石蒜碱调控G3BP1/TGF-β/Smad信号通路抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8（cell counting kit-8,CCK-8）法分析细胞增殖抑制率,Western blot法分析GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1［GTPase activating protein（SH3 domain)binding protein 1,G3BP1］、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平。敲低或过表达G3BP1,观察其对细胞增殖抑制率以及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2~64 μmol/L石蒜碱抑制ECA109细胞增殖,石蒜碱48 h IC50为（16.21±2.35）μmol/L。4、8、16 μmol/L的石蒜碱能下调G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3的水平。敲低G3BP1的表达能明显提高石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,促进石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）;上调G3BP的表达能明显下调石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,抑制石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）。体内实验显示,与模型对照组比较,25、50、100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,对裸鼠体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控G3BP1/TGF-β/Smad 信号通路有关。     

TGF-β/Smad信号通路与食管癌上皮间质转化的研究进展

国内外的多项研究显示,在消化系统肿瘤中普遍存在上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)现象,并与浸润转移及预后差密切相关。已有研究发现转化生长因子-β(TGF-β)在诱发EMT过程中起重要作用,而Smads蛋白是TGF-β下游关键的信号蛋白分子,是将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内的关键因子。本文就食管癌上皮-间质转化与TGF-β/Smad信号通路关系的研究进展作一综述。     

调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌SiHa细胞自噬基因LC3的影响

目的:探究调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌SiHa细胞自噬基因LC3的影响。方法:取对数生长期的宫颈癌SiHa细胞加入不同浓度的TGF-β1和SIS3干预24小时后收取细胞,采用实时荧光定量PCR法及免疫印迹法检测自噬基因LC3在mRNA水平及蛋白水平上的表达量变化。结果:不同浓度的TGF-β1作用SiHa细胞24小时后,随TGF-β1浓度升高,LC3 mRNA及蛋白的表达量逐渐增高（P＜0.05）。不同浓度的SIS3作用SiHa细胞24小时后,随SIS3浓度升高,LC3 mRNA及蛋白的表达量逐渐降低（P＜0.05）。结论:外源性的TGF-β1/Smad4通路激活剂TGF-β1可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白LC3 mRNA和蛋白表达量升高,诱导宫颈癌SiHa细胞发生自噬;外源性的TGF-β1/Smad4通路抑制剂SIS3可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白LC3 mRNA和蛋白表达量降低,抑制宫颈癌SiHa细胞发生自噬;且随TGF-β1和SIS3浓度的增加,LC3的表达量出现变化,具有一定的浓度依赖性。     

马鞭草总黄酮通过AKT/mTOR信号通路调控自噬抑制肝癌细胞增殖

目的:分析马鞭草总黄酮(total flavonoids of verbena officinalis L.,TFV)对肝癌细胞自噬和增殖的影响,并探讨其机制。方法:MDC染色法检测自噬泡水平,Western印迹检测自噬相关蛋白水平,运用3-甲基腺嘌呤(3-MA)、雷帕霉素(RAPA)研究TFV对自噬、细胞增殖的影响,MTT法检测细胞存活率。裸鼠成瘤实验验证TFV对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及自噬相关蛋白水平的影响。结果:TFV能增加HepG2、Huh-7细胞中MDC染色标记的荧光颗粒,并伴随浓度的上调明显增加,促进HepG2、Huh-7细胞中自噬蛋白Beclin-1、LC3 II/LC3 I水平表达,降低p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平(P<0.05)。与TFV组比较,TFV+3-MA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显降低,p-mTOR/mTOR明显增加(P<0.05);与TFV组比较,TFV+RAPA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显增加,p-mTOR/mTOR明显降低(P<0.05);与TFV组比较,TFV+3-MA组裸鼠瘤体LC3 II/...     

