荔枝核皂苷对糖调节受损大鼠胰腺组织氧化应激的改善作用及其机制

目的：研究荔枝核皂苷（SL）对糖调节受损（IGR）大鼠氧化应激及核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶1（HO-1）信号通路的作用,阐明其相关机制。方法：采用高脂饲料喂养制备IGR大鼠模型,随机分为模型组、二甲双胍组（0.20 g·kg^-1）、低剂量SL组（0.05 g·kg^-1）、中剂量SL组（0.10 g·kg^-1）和高剂量SL组（0.20 g·kg^-1）,同时设正常对照组,每组12只,连续给药6周。观察SL对实验大鼠糖脂代谢的影响,采用实时荧光定量（Real-time PCR）法检测大鼠胰腺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和HO-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠胰腺组织胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达水平,采用SOD和MDA试剂盒检测大鼠胰腺组织中SOD活性和MDA水平。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠空腹血糖（FBG）和血脂水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,胰腺组织中SOD活性和mRNA表达水平降低（P<0.01）,MDA水平和mRNA表达水平升高（P<0.01）,胞核和胞质中Nrf2蛋白表达水平和核转位率升高（P<0.01）,HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较,二甲双胍组和中、高剂量SL组大鼠FBG和血清甘油三酯（TG）水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,胰腺组织中SOD活性和mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,MDA水平和mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,胞质中Nrf2表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,胞核中Nrf2表达水平和核转位率升高（P<0.05或P<0.01）,HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。结论：SL具有改善糖脂代谢和增强抗氧化应激作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路、促进Nrf2核转位及增强下游抗氧化基因HO-1表达有关。     

ACE2基因通过调控Nrf2/HO-1通路改善肾缺血再灌注损伤

目的 探讨血管紧张素转化酶2(ACE2)对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞HK-2氧化应激、炎症、凋亡及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。 方法 将ACE2慢病毒转染HK-2细胞,按照实验需要分为常氧组(Control组)、缺氧复氧模型组(H/R组)、缺氧复氧转染阴性对照慢病毒组(H/R-NC组)和缺氧复氧转染ACE2慢病毒组(H/R-ACE2组)。细胞经H/R处理后,通过CCK-8法检测细胞活力;RT-PCR及ELISA法检测炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平;比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)表达水平;Western blotting法检测胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、Nrf2、HO-1的蛋白水平。采用Nrf2抑制剂ML385以及HO-1抑制剂SnPPIX抑制Nrf2/HO-1通路,Western blotting法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、Nrf2、HO-1的蛋白表达水平变化,比色法检测SOD和MDA表达变化。 结果 与Control组相比,H/R组细胞活力降低(t=7.58,P<0.001),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均增加(t_MDA=11.08,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=5.82,P_PCR-IL6<0.001;t_PCR-TNF-α=7.69,P_PCR-TNF-α<0.001;t_PCR-IL-1β=4.80,P_PCR-IL-1β=0.001;t_ELISA-IL-6=34.11,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=14.12,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=9.63,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=2.73,P_Caspase-3=0.026;t_Bax=27.75,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平下降(t_SOD=7.74,P_SOD<0.001;t_Bcl-2=75.49,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=11.41,P_ACE2<0.001)。与H/R组相比,H/R-ACE2组细胞活力增加(t=3.61,P=0.002),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均下降(t_MDA=6.15,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=3.34,P_PCR-IL-6=0.006;t_PCR-TNF-α=3.65,P_PCR-TNF-α=0.007;t_PCR-IL-1β=4.06,P_PCR-IL-1β=0.004;t_ELISA-IL-6=14.62,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=10.42,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=8.65,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=3.74,P_Caspase-3=0.006;t_Bax=30.52,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平增加(t_SOD=3.58,P_SOD=0.007;t_Bcl-2=63.86,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=58.72,P_ACE2<0.001),Nrf2/HO-1信号通路被激活蛋白水平增加(t_Nrf2=44.55,P_Nrf2<0.001;t_HO-1=14.19,P_HO-1<0.001)。然而ML385和SnPPIX处理会抑制ACE2基因过表达在H/R中HK-2细胞的保护作用(F_Bax=11.02,P_Bax=0.003;F_Bcl-2=21.48,P_Bcl-2<0.001;F_Caspase-3=20.80,P_Caspase-3<0.001;F_SOD=133.49,P_SOD<0.001;F_MDA=14.06,P_MDA=0.001)。 结论 ACE2在HK-2细胞缺氧复氧损伤中具有抑制氧化应激、调节炎症、改善凋亡的作用,Nrf2/HO-1信号通路发挥重要作用。     

