CD8+T细胞耗竭发生和特征及其与肿瘤免疫治疗耐药的研究进展

免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitors,ICIs）是治疗多种肿瘤的重要手段,但耐药成为其最大难题。肿瘤免疫治疗耐药与肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）密切相关,TME中CD8⁺T细胞耗竭不仅持续性高表达抑制性受体（inhibitory receptors,IRs）,同时也是导致ICIs耐药的关键环节,靶向IRs为克服免疫治疗耐药提供了新思路。本文将重点对CD8⁺T细胞耗竭发生和特征及其与肿瘤免疫治疗耐药性相关的研究进行综述。     

肺腺癌浸润CD8+T细胞表达CD39的机制

目的：探讨肿瘤浸润CD8⁺T细胞表达CD39的可能机制。方法：通过TCGA数据库的肺腺癌(LUAD)组织及正常肺组织转录组数据分析CD39在LUAD组织和正常肺组织中的表达差异及其对患者预后的影响,分析CD39表达与T细胞浸润、激活的关系。用小鼠LUAD Lewis细胞建立小鼠皮下移植瘤模型,FCM检测淋巴结、脾脏以及移植瘤组织中CD8⁺CD39⁺T细胞。收集Lewis细胞培养上清液作为条件培养基(CCM),免疫磁珠法(MACS)分选CD8⁺T细胞、CD11b⁺细胞;在培养基中分别加入CCM、IL-6和采取非接触或接触培养方式进行培养,探索CD8⁺T细胞表达CD39的可能机制。结果：CD39在LUAD组织中呈低表达(P<0.01),其表达水平与LUAD患者OS、T细胞浸润和激活水平均呈正相关(P<0.05或P<0.001)。FCM检测结果显示,在移植瘤组织中CD8+CD39⁺T细胞的比例明显高于淋巴结及脾脏(P<...     

干细胞样CD8+ T细胞：肿瘤免疫疗法的新生力量

CD8+ T 细胞是抗肿瘤免疫应答的主要执行者。通过重塑CD8+ T 细胞杀伤肿瘤细胞的能力，免疫疗法已在抗肿瘤领域取得重大突破，但临床获益仅局限于部分患者和癌症类型。如何克服CD8+ T细胞功能障碍是肿瘤免疫疗法亟待解决的关键问题。近年来，多项研究揭示了CD8+ T细胞的干性调控机制，发现了干细胞样CD8+ T细胞具有自我更新和增殖能力，阐明了该细胞亚群在维持持续性肿瘤免疫治疗应答中的重要性。本文论述了干细胞样CD8+ T 细胞的分子与功能特征、CD8+ T 细胞干性的细胞内外影响因素，归纳总结了目前靶向CD8+ T细胞的干性重编程策略，进一步展望了靶向CD8+ T细胞干性程序来提高肿瘤免疫疗法疗效的思路和方法。     

食管鳞癌组织Snail与PDL-1和CD8+T表达及预后分析

目的 探讨食管鳞癌(ESCC)组织中Snail与细胞程序性死亡配体1(PDL-1)、CD8⁺T之间的相关性及预后观察。方法 收集222例2014-02-01-2015-12-30就诊于新乡医学院第一附属医院,手术后经病理确诊为ESCC的癌组织。应用免疫组织化学法检测Snail、PDL-1和CD8⁺T表达,Spearman相关分析三者的相关性,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox回归模型进行预后因素分析。结果 Spearman相关分析显示,Snail与PDL-1蛋白表达呈低度正相关,r=0.210,P=0.002;与CD8⁺T浸润呈低度负相关,r=-0.174,P=0.009。Cox单因素分析显示,远处转移(HR=4.060,95%CI为2.472～6.668,P<0.001)、G₂+G₃(HR=1.562,95%CI为1.080～2.260,P=0.018)、T₃+T₄(HR=2.053,95%CI为1.339～3.1...     

