Rspo1与EMT相关蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

摘 要：［目的］ 探讨特异性顶部盘状底板反应蛋白1（Rspo1）与上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白波形蛋白（Vimentin）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）在胃癌中的表达水平及其临床意义。［方法］ 通过免疫组化SP法测定115例胃癌组织及20例癌旁正常组织标本中Rspo1和Vimentin、E-cadherin的表达,分析其与临床病理特征的关系,Rspo1和EMT相关蛋白之间的相关性以及与胃癌患者预后的关系。［结果］胃癌组织中Rspo1和Vimentin阳性表达率（54.8%和34.8%）明显高于癌旁正常组织（25.0%和0）（P均<0.05）,而胃癌组织中E-cadherin阳性表达率（53.9%）明显低于癌旁正常组织（100%）（P<0.05）。胃癌组织中Rspo1表达与肿瘤大小、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移及远处转移相关（P均<0.05）,与患者性别、年龄、分化程度无关。Rspo1与Vimentin的表达呈正相关（r=0.333,P<0.05）,与E-cadherin的表达呈负相关（r=-0.349,P<0.05）。Rspo1和Vimentin高表达患者生存率更低（P<0.05）,E-cadherin阴性组患者较阳性组患者生存率更低（P<0.05）。多因素Cox回归分析显示：TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移、Rspo1表达阳性及E-cadherin表达阴性是影响胃癌患者预后的独立危险因素（P<0.05）。［结论］ Rspo1在胃癌组织中高表达,且与EMT相关蛋白的表达密切相关,Rspo1可能通过诱导EMT的发生促进胃癌的侵袭和转移,进而影响患者预后。     

鼻咽癌原发与转移性淋巴结E-cadherin 和TGF-β1表达相关性的探讨

目的:探讨E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、转生长因子(TGF-β1)蛋白在鼻咽癌组织中的表达情况及临床病理意义.方法:采用免疫组织化学染色S-P法检测57例鼻咽癌组织、36例淋巴结转移癌组织和20例癌旁鼻咽黏膜慢性炎组织中E-cadherin、TGF-β1蛋白的表达水平.结果:1)E-cadherin在颈部淋巴结转移癌中的阳性表达率为47.2%(17/36),显著低于鼻咽癌组织(80.7%,46/57,P=0.001)和鼻咽黏膜慢性炎组织(90.0%,18/20,P=0.02);TGF-β1在颈部淋巴结转移癌中阳性表达率高于鼻咽黏膜慢性炎组织(P=0.041).2)在鼻咽癌组织中E-cadherin及TGF-β1的表达与临床分期有关(均P<0.05);有淋巴结转移组的鼻咽癌组织中TGF-β1阳性率明显高于无淋巴结转移组(P=0.044).3)鼻咽癌中E-cadherin与TGF-β1的表达呈负相关(P<0.05).结论:E-cadherin蛋白表达下调或TGF-β1蛋白表达增多可能是导致鼻咽癌癌细胞侵袭转移的重要因素.     

结肠癌组织中Foxp3和TGF-β1的相互关系

目的：对结肠癌组织中Foxp3、TGF-β1蛋白进行检测,结合临床病理资料,分析其表达与患者临床病理资料及预后的关系。方法：收集56例结肠癌、癌旁组织标本和15例健康对照组的标本。应用免疫组化法检测56例结肠癌原发灶及癌旁组织和15例健康对照组织中Foxp3、TGF-β1蛋白的表达。结果：结肠癌患者组织Foxp3、TGF-β1阳性表达率均显著高于健康对照组和癌旁对照组（ P〈0.01）。癌旁对照组Foxp3、TGF-β1阳性表达率高于健康对照组,有统计学意义（ P〈0.05）。阳性表达率与淋巴结转移、临床Duke分期有关（P〈0.05）,与组织学分级、肿瘤大小无关（P〉0.05）。Spearman等级相关分析表明,结肠癌组织Foxp3与TGF-β1蛋白表达呈正相关。结论：Foxp3、TGF-β1在结肠癌组织中表达增高,提示在结肠癌患者中,全身免疫状态与肿瘤的生长和侵袭密切相关,Foxp3、TGF-β1可作为判断患者预后的指标,并为结肠癌的靶向治疗提供新的途径。     