芪参益气滴丸对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的：探讨芪参益气滴丸（QSYQ）对慢性心力衰竭（CHF）大鼠心肌细胞凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药对照组（6.75 mg·kg^-1·d^-1卡托普利）、低剂量（135 mg·kg^-1·d^-1）QSYQ组和高剂量（270 mg·kg^-1·d^-1）QSYQ组,每组12只。采用冠状动脉前降支结扎法建立CHF模型,造模成功后连续灌胃给药4周,超声心动图检测大鼠心功能,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标志法（TUNEL）检测大鼠心肌细胞凋亡率,比色法测定大鼠血清中乳酸脱氢酶（LDH）和超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）水平,流式细胞术检测大鼠心肌组织中活性氧（ROS）水平,Western blotting法检测大鼠心肌组织中凋亡相关蛋白和核因子E2相关因子2（Nrf2）及血红素氧化酶1（HO-1）蛋白表达水平。结果：与假手术组比较,模型组大鼠左室收缩末期内径（LVSD）和左室舒张末期内径（LVDD）明显增加（P<0.05）,左室射血分数（EF）和左室短轴缩短率（FS）明显降低（P<0.05）,棕黄色心肌细胞数明显增多（P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,血清中LDH活性及ROS和MDA水平明显升高（P<0.05）,SOD活性明显降低（P<0.05）,心肌组织中活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved-Caspase-3）和B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）表达水平明显升高（P<0.05）,Bcl-2、Nrf2和HO-1蛋白水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,高剂量QSYQ组和阳性药对照组大鼠LVSD和LVDD明显降低（P<0.05）,EF和FS明显升高（P<0.05）,棕黄色心肌细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,血清中LDH活性及ROS和MDA水平明显降低（P<0.05）,SOD活性明显升高（P<0.05）,心肌组织中Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,而低剂量QSYQ组大鼠上述各相关指标差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较,高剂量QSYQ组大鼠心肌组织中Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,阳性药对照组和低剂量QSYQ组大鼠心肌组织中Nrf2和HO-1蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：QSYQ可抑制CHF大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路、降低氧化损伤有关。     

人参糖肽的结构及其对Aβ25-35处理PC12细胞的抗凋亡作用

目的：研究人参糖肽的结构,探讨其对β淀粉样蛋白_25-35（Aβ_25-35）处理PC12细胞凋亡的保护作用,为开发人参抗阿尔茨海默病（AD）药物奠定理论基础。方法：采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）与Q ExactiveOrbitrap质谱联用分析人参糖肽结构。将鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞分为6组,加入含不同浓度（0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00 μmol·L^-1） Aβ_25-35的培养基,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定PC12细胞的存活率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和给药组,模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,给药组加入不同浓度（0.03、0.10、0.30和1.00 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基。采用CCK-8法测定PC12细胞的存活率,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI法测定人参糖肽和Aβ_25-35处理后PC12细胞的凋亡率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和人参糖肽给药组,模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,给药组加入不同浓度（0.10和0.30 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,采用流式细胞术测定不同细胞周期PC12细胞的百分比。结果：人参糖肽结构分析得到肽链为NLSHYHSGSS、糖基为N1-HexNAc,肽链为SGSSSSSSSEDDGMGR、糖基为S6-HexNAc等20多个人参糖肽结构。当Aβ_25-35浓度为50 μmol·L^-1时,PC12细胞存活率为（55.45±2.34）%;与空白对照组比较,不同浓度Aβ_25-35处理组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）。与空白对照组比较,模型组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）;与模型组比较,给药组细胞存活率明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,模型组PC12细胞凋亡率升高（P<0.01）;与模型组比较,给药组细胞凋亡率降低（P<0.05）。与空白对照组比较,模型组S期PC12细胞百分比升高（P<0.05）;与模型组比较,给药组S期PC12细胞百分比降低（P<0.05）。结论：利用质谱法分析得到人参糖肽结构。人参糖肽可有效抑制Aβ_25-35处理PC12细胞的凋亡,具有神经细胞保护作用,其抗凋亡活性作用可能与抑制细胞S期阻滞有关。     