组织驻留CD8+T细胞在肿瘤中的研究进展

组织驻留记忆 T 细胞（ tissue-resident memory T cells，TRMs）作为一种特殊的记忆T细胞，在免疫应答中发挥着极其重要的作用。其特征是可表达归巢受体，从而具备驻留特性，因此能够驻留在外周组织器官中，当病原体侵袭时可以迅速反应。目前，TRMs（尤其是CD8+TRMs）与肿瘤的关系及其在抗肿瘤中的应用被愈加重视，一方面是CD8+TRMs可以通过分泌颗粒酶B、穿孔素和INF-γ等因子直接杀伤肿瘤细胞，另一方面一些抗肿瘤措施（如放化疗、免疫治疗等）可以使CD8+TRMs在肿瘤组织中富集，从而进一步提高治疗的效果。本文就CD8+TRMs的亚群分类、在肿瘤中如何调控形成以及其在肿瘤治疗中的作用等方面的研究进展进行综述。      

胆固醇代谢调控CD8+T细胞抗肿瘤作用的研究进展

CD8+T细胞又名细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),具有直接杀死病原体感染细胞和癌细胞的作用.然而,CD8+T细胞常常丧失其效应功能,继而限制肿瘤微环境中的抗肿瘤免疫,因此,如何重新激活CD8+T细胞的抗肿瘤效力是目前需要解决的问题.最近研究发现,胆固醇代谢在肿瘤中发挥重要作用...     

外周血CD8+T淋巴细胞数量与Ⅲ期结直肠癌患者术后无病生存期的关系

目的:探讨结直肠癌(colorectal cancer, CRC)患者外周血CD8⁺T淋巴细胞数量与术后无病生存期(disease-free survival, DFS)的关系。方法:选择2019-01-01至2021-12-31河北中石油中心医院临床分期为Ⅲ期的81例CRC患者为研究对象,入组患者均监测术前、术后首次辅助化疗前、术后辅助治疗结束三个节点的外周血CD8⁺T淋巴细胞数量,并统计临床、病理资料。随访至2022-12-31,记录患者手术时间、出现局部复发或远处转移的时间或死亡时间。采用二元Logistic回归模型进行多因素分析,筛选入组患者肿瘤进展的独立危险因素;依据入组患者三个节点CD8⁺T淋巴数量变化特点进行分组,采用Kaplan-Meier法绘制各组的生存曲线。结果:多因素分析显示pT₄(OR=11.647,95%CI为2.255～60.166,P=0.003),CEA数值(OR=1.044,95%CI为1.010～1.079,P=0.011)是入组患者肿瘤进展的独立危险因素;术后首...     

癌相关CD8+记忆T细胞在过继免疫治疗中的应用

针对癌症患者的过继免疫治疗是临床肿瘤治疗研究中的热点话题。癌症患者体内天然存在着能够对恶性肿瘤细胞进行识别、攻击和杀伤的癌相关CD8+记忆T细胞,它们具有对少量肿瘤细胞产生快速免疫应答和持续长期发挥抗癌作用的优点。癌相关CD8+记忆T细胞主要存在于骨髓中,如将骨髓中的这部分T细胞分离出来,并以特定手段激活并回输体内,将可发挥强大的免疫治疗作用。为了帮助临床癌症治疗研究者们更加清晰地认识癌相关CD8+记忆T细胞的生物学特性、肿瘤杀伤能力和临床治疗效果,并妥善处理实际应用过程中遇到的各种问题,本文对近年有关癌相关CD8+记忆T细胞在肿瘤免疫治疗中应用的研究进展加以介绍。     

抗Gr-1抗体降低肺癌小鼠髓源性抑制细胞对CD8+T细胞数量和肿瘤生长的影响

目的探讨通过抗Gr-1抗体降低Lewis肺癌小鼠髓源性抑制细胞(MDSC)对肿瘤生长及对外周血、脾脏、肿瘤组织中CD8+ T细胞数量的影响。方法构建小鼠肺癌Lewis细胞荷瘤小鼠模型。每48 h腹腔注射抗Gr-1抗体降低MDSC(观察组), 以注射等量0.7% NaCl溶液的模型小鼠为对照组, 持续3周。接瘤第7、14、21天分别处死3只小鼠, 应用流式细胞仪动态监测各时间点小鼠外周血、脾脏、肿瘤组织中MDSC、CD8+ T细胞的比例;接瘤7 d后, 定时测量小鼠皮下肿瘤的长径、短径, 监测两组肿瘤大小。结果两组肿瘤体积均随时间延长而增长, 其中观察组上升趋势相对缓慢, 第20天观察组肿瘤体积较对照组小[(1 978±315)mm3比(1 356±432)mm3, P=0.001]。接瘤后第7、14、21天, 观察组小鼠外周血、脾脏、肿瘤组织中MDSC和CD8+ T细胞比例均低于对照组。两组小鼠外周血中MDSC比例随时间推移均呈上升趋势, 其中观察组小鼠MDSC比例上升趋势较对照组缓慢;两组外周血中CD8+ T细胞比例在第7天至第14天均呈现上升趋势, 且观察组上升趋势更明显, 第14...     

