乳糖酸修饰的介孔二氧化硅纳米粒子靶向肝癌研究

目的:合成一种具有肝癌特异性的纳米药物载体,实现对肝癌细胞靶向释放化疗药物阿霉素（doxorubicin,DOX）。方法:本研究将具有肝癌特异性的配体乳糖酸（lactobionic acid,LA）修饰到介孔二氧化硅（mesoporous silica nanoparticles,MSN）表面,合成具有肝癌靶向作用的纳米载体LA-MSN,然后用LA-MSN负载化疗药物阿霉素,形成具有肝癌特异性靶向杀伤作用的纳米药物DOX/LA-MSN。结果:细胞荧光成像以及细胞电子显微镜实验显示乳糖酸具有良好的肝癌细胞靶向作用并能有效转运DOX/LA-MSN纳米药物进入肝癌细胞。 体外杀伤实验显示DOX/LA-MSN纳米药物在体外能够有效杀伤HepG2肝癌细胞,小动物活体成像实验表明LA-MSN纳米药物具有在体内靶向实体肝癌的能力。结论:DOX/LA-MSN纳米药物能够有效避免阿霉素药物非特异性的缺点,实现对肝癌靶向治疗,是一种具有良好应用前景的纳米药物载体。     

肝细胞癌中Hep Par 1、p53、HBsAg表达差异与细胞形态计量学变化的关系

目的 探讨原发性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中肝细胞抗原（Hep Par1)，p53，乙型肝炎表面抗原（HBsAg)的表达差异及与细胞形态学变化的相关性。方法 用免疫组织化学方法（两步法－EnVision System-HRP)检测10对肝癌和癌旁组织，3例正常肝组织中Hep Par1,p53,HBsAg等蛋白的表达差异；用HPIAS－1000图像分析系统测量实质细胞的总面积（以细胞直径代替）和核质比。结果 1）Hep Par 1:正常肝组织中肝细胞中度表达，癌旁肝组织中肝细胞为弥漫性高表达，肝癌细胞中阳性率为24．53％（13／53）；2）p53：正常肝组织和癌旁肝组织中均呈阴性；肝癌组织，在被检的10例样品中肝癌细胞均为阳性；3）HBsAg:正常肝组织中肝细胞呈阴性，癌旁肝组织中肝细胞为片状弥漫性或散在性高表达，肝癌组织，在被检的10例样品中肝癌细胞仅有1例呈阳性；4）各种组织中实质细胞的平均直径为癌旁肝细胞＞正常肝细胞＞肝细胞癌细胞；5）正常肝细胞和癌旁肝细胞的核质比无差别（P＞0．05），但均明显＜肝细胞癌细胞（P＜0．01和P＜0．01）。结论 肝细胞抗原（Hep Par 1)在分化较高的肝细胞癌细胞中有不同程度的表达，可作为鉴别原发性肝细胞癌细胞来源的标志；原发性肝细胞癌细胞核质比明显＞正常肝细胞和癌旁肝细胞（P＜0.01和P＜0.01)。     

偶联双基因靶点的多功能金纳米颗粒对三阴性乳腺癌细胞的毒性分析

目的:设计并构建偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）,并探讨该多功能金纳米棒颗粒对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的细胞毒性,初步明确该新型多功能金纳米棒颗粒在体外实验中所需的剂量范围。方法:运用种子介导生长法制备金纳米棒,以改良的奥伯法对其表面进行介孔二氧化硅包裹,通过表面修饰偶联整合素αvβ3和表皮生长因子受体（VEGFR）的特异性抑制剂RGD和TKI-258,采用紫外分光光度计和透射电镜对其特征进行检测。以不同浓度（0、12.5、25、50、100、200μg/ml）多功能金纳米棒颗粒孵育人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株,采用CCK-8法检测细胞增殖率,并进行细胞毒性评级。结果:多功能金纳米棒颗粒物理状态稳定,吸收峰位于515、860 nm处。偶联的双基因靶点抑制剂TKI-258、RGD分别在360、204 nm处有特征性吸收峰,药物包封率分别为58.18%±7.13%,57.95%±5.22%,载药率分别为4.26%±0.42%,4.35%±0.79%。不同浓度多功能金纳米棒处理后,细胞增殖率在50%-100%之间,细胞毒性评级为I-II级,0-100μg/ml浓度范围内无细胞毒性。结论:偶联双基因靶点的多功能金纳米棒颗粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）具有热疗/放疗增敏的特殊光学性质,偶联双基因靶点抑制剂TKI-258、RGD的载药量稳定,生物相容性良好,可作为三阴性乳腺癌细胞特异性靶向的热疗/放疗载药增敏材料。     