MyD88抑制肽对LPS诱导BV2小胶质细胞极化状态的抑制作用及其机制

目的：观察髓样分化因子88（MyD88）抑制肽（MIP）对脂多糖（LPS）激活BV2小胶质细胞极化的影响,阐明其作用机制。方法：将对数生长期的BV2小胶质细胞分为对照组（不进行处理）、LPS组（给予1 mg·L^-1 LPS处理）和不同剂量MIP+LPS组（分别给予25、50和100μmol·L^-1 MIP预处理1 h后,再加入1 mg·L^-1 LPS）。采用MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组BV2小胶质细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素18（IL-18）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组BV小胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶1（Arg-1）蛋白表达水平。结果：LPS组BV2小胶质细胞体积变大,突起增多,呈阿米巴状;不同剂量MIP+LPS组小胶质BV2细胞活化率较LPS组明显减少（P<0.05或P<0.01）。MTT法检测,与对照组比较,LPS组细胞存活率明显降低（P<0.01）;与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞存活率明显提高（P<0.05或P<0.01）。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平及iNOS蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,而IL-4和IL-10 mRNA表达水平及Arg-1蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,且呈剂量依赖性。结论：MIP能够抑制活化的BV2小胶质细胞向M1型极化,促进其向M2型转化,抑制炎症的过度激活。     

1,25(OH)2D3联合黄芪多糖对体外骨骼肌细胞胰岛素抵抗的改善作用及其机制

目的 探讨骨化三醇［1,25（OH）₂D₃］联合黄芪多糖（APS）对骨骼肌细胞胰岛素抵抗（IR）的改善作用及其作用机制,为采用1,25（OH）₂D₃和APS缓解IR提供依据。 方法 采用CCK-8法和己糖激酶法确定棕榈酸（PA）溶液（0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mmol·L^－1）的最佳作用剂量和最佳作用时间、APS（25、50、100和200 mg·L^－1）最佳作用剂量及1,25（OH）₂D₃（1、10、100和1 000 nmol·L^－1）最佳作用剂量。将骨骼肌细胞分为对照组（不进行任何处理）、PA组（给予0.4 mmol·L^－1 PA 作用24 h）、PA+APS组（给予0.4 mmol·L^－1 PA 作用24 h后再给予100 mg·L^－1 APS作用24 h）、PA＋1,25（OH）₂D₃组［给予0.4 mmol·L^－1 PA作用24 h后再给予100 nmol·L^－1 1,25（OH）₂D₃作用24 h］、PA＋APS＋1,25（OH）₂D₃组［给予0.4 mmol·L^－1 PA作用24 h后再给予100 mg·L^－1 APS和100 nmol·L^－1 1,25（OH）₂D₃作用24 h］。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,流式细胞术检测各组细胞中活性氧（ROS）水平,Western blotting法检测各组细胞中胰岛素受体（InsR）、胰岛素受体底物1（IRS-1）、磷酸化胰岛素受体底物1（p-IRS-1）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、P65、磷酸化P65（p-P65）、P38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,PA组骨骼肌细胞中ROS、IL-6、TNF-α、MCP-1水平和P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均升高（P<0.05）,IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均降低（P<0.05）;与PA组比较,PA+APS、PA+1,25（OH）₂D₃和PA+APS+1,25（OH）₂D₃组细胞中ROS、IL-6、MCP-1和TNF-α水平及P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均降低（P<0.05）,IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均升高（P<0.05）。PA+APS+1,25（OH）₂D₃组细胞中ROS水平、p-P65和p38MAPK蛋白表达水平均低于PA+APS和PA+1,25（OH）₂D₃组（P<0.05）,InsR、IRS-1、p-IRS-1和GLUT4蛋白表达水平均高于PA+APS和PA+1,25（OH）₂D₃组（P<0.05）。 结论 1,25（OH）₂D₃联合APS可有效减轻IR,其机制可能是通过抑制氧化应激通路以及炎性因子的释放来实现的,且联合应用效果优于单独应用。     