Vimentin和E-cadherin蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的: 研究波形蛋白（Vimentin）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）在人乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法: 回顾性分析2014 年1 月至2016 年1 月在安徽医科大学附属巢湖医院接受乳腺癌根治术的56 例乳腺癌组织和相应癌旁组织标本以及病历资料,用免疫组织化学染色法和qPCR 分别检测癌组织中Vimentin、E-cadherin 蛋白和mRNA的表达,分析Vimentin 和E-cadherin蛋白在乳腺癌组织中的表达与临床病理特征的关系。用Logistic 多因素回归分析影响Vimentin 和E-cadherin 蛋白表达的独立因素,用Spearman 分析Vimentin 与E-cadherin 蛋白表达的相关性,用Kaplan-Meier 分析Vimentin 和E-cadherin 蛋白表达与预后的关系,用ROC曲线分析Vimentin 和E-cadherin 蛋白表达对预后的诊断。结果: 56 例乳腺癌组织中Vimentin 和E-cadherin 蛋白高表达率分别为76.79%和19.64%;其中47 例（47/56,83.93%）乳腺癌组织中Vimentin mRNA 的表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）,46 例（46/56,82.14%）乳腺癌组织中E-cadherin mRNA的表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）。Vimentin 蛋白表达与肿瘤大小、淋巴结转移、脉管侵袭、组织学分级、临床分期、分子分型、Ki67 阳性、ER阴性、PR阴性及HER2 阴性表达均有关（均P<0.05）;E-cadherin 蛋白表达与淋巴结转移、脉管侵袭、组织学分级、临床分期、分子分型、Ki67 阳性、ER阴性、PR阴性及HER2 阴性表达均有关（均P<0.05）。肿瘤大小、淋巴结转移、脉管侵袭、组织学分级、临床分期、分子分型、Ki67 阳性、ER阴性、PR阴性及HER2 阴性表达均是促进Vimentin 和E-cadherin 表达的独立影响因素（P<0.05）,且Vimentin 与E-cadherin 蛋白表达呈负相关关系（P<0.05）。Vimentin 蛋白高表达的患者3 年生存率为67.44%,E-cadherin 蛋白低表达的患者3 年生存率为68.89%。结论: 在乳腺癌组织中Vimentin高表达和E-cadherin低表达与乳腺癌发生发展、侵袭转移及患者预后有关,可作为临床诊断与预后的评价指标。     

事肿瘤分子病因学的研究 贲门腺癌中TGF-β1型受体启动子区甲基化状态分析

 目的探讨贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma,GCA）中TGF-β1型受体（transforming growth factor-beta receptor type 1 gene,TGFBR1）启动子区的甲基化状态及其与TGF-β1蛋白表达之 间的相关性。方法分别应用甲基化特异性PCR（MSP）方法、RT-PCR方法和免疫组织化学法检测贲门腺癌组 织及相应癌旁组织的TGFBR1甲基化情况、mRNA和蛋白表达情况,应用免疫组织化学法检测相应TGF-β1的 蛋白表达情况。结果TGFBR1在贲门腺癌组织的甲基化率为30.9%（34/110）,显著高于癌旁正常组织 （P<0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中TGFBR1基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P<0.05） 。贲门癌组织中TGFBR1基因的mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织（P<0.05）且与其甲基化状态之间有 明显的相关性。TGF-β1在贲门癌组织中的表达（65.5%）明显升高,与相应癌旁正常组织相比差异有统计 学意义（P<0.01）,且随肿瘤分期的增高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高 （P<0.05）。TGFBR1和TGF-β1蛋白在贲门腺癌中的表达呈明显的负相关。结论TGF-β1型受体基因启动子 区的高甲基化及其TGF-β1的过表达可能参与了贲门腺癌的发生发展过程,TGF-β1型受体基因启动子区发 生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一。     