乳腺上皮细胞与癌细胞的激光镊子拉曼光谱研究

目的:研究人正常上皮乳腺细胞株(HBL-100)和乳腺癌细胞株(MCF-7)的单细胞拉曼光谱与分子生物学变化之间的关系,以及癌变发生发展过程中生物组分的变化,以期建立乳腺癌细胞的特征拉曼光谱库.方法:分别测试了正常乳腺细胞株和乳腺癌细胞株的拉曼光谱,结果用PCA主成分分析.结果:乳腺癌细胞和乳腺正常细胞间的平均光谱存在较多的差异;乳腺癌细胞的谱线强度整体变强;乳腺癌细胞的936、1 002、1 298和1 445 cm-1的峰高升高,1 102 cm-1峰移位到1 094 cm-1,484 cm-1 峰消失;乳腺癌癌细胞的核酸、蛋白质、脂类等重要生物分子在结构或含量都发生了不同的改变.用PCA主成分对单个细胞的平均拉曼光谱进行分析发现,PCA可以正确区分乳腺正常细胞和癌细胞,PCA区分率为87%(13/15).结论:激光镊子拉曼光谱是判断正常乳腺细胞和乳腺癌细胞的有效方法,单细胞光镊拉曼光谱技术有可能成为癌症诊断的新途径,具有广阔的前景.     

肝癌组织SOD、PCNA免疫组化定位观察

目的：探讨肝细胞癌与超氧化物歧化酶（SOD）及增殖细胞核抗原（PCNA）的关系。方法：对23例发性肝细胞性肝癌组织进行SOD及PCNA免疫组织化学研究（SP法）。结果：肝癌细胞的SOD标记阳性率和阳性程度高于癌旁肝组织及正常肝组织（P＜0．05）；PCNA标记阳性率和阳性程度明显高于癌旁肝组织及正常肝组织（P＜0．01），并且随癌细胞分化程度的降低而增强（P＜0．05）。结论 降低肝癌细胞中SOD的活性是抑制肝癌细胞生长的有效方法。     

STAT3反义寡核苷酸纳米复合微粒对肝癌细胞的抑制作用

目的: 研究利用聚酰胺胺型树枝状分子(polyamidoaminedendrimer,PAMAMD)递送STAT3反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,asODN)抑制人肝癌细胞（SMMC7721）增殖的效应。方法: 第7代的聚酰胺胺型树枝状分子室温下与STAT3反义寡核苷酸混合制备树形分子与反义寡核苷酸的复合物(PAMAMasODN),应用透射电镜观察复合物的形态结构,激光粒径仪测定复合纳米微粒的粒径。MTT法检测复合纳米微粒对肝癌细胞SMMC7721增殖的抑制作用,采用流式细胞术与TUNEL技术检测PAMAMasODN诱导SMMC7721细胞凋亡和细胞周期的变化,实时定量PCR分析PAMAMasODN作用后肝癌细胞STAT3 mRNA的表达水平。结果: 成功制备的新型纳米复合微粒分散均匀、流动性好,其粒径约为85.45 nm。MTT检测结果表明,纳米复合微粒以时间和浓度依赖的方式抑制人肝癌细胞增殖,其最高抑制率达（68.9±3.0）%。流式细胞与TUNEL技术检测表明,PAMAMasODN可加强诱导肝癌细胞凋亡（P<0.01),使细胞周期阻滞于G2/M期。实时定量PCR的结果表明, PAMAMasODN作用后肝癌细胞中STAT3 mRNA表达较asODN作用组降低了（54±2.1)%。结论:聚酰胺胺型树枝状分子能高效递送STAT3 asODN,可显著抑制肝癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