北五味子酸性多糖对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力的改善作用

目的：观察北五味子酸性多糖（SCP-A）对Aβ_25-35致阿尔茨海默病（AD）模型小鼠学习记忆能力的改善作用,并阐明其相关机制。方法：75只雄性C57BL小鼠随机分为空白组（侧脑室注射生理盐水,灌胃蒸馏水）,模型组（侧脑室注射Aβ_25-35,灌胃蒸馏水）,5、10和20 mg·kg^-1 SCP-A组（侧脑室注射Aβ_25-35,灌胃SCP-A）,每组15只。灌胃药物每日1次,连续14 d,于第8天给予Aβ_25-35进行侧脑室注射。给药完毕后,第15天依次进行避暗实验及Morris水迷宫实验观察小鼠的潜伏期、错误次数、找到平台时间、穿越平台次数和目标象限停留时间,Western blotting法检测小鼠海马组织中Tau蛋白、糖原合成酶激酶3（GSK-3β）及其磷酸化蛋白的表达水平。结果：避暗实验,与空白组比较,模型组小鼠潜伏期明显缩短,错误次数明显升高（P<0.01）;与模型组比较,10和20 mg·kg^-1 SCP-A组小鼠潜伏期明显延长（P<0.01）,错误次数明显减少（P<0.05或P<0.01）。Morris水迷宫,与空白组比较,模型组小鼠找到平台时间明显延长（P<0.01）,穿越平台次数及目标象限停留时间明显缩短（P<0.01）;与模型组比较,10和20 mg·kg^-1 SCP-A组小鼠找到平台时间明显缩短（P<0.01）,穿过平台次数及平台区域停留时间明显增加（P<0.01）。Western blotting法检测,与模型组比较,20 mg·kg^-1SCP-A组小鼠海马组织中磷酸化蛋白Tau Ser199、Tau Ser396及Tau Ser404表达水平明显降低（P<0.05）,GSK-3β表达水平明显降低（P<0.01）,磷酸化蛋白GSK-3β Tyr216相对表达水平明显降低（P<0.05）,磷酸化蛋白GSK-3β Ser9相对表达水平明显升高（P<0.05）。结论：SCP-A具有抗AD作用,该作用与其调节GSK-3β活性进而降低海马组织中Tau蛋白磷酸化水平有关。     

坐骨神经脉冲射频对慢性坐骨神经压迫损伤模型大鼠脊髓背角胶质细胞活化水平的影响及其镇痛作用

目的：观察坐骨神经结扎处脉冲射频（PRF）对慢性坐骨神经压迫损伤（CCI）模型大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的影响,探讨坐骨神经PRF镇痛机制与脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的关系。方法：雄性SPF级SD大鼠40只随机分为CCI假造模PRF假治疗组（SS组）、CCI假造模PRF治疗组（SP组）、CCI造模PRF假治疗组（CS组）和CCI造模PRF治疗组（CP组）,每组10只。CCI造模成功后4 d行PRF治疗,在坐骨神经结扎处行标准PRF （120s、42℃）。于CCI造模前1d （D₀）及造模后1、3、5和7 d （D₁、D₃、D₅和D₇）测定大鼠患侧机械缩足反射阈（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）。疼痛行为学测试完成后（D₇）取患侧L3~5脊髓背角,Western blotting法检测脊髓背角小胶质细胞特异性蛋白（Iba-1）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的蛋白表达水平。结果：与SS组比较,CCI造模后不同时间点CS组大鼠患侧出现足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学表现,MWT和TWL均明显下降（P<0.01）,脊髓背角Iba-1和GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与CS组比较,CP组大鼠（D₅和D₇） PRF后足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学变化明显缓解,MWT和TWL值明显升高（P<0.01）,脊髓背角Iba-1蛋白表达水平明显下调（P<0.05）,GFAP蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：坐骨神经PRF能有效缓解CCI模型大鼠的神经病理性疼痛（NP）,坐骨神经PRF可抑制脊髓背角小胶质细胞活化水平,其镇痛机制可能与抑制脊髓背角小胶质细胞活化有关。     

鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对Aβ25-35诱导脊髓神经元凋亡的保护作用

目的：探讨鹿茸多肽（VAP）联合胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰的雪旺细胞（SCs）对β淀粉样蛋白25-35（Aβ_25-35）诱导的脊髓神经元凋亡的保护作用,阐明其作用机制。方法：制备胎鼠脊髓细胞,取对数生长期的脊髓神经元,采用Aβ_25-35诱导脊髓神经元凋亡,将脊髓神经元分为正常细胞组（正常脊髓神经元）、诱导凋亡组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元）、SCs组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+SCs）、GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF）、SCs+GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF转染的SCs）和VAP联合组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+VAP联合GDNF转染的SCs）。流式细胞术检测各组脊髓神经元凋亡率,免疫组织化学染色检测各组脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数。结果：胎鼠脊髓神经元悬液接种后初始脊髓神经元大多为圆形。流式细胞术检测,与诱导凋亡组比较,SCs组、GDNF组、SCs+GDNF组和VAP联合组脊髓神经元凋亡率降低（P<0.05）;与SCs+GDNF组比较,VAP联合组脊髓神经元凋亡率明显降低（P<0.05）。免疫组织化学检测,各组脊髓神经元中均有caspase-3表达,SCs组、GDNF组和SCs+GDNF组细胞着色差异不明显,脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数差异不大,但与诱导凋亡组比较明显减少（P<0.05）。结论：VAP联合GDNF转染的SCs对脊髓神经元凋亡有保护作用,该作用通过下调脊髓神经元中caspase-3表达来实现。     

