针刺对去势雌兔干眼症模型眼表粘蛋白MUC5AC、MUC19表达的影响

目的 研究针刺对更年期干眼症模型去势雌兔眼表蛋白MUC5AC和MUC19的表达影响,为更年期干眼症治疗提供依据。 方法 选择健康成年雌兔45只,将其随机分为对照组、模型组、针刺组(每组15只),模型组和针刺组行双侧卵巢切除建立干眼模型,2周后对针刺组采取针刺治疗,分别于去势前、2周后、3周后、6周后行Schirmer试验、泪膜破裂时间检测、荧光染色评分、虎红染色评分、免疫组化染色检测MUC5AC的MUC19表达水平。 结果 2周和3周时模型组和针刺组Shirmer值、BUT时间、荧光染色评分、虎红染色评分值与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);3周时针刺组和模型组的Shirmer值和虎红染色评分差异有统计学意义(P<0.05);6周时模型组的Shirmer值、BUT时间、荧光染色评分、虎红染色评分值与对照组和针刺组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。实验3周后针刺组MUC5AC和MUC19表达水平较模型组显著升高(P<0.05),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);6周后针刺组黏蛋白表达水平继续升高,明显高于模型组(P<0.05)。 结论 针刺治疗可提高眼表黏蛋白的表达,提示其在干眼症治疗中具有应用价值。      

安贺拉滴眼液治疗兔干眼症的免疫病理学研究

目的 观察安贺拉滴眼液应用于兔干眼症治疗的免疫病理学变化,初步探讨安贺拉滴眼液治疗干眼症的可能机制.方法 新西兰白兔20只,制作碱烧伤干眼模型,随机分为对照组和安贺拉组,分别滴生理盐水和安贺拉滴眼液.用药4周后应用印迹细胞学和免疫病理学方法检测结膜杯状细胞密度、MUC5AC阳性细胞率和炎性细胞浸润密度.结果 对照组结膜炎性细胞浸润密度高于安贺拉组,安贺拉组杯状细胞密度和MUC5AC阳性细胞率均大于对照组(P＜0.05).结论 安贺拉滴眼液可以降低兔眼表的炎症反应,促进杯状细胞增殖,在干眼症治疗方面具有一定的应用前景.     

辛伐他汀对丙烯醛暴露大鼠NF-kB表达的影响

目的 通过检测辛伐他汀对大鼠肺组织中NF活性的影响,了解其对减少丙烯醛引起的气道黏液高分泌的可能机制.方法 大鼠雾化吸入丙烯醛建立气道黏液高分泌模型.干预组在雾化吸入丙烯醛同时用不同浓度辛伐他汀灌胃.蛋白印迹(western blot)检测MUC5AC蛋白的表达,凝胶阻滞迁移分析方法(EMSA)检测NF-<,k>B的活性.结果 丙烯醛吸入刺激后12天,与正常对照组相比,MUC5AC蛋白、NF-<,k>B活性增加.辛伐他汀干预后,与丙烯醛组相比,MUC5AC蛋白、NF-<,k>B活性降低,应用甲羟戊酸后可以部分抵消辛伐他汀的作用,使MUC5AC蛋白产生、NF-<,k>B活性增加.结论 辛伐他汀可抑制丙烯醛所致气道粘液高分泌,其部分机制可能通过甲羟戊酸途径抑制NF-<,k>B活性.     

辛伐他汀对丙烯醛暴露大鼠NF-κB表达的影响

目的通过检测辛伐他汀对大鼠肺组织中NF活性的影响,了解其对减少丙烯醛引起的气道黏液高分泌的可能机制。方法大鼠雾化吸入丙烯醛建立气道黏液高分泌模型。干预组在雾化吸入丙烯醛同时用不同浓度辛伐他汀灌胃。蛋白印迹（western blot）检测MUC5AC蛋白的表达,凝胶阻滞迁移分析方法（EMSA）检测NF-κB的活性。结果丙烯醛吸入刺激后12天,与正常对照组相比,MUC5AC蛋白、NF-κB活性增加。辛伐他汀干预后,与丙烯醛组相比,MUC5AC蛋白、NF-κB活性降低,应用甲羟戊酸后可以部分抵消辛伐他汀的作用,使MUC5AC蛋白产生、NF-κB活性增加。结论辛伐他汀可抑制丙烯醛所致气道粘液高分泌,其部分机制可能通过甲羟戊酸途径抑制NF-κB活性。     