E-cadherin和CK19表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征和复发的关系

目的:探讨上皮型钙黏附素（E-cadherin）和角蛋白19（CK19）与甲状腺乳头状癌（PTC）患者临床病理特征及复发的关系。方法:收集2012年7月至2015年6月期间在广元市中心医院行外科手术的PTC患者130例，随访患者复发情况。采用免疫组织化学染色法（IHC）检测所有PTC患者肿瘤组织和癌旁正常组织E-cadherin和CK19的表达。结果:肿瘤组织中E-cadherin阳性表达率为41.54%（54/130），明显低于癌旁组织，且与肿瘤腺体包膜浸润、淋巴结转移数量有关（P＜0.05）；而CK19阳性表达率为66.92%（87/130），明显高于癌旁正常组织，与肿瘤大小、腺体包膜浸润、TNM分期有关（P＜0.05）。E-cadherin在PTC组织中的表达与CK19呈负相关性（rk=-0.239，P=0.026）。14例（11.38%）患者术后复发。E-cadherin阳性表达者无病生存率高于阴性表达者（P＜0.05）。另外，CK19阳性表达者无病生存率低于阴性表达者（P＜0.05）。经多因素logistic回归分析，腺体包膜浸润、E-cadherin低表达和CK19高表达是术后复发的独立影响因素（P＜0.05）。结论:肿瘤组织中E-cadherin低表达和CK19高表达可作为PTC患者术后复发的预警标志物，有助于筛选术后复发的高危患者。     

TGF-β1及其信号转导通路分子在鼻咽癌组织芯片中的表达及意义

目的探讨转化生长因子TGF-β1及其信号转导通路分子在鼻咽癌中的表达情况及临床病理意义。方法利用组织芯片及免疫组织化学技术检测163例鼻咽癌和42例鼻咽黏膜慢性炎组织中TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ和Smad4蛋白的表达,分析其与各临床病理因素的关系。结果（1）TGF-β1在鼻咽癌组织中的阳性表达率为52.8％(86／163) ,明显高于鼻咽慢性炎组织中的阳性表达率19.0%（8/42）(P＜0．01);TGF-βRⅠ在鼻咽慢性炎组织中阳性表达率为57.1％(24／42),与鼻咽癌组织中的阳性表达率66.3％(108／163)比较差异无统计学意义（P＞0．05）;TGF-βRⅡ在鼻咽癌组织中的阳性表达率为49.1％(80／163),明显低于慢性鼻咽炎组织的阳性表达率71.4％(30／42) (P＜0．01);Smad4蛋白表达于胞质和(或)胞核中,在鼻咽癌组织中的阳性率为63.8％(104／163),明显低于鼻咽慢性炎组织的阳性表达率［83.3％(35／42) ］(P＜0．05)。（2）TGF-β1与Smad4的表达与鼻咽癌的临床分期和5年生存率有一定相关性(P＜0．05);TGF-βRⅠ在非角化性分化型鳞状细胞癌中的阳性表达明显低于非角化性未分化型鳞状细胞癌的表达（P＜0．05)。（3）TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4蛋白的表达与鼻咽癌患者的年龄、性别和组织学类型无关,TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ和Smad4蛋白在鼻咽癌组织中的表达不存在相关性(P>0.05)。结论TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ和Smad4在鼻咽癌的发生、发展中起一定的作用。     

TGF-β_1Ⅱ型受体在肝癌蛋白水平的表达

［目的］研究转化生长因子-β1Ⅱ型变体（TGF-β1RⅡ）在肝细胞癌蛋白水平的表达及意义。［方法）用免疫组化染色（LSAB法）分别检测30例肝癌组织和癌旁肝组织中TGF-β1RⅡ的表达。［结果]TGF-β1RⅡ染色,在肝癌组织以阴性（14例）和弱阳性（10例）为主;在癌分组织以弱阳性（8例）和阳性（11例）为主。经统计学处理,两组差别有显著性意义（P＜0.05）。（结论]TGF-β1RⅡ在肝癌组织表达降低,导致肝癌细胞及性生长调控障碍,可能是其癌变和生长失控的重要原因之一。     