磁流体对肝癌细胞的凋亡诱导研究及联合紫杉醇对大鼠肝癌的抑制作用

不同浓度的磁性纳米颗粒作用于肝癌HepG2细胞后,检测其凋亡情况,并电镜观察细胞形态变化。制备抗肿瘤靶向药物紫杉醇白蛋白磁性纳米颗粒（MAG-TAX-NP）,将其联合碘化油治疗大鼠肝癌,观察治疗效果。方法:化学共沉淀法制备磁流体,将其作用于HepG2细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。电镜观察磁微球作用于肝癌HepG2细胞后的形态学变化。用乳化-超声-加热固化法制备紫杉醇磁性纳米颗粒。建立大鼠肝癌模型,将荷瘤大鼠30只随机分为5组,除空白对照组外,分别将碘化油﹑碘化油紫杉醇﹑碘化油纳米磁流体、碘化油紫杉醇白蛋白磁性纳米颗粒各0.2 mL注入其余4组大鼠肝固有动脉内。紫杉醇用量为5mg/kg体重,肝肿瘤区外加磁场,14d后处死大鼠,取肝肿瘤组织称重,计算各组抑瘤率。结果:证实了磁流体可诱导肝癌HepG2细胞凋亡。电镜下可见肿瘤细胞吞噬磁流体后细胞内形成凋亡小体,细胞裂解增加。大鼠肝癌模型中除空白对照组外,其余各组的抑瘤率分别为43.2%、51%、57.4%、87.4%。结论:磁微球可诱导肝癌HepG2细胞凋亡。碘化油紫杉醇白蛋白磁性纳米颗粒局部栓塞可抑制肿瘤生长,较其他组具有更强的抑瘤效果。随着深入研究,磁流体有望成为治疗肿瘤的方法,紫杉醇白蛋白磁性纳米颗粒可作为临床紫杉醇药物治疗肝癌的新剂型。      

隐形平阳霉素纳米金颗粒的体内外抗肿瘤活性的研究

目的研究隐形平阳霉素纳米金颗粒体外对人肿瘤细胞7721、7402、HepG-2和小鼠肝癌H22细胞的杀伤作用及体内对小鼠H22肿瘤生长的影响,对隐形平阳霉素纳米金颗粒进行抗肿瘤药效学评价。方法①采用MTT法测定了粒径为40nm的隐形平阳霉素纳米金颗粒对人肝癌细胞7721、7402、HepG-2和小鼠肝癌H22细胞的体外增殖的影响。取对数生长期入肝癌细胞7721、7402、HepG-2细胞接种至96孔板,每孔2×10^3个细胞。于37℃,5％CO2孵箱中培养24小时后,加入不同浓度的隐形平阳霉素纳米金颗粒,每组设三个平行孔,同时设相同浓度的平阳霉素及未结合平阳霉素的隐形纳米金颗粒对照组。培养72h后吸去培养液,每孔加入100μl0．5％MTT溶液。37℃孵育4h后,弃上清,每孔加150μl DMSO溶解甲簪后,于570nm波长下检测OD值并计算IC50值;②体内抑瘤实验。取接种于昆明鼠第8d的H22腹水肿瘤,用生理盐水配制成细胞数为3×10^5个／ml细胞悬液,接种于雌性昆明鼠背部皮下,每组10只。实验第3d静脉给药,连续给药8次。隐形平阳霉素纳米金颗粒的剂量分别为2．5mg／kg、5mg／kg（以结合的平阳霉素计）,平阳霉素的剂量分别为2．5mg／kg、5mg／kg,以相同剂量未结合平阳霉素的隐形纳米金颗粒和生理盐水为对照组。至第14d,测定瘤重并统计抑瘤率。结果①隐形平阳霉素纳米金颗粒在体外对肿瘤细胞的抑制作用。隐形平阳霉素纳米金颗粒和平阳霉素对肿瘤细胞7721、7402、HepG-2和H22的增殖有明显的抑制效应并有量效关系,隐形纳米金颗粒对肿瘤细胞的增殖无抑制效应（P〉0．05）。隐形平阳霉素纳米金颗粒对肿瘤细胞7721、7402、HepG-2和H22的IC50分别为56．04μg/ml、76．36μg／ml、37．64μg／ml、0．413μg／ml。平阳霉素对肿瘤细胞7721、7402、HepG-2和I-122的IC50分别为26．84μg／ml、20．62μg／ml、3．58μg/ml?     