四妙勇安汤中甘草苷、金丝桃苷和木犀草苷提取率的拆方分析

目的研究四妙勇安汤的配伍组合对甘草苷、金丝桃苷和木犀草苷提取率的影响。方法将四妙勇安汤拆方,采用HPLC法,SunfireTMC18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸等梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长276 nm(甘草苷)、350 nm(金丝桃苷、木犀草苷),柱温35℃,分析各组合样品中甘草苷、金丝桃苷和木犀草苷含量并计算提取率。结果与单味药相比,配伍药味越多,甘草苷、金丝桃苷和木犀草苷的提取率越高,全方合煎后,3种成分提取率均达到最高。结论配伍可以明显提高四妙勇安汤中甘草苷、金丝桃苷和木犀草苷的提取率,从化学成分提取率角度验证了复方配伍的科学性和合理性,阐明了中药复方配伍的科学内涵。     

参芪补肺方对慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠Nrf2和MUC5AC表达的影响

目的探讨参芪补肺方对大鼠肺组织Nrf2、MUC5AC的m RNA及蛋白表达水平的影响。方法将Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、中药组、可比特组。参照相关建模实验方法建立COPD肺肾气虚型大鼠模型,采用烟熏合脂多糖(LPS)气管滴入建立COPD大鼠模型,空白对照组大鼠不做任何干预,其余三组分别给予生理盐水灌胃、参芪补肺方中药汤剂灌胃、可比特雾化吸入,连续30天。实验后处死大鼠提取肺组织,用PCR法检测Nrf2和MUC5AC的m RNA表达量,用western-blot检测Nrf2和MUC5AC蛋白的表达情况。结果与空白对照组相比,模型对照组大鼠肺组织Nrf2和MUC5AC的m RNA及蛋白表达水平明显升高(P0.05),中药组和可比特组Nrf2和MUC5AC的表达水平较模型对照组显著降低(P0.05),中药组和可比特组比较无差异(P0.05)。结论参芪补肺方能够影响大鼠肺组织中的Nrf2、MUC5AC的m RNA及蛋白表达水平,从而发挥对COPD大鼠模型的抗氧化和抗粘液高分泌机制的调节作用。     

糖皮质激素激动剂Mapracorat对兔干眼症的疗效观察

目的：探讨糖皮质激素激动剂Mapracorat对兔蒸发过强型干眼症的疗效及兔泪液中白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法：健康成年雌性新西兰白兔（16只／组）,经灼烧封闭睑板腺开口建立蒸发过强型干眼症模型,并经6周观察确认模型建立成功后随机分为两组：0．1％地塞米松（0．1％DEX）治疗组和0．5％Mapracorat治疗组,分别给予0．1％地塞米松磷酸钠溶液滴眼（1滴／次,3次／d）,0．59／6Mapracorat溶液滴眼（1滴／次,3次／d）。给药后分别在1、3、5周时间点进行裂隙灯下观察两组兔角膜形态,并进行Schirmer I实验、BUT时间测定、角膜荧光素染色评分,同时采集兔泪液进行IL-6、TNF-α的ELISA检测。结果：两组实验兔的蒸发过强型干眼症模型均建立成功,在模型第6周Schirmer I实验棉条湿润长度〈10ram／5min,BUT时间〈10S,角膜荧光素染色评分明显增加。0．5％Mapracorat治疗组与0．1％地塞米松治疗组比较,自给予开始后1、3、5周检测均表现出显著性优势,能明显增加Schirmer I实验棉条湿润长度,延长BUT时间,降低角膜荧光素染色评分（P〈0．05）。泪液中IL-6、TNF-α含量在干眼症模型中明显高于正常基线水平,0．1％地塞米松和0．5％Mapracorat均能有效降低泪液中IL-1、TNF-α含量,且0．5％Mapracorat表现出更强的降低效果（P〈0．05）。结论：Mapracorat可明显减轻蒸发过强型兔干眼症状,其机制可能与抑制眼表的炎性因子IL-6和TNF-α表达从而减轻炎症反应有关。     