罗哌卡因抑制Rac1/JNK1/FAK通路的活化抑制黑色素瘤M21细胞生长、侵袭和迁移

目的:本文旨在探究罗哌卡因(ropivacaine,RPC)对黑色素瘤M21细胞生长,运动和上皮间质形态转换的影响。方法:采用0、0.25、0.5、1 mmol/L剂量罗哌卡因处理M21细胞,将细胞随机分为四组:RPC 0 mmol/L组、RPC 0.25 mmol/L组、RPC 0.5 mmol/L组和RPC 1 mmol/L组进行后续试验。EDU染色检测细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell检测侵袭细胞数;划痕试验检测细胞迁移;显微镜观察上皮间充质转化形态学变化;蛋白免疫印迹检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Rac1、JNK1、p-JNK1、FAK、p-FAK蛋白表达水平。结果:结果表明,与RPC 0 mmol/L组相比较,RPC 0.5、1 mmol/L组EDU阳性细胞数显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,侵袭细胞数显著降低（P＜0.05）,划痕愈合率显著降低（P＜0.05）,上皮间充质转化受到抑制,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,Vimentin、N-cadherin、Rac1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,p-JNK1/JNK1、p-FAK/FAK比值显著降低（P＜0.05）。结论:罗哌卡因抑制Rac1/JNK1/FAK通路的活化调节黑色素瘤M21细胞生长,运动和上皮间质形态转换。     

E-cadherin、β-catenin 表达与胰腺癌预后的关系

目的：探讨胰腺癌患者中E-cadherin和β-catenin的表达与其预后的关系。方法选取胰腺癌患者50例,检测E-cadherin及β-catenin在胰腺癌组织及癌旁组织的表达,并分析其与肿瘤临床分期、分化程度、淋巴结转移及血管侵犯的关系。结果胰腺癌组织中E-cadherin及β-catenin的阳性表达率均明显低于癌旁组织,差异具有统计学意义（ P＜0．05）;E-cadherin和β-catenin的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及血管侵犯密切相关（P＜0．05）。结论联合检测胰腺癌组织中E-cadherin和β-catenin的表达情况,可在一定程度上分析胰腺癌患者的恶性程度,从而判断患者的预后情况。     

ZEB-1、E-cadherin在胃癌组织中的表达及与临床病理因素的关系

目的:研究ZEB-1、E-cadherin 蛋白在胃癌组织中的表达情况及其与临床病理因素之间的相互关系。方法:应用免疫组织化学法（IHC 法）检测ZEB-1 蛋白和E-cadherin 蛋白在171 例胃癌组织和60 例癌旁胃组织中的表达情况,分析两种蛋白在胃癌组织中与临床病理参数之间的关系。结果:ZEB-1在胃癌组织中呈阳性表达,阳性表达率明显高于癌旁胃组织（P<0.05）,且表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM 临床分期有关（P<0.05）;E-cadherin在胃癌组织中阳性表达率明显低于癌旁胃组织,且表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM 临床分期有关（P<0.05）;ZEB-1、E-cadherin 蛋白在胃癌组织中的表达呈负相关性（r=-0.369,P=0.019）。结论:联合检测E-cadherin 和ZEB-1 对判断胃癌患者的预后具有一定的临床价值。     