肿瘤浸润性辅助性T细胞9细胞对胃癌患者CD8+T细胞抗肿瘤活性的调控作用

目的探讨辅助性T细胞9(Th9)细胞和白细胞介素9(IL-9)在胃癌患者中的水平, 评估Th9/IL-9对胃癌患者抗肿瘤免疫应答的调控作用。方法纳入2018年10月至2019年8月在新乡医学院第一附属医院行手术治疗的胃癌患者34例, 同期健康体检者20例。采集外周血, 分离血浆和外周血单个核细胞(PBMCs), 从手术切除的胃癌组织分离肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)和自体胃癌细胞, 分选PBMCs和TILs中的CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-9水平, 流式细胞术检测PBMCs和TILs中CD3+CD4+IL-9+Th9细胞比例, 实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-9和转录因子富嘌呤核酸结合蛋白1(PU.1) mRNA的相对表达量。以重组人IL-9刺激胃癌患者PBMCs和TILs, 采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖, Western blot法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)和STAT6磷酸化, ELISA法检测细胞因子分泌。以重组人IL-9刺激胃癌患者TILs分选的CD8+ T...     

结直肠腺癌侵袭性前缘的生长方式及肿瘤细胞巢出芽和CD8+T淋巴细胞浸润与其临床病理学特征的关系*

  目的  观察结直肠腺癌侵袭性前缘的生长方式,计数肿瘤细胞巢出芽的数量和CD8+T淋巴细胞浸润的数量,探讨以上参数与相关临床病理学特征的关系。  方法  收集2008年1月至2019年12月在河西学院附属张掖人民医院院行手术切除的126例原发性结直肠腺癌患者的石蜡包埋样本,运用免疫组织化学方法对126例病理切片进行染色,广谱CK用于标记肿瘤细胞巢出芽,CD8标记T淋巴细胞进行评估。  结果  结直肠腺癌侵袭性前缘的浸润性生长方式,高级别肿瘤细胞巢出芽与肿瘤大小病理分期（pT）（P=0.029,P < 0.001）,淋巴结转移病理分期（pN）（P < 0.001,P=0.023）及脉管浸润相关（P < 0.001,P < 0.001）;高级别肿瘤细胞巢出芽与肿瘤组织学低分化程度相关（P < 0.001）;高级别CD8+T淋巴细胞浸润可能与阻碍肿瘤细胞淋巴结转移相关（P=0.050）。  结论  结直肠腺癌侵袭性前缘的浸润性生长方式,高级别肿瘤细胞巢出芽与患者预后相关,两种组织学形态特征易于观察,可重复性好,借助于广谱CK免疫组织化学染色,可作为判断患者预后的指征。      

Cytotoxic CD8+ T cells in cancer and cancer immunotherapy

The functions of, and interactions between, the innate and adaptive immune systems are vital for anticancer immunity. Cytotoxic T cells expressing cell-surface CD8 are the most powerful effectors in the anticancer immune response and form the backbone of current successful cancer immunotherapies. Immune-checkpoint inhibitors are designed to target immune-inhibitory receptors that function to regulate the immune response, whereas adoptive cell-transfer therapies use CD8⁺ T cells with genetically modified receptors—chimaeric antigen receptors—to specify and enhance CD8⁺ T-cell functionality. New generations of cytotoxic T cells with genetically modified or synthetic receptors are being developed and evaluated in clinical trials. Furthermore, combinatory regimens might optimise treatment effects and reduce adverse events. This review summarises advances in research on the most prominent immune effectors in cancer and cancer immunotherapy, cytotoxic T cells, and discusses possible implications for future cancer treatment.Subject terms: Checkpoint signalling, Cancer immunotherapy, Checkpoint signalling, Cancer immunotherapy, Cancer microenvironment     