白藜芦醇调控 TGFβ1／Smad 信号通路抑制胃癌 MGC803细胞增殖机制探讨

目的：探讨白藜芦醇对人胃癌 MGC803细胞生长增殖的影响及其可能的作用机制。方法：用白藜芦醇溶液干预胃癌 MGC803细胞,然后采用 MTT 法与台盼蓝染色实验检测白藜芦醇溶液对胃癌 MGC803细胞生长增殖的影响。采用 ELISA 法检测 MGC803细胞培养基中细胞外泌转化生长因子β1（TGFβ1）蛋白的含量。蛋白质印迹法检测白藜芦醇干预后 MGC803细胞中 p －Smad3、Smad4、Cyclin D1信号通路相关蛋白表达的变化。结果：MTT 法检测结果显示：低、中、高剂量白藜芦醇组 MGC803细胞的活力分别为对照组的0．937±0．046（t ＝1．266,P ＝0．274＞0．05）、0．844±0．026（t ＝4．822,P ＝0．009＜0．05）和0．540±0．038（t ＝10．997,P ＝3．89×10－4＜0．001）倍,其中各剂量组间细胞活力存在明显差异（F ＝13．216,P ＝0．002）。同时台盼蓝染色计数结果也发现：对照组、低、中、高剂量白藜芦醇组 MGC803细胞的死亡率分别为（4．83±3．00）％、（21．58±3．21）％、（34．84±2．87）％和（56．83±2．75）％,低、中、高剂量组 MGC803细胞死亡率较对照组明显上升（P ＝0．016＜0．05）。此外,对照组、低、中、高剂量白藜芦醇组 MGC803细胞上清液中TGFβ1的含量分别为（1332．32±39．81）、（1264．80±11．58）、（1170．54±15．51）和（1148．12±24．01）pg／ml,各组间差异具有明显的统计学意义（F ＝11．520,P ＝0．003）。蛋白质印迹法检测结果显示：白藜芦醇干预后 MGC803细胞中 p －Smad3、Cyclin D1蛋白水平明显下降,并且随着白藜芦醇剂量的增加,抑制作用也明显增强（P ＜0．05）。Smad4蛋白的表达水平呈现出明显上调,且亦与白藜芦醇存在明显的量效关系（P ＜0．05）。结论：白藜芦醇可抑制胃癌 MGC803细胞的增殖,并且其作用的发挥与白藜芦醇对 TGFβ1／Smad 信号通路的调控作用有关。     

扶正抑癌方含药血清对结肠癌Lovo细胞TGF-β/Smad信号转导通路的影响及意义

目的 通过观察扶正抑癌方含药血清对结肠癌Lovo细胞TGF-β/smad信号转导通路中TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白表达的影响,明确扶正抑癌方抑制结肠癌细胞间质化转变的作用机制.方法 Lovo细胞体外培养,制备大鼠不同浓度含药血清后,MTT法测定不同浓度含药血清对细胞增殖的影响,以5 Fu作为阳性对照;通过Western blot检测TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白的表达.结果 大剂量含药血清组24 h对Lovo细胞抑制率较中剂量、小剂量组作用更加明显,差异具有统计学意义(P＜0.01).Western blot检测结果表明扶正抑癌方含药血清可以下调Lovo细胞TGF-β1、Smad3和p-Smad3的蛋白表达,与正常组和空白组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 扶正抑癌方含药血清可能通过下调TGF-β/smad信号转导通路中TGF-β1、Smad3和p-Smad3的蛋白表达,抑制Lovo细胞间质化转变.     

广藿香酮通过JNK/c-Jun信号通路调控肺癌A549细胞凋亡及自噬

目的 探讨广藿香酮对肺癌A549细胞增殖、凋亡、自噬和JNK/c-Jun信号通路的影响。方法 采用0、10、20、40μmol/L广藿香酮处理肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组：0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L广藿香酮处理组,同时将5μmol/L顺铂处理后的肺癌A549细胞作为阳性对照组。EdU染色检测细胞增殖;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blotting检测LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin-1、p62、JNK、p-JNK、c-Jun和p-c-Jun蛋白表达。10μmol/L JNK抑制剂SP600125与40μmol/L广藿香酮共处理A549细胞2 h及24 h,检测细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达。结果 与广藿香酮0μmol/L组比较,广藿香酮20、40μmol/L组EdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达升高,p62蛋白表达降低,LC3⁺含量升高,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对...     