川芎嗪对肾结石模型大鼠肾组织氧化损伤的改善作用

目的 探讨川芎嗪（TMP）对肾结石模型大鼠肾组织氧化损伤的改善作用,阐明其可能的作用机制。 方法 健康雄性SD大鼠40只,随机分为对照组、模型组、TMP组和阳性对照组,经预实验后,除对照组外其余各组大鼠采用乙醛酸盐原液80 mg·kg^－1腹腔注射构建肾结石大鼠模型,同时TMP组大鼠采用盐酸TMP注射液100 mg·kg^－1腹腔注射,阳性对照组大鼠采用肾石通颗粒3.12 g·kg^－1灌胃,对照组大鼠采用0.9%氯化钠注射液2.5 mL·kg^－1腹腔注射,连续用药10 d。取各组大鼠肾组织切片,Von Kossa染色和HE染色观察各组大鼠肾组织中钙盐沉积情况和病理形态表现,检测各组大鼠肾组织中丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。Western blotting法检测各组大鼠肾组织中核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素氧合酶1（HO-1）及NAD（P）H醌：氧化还原酶1（NQO1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,模型组大鼠肾组织Von Kossa染色可见明显的钙盐沉积,结晶量化分级评分明显升高（P<0.01）,HE染色可见肾组织细胞出现明显的病理损伤,肾组织中MDA水平明显升高（P<0.01）,SOD和GSH-Px活性明显降低（P<0.01）,肾组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与模型组比较,TMP组和阳性对照组大鼠肾组织Von Kossa染色可见钙盐沉积,结晶量化分级评分明显降低（P<0.05）,HE染色可见肾组织细胞病理损伤减轻,肾组织中MDA水平明显降低（P<0.01）,SOD和GSH-Px活性明显升高（P<0.05）,肾组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 肾结石可引起大鼠肾组织氧化应激损伤,导致肾组织中氧化应激指标改变和Nrf2/抗氧化反应原件（ARE）信号通路蛋白表达水平变化,TMP干预处理后可激活该信号通路,从而发挥对肾组织氧化应激损伤的改善作用。     

肌肽对血管性认知障碍大鼠氧化应激及NF-κB信号途径的影响

目的：探讨肌肽对大鼠血管性认知功能障碍（VCI）的保护作用,并阐明其作用机制。方法：50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组（双侧颈总动脉夹闭10 min→再灌注10 min→夹闭10 min）和不同剂量肌肽组（双侧颈总动脉夹闭10 min→再灌注10 min→夹闭10 min+100、300和900 mg·kg^-1·d^-1肌肽）,每组10只。肌肽于造模前21d至造模后12d灌胃给药,每日1次。于术后第7天开始进行水迷宫实验测定各组大鼠学习记忆能力;术后第12天取大鼠海马,高效液相色谱（HPLC）法测定各组大鼠海马组织中肌肽和还原性谷胱甘肽（GSH）水平。免疫组织化学法观察各组大鼠海马CA1区中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达情况,Western blotting法检测各组大鼠海马组织中磷酸化核因子κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达水平,ELISA法检测各组大鼠海马组织中白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果：与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区锥体细胞部分缺失,逃避潜伏期明显延长（P<0.01）,在平台象限停留时间明显缩短（P<0.01）;大鼠海马组织中肌肽和GSH水平降低（P<0.01）,GFAP阳性细胞数增加,p-NF-κB p65蛋白表达水平升高（P<0.01）,IL-1β和TNF-α水平升高（P<0.01）。与模型组比较,不同剂量肌肽组大鼠海马CA1区锥体细胞排列整齐,逃避潜伏期明显缩短（P<0.01）,平台象限停留时间明显增加（P<0.01）;大鼠海马组织中肌肽和GSH水平升高（P<0.05或P<0.01）,GFAP阳性细胞数减少,p-NF-κB p65蛋白表达水平降低（P<0.01）,IL-1β和TNF-α水平降低（P<0.01）。结论：肌肽对大鼠VCI具有保护作用,其作用机制可能与提高大鼠抗氧化能力、抑制NF-κB途径激活、进而抑制星形胶质细胞的异常激活并减少炎症有关。     

刺五加苷B对疲劳小鼠学习记忆能力的改善作用及其激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路的机制