金纳米棒标记的人CIK细胞用于胃癌靶向光声成像与免疫治疗

目的:利用金纳米棒标记的人细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)主动靶向体内胃癌细胞的特性,实现胃癌的局部光声成像,观察金纳米棒在胃癌组织中的分布,测量血清中细胞因子浓度变化.方法:取健康志愿者的全血提取外周血单个核细胞,在多种细胞因子的诱导下扩增出CIK细胞;采用种子合成法制备金纳米棒并对其表面进行二氧化硅修饰与表征;利用胃癌细胞系MGC803细胞建立裸鼠胃癌皮下瘤模型;制备金纳米棒标记的CIK细胞,尾静脉注射进入荷胃癌的裸鼠模型,注射后不同时间点,进行光声成像观察金纳米棒标记的CIK细胞在肿瘤部位的分布;注射后3d,收集裸鼠血清,测量IL-2、IL-17、γ-IFN的浓度,评判免疫治疗效果.结果:CIK细胞成功制备;制备的金纳米棒长为60 nm,宽为8 nm,二氧化硅厚度为20 nm;制备的金纳米棒被人CIK细胞内吞;金纳米棒标记的人CIK细胞能够主动靶向体内胃癌组织,在胃癌组织中大量聚集,呈现出增强的光声成像信号;细胞因子IL-2、IL-17与γ-IFN的浓度显著升高(P＜0.05).结论:金纳米棒标记的CIK细胞能够主动靶向体内胃癌组织,高效聚集并呈现出增强的光声成像信号,同时升高血液中细胞因子水平,增强免疫治疗功能.     

肝针吸良、恶性细胞核内AgNORs图像分析的定量研究

应用真彩色图像分析技术对肝针吸细胞中的２０例肝癌及５例增生肝细胞核内ＡｇＮＯＲｓ进行了定量研究。结果显示，肝针吸肝癌细胞核内ＡｇＮＯＲｓ的平均面积、平均积分光密度、颗粒直径及平均颗粒数均明显高于增生肝细胞（Ｐ＜００１）；ＡｇＮＯＲｓ图像定量分析可为肝针吸癌细胞和增生肝细胞的鉴别诊断提供一种新的定量指标；ＡｇＮＯＲｓ在形态、数量及分布上的不同特征也可作为鉴别两者的重要依据。     

肝细胞肝癌患者外周血CD8+T淋巴细胞凋亡相关机制探讨

目的:探讨肝细胞肝癌患者外周血CD8+T淋巴细胞（CTL细胞）凋亡的相关机制及临床意义。方法:收集30例健康体检者及60例不同临床分期肝细胞肝癌患者外周血,应用流式细胞仪检测分析 CTL细胞相对百分比、凋亡情况及CTL细胞表面Fas(CD95)表达情况。结果:肝细胞肝癌患者外周血CTL细胞相对百分比含量高于健康体检者［（26.4%±9.2%） vs （19.7%±4.7%）,P＜0.05］。肝细胞肝癌患者外周血 AnnexinV+CTL细胞凋亡率高于健康体检者［（25.3%±6.5%) vs (12.1%±6.5%),P＜0.05］。肝细胞肝癌患者Fas+CTL细胞含量高于健康体检者［（62.2%±18.5%) vs (42.6%±16.5%),P＜0.05］。Fas表达与CTL细胞的凋亡呈正相关。不同TNM分期患者CTL细胞凋亡能力不同,随着病情程度恶化,细胞凋亡水平增加［（27.7%±5.9%） vs （20.6%±5.1%）,P＜0.001］。结论:肝细胞肝癌患者外周血中CTL细胞的百分比增加,提示在肿瘤的发生发展过程中机体存在抗肿瘤免疫效应,但是基于Fas/FasL途径的CTL细胞凋亡比例增加,可能是肿瘤细胞免疫逃逸的重要机制。     

人树突状细胞与肝癌细胞系HLE融合细胞的构建

目的构建人源树突状细胞（DC）与肝癌细胞系HLE的融合细胞。方法含15％FCS的RPMI 1640培养HLE细胞,用GM—CSF和IL-4培养成人外周血单核细胞7d,并用TNF-α和PGE2促成熟2d后获得成熟DC;用荧光染料PKH67-GL（绿色荧光）和PKH26-GL（红色荧光）分别标记DC和HLE细胞,以50％聚乙二醇和10％二甲基亚砜为融合剂,构建可供流式细胞仪快速筛选的融合细胞。结果成功构建具有红、绿双色荧光的人源DC与HLE的融合细胞,融合率为16．8％。结论利用PKH67-GL和PKH26-GL为标记,可获得便于快速识别和筛选的DC与肝癌细胞的融合细胞,为使用融合DC疫苗治疗肝癌奠定了基础。     