A2aR在弥漫大B细胞淋巴瘤组织和CD8+T细胞上的表达和预后价值的研究

  目的  探讨A2aR在弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）组织和CD8+T细胞上的表达及与患者临床病理特征和预后的相关性。  方法  回顾性分析2010年1月1日至2015年12月31日就诊于天津医科大学肿瘤医院初治的72例DLBCL患者临床病理资料。采用多重免疫组织化学法检测组织中A2aR、CD8的表达,采用χ2检验分析其与患者临床病理特征的相关性,应用Kaplan-Meier法进行生存资料分析。  结果  DLBCL组织中A2aR总表达阳性率为41.7%（30/72）,与患者分期、IPI评分、Ki-67、β2-MG、B症状相关（P < 0.05）;A2aR+组患者总生存期（overall survival,OS）较A2aR-组差（P < 0.05）。DLBCL组织中CD8+T细胞上A2aR表达阳性率为22.2%（16/58）,与患者分期、IPI评分、Ki-67、β2-MG、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、结外受累数目、B症状相关（P < 0.05）;A2aR+CD8+组患者OS较A2aR-CD8+组显著更差（P < 0.001）。  结论  A2aR总表达及CD8+T细胞上A2aR表达与DLBCL患者临床病理特征及预后密切相关。检测CD8+T细胞上A2aR表达可更好地评价DLBCL患者的预后。      

卵巢癌患者腹水及外周血CD4+ CD25+调节性T细胞含量及抑制功能的研究

  目的   研究卵巢癌患者腹水及外周血单个核细胞（PBMC）中CD4+ CD25+调节性T细胞（Treg）的表达差异、免疫调节功能及其含量与化疗、复发的关系,探究其在卵巢癌腹腔微环境中发挥免疫调节的具体作用及意义。   方法   采用流式细胞术分别检测27例卵巢癌患者腹水及28例卵巢癌患者PBMC中CD4+ CD25+/CD4+ T细胞百分比,并根据收集标本时患者临床特征进行分组,比较处于初治（PD）、化疗后（AC）及复发（RD）3个阶段卵巢癌患者腹水及PBMC中Treg含量的差异。应用免疫磁珠分选卵巢癌患者腹水及外周血Treg,与经羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidylester,CFSE）标记的自CD4+CD25- T细胞按不同比例（0:1,1:1,1:2及1:4）共培养,检测Treg免疫抑制功能。   结果   卵巢癌患者腹水中CD4+ CD25+/CD4+ T细胞百分比（28.25±14.06）%较PBMC中（14.6±4.74）%显著增高（P < 0.000 1）。卵巢癌患者PD、AC及RD 3个阶段腹水及PBMC中Treg含量均显示为AC>RD>PD,且均有显著统计学意义（P < 0.000 1）。体外实验结果显示,卵巢癌患者腹水中CD4+ CD25+ Treg可有效抑制CFSE标记的自体CD4+ CD25- T细胞增殖,且抑制功能较外周血显著增强（P < 0.01）。   结论   卵巢癌腹腔微环境中存在CD4+ CD25+Treg,且其含量及免疫抑制功能较外周血PBMC显著增高,提示卵巢癌腹腔内更易发生免疫逃逸作用。卵巢癌患者化疗后及复发阶段腹水及PBMC中CD4+ CD25+ Treg含量均大于原发阶段,提示化疗可能促进卵巢癌患者体内Treg含量升高,而Treg升高可能参与促进肿瘤复发。       

CD34^＋细胞的体外定向诱导分化

目的：研究CD34^ 细胞的体外定向诱导分化。方法：利用吸附单克隆抗体-磁珠分离系统（MACS）从外周血中分离CD34^ 细胞,加入白细胞介素-3（IL-3）、粒细胞-单核巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）及G-CSF培养3天及7天后取出用于细胞总数,CD34^ 细胞比例及粒系祖细胞检测。结果：CD34^ 细胞在IL-3、G-CSF、GM-CSF刺激下3天细胞总数扩增51倍,7天细胞总数扩增110倍,IL-3、G-CSF、CM-CSF可使粒=单核巨噬系祖细胞（CFU-GM）在3天和7天时分别比对照组增加8.44wuk t 35.08倍。结论：含有IL-3、G-CSF、GM-CSF的细胞因子组合。可诱导CD34^ 细胞定向生成大量的粒系祖细胞和成熟粒细胞,输注后将可使患者白细胞得以迅速恢复,减少感染的发生率。     

Generation of dendritic cells from positively selected CD14+ monocytes for anti-tumor immunotherapy