目的：探讨刺五加苷B（ELB）对疲劳小鼠学习记忆能力的影响,阐明其可能的作用机制。方法：60只ICR小鼠随机分为对照组（灌胃给予蒸馏水,静坐实验）、模型组（灌胃给予蒸馏水,游泳实验）、ELB（C）组（灌胃给予80 mg·kg^-1 ELB,静坐实验）及ELB（M）组（灌胃给予80 mg·kg^-1 ELB,游泳实验）,每组15只。持续给药4周后采用转棒实验观察小鼠的抗疲劳能力,采用Morris水迷宫实验和避暗实验检测疲劳小鼠的学习记忆能力,采用比色法检测小鼠血清中乳酸（LD）水平,微量酶标法检测小鼠血清中乳酸脱氢酶（LDH）活性,脲酶法检测小鼠血清中尿素氮（BUN）水平,羟胺法检测小鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性,硫代巴比妥酸法（TBA）检测小鼠脑组织中丙二醛（MDA）水平,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠脑组织中活性氧簇（ROS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、γ氨基丁酸（GABA）和谷氨酸（GLU）水平,分光光度法检测小鼠脑组织中三磷酸腺苷酶（ATPase,包括Na⁺K⁺-ATPase、Mg²⁺-ATPase、Ca²⁺-ATPase和Ca²⁺Mg²⁺-ATPase）活性,Western blotting法检测小鼠脑组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keap1）、核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素加氧酶1（HO-1）蛋白表达水平,HE染色法观察小鼠脑组织海马区神经元结构。结果：与对照组比较,模型组小鼠转棒时间明显缩短（P<0.05）,水迷宫潜伏期明显延长（P<0.05）,避暗潜伏期缩短（P<0.05）,错误次数增加（P<0.05）,血清中LDH活性和LD、BUN水平升高（P<0.05）,脑组织中eNOS水平和SOD、Na⁺K⁺-ATPase、Mg²⁺-ATPase、Ca²⁺-ATPase、Ca²⁺Mg²⁺-ATPase活性及GLU/GABA比值降低（P<0.05）,MDA和ROS水平升高（P<0.05）,脑组织中Keap1蛋白表达水平升高（P<0.05）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平降低（P<0.05）;ELB（C）组小鼠转棒时间延长（P<0.05）,但其余各检测指标差异均无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较,ELB（M）组小鼠转棒时间延长（P<0.05）,水迷宫潜伏期缩短（P<0.05）,避暗潜伏期延长（P<0.05）,错误次数减少（P<0.05）,血清中LDH活性和LD、BUN水平降低（P<0.05）,脑组织中eNOS水平和SOD、Na⁺K⁺-ATPase、Mg²⁺-ATPase、Ca²⁺-ATPase、Ca²⁺Mg²⁺-ATPase活性及GLU/GABA比值升高（P<0.05）,MDA和ROS水平降低（P<0.05）,脑组织中Keap1蛋白表达水平降低（P<0.05）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平升高（P<0.05）。与对照组比较,模型组小鼠海马区神经元排列松散,层次不清,部分海马区神经元形态有明显的病理学改变;与模型组比较,ELB（C）和ELB（M）组小鼠脑组织海马区结构层次清晰,神经元增多,排列较为紧密有序,海马区神经元形态和体积趋于正常。结论：ELB能够改善疲劳小鼠的学习记忆能力,其机制可能与调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路的相关因子表达有关。     

姬松茸多糖对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠的抗衰老作用及其Keap1/Nrf2/ARE信号转导途径机制

目的：研究姬松茸酸性多糖A级分（ABP-A）对D-半乳糖（D-Gal）所致衰老模型小鼠的抗衰老作用,并探讨姬松茸多糖（ABP）的抗衰老机制。方法：水提醇沉法提取姬松茸粗多糖,并进行DEAE-纤维素离子交换柱层析分级及成分分析,得到ABP-A。48只ICR雄性小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药物（吡拉西坦）组和ABP-A组,每组12只。给药70 d后进行小鼠Morris水迷宫、避暗和跳台行为学实验;检测各组小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）水平、总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）活性和活性氧（ROS）水平,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中Nrf2、Keap1和HO-1蛋白表达水平。结果：ABP的总糖含量为75.1%,DEAE-纤维素离子交换柱层析分级得到ABP-A。行为学实验,与模型组比较,ABP-A组小鼠避暗潜伏期明显延长（P<0.05）,错误次数明显减少（P<0.05）,跳台潜伏期明显延长（P<0.05）,错误次数明显减少（P<0.05）,定位航行潜伏期明显缩短（P<0.05）,进入平台次数明显增加（P<0.05）。生化指标检测,与模型组比较,ABP-A组小鼠血清中SOD和CAT活性升高（P<0.05）,T-AOC升高（P<0.05）,MDA和ROS水平降低（P<0.05）。Western blotting法,与模型组比较,ABP-A组小鼠脑组织中HO-1蛋白表达水平升高（P<0.05）,Nrf2和Keap1蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：ABP可改善衰老模型小鼠学习记忆能力,其机制可能与调节以Nrf2为核心的Keap1/Nrf2/ARE氧化应激通路相关因子Nrf2、Keap1和HO-1发挥抗衰老作用有关。     

沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

目的：探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2（Frat2）通过Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法：选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应（Real-Time RT-qPCR）法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4 μmol·L^-1Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、c-myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3（pGSK-3β）蛋白表达水平。结果：与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

SO2对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的改善作用及其机制

目的 探讨二氧化硫（SO₂）对链脲佐菌素（STZ）和高糖高脂饮食诱导的2型糖尿病（T2DM）大鼠心肌纤维化的改善作用及对细胞凋亡和转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad同源物2/3（Smad2/3）通路的影响,阐明SO₂改善糖尿病心肌纤维化可能的分子机制。 方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、T2DM组、T2DM+SO₂组和SO₂组。除对照组和SO₂组外,T2DM组和T2DM+SO₂组大鼠采用腹腔注射STZ（35 mg·kg^－1）和高糖高脂饮食建立T2DM大鼠模型,T2DM+SO₂组和SO₂组大鼠腹腔注射外源性SO₂供体［亚硫酸钠（Na₂SO₃）/亚硫酸氢钠（NaHSO₃）,85 mg·kg^－1·d^－1］,共8周,采用Masson染色观察各组大鼠心肌组织纤维化病理形态表现,并计算各组大鼠心肌胶原容积分数,采用Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中相关蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,T2DM组大鼠心肌组织形态结构紊乱,心肌胶原纤维形成明显增加,心肌胶原容积分数明显升高（P<0.01）,心肌组织中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与T2DM组比较,T2DM+SO₂组大鼠心肌组织形态结构有所改善,心肌胶原纤维形成明显减少,心肌胶原容积分数明显降低（P<0.01）,心肌组织中α-SMA、Col Ⅲ、Bax、TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,SO₂组大鼠上述各项指标差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 SO₂可通过抑制促凋亡相关蛋白和TGF-β1/Smad2/3通路蛋白表达,缓解T2DM大鼠心肌纤维化。     

EGCG对铅暴露C57BL/6仔鼠海马Aβ蛋白及NEP酶表达的影响

目的 探讨不同剂量的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对哺乳期铅暴露仔鼠海马学习记忆能力损伤的作用,及对β淀粉样蛋白、脑啡肽酶的影响。 方法 选取SPF级C57BL/6孕鼠,随机分为对照组和铅暴露组。铅暴露组孕鼠在哺乳期饮用0.5%醋酸铅水溶液,对照组饮用蒸馏水。染铅结束后,取40只染铅雄性仔鼠(分为低、中、高剂量EGCG干预组、铅暴露模型组,每组各10只),对照组10只雄性仔鼠,分别用不同浓度的EGCG溶液和生理盐水等体积灌胃21 d,采用Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力,石墨炉原子吸收光谱法测定各组小鼠血铅含量,并对海马组织中Aβ_1-40、Aβ_1-42、AβPP mRNA、AβPP、脑啡肽酶( Nep)的蛋白含量进行测定。 结果 铅暴露模型组,低、中、高剂量EGCG干预组的血铅含量明显高于对照组(P<0.001),低、中、高剂量EGCG干预组和铅暴露模型组血铅含量比较差异无统计学意义(P=0.174,0.086,0.071);铅暴露模型组逃避潜伏期高于对照组(P<0.001),中、高剂量EGCG干预组的逃避潜伏期低于铅暴露模型组(P<0.001);铅暴露模型组小鼠海马内Aβ_1-40、Aβ_1-42的含量与对照组比较明显升高(P<0.001),Nep含量明显降低(P<0.001),中、高剂量EGCG干预组Aβ_1-40、Aβ_1-42的含量与铅暴露模型组比较明显降低,Nep含量明显升高(P<0.001),其中以高剂量EGCG干预组效果最佳。 结论 EGCG干预能明显提高小鼠的学习记忆能力,且EGCG能够降低小鼠海马组织中Aβ_1-40、Aβ_1-42的含量,抑制Aβ相关基因AβPP的表达,上调Nep蛋白的表达。     