肝癌组织中CLDN1的表达及其过表达对肝癌细胞恶性表型的影响

目的:探讨CLDN1在肝癌组织中的表达及其过表达对肝癌细胞恶性表型的影响。方法:通过免疫组化法及PCR法测定肝癌组织与癌旁组织中CLDN表达水平,建立CLDN1过表达细胞系,测定CLDN1过表达细胞株增殖能力、肿瘤细胞成球能力及干性相关标志物水平。结果:CLDN1在肝癌组织中表达阳性率为65.2%（58/89）,在癌旁组织中表达阳性率为25.5%（14/55）,差异具有统计学意义（P＜0.001）;CLDN1过表达肝癌细胞株增殖能力、肿瘤细胞成球能力均明显增强,并且肿瘤干性相关分子标志物水平明显提高。结论:CLDN1过表达可影响肝癌细胞干性获得,提示CLDN1表达水平与肝癌发生发展密切相关。     

miR-203-3p在肝癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-203-3p（miR-203-3p）在肝细胞癌细胞中的表达,并进一步分析其对肝细胞癌进展的影响。方法:通过qRT-PCR检测miR-203-3p在不同肝细胞癌细胞系中的表达,并利用敲低和过表达的方法分析miR-203-3p表达水平的变化对肝癌细胞生长、运动等的影响,并初步探索其机制。结果:肝细胞癌细胞中的miR-203-3p表达水平低于正常肝细胞。功能上,miR-203-3p抑制肝细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭,加速细胞凋亡;机制上,miR-203-3p可与FGF2 mRNA碱基配对,吸附FGF2 mRNA导致FGF2蛋白生成减少。结论:miR-203-3p通过直接靶向作用,抑制FGF2表达,从而抑制肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-26b通过调节Notch1信号通路参与原发性肝细胞肝癌侵袭的机制研究

目的:探讨miR-26b参与原发性肝细胞肝癌（HCC）侵袭的机制。方法:在细胞培养液中培养人肝细胞系HL-7702和HCC细胞各系Hepb-3、HuH-7、MHCC97-L、MHCC97-H。实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测miR-26b的表达水平；用miR-26b mimics、miR-26b inhibitors和Notch1-siRNA分别转染HCC细胞；MTT实验检测转染后HCC细胞的活力；采用Western blot检测Notch1受体蛋白表达水平的变化；Transwell小室测定不同处理后的HCC细胞的侵袭能力。结果:人正常肝细胞系HL-7702和HCC细胞系Hepb-3、HuH-7、MHCC97-L、MHCC97-H中的miR-26b相对表达含量随其侵袭和迁移能力的升高而依次下降；抑制miR-26b的表达，Notch1受体蛋白表达明显增高，而此时HCC细胞的侵袭性显著增强；相反，上调miR-26b的表达，Notch1受体蛋白表达明显降低，而HCC细胞侵袭性显著下降；miR-26b可能通过调控Notch1信号通路调节HCC细胞侵袭性。结论:miR-26b通过负调控Notch1信号通路抑制HCC细胞侵袭能力，为HCC侵袭的机制奠定了理论基础，miR-26b可能成为HCC治疗的新靶点。     

Sirt3对肝癌细胞增殖与侵袭的影响

目的:探讨线粒体去乙酰化酶Sirt3基因对肝癌细胞增殖及侵袭的影响。方法:构建Sirt3载体，利用腺病毒感染方法建立Sirt3过表达的肝癌细胞（AdEasy-Sirt3），并设置相应对照（AdEasy-EGFP）。采用PCR与Western blotting实验分别鉴定病毒载体构建以及病毒感染后Sirt3蛋白过表达效果。采用EdU增殖实验与Transwell侵袭实验分别观察评价Sirt3对肝癌细胞的增殖与侵袭作用。结果:Sirt3腺病毒载体以及Sirt3蛋白过表达的肝癌细胞构建成功；与对照Ad-EGFP相比，Ad-Sirt3腺病毒感染的肝癌细胞增殖速度明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；Ad-EGFP组与Ad-Sirt3组肝癌细胞的侵袭能力差异亦具有统计学意义（P<0.01）。结论:过表达Sirt3可显著抑制肝癌细胞（HLF与HLE细胞株）增殖和侵袭，提示Sirt3可能是肝癌治疗的潜在靶点。     

