的68例患者的胃癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌组织、癌旁组织和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞、人胃癌细胞（MKN-28、MGC-803、 MKN-45、 SGC-7901和HGC-27）中miR-431-3p及羧基末端结构域磷酸酶1 (CTDP1)mRNA表达水平,Western blotting法检测上述细胞中CTDP1蛋白和各组SGC-7901细胞中细胞色素C(Cyt C)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析miR-431-3p与CTDP1 mRNA表达水平的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-431-3p和CTDP1的靶向关系。将miR-431-3p mimic和CTDP1过表达慢病毒分别或同时转染至SGC-7901细胞中,将细胞分为空白组、空载过表达（mimic NC）组、miR-431-3p过表达（miR-431-3p mimic）组、空载慢病毒（Ve...     

circ_0000515靶向miR-1258调控结肠癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨circ_0000515调控结肠癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法选取41例结肠癌病人癌组织及癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测circ_0000515和miR-1258的表达水平;结肠癌细胞SW620分为si-circ_0000515组、si-NC组、miR-1258组、miR-NC组、si-circ_0000515+anti-miR-NC组、si-circ_0000515+anti-miR-1258组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测SW620细胞活性;流式细胞术检测SW620细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测circ_0000515和miR-1258的靶向关系。结果与癌旁组织比较,结肠癌组织中circ_0000515表达水平升高,miR-1258表达水平降低（P < 0.01）。抑制circ_0000515表达或过表达miR-1258,SW620细胞活性降低,SW620细胞的凋亡率升高（P < 0.01）。circ_0000515靶向调控miR-1258;干扰miR-1258表达逆转了抑制circ_0000515表达对结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的作用。结论抑制circ_0000515表达通过靶向上调miR-1258抑制结肠癌细胞增殖,促进凋亡。     

慢性HBV感染者外周血单个核细胞中miR-194-5p和MagT1表达水平检测及其意义

目的：检测慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-194-5p和镁离子（Mg²⁺）转运蛋白1（MagT1）表达水平,阐明其可能的临床意义。方法：收集40例健康体检者（健康对照组）、40例HBV携带者（HBV携带组）、40例轻中度慢性乙型肝炎（轻中度CHB组）和40例重度慢性乙型肝炎（重度CHB组）患者的临床资料。采集各组研究对象外周血并利用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PBMCs,采用RT-PCR法检测各组研究对象PBMCs中miR-194-5p及MagT1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组研究对象PBMCs中MagT1蛋白表达水平,检测各组研究对象外周血和PBMCs中Mg⁺水平,流式细胞术检测各组研究对象PBMCs中CD8+T淋巴细胞表面分子程序性死亡受体1（PD-1）和自然杀伤细胞受体2群D分子（NKG2D）表达水平。在293T细胞中分别转染miR-194-5p mimic质粒（miR-194-5p mimic组）和miR-NC质粒（miR-NC组）,应用双荧光素酶报告基因实验检测2组293T细胞中荧光素酶活性。结果：与健康对照组比较,HBV携带组、轻中度CHB组和重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均明显降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。与HBV携带组和轻中度CHB组比较,重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T细胞表面分子PD-1表达水平降低（P<0.05）。与HBV携带组比较,轻中度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验,MagT1是miR-194-5p靶基因。结论：miR-194-5p可能通过靶向下调MagT1表达,引起MagT1介导的Mg²⁺内流障碍,造成CD8+T淋巴细胞免疫活性降低,导致乙型肝炎慢性发展。     

Toll样受体4接头分子对乳酸诱导巨噬细胞M2极化的促进作用及其机制

目的：探讨Toll样受体4 (TLR4)接头分子髓样分化因子88 (MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1 (IL^-1)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。方法：体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,定向敲除MyD88和TRIF基因(MyD88-KO组和TRIF-KO组),设未感染的Raw264.7细胞为对照组,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测基因敲除效果。实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组。15 mmol·L^-1乳酸诱导24 h后进行各指标检测。RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1(Arg1) mRNA表达水平,光学显微镜下观察各组细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞...     

circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的探讨circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制。方法选取33例胃癌组织及癌旁组织标本,实时荧光定量PCR检测circ_0001178和miR-1179的表达水平;将胃癌细胞株AGS随机分为si-NC组、si-circ_0001178组、miR-NC组、miR-1179组、si-circ_0001178+anti-miR-NC组、si-circ_0001178+anti-miR-1179组;采用克隆形成实验检测克隆形成数,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0001178和miR-1179的靶向关系。结果胃癌组织中circ_0001178表达水平明显高于癌旁组织,而miR-1179表达水平明显低于癌旁组织（P < 0.01）。抑制circ_0001178表达或过表达miR-1179,AGS细胞克隆形成数减少,细胞活性降低,AGS细胞凋亡率升高,cleaved-caspase3和cleaved-caspase9表达水平均升高（P < 0.05）。结论抑制circ_0001178表达可能通过靶向上调miR-1179抑制胃癌AGS细胞增殖,诱导细胞凋亡。