吉非替尼在丙烯醛诱导气道黏液高分泌中的作用

目的研究表皮生长因子酪氨酸受体抑制剂（EGFR-TKI）——吉非替尼（gefitinib）在丙烯醛诱导气道黏液高分泌中的作用。方法采用丙烯醛诱导气道黏液高分泌建立大鼠模型，将大鼠分为正常对照组（A组，不予以任何干预），模型组（B组，丙烯醛雾化吸入），药物干预组（C、D、E组，在丙烯醛雾化前30min，分别以10mg／kg、20mg／kg、30mg／kg的吉非替尼灌胃），药物对照组（F组，生理盐水雾化前30min，以30mg／kg吉非替尼灌胃），每组6只大鼠。上述处理持续3周后处死实验动物并取其肺组织，分别进行RT-PCR检测黏蛋白MUC5AC mRNA的表达，免疫组化检测气道MUC5AC和EGFR的蛋白表达，阿尔辛蓝-过碘酸雪夫氏染色（AB-PAS）检测杯状细胞数目。结果模型组大鼠肺组织MUC5AC、EGFR表达增强，杯状细胞数增加；吉非替尼对丙烯醛引起的MUC5AC表达、杯状细胞数增加均具有抑制作用，随着浓度的增加，抑制作用加强；吉非替尼对EGFR信号通路中EGFR蛋白表达具有抑制作用。结论丙烯醛活化EGFR使MUC5AC过度表达，吉非替尼通过对EGFR信号通路的调节，在气道黏液高分泌中具有保护作用。     

金银花和山银花UPLC特征图谱-化学成分模式识别方法研究

目的 建立超高效液相色谱（UPLC）特征图谱-化学模式识别金银花和山银花的差异性,为金银花和山银花的鉴定提供新的鉴别手段。方法 以70%甲醇超声提取金银花和山银花,特征图谱及含量测定利用同一液相色谱条件：乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,同时对新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、木犀草苷、芦丁、金丝桃苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C等9种化学成分的色谱峰进行指认和含量测定,并采用SMICA14.1软件进行数据处理、聚类分析和主成分分析。结果 建立的金银花UPLC特征图谱中指认了金银花16个共有峰,山银花15个共有峰,聚类分析和主成分分析均可将二者区分开来。二者差异性成分为金丝桃苷、木犀草苷和新绿原酸。结论 UPLC特征图谱-化学成分模式识别方法能够全面、有效、直观地反映出金银花和山银花的差异,为金银花及其伪品的鉴别提供新的途径。     

针药结合对兔干眼模型角膜及泪腺形态学的影响

目的 评估电针结合润目灵颗粒对水样缺乏性干眼模型角膜及泪腺组织的影响。方法 60只健康3~4月龄新西兰大白兔随机分为6组（空白对照组、模型组、西药组、中药组、电针组及针药组, 分别以A,B,C,D,E和F组表示）,每组10只。A组不作处理;B组双眼滴1%硫酸阿托品滴眼液进行造模,每日4次,直至实验结束;C,D,E和F组实验兔同模型组一样双眼滴1%硫酸阿托品滴眼液,3d后（即实验第4天,干眼实验动物模型制作成功）开始,分别用毛果芸香碱滴眼液、润目灵颗粒灌胃、电针以及电针加润目灵颗粒对其治疗,同时双眼滴1%硫酸阿托品滴眼液,直到实验结束。不同时段分别观察各组泪液分泌及第17天角膜、泪腺形态学的改变。结果 在实验第10天、17天,C,D,E和F组兔的泪液分泌量均显著高于模型组（P<0.05）。F组泪腺胞浆饱满丰富及角膜层次分明、排列有序最接近于空白对照组。结论 电针和中药润目灵颗粒可以最大程度的促进泪液分泌,减少泪腺和角膜上皮损伤及其局部炎症反应。电针及中药润目灵颗粒结合比单纯电针及单纯中药治疗干眼效果更好。      

MUC5AC EXPRESSION UP-REGULATION GOBLET CELL HYPERPLASIA IN THE AIRWAY OF PATIENTS WITH CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE

Objective To determine the number of goblet cells, the change of MUC5AC expression in chronic obstructive pul monary disease (COPD) patients and the relationship of smoking with goblet cell, MUC5AC, and lung function. Methods Eighteen patients undergoing lung resections for a solitary peripheral carcinoma were classified by lung function as having COPD. Twenty patients with normal lung function served as the control group. Normal lobe bronchioles far away from the lesion site were taken for paraffin section. Goblet cells were identified by AB/PAS staining and the ex pressionof MUC5AC in the paraffin's section was tested by immunohistochemistry. Results Goblet cell hyperplasia was observed in the COPD group. The positive rate of goblet cell in COPD group (0.20% ± 0.10%) was significantly higher than that in the normal lung function group (0.13% ± 0.06%, P ＜ 0.05). The positive rate of MUC5AC expression in the COPD group (0.27% ± 0.09%) was higher than that in the normal lung function group (0.20% ± 0.10%, P ＜0.05).The positive rate of goblet cell in smokers (27.93% ± 9.00%) of the COPD group and normal lung function group was higher than that in non-smokers (17.70% ± 9.37%, P ＜ 0.05), while MUC5AC expression had no significant difference between smokers and non-smokers (17.88% ± 6.44% and 10.88% ± 7.10%, respectively). Conclusion For COPD patients with declined lung function, there were goblet cell hyperplasia and increased expres sion of MUC5AC. MUC5AC expression up-regulation may due to goblet cell hyperplasia. Smoking may be an important factor for goblet cell hyperplasia.     