非小细胞肺癌中ETS-1与E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达相关性的研究

目的：探讨ETS-1与E-cadherin、N-cadherin、Vimentin在肺癌中的表达相关性及其临床意义。方法选择接受手术切除并经病理证实的110例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者的肿瘤组织和距肿瘤3 cm以上的癌旁正常肺组织,采用免疫组化SP法检测组织中ETS-1与E-cadherin、N-cadherin、Vimen-tin的表达,并结合临床资料进行相关性分析。结果非小细胞肺癌组织中ETS-1与N-cadherin、Vimentin的阳性表达率分别为65%（72/110）、56%（62/110）、34%（37/110）,明显高于正常癌旁肺组织的6%（3/50）、8%（4/50）、2%（1/50）,组间差异具有统计学意义（P<0.01）;E-cadherin的阳性表达率为41%（45/110）,明显低于正常癌旁肺组织中的84%（42/50）。ETS-1的阳性率与淋巴结转移和TNM分期呈正相关（P<0.05）,而与性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型及分化程度无关（P>0.05)。E-cadherin的阳性率与肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期呈负相关（P<0.05）,N-cadherin和Vimentin的阳性率与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期呈正相关（P<0.05）,E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型无相关性（P>0.05）。在非小细胞肺癌中ETS-1与E-cadherin的表达呈负相关,ETS-1与N-cadherin的表达呈正相关。结论 ETS-1与E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达和非小细胞肺癌的转移密切相关,其检测可作为判断非小细胞肺癌转移和预后的指标之一。     

转化生长因子-β1表达与原发性肝癌预后的相关性分析

目的：分析TGF-B1在原发性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）、癌旁组织、术后血清中表达特征与术后复发转移。生存率及手术方式的相关关系，探索PHC预后的量化评估方法。方法：采用免疫组化，夹心酶联免疫吸附试验．检测31例手术治疗的PHC不同组织学类型和不同手术方式患者，癌及癌旁组织、术后血清中TGF-β1表达水平．选择同期4例继发性肝癌（secondary hepatic carcinoma，SHC）手术病例对照，对其表达差异性及相关性进行统计学分析。，结果：PHC和SHC癌及癌旁组织、术后血清TGF-β1，的表达差异具有显著性意义。不同组织学类型的PHC表达不均衡．癌旁组织、术后血清TGF-β1表达随肝癌分型与分期越差而增强；胆管细胞癌高于肝细胞肝癌；肿瘤复发转移者高于无转移者；规则性肝切除高于局限性肝切除。结论：TGF-β1在癌旁组织和术后血清的表达程度与PHC的组织学分型暨肿瘤的恶性程度呈正相关，提示高恶性肝癌由于早期的浸润性生长方式刺激或激活肝脏间质组织或细胞合成分泌TGF-β1致使其过表达。术后血清中TGF-β1的表达与手术方式相关，显示规则性肝切除对肝脏损伤程度与范围大，肝细胞和问质组织及细胞的再生活跃，TGF-β1的合成旺盛。TGF-β1在术后血清中持续过表达可能是导致PHC复发转移和术后免疫功能缺陷的重要因素之一。     

结直肠癌组织中Vav1、Rac1、CyclinD1、p21表达的意义

摘 要：［目的］ 通过检测Vav1、Ras相关的C3肉毒素底物1（Rac1）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21蛋白在结直肠癌组织中的表达情况,分析Vav1蛋白与Rac1、CyclinD1、p21的关系及意义。［方法］ 180例结直肠癌肿瘤组织和162例癌旁组织的石蜡组织标本进行免疫组化染色,检测肿瘤组织和癌旁组织中Vav1、Rac1、CyclinD1、p21蛋白表达。［结果］ 结直肠癌肿瘤组织中Vav1 、Rac1、CyclinD1蛋白表达高于癌旁组织,p21蛋白在癌组织表达低于癌旁组织(P<0.05)。Vav1蛋白表达与肿瘤的浸润深度、分化情况及淋巴结转移有关;Rac1与肿瘤的分化情况、淋巴结转移有关;CyclinD1表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移有关（均P<0.05）。 Spearman相关分析显示,肿瘤组织中Vav1蛋白表达与Rac1、CyclinD1蛋白呈正相关,与p21负相关(P<0.05)。［结论］ Vav1在结直肠癌组织中的表达与肿瘤增殖的指标有关,可能通过调节Rac1、CyclinD1、p21促进肿瘤的生长。     