鼻咽癌中TGF-β/Smad信号通路分子的表达及意义

目的探讨TGF-β/Smad信号通路关键分子TGF-β1、TGF-β2、Smad7及其下游的转录因子RUNX3在鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)中的表达,并分析它们的相关性及与NPC临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测50例NPC和20例鼻咽慢性炎组织中TGF-β/Smad信号通路各关键分子的蛋白表达情况。结果TGF-β1、TGF-β2、Smad7及RUNX3在NPC中的阳性率分别为42%、70%、40%、56%,在黏膜慢性炎中的阳性率分别为0、100%、0、100%,四者的表达差异均有统计学意义(P＜0.05);TGF-β1、Smad7的表达与NPC的临床分期和局部浸润转移有关(P＜0.05),而TGF-β2、RUNX3与分期和局部浸润转移则无明显关系(P＞0.05),TGF-β1与Smad7的表达呈正相关(rs=0.6286, P＜0.05),TGF-β2则与RUNX3的表达呈正相关 (rs=0.4748, P＜0.05);四者在性别、年龄和组织学分级的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。结论TGF-β1和Smad7在NPC中的表达上调,两者呈正相关,可能共同参与了NPC的发生、发展;TGF-β2和RUNX3的表达下调,呈正相关关系,则可能协同作用,是影响NPC进展的保护性因子,而它们相互的作用机制则有待进一步研究。     

Wnt/β-catenin信号通路在食管癌变中的作用

Wnt家族基因编码一组糖蛋白信号分子,这些分子激活的信号通路在人类不同肿瘤细胞中的作用相互交织,β-catenin是Wnt信号通路正向调节的重要效应分子,该分子在细胞质内降解的失调可于细胞核内累积激活一系列靶基因的转录,导致肿瘤发生.近来,Wnt信号通路及其关键组分β-catenin在食管癌形成过程中的作用越来越受到重视,阻断Wnt途径,在食管癌治疗中可能是一个新的靶点.     

顺铂通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬

目的：探讨顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的影响,并初步探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路在其中的作用。方法：透射电镜观察自噬泡形成,免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3融合蛋白II（microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3II） 的荧光聚集情况。采用Westerblot检测mTOR通路中的PI3K、AKT及mTOR蛋白的表达。结果：顺铂（20μg/mL）能诱导Ishikawa细胞发生自噬,其中24h组明显高于12h组（P<0.05）;与对照组（20μg/mL-0h组）相比较,自噬相关蛋白-LC3的表达随着时间延长表达增加（P<0.05）。磷酸化AKT1、磷酸化mTOR及PI3Kp85蛋白表达水平随着时间延长表达下降。胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factors-1,IGF-1）与顺铂共培养组自噬小体及LC3蛋白表达少于顺铂组,但高于对照组。结论：顺铂可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而诱导子宫内膜癌细胞发生自噬。     

紫杉醇通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的：探究紫杉醇对人鼻咽癌细胞株HONE1增殖、凋亡及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法用终浓度为1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇处理HONE1细胞,分别在培养0、12、24、48 h后,用CCK-8检测HONE1细胞的增殖情况。培养48 h后,用平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt4、β-catenin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。用终浓度为10 ng/ml的紫杉醇及100 ng/ml的Wnt阻断剂DKK-1单独或共同处理HONE1细胞48 h后,用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇能够不同程度地抑制HONE1细胞的增殖,减少HONE1细胞的克隆形成数目,促进HONE1细胞发生凋亡,下调Wnt4、β-catenin和Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P﹤0.05）;用DKK-1抑制Wnt/β-catenin信号通路能够增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用,与紫杉醇处理组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论紫杉醇能够抑制人鼻咽癌细胞株HONE1增殖,并促进其发生凋亡,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

TGF-β信号通路介导胃癌EMT的研究进展

胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,由于缺乏早期典型症状,很多患者确诊时已经处于进展期,胃癌的主要治疗手段还是手术及化疗,五年生存率较低,大约处于20%~30%。胃癌又是一种异质性很强的恶性肿瘤,在种族、地域以至于个体之间,甚至于同一个体内的不同空间(如原发灶和转移灶)和时间节点(如初发病灶和复发病灶)在分子基因学以及肿瘤微环境等方面也不尽相同。探究胃癌发生、发展机制对胃癌治疗具有重要意义。上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是一种复杂的分子程序,多项研究表明EMT的异常活化与肿瘤的发生、侵袭、转移密切相关。转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）被认为是促进EMT的发生和肿瘤转移不可缺少的诱导因子,靶向TGF-β信号通路及其调节因子可能是预防和治疗胃癌的潜在策略。本文就TGF-β信号通路介导胃癌EMT的研究进展及作用于TGF-β信号通路的诱导剂及抑制剂作一综述。     