复发性翼状胬肉中MUC5AC的表达与泪膜稳定性的相关研究

目的：检测粘蛋白MUC5AC在复发性翼状胬肉组织中的表达水平,初步探讨粘蛋白MUC5AC与翼状胬肉术后泪膜稳定性的相关性。方法：应用SP免疫组织化学染色法检测5例正常结膜组织、6例原发性翼状胬肉组织及22例复发性翼状胬肉组织中粘蛋白MUC5AC的免疫学定位及表达,所有病例术前均检查泪膜破裂时间（BUT）、泪液分泌（Schirmer）试验,分析MUC5AC在复发性翼状胬肉中的表达与BUT、Schirmer实验的相关性。结果：正常结膜组织、原发性翼状胬肉组织及复发性翼状胬肉组织的Schirmer试验、BUT组间差异有统计学意义,P〈0.05;MUC5AC在正常结膜组织、原发性翼状胬肉组织及复发性翼状胬肉组织的表达组间差异有统计学意义,P〈0.05;复发性翼状胬肉组MUC5AC阳性细胞计数与正常结膜组比较差异有统计学意义,P〈0.05;Spearman相关分析,MUC5AC的表达与BUT呈负相关;r=0.616。结论：粘蛋白MUC5AC在复发性翼状胬肉中高表达与翼状胬肉术后泪膜稳定性下降有关。     

3种不同翼状胬肉术后干眼症的临床观察

目的  通过评估翼状胬肉术后干眼症的发生情况及严重程度,寻找一种降低术后干眼发生的最佳手术方式。方法  将翼状胬肉120例120只眼随机分为A、B及C 3组,每组各40眼。A组采用翼状胬肉切除+自体角膜缘干细胞移植术;B组采用翼状胬肉切除+羊膜移植术;C组采用翼状胬肉切除+自体角膜缘干细胞联合羊膜移植术。术后1周内每天在裂隙灯显微镜下观察结膜和角膜创缘的愈合情况、移植片的生长情况,有无感染,角膜上皮修复情况及角膜新生血管生长情况等。术后1、6和12个月从Schirmer试验、泪液膜破裂时间及角膜荧光着色来观察胬肉术后干眼症的发生情况及严重程度。结果  A、B、C 3组在术后1、6和12个月泪液分泌（Schirmerl）试验差异无统计学意义（P >0.05）。术后1个月C组泪膜破裂时间长于A和B组,差异有统计学意义（P <0.05）,且A、B组之间比较差异无统计学意义（P >0.05）;术后1个月C组角膜荧光染色分值低于A、B组,差异有统计学意义（P <0.05）,且A、B组之间比较差异无统计学意义（P >0.05）;A、B、C 3组术后6和12个月泪液膜破裂时间及角膜荧光染色分值的差异无统计学意义（P >0.05）。结论  翼状胬肉切除+自体角膜缘干细胞联合羊膜移植术治疗翼状胬肉较翼状胬肉切除+羊膜移植术及翼状胬肉切除+自体角膜缘干细胞移植术在术后早期可保持更好的泪膜稳定性,但3种手术方式术后远期干眼症的发生情况及严重程度相当,应该根据患者情况决定手术方式。

     