Peripheral blood CD14+ monocytes from multiple myeloma (MM) patients can be induced to differentiate into fully functional, mature, CD83+ dendritic cells (DCs) which are highly efficient in priming autologous T lymphocytes in response to the patient-specific tumor idiotype (Id). We have recently scaled up our manufacturing protocol for application in a phase I-II clinical trial of anti-Id vaccination with DCs in MM patients. Elegible patients received a series of by-monthly immunizations consisting of three subcutaneous and two intravenous injections of Id-keyhole limpet hemocyanin (KLH)-pulsed DCs (5 x -, 10 x -, 50 x 10(6) cells and 10 x -, 50 x 10(6) cells, respectively). To generate DCs, monocytes were labeled with clinical grade anti-CD14 conjugates and positively selected by immunomagnetic separation. Cells were then cultured, according to Good Manufacturing Practice guidelines, in FCS-free medium in cell culture bags, and differentiated to DCs with GM-CSF plus IL-4 followed by TNF-alpha or, more recently, by a cocktail of IL-1beta, IL-6, TNF-alpha and prostaglandin-E2. Before maturation, Mo-DCs were pulsed with the autologous Id as whole protein or Id (VDJ)-derived HLA class I restricted peptides. Ten MM patients, who had been treated with two courses of high-dose chemotherapy with peripheral blood stem cell support, entered into the clinical study. CD14+ monocytes were enriched from 16.1+/-5.7% to 95.5+/-3.2% (recovery 67.9+/-15%, viability > 97%). After cell culture, phenotypic analysis showed that 89.6+/-6.6% of the cells were mature DCs. We obtained 2.89+/-1 x 10(8) DCs/leukapheresis which represented 24.5+/-9% of the initial number of CD14+ cells. Notably, the cytokine cocktail induced a significantly higher percentage and yield (31+/-10.9 of initial CD14+ cells) of DCs than TNF-alpha alone, secretion of larger amounts of IL-12, potent stimulatory activity on allogeneic and autologous T cells. Storage in liquid nitrogen did not modify the phenotype or functional characteristics of pre-loaded DCs. The recovery of thawed, viable DCs, was 78+/-10%. Thus, positive selection of CD14+ monocytes allows the generation of a uniform population of mature pre-loaded DCs which can be cryopreserved with no effects on phenotype and function and are suitable for clinical trials. Based on these results, a DCs-based phase II trial of anti-Id vaccination with VDJ-derived HLA class I-restricted peptides and KLH is underway for lymphoma patients.     

多发性骨髓瘤患者外周血CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞数量及凋亡相关蛋白水平

  目的  探讨外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）治疗中的作用。  方法  采用流式细胞术检测30例初治、27例完全缓解（CR）MM患者以及25例健康成年人外周血CD4+ T细胞、Tregs数量,并检测Tregs表面功能分子CTLA-4及其凋亡相关蛋白CD95、bcl-2、Caspase3的表达,分析其与临床特点及疗效的关系。  结果  初治组CD4+ T细胞占外周血单个核细胞的比例低于对照组（P < 0.05）,Ⅲ期初治患者CD4+ T细胞明显低于Ⅰ、Ⅱ期患者（P < 0.05）;初治MM组Tregs占CD4+ T细胞比例显著高于CR组和正常对照组（P < 0.05）,初治Ⅲ期患者Tregs占CD4+ T细胞比例明显高于初治Ⅰ、Ⅱ期患者（P < 0.05）。初治组、CR组和正常对照组Tregs的表面CD95表达无统计学差异（P > 0.05）,初治组CTLA-4表达高于CR组（P < 0.05）和对照组（P < 0.01）,CR患者CTLA-4高于对照组（P < 0.05）,初治组Tregs胞浆内bcl-2水平高于CR组（P < 0.05）和对照组（P < 0.01）,CR组高于对照组（P < 0.05）,初治组和CR组Tregs胞内Caspase3的水平低于对照组（P < 0.05）。初治组Tregs占CD4+比例与骨髓瘤数量呈正相关（P < 0.05）,且Tregs比例与治疗前后浆细胞下降值成反比（r=0.735,P < 0.05）。  结论  MM患者外周血Tregs水平升高,与瘤细胞负荷及疾病的分期呈正相关,与疗效呈负相关;Tregs水平增高与其抗凋亡能力增强有关。