lncRNA PVT1调控肝癌细胞放射敏感性的分子机制

目的:探讨lncRNA PVT1调控肝癌细胞对放射照射增殖、凋亡的敏感性及机制。方法:运用qRT-PCR检测人肝癌细胞HepG2、人正常肝细胞L02中PVT1的表达。si-NC组（转染si-NC）、si-PVT1组（转染si-PVT1）、IR+si-NC组（转染si-NC后放射照射）、IR+si-PVT1组（转染si-PVT1后放射照射）均用脂质体法转染至HepG2细胞。MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western blot检测各组细胞中p-ATM、p-p53、p-Chk2、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:与人正常肝细胞L02相比,人肝癌细胞HepG2中PVT1的表达显著升高（P<0.05）;敲减PVT1联合放射照射可明显抑制HepG2细胞增殖,促进凋亡且可下调p-ATM、p-p53、p-Chk2、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达。结论:敲减lncRNA PVT1可通过抑制HepG2细胞增殖,促进凋亡,增强其对放射照射的敏感性,为提高肝癌的治疗效率提供新靶点。     

CISD2在肝细胞肝癌组织和细胞中的表达及其临床意义

目的:探究CDGSH铁硫结构域2(CISD2)在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织和细胞中的表达及临床病理意义。方法:采用免疫组织化学染色方法检测100例HCC肿瘤组织标本及46例癌旁肝组织标本中CISD2的蛋白表达水平,分析CISD2与临床病理特征、增殖相关蛋白Ki-67、患者生存率的相关性;运用Western blot法检测人HCC细胞株BEL7404、HepG2、SMMC-7721以及人正常肝细胞株L02中CISD2的表达,分析其表达差异。结果:CISD2在HCC肿瘤组织中的表达水平明显高于癌旁肝组织,CISD2在肝癌细胞株中的表达水平也明显高于正常肝细胞,差异有统计学意义(P＜0.01)。CISD2的表达与HCC患者的肿瘤大小（P＜0.05）以及Ki-67指数相关(P＜0.001),CISD2高表达患者的总生存率低于低表达者。结论:CISD2在HCC组织和细胞中高表达,其表达水平与患者的预后有关。CISD2可能成为HCC预后判断的标志和治疗的潜在靶点。     

顺铂联合迷迭香酸抑制Huh7细胞增殖诱导凋亡

目的:探讨含铂抗癌药物顺铂（Cisplatin,CDDP）联合中药单体迷迭香酸（Rosmarinic acid,RA）对人原发性肝癌Huh7细胞系增殖与凋亡的影响。方法:通过CCK-8细胞增殖实验检测并计算CDDP和RA治疗24 h、48 h、72 h后的IC50值,随后设置未经药物处理组（control组）、5 μg/mL CDDP处理组、200 μg/mL RA处理组以及5 μg/mL CDDP联合200 μg/mL RA处理组。采用流式细胞术检测control组、CDDP处理组、RA处理组以及联合用药组的细胞凋亡率分别为（7.28±0.56）%、（18.23±2.53）%、（26.44±1.99）%和（37.27±0.28）%。最后,利用免疫印迹试验(Western blot)检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3以及Procaspase-3凋亡相关蛋白的表达水平。结果:RA可增强CDDP对Huh7细胞增殖的抑制能力并呈现出浓度依赖性（P＜0.05）,在CDDP联合RA处理组中Huh7细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,CDDP联合RA作用后促凋亡蛋白Bax与Cleaved-caspase-3的表达水平增加,而Bcl-2的表达水平下降（P＜0.05）。结论:RA能抑制Huh7细胞增殖并且诱导细胞凋亡,与顺铂联用具有协同作用,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1,以实时荧光定量（qRT-PCR）分别在24、48 h后检测MALAT-1 mRNA表达水平,筛选合适的siRNA作用浓度和时间。将CNE细胞分为三组:空白对照组、siRNA阴性对照组和siRNA组,siRNA处理细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,Western blot 检测各组细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）及PI3K/AKT通路蛋白（PI3K、ATK、p-AKT）表达情况。结果:选定30 nmol/L浓度的siRNA作用于CNE细胞48 h;siRNA处理细胞后,与空白对照组相比,siRNA组细胞增殖率明显降低,凋亡率明显升高,Bax、caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;AKT蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA阴性对照组各指标均无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:siRNA可靶向沉默MALAT-1,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。