胃癌中幽门螺杆菌对hMSH2和hMLH1基因表达的影响

目的：探讨胃癌中幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hpylori）对hMSH2和hMLH1基因表达的影响，方法：利用尿素酶快速检验法确定胃癌组织及同病例癌旁粘膜、胃镜非癌患者胃粘膜组织有无Hpylori感染；应用免疫组织化学方法检测所有标本的hMSH2、hMLH1蛋白的表达。结果：胃癌组的hMSH2蛋白阳性表达率显著高于癌旁组和非癌组（P〈0．05）；而后两者无显著差别（P〉0．05）。胃癌组、癌旁组和非癌组的hMLH1蛋白阳性表达率无显著差别（P〉0．05）。胃癌组织中，Hpylori感染组的hMSH2蛋白阳性表达率和hMLH1蛋白阳性表达率均显著低于非感染组（P〈0．05）；癌旁组织中．Hpylori感染组的hMSH2蛋白阳性表达率和hMLH1蛋白阳性表达率均显著低于非感染组（P〈0．05）；非癌患者胃粘膜中，H pylori感染组与非感染组的hMSH2蛋白阳性表达率及hMLH1蛋白阳性表达率均无显著差别（P〉0．05）。结论：胃粘膜hMSH2蛋白表达上调并hMLH1蛋白表达下调可能是胃癌发生的标志；Hpylori感染导致的胃粘膜细胞hMSH2和hMLH1蛋白表达降低，可能是促进胃癌发生的一个因素.     

BRCA1在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene-1,BRCA1）在前列腺癌组织中的表达及临床意义。方法 采用SP免疫组化法检测46例前列腺癌组织及14例癌旁组织中BRCA1的表达,分析BRCA1表达与前列腺癌临床病理特征的关系。结果 14例前列腺癌旁组织中BRCA1阳性表达率为78.6％（11/14）,46例前列腺癌组织中BRCA1阳性表达率为45.7％（21/46）,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。BRCA1表达与前列腺癌家族史、Gleason 评分和TMN分期有关（P＜0.05）,与年龄和前列腺特异性抗原（prostate specific antigen,PSA）浓度无关（P＞0.05）。结论 BRCA1在前列腺癌组织中低表达,且随肿瘤恶性程度增加其表达降低,提示检测BRCA1蛋白对前列腺癌辅助诊断及预后判断有一定参考价值。     

E-cadherin和β-catenin在肝细胞癌中的表达及意义

[目的]探讨上皮型钙黏素（E-cadherin）和β-连环素（β-catenin）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与临床病理特征的关系。[方法]采用免疫组织化学方法检测61例HCC组织及其癌旁肝组织中E-cadherin和β-catenin蛋白的表达,分析其表达与HCC临床病理特征的关系。[结果]E-cadherin和β-catenin蛋白在癌组织中的异常表达率分别为34.43%和67.21%,而在癌旁肝组织中的异常表达率分别为14.75%和26.23%,癌组织与癌旁组织比较差异有显著性（P〈0.05）。E-cadherin表达与门脉癌栓、术后复发、肿瘤大小、肿瘤分化、肿瘤个数有关。β-catenin异常表达在不同肿瘤个数及不同肿瘤分化状况下差异有显著性。[结论]E-cadherin和β-catenin的异常表达可能与HCC的发生及术后的复发及转移有关,可能作为监测HCC恶性程度和判断预后的指标。     