中性粒细胞弹力蛋白酶引起黏蛋白5AC高表达的信号转导机制

目的研究中性粒细胞弹力蛋白酶（NE）通过表皮生长因子受体（EGFR）引起黏蛋白（MUC）5AC高表达的上游信号通路。方法培养人气道BEAS@B上皮细胞,给予NE刺激,以肿瘤坏死因子转换酶抑制剂-1（TAPI-1）及活性氧（ROS）清除剂DMTU为干预因素。RT-PCR检测干预前后细胞中MUCSACmRNA含量;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测培养上清中MUCSAC、可溶性转化生长因子（TGF）-α蛋白含量;Westem印迹分析磷酸化表皮生长因子受体（P-EGFR）蛋白水平。结果NE刺激后引起MUCSAC基因转录和蛋白表达水平明显高于未给予NE刺激的对照组（P〈0．01）,同时伴随可溶性TGF-α及p-EGFR蛋白水平的增高,与对照组相比,差异有统计学意义（均P〈0．01）;加入浓度为20umol/L的肿瘤坏死因子转换酶抑制剂TAPI-1后可明显下调上述指标的表达水平（均P〈0．01）,DMTU也同样降低了MUC5AC的基因转录、产物水平以及可溶性TGF-α蛋白相对含量,与单纯NE刺激组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）,但对单纯外源性TGF-α刺激组引起的MUCSAC基因转录和蛋白合成增加无明显作用（均P〉0．05）。结论NE能刺激细胞产生ROS,再活化肿瘤坏死因子转换酶（TACE）引起黏蛋白产生的增多,组成EGFR通路上游的主要信号分子,故ROS／TACE／TGF-α前体／EGFR转导途经是NE引起气道黏液高分泌的重要机制。     

奈帕芬胺对角膜组织中前列腺素E2的作用研究

目的通过复制兔眼前节缺血（ASI）模型,检测模型角膜中前列腺素E2（PGE2）的表达,探讨奈帕芬胺在角膜组织中对PGE2 的抑制作用。方法将54 只已排除眼疾的健康雄性纯种大耳白兔随机分成对照组（18 只兔,36 只眼）和手术组（36 只兔,72 只眼）。手术组36 只兔的左眼（36 只眼）为缺血组,右眼（36 只眼）为治疗组。不同时间在裂隙灯显微镜下观察各组角膜的变化,然后取角膜做病理学检查和免疫组织化学检查,观察各时间PGE2 在角膜中的表达。结果缺血组各时间点PGE2 表达增高（p <0.05）,治疗组PGE2 表达较缺血组下降（p <0.05）。结论在ASI 的发病过程中,PGE2 发挥重要作用,奈帕芬胺在角膜组织中可有效抑制PGE2。     

兔眼碱烧伤后VEGF的表达与角膜新生血管的关系探讨

目的:研究兔眼碱烧伤后角膜血管内皮生长因子(VEGF)的表达与角膜新生血管(CNV)的关系。方法:56只兔随机分成实验组A、实验组B、实验组C及对照组。实验组用N aOH碱烧伤法诱导CNV模型,按碱烧伤后24h、3d、1周、2周、3周、4周,2月、6月处死兔取出角膜,进行CNV的形态学检查及免疫组化法评价VEGF的表达。结果:实验组兔碱烧伤后1d开始出现CNV,2周达高峰;碱烧伤后1d出现VEGF表达,持续升高至碱烧伤后1周,随后表达水平开始下降。对照组中未出现CNV及VEGF不表达。结论:碱烧伤后兔眼VEGF的表达与CNV的形成有密切相关性,并发挥了作用。     

激素对哮喘小鼠气道黏液分泌作用的研究

目的研究糖皮质激素对小鼠哮喘模型气道黏液过度分泌的作用及机制。方法将24只 BALB/c 小鼠随机分为对照组、哮喘组和哮喘+地塞米松组,每组8只。各组小鼠于末次激发24 h 后进行麻醉,留取不同标本,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和嗜酸性粒细胞数,AB-PAS 染色了解气道杯状细胞变化,用 RT-PCR 和免疫组织化学染色分别检测肺组织黏蛋白基因MUC5AC mRNA 和蛋白、白细胞介素4(IL-4)mRNA。结果与对照组相比,哮喘组 BALF 嗜酸性粒细胞和气道杯状细胞均明显增多,而哮喘+地塞米松组明显减少;哮喘组肺组织 MUC5AC mRNA(0.5341±0.0303)和蛋白(0.1906±0.0008)、IL-4 mRNA(0.6265±0.0932)均较对照组(分别为0.1994±0.0128、0.1194±0.0007和0.2389±0.0289)明显增加(P 均<0.01),哮喘+地塞米松组(分别为0.2729±0.0345、0.1456±0.0003和0.2424±0.0260)均明显高于哮喘组(P 均<0.05),但哮喘+地塞米松组 IL-4 mRNA 和对照组差异无统计学意义(P>0.05),MUC5AC mRNA和蛋白较对照组均明显降低(P 均<0.01)。结论糖皮质激素可减轻哮喘小鼠肺组织炎症,并可能通过下调MUC5AC 和 IL-4表达在气道黏液过度分泌中起治疗作用。