铅暴露加重Aβ1-42处理的小胶质细胞活化和小胶质细胞中的铜离子蓄积

目的 探讨铜离子在铅(Pb)加重Aβ_1-42处理的小胶质细胞活化及神经元损伤中的作用,以揭示铅加重阿尔兹海默症(AD)样变的调控机制。方法 将BV2细胞分为Control组(不予任何处理)、Aβ_1-42组(5、10、15、20μmol/LAβ_1-42处理12 h)、Pb组(5、10、15、20μmol/L Pb处理12 h)和Aβ_1-42+Pb组(10μmol/L Aβ_1-42+10μmol/L Pb处理12 h)。CCK8检测细胞活力,相差显微镜观察细胞形态学改变,细胞免疫荧光检测iNOS释放及氧化应激情况,ELISA检测小胶质细胞的炎性因子释放情况,Western blot检测CTR1和ATP7A蛋白表达量,ICP-MS检测细胞铜含量。结果 15μmol/L和20μmol/L的Aβ_1-42处理BV2细胞12 h可降低其生长活力(P<0.05和P<0.01);与对照组相比,10μmol/L Aβ_1-42处理BV2细胞12...     

叶黄素激活Nrf2/HO-1信号通路缓解2型糖尿病大鼠骨质疏松

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路探究叶黄素对2型糖尿病大鼠模型骨质疏松的保护机制研究。方法:68只大鼠随机分为假手术组和造模组,其中造模组大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)及切除双侧卵巢建立2型糖尿病性骨质疏松(T2DOP)大鼠模型,将造模成功的T2DOP大鼠随机分为T2DOP组、叶黄素组(200 mg·kg^-1叶黄素)、Nrf2抑制剂-ML385组(30 mg·kg^-1 ML385)、叶黄素+ML385组(200 mg·kg^-1叶黄素+30 mg·kg^-1 ML385),每组10只。干预结束后,双能X射线检测大鼠骨密度(BMD)水平;试剂盒检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及活性氧(ROS)水平;骨生物力学测量左侧股骨最大载荷、弹性模量和屈服载荷;HE检测右侧股骨组织形态学变化;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测右侧股骨组织中Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,T2DOP组SOD含量、B...     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨迷迭香酸对急性胰腺炎大鼠氧化损伤的影响

目的：基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路探究迷迭香酸（RA）对急性胰腺炎（AP）大鼠氧化损伤的影响。方法：将40只大鼠随机分为Sham组、AP组、RA组、RA+ML385(Nrf2抑制剂)组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组大鼠血清淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LIP）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）指标。HE染色检测胰腺组织病理学变化；TUNEL检测胰腺组织细胞凋亡；Western blotting和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胰腺组织中Nrf2、HO-1蛋白和mRNA表达。结果：与Sham组相比，AP组血清中AMY、LIP、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量、胰腺指数、胰腺组织病理学评分和细胞凋亡率显著升高，血清中SOD活性、GSH-Px含量、胰腺组织中Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达量降低（均P<0.05）；与AP组相比，RA组血清中AMY、LIP、IL-1β、...     

Aβ1-42对大鼠基底前脑神经元KATP通道各亚基蛋白表达的影响

目的研究β淀粉样蛋白（Aβ_1-42）对原代培养基底前脑胆碱能神经元ATP敏感性钾通道（KATP）各亚基蛋白表达的影响,探讨阿尔茨海默病发病的细胞毒性分子机制。方法 运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定, 用2μmmol/L的Aβ_1-42对原代培养细胞进行干预, 免疫荧光双染及免疫印记观察干预后不同时间(分别为0, 24, 72h)细胞KATP通道各亚基Kir6.1、Kir6.2和SUR1、SUR2蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,Aβ_1-42作用胆碱能神经元24h后, KATP通道亚基Kir6.1及SUR2蛋白表达显著增多(P<0.05),而亚基Kir6.2及SUR1蛋白表达无明显变化。但Aβ_1-42作用时间达72h后, KATP通道各个亚基蛋白表达均显著升高(P<0.05)。 结论 Aβ_1-422作用胆碱能神经元不同的时间段（24h和72h）,细胞KATP通道各亚基蛋白表达有不同程度的增加,且增加速度不一致。可能由此改变KATP通道的结构和功能,从而影响Aβ_1-42的神经细胞毒性作用。