贲门腺癌中Smad4基因甲基化状态分析

目的：探讨贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma,GCA）中Smad4（mothers against decapentaplegic homolog4）基因启动子区及第1外显子区的甲基化状态及其与TGF-β1蛋白表达之间的相关性。方法：取110例贲门腺癌组织及相应癌旁组织,分别采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）方法检测Smad4基因的甲基化情况,RT-PCR方法检测Smad4 mRNA水平,免疫组织化学法检测Smad4和TGF-β1的蛋白表达情况。结果：贲门腺癌组织Smad4基因启动子甲基化率为5.5%（6/110）,Smad4基因第1外显子5′非翻译区的甲基化率为24.5%（27/110）,相应癌旁正常黏膜均未检测到此两个位点的甲基化,癌组Smad4基因甲基化率显著高于癌旁正常组织（P〈0.05）,且贲门腺癌中Smad4基因5′非翻译区发生甲基化的比率显并高于启动子区（P〈0.01）。贲门腺癌组织中Smad4 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织（P〈0.05）,其甲基化与蛋白表达之间呈负相关。TGF-β1在贲门癌组织中的表达（65.5%）明显高于相应癌旁组织（15.5%）（P〈0.01）,且随肿瘤分期的增高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高（P〈0.05）。Smad4蛋白和TGF-β1蛋白在贲门腺癌中的表达呈明显的负相关。结论：在贲门腺癌发生发展过程中Smad4基因第1外显子的5′非翻译区比启动子区更易发生高甲基化而导致基因沉默,Smad4甲基化及TGF-β1的过表达可能是贲门腺癌发生的机制之一。     

Ras相关的C3肉毒素底物1蛋白在胃癌组织中的表达和分布以及与胃癌进展的关系

目的 观察胃癌组织中Ras相关的C3肉毒素底物1(Racl)蛋白的表达和分布，探讨Racl蛋白的定位与胃癌进展之间的关系。方法 采用免疫组化染色法检测48例胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织中Racl蛋白的表达和分布，采用实时荧光PCR法检测48例胃癌组织中T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）和Racl mRNA的表达水平。结果 48例胃癌组织中，Racl蛋白阳性表达38例(79.2％)，其中31例(64.6％)定位于细胞核。48例癌旁组织中，Racl蛋白阳性表达9例(18.8％)，全部定位于细胞质。Racl蛋白在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率差异有统计学意义(u ＝6.43，P＜0.01)，Racl蛋白在胃癌和癌旁组织中的核定位率差异亦有统计学意义(x2＝45.795,P＜0.001)。实时荧光PCR检测结果显示，Rac1蛋白核定位胃癌组织中Racl和Tiaml mRNA的阳性表达率和中位数均明显高于Racl蛋白非核定位组（均P＜0.05）。Racl蛋白的细胞核定位与胃癌的分化程度、T分期以及局部淋巴结转移相关。结论在多数胃癌组织中，Racl蛋白定位于细胞核，Racl蛋白的核定位可能是Tiaml/Racl信号通路异常活化的表现，也可能预示着胃癌侵袭能力的增强。     

解整合素金属蛋白酶10通过介导Wnt/β-catenin信号通路促进子宫内膜癌细胞上皮-间质转化

目的:探讨解整合素金属蛋白酶10（ADAM10）对子宫内膜癌（EC）细胞上皮-间质转化（EMT）的影响及其作用机制。方法:收集84例EC患者的新鲜癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测癌组织及其癌旁组织中ADAM10 mRNA表达水平。以人EC细胞株HEC-1B作为研究对象,采用ADAM10过表达慢病毒感染HEC-1B细胞,并联合Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939进行干预,再将细胞分为空白对照组（blank）、慢病毒阴性对照组（Lv-NC）、ADAM10过表达慢病毒组（Lv-ADAM10）和Lv-ADAM10+XAV939组。采用qRT-PCR检测感染后各组细胞中ADAM10 mRNA表达水平;划痕和Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力;Western blot法分析各组细胞中ADAM10及EMT相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:EC患者癌组织中ADAM10 mRNA表达水平显著高于癌旁组织（P＜0.05）。与blank组或Lv-NC组比较,Lv-ADAM10组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平以及N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平均显著升高（均P＜0.05）,而E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）,同时细胞迁移和侵袭能力显著增强（均P＜0.05）。与Lv-ADAM10组比较,Lv-ADAM10+XAV939组细胞中N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平显著降低（均P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）,且细胞迁移和侵袭能力明显降低（均P＜0.05）。结论:ADAM10在EC组织中高表达,其过表达可促进HEC-1B细胞的EMT进程,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。