线粒体自噬的信号通路及其在肿瘤中的研究进展

线粒体自噬是真核生物细胞中广泛存在的清除功能失调或者多余线粒体的一种高度保守的细胞进程,能很好地调整线粒体数目并维持细胞能量代谢的稳定。该过程较复杂,多种信号通路参与其中来诱导或抑制线粒体自噬,从而以多重角度监测它的正常进行。而在恶性肿瘤中,线粒体自噬涉及到癌细胞的异常活化与增殖,提示它既可在癌细胞内发挥促癌效应,又可在正常细胞中发挥抑癌效应,二者之间的平衡可以决定肿瘤的进展或凋亡。从这个角度可以形成一条抗癌治疗新思路,既可抑制癌细胞中的线粒体自噬发挥抑癌效应,又可增强正常细胞中的线粒体自噬,清除损伤线粒体,维持线粒体基因组稳定与正常功能,从而发挥抑癌作用。本综述主要探讨线粒体自噬中涉及的多种信号通路及发挥关键作用的分子,并阐述线粒体自噬与恶性肿瘤的关系。     

恶性肿瘤中TGF-β1信号传递分子DPC4/Smad4的研究进展

DPC4/Smad4基因是新近被鉴定的一个肿瘤抑制基因 ,其编码的DPC4/Smad4蛋白是TGF β信号传导通路中的重要传导蛋白 ,是TGF β配体、受体结合后后续信号传导的胞质递质 ,参与TGF β受体激活后的信号传导。DPC4/Smad4调控的下游目的基因有p2 1WAF1、uPA、PAI 1、VEGF、TSP 1。转化生长因子 -β(transforminggrowthfactorbeta ,TGF β)信号传导通路的配体、受体、胞内信号传导分子Smad蛋白及其调控的下游目的基因等组成一个肿瘤生长的负性调节 ,通路中任何一个元件的异常都可引起信号传导紊乱 ,导致肿瘤发生     

异莲心碱通过PI3K/Akt/mTOR信号通路影响结肠癌SW480细胞增殖、 凋亡和自噬

目的：探讨异莲心碱（Iso）通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法：用 10、20和40 μmol/L的Iso处理结肠癌SW480细胞,CCK-8法、流式细胞术和WB法分别检测Iso对细胞增殖活力、凋亡和自噬相关 蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62表达的影响。然后,用20 μmol/L的Iso和25 μmol/L的PI3K激活剂740 Y-P分别处理SW480细胞,将细 胞分为对照组、740 Y-P组、Iso组和Iso+740 Y-P组,流式细胞术、WB法检测Iso和740 Y-P对各组细胞凋亡及细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、 p62、PI3K、p-PI3K、 mTOR和p-mTOR蛋白表达的影响。结果：10、20和40 μmol/L的Iso处理后,SW480细胞增殖活力均显著下 降（均P<0.05）,细胞凋亡率均显著升高（均P<0.05）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著上调（均P<0.05）,p26蛋白表达显著下调（P<0.05）。 Iso和740 Y-P处理后,与对照组相比,740 Y-P 组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著下降（均P<0.05）,p26、p-PI3K/PI3K和 p-mTOR/mTOR 表达均显著升高（均 P<0.05）;Iso 组 细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高（均 P<0.05）,p26、p-PI3K/PI3K和 p-mTOR/mTOR 表达均显著下降（均 P<0.05）;与 740 Y-P 组相比,Iso+740 Y-P 组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高（P<0.05）, p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降（均P<0.05）;与Iso组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达下 降（均P<0.05）,p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高（均P<0.05）。结论：Iso通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路 抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬。     

长链非编码RNA LIMT调控TGF-β信号通路对肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:检测lncRNA LIMT在肺癌组织中的表达水平,探讨lncRNA LIMT表达对肺癌细胞增殖及凋亡的影响及其可能的分子作用机制。方法:利用荧光定量PCR（RT-qPCR）检测lncRNA LIMT在肺癌组织中的表达水平;在肺癌细胞A549中转染lncRNA LIMT过表达质粒pEGFP-C1-LIMT及敲减lncRNA LIMT的特异性siRNA-LIMT及其相关对照,RT-qPCR验证其转染效率;利用CCK-8法、流式细胞术检测转染lncRNA LIMT过表达质粒及siRNA-LIMT后肺癌细胞的增殖及凋亡能力变化;利用Western blotting检测TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β1蛋白及Smad4蛋白的表达水平。结果:RT-qPCR结果显示:肺癌组织中lncRNA LIMT的表达水平显著低于配对癌旁组织（P＜0.05）;细胞转染实验结果显示:转染pEGFP-C1-LIMT后A549细胞中lncRNA LIMT的表达水平显著高于转染空载质粒（P＜0.001）,转染siRNA-LIMT后A549细胞中lncRNA LIMT的表达水平显著低于转染对照siRNA-NC（P＜0.01）;CCK-8和流式细胞术实验结果显示:过表达lncRNA LIMT显著抑制了肺癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡（P＜0.01）,敲减lncRNA LIMT显著促进了细胞增殖、抑制细胞凋亡（P＜0.01）;Western blotting结果显示:lncRNA LIMT过表达的肺癌细胞中TGF-β1蛋白表达水平显著降低,Samd4蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,敲减lncRNA LIMT的肺癌细胞中TGF-β1蛋白表达显著升高,Samd4蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论:lncRNA LIMT在肺癌组织中表达下调,过表达lncRNA LIMT抑制肺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,敲减lncRNA LIMT促进肺癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,可能通过对TGF-β信号通路的调控来实现。     

miR-181通过Wnt/β-catenin信号通路调控对B-ALL细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究miR-181在急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞中表达及其过表达对细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量PCR检测miR-181在急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中的表达水平,利用慢病毒转染技术使miR-181过表达,利用CCK-8实验检测过表达miR-181对人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181对Nalm-6细胞凋亡的影响,利用蛋白印迹实验检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白的表达水平。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常人相比,急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平显著下调;CCK-8检测细胞增殖结果显示,过表达miR-181显著抑制了人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,过表达miR-181显著促进了Nalm-6细胞的凋亡;Western blotting 结果显示,miR-181过表达,Wnt1、β-catenin、cyclin D1 和c-myc蛋白的表达均显著下调。结论:急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平下调,过表达miR-181抑制Nalm-6细胞增殖、促进Nalm-6细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号转导通路的受抑有关。     

LncRNA MALAT1通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭北大核心

目的:观察LncRNA MALAT1对Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:干扰LncRNA MALAT1在Saos-2细胞中的表达水平,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞技术检测细胞凋亡及周期情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭改变,透射电镜观察自噬小体,Western Blot、RT-PCR检测自噬相关因子Beclin1、LC3、p62表达差异及LncRNA MALAT1对Wnt/β-catenin通路的影响。结果:干扰LncRNA MALAT1后,Saos-2细胞自噬水平明显升高,Beclin1、LC3表达水平明显升高(P<0.05),而p62的表达水平显著下降(P<0.05);细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05),Wnt/β-catenin通路相关因子Wnt3a、β-catenin的表达水平显著下降(P<0.05)。结论:LncRNA MALAT1可以通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移和侵袭。     

Prucalopride通过促进自噬抑制胶质瘤细胞U251增殖

目的:研究Prucalopride对胶质瘤U251细胞增殖、自噬、凋亡的影响,并探讨其相关信号通路。方法:通过CCK8检测细胞增殖的变化;Transwell检测迁移和侵袭的变化;细胞流式实验、Western blot检测细胞凋亡的变化;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1、p62的表达;AKT/mTOR通路相关蛋白的变化。结果:CCK8显示Prucalopride显著抑制U251细胞的增殖（P＜0.05）;Transwell侵袭实验显示Prucalopride可以抑制脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭（P＜0.05）;细胞流式实验显示Prucalopride促进U251细胞的凋亡（P＜0.05）,Prucalopride处理后细胞凋亡相关蛋白Bax、Active Caspase3水平升高,Bcl-2表达降低;自噬相关蛋LC3、Beclin1表达上调,p62表达下调;p-AKT蛋白和p-mTOR蛋白水平显著降低。结论:Prucalopride通过抑制AKT/mTOR信号通路激活自噬抑制U251细胞增殖和迁移,促进其凋亡。