番茄红素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究番茄红素(Lycopene,LP)对人肝癌HepG2细胞生长的影响并初探其机制。方法取对数生长期HepG2细胞设空白对照组、LP(5 μg/mL)组、LP(10 μg/mL)组、LP(20 μg/mL)组和顺铂(40 μg/mL)组,每组设10个复孔;各组分别给药干预48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡状况,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 与空白对照组比较,经LP(10 μg/mL、20 μg/mL)或顺铂40 μg/mL干预48 h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率,延长细胞周期中G₀/G₁期而缩短G₂/M期,提高细胞凋亡率,上调促凋亡Bax mRNA表达并下调抑凋亡Bcl-2 mRNA表达,提高Bax/Bcl-2比值,上调Caspase-3蛋白表达,LP上述作用具有一定的剂量依赖性。结论 LP具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与LP干预细胞周期分布和调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP细胞凋亡

目的：观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法：A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果：对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著（P〈0.01）,逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著（P〈0.01）。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论：A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

瑞戈非尼联合哌立福辛诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨瑞戈非尼联合哌立福辛(AKT抑制剂)对人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。 方法 不同浓度瑞戈非尼(1、5、10、15、20、25 μmol/L)处理肝癌细胞后,通过CCK-8检测其细胞存活率;再设置不同浓度瑞戈非尼(0、5、10、20 μmol/L)处理肝癌细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡;用免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9的表达情况;设置哌立福辛组(10 μmol/L)、瑞戈非尼组(20 μmol/L)及双药联合组(哌立福辛10 μmol/L联合瑞戈非尼20 μmol/L),检测细胞凋亡及相关蛋白表达变化。 结果 从5 μmol/L浓度起,瑞戈非尼可剂量依赖性的抑制肝癌细胞增殖(P＜0.05);Bcl-2及p-AKT表达下调,Bax、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9表达上调(P＜0.05);瑞戈非尼和哌立福辛双药联合应用后,细胞凋亡率、Bax表达量明显增加(P＜0.05),Bcl-2、p-AKT表达量下降程度均较单独应用哌立福辛及瑞戈非尼明显(P＜0.05)。 结论 瑞戈非尼通过增加p21、p27、Bax、caspase-8、caspase-9的表达,减少Bcl-2、p-AKT的表达,来诱导肝癌细胞凋亡,并且瑞戈非尼与哌立福辛双药联合应用后,明显增加肝癌细胞凋亡率,为药物治疗肝癌提供新的理论基础和思路。     

神经酰胺促胃癌SGC7901细胞凋亡的实验

目的探讨神经酰胺(Ceramide,Cer)对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用及可能作用机制。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,分别给予Cer、顺铂（DDP）;DDP联合Cer作用后,MTT检测单独使用Cer及联合DDP应用对SGC7901细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色、Western blot 检测SGC7901细胞NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果Cer 2.5 μmol/L及以上时可以抑制细胞增殖,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。Cer联合DDP后,联合用药作用强于单独DDP及Cer组(P<0.05),q值在24、48、72 h分别为1.05、1.01、0.99。Cer、DDP作用48h可诱导SGC7901细胞凋亡,Cer 5 μmol/L、DDP 2.5 mg/L单独用药组及Cer 5 μmol/L 联合DDP 2.5 mg/L组凋亡率分别为：（39.23±1.62）%、（4727±113）%、（50.13±2.76）%,与对照组［（1846±1.64）%］相比差异有统计学意义（P<0.05）,联合用药作用强于单独DDP及Cer组(P<0.05)。NF-κB、Bcl-2在SGC7901细胞中较高表达［（74.10±2.69）%、（69.37±4.54）%］,Bax在SGC7901细胞中表达较低［（2460±373）%］,Cer 5 μmol/L、DDP 25 mg/L单独用药组及Cer 5 μmol/L 联合DDP 2.5 mg/L组NF-κB、Bcl-2阳性表达率降低(65.13±1.71、 62.17±2.12, 44.8±3.65;57.70±2.22、55.13±5.77、37.67±2.14),Bax表达率上调(33.80±1.10、35.50±2.27、51.73±3.76),Bcl-2/Bax 比值降低(1.71±0.10、1.56±0.26、0.73±0.09),与对照组相比差别有统计学意义（P<0.05）,联合用药作用强于单独DDP及Cer组(P<0.05)。相关性分析显示NF-κB与Bcl-2呈正相关（Spearman^,s rho =0.9510,Prob>|t|=0.0000）。结论Cer通过下调NF-κB进而调节Bcl-2/Bax比值诱导SGC7901细胞凋亡。     

左卡尼汀联合多西他赛对GLC-82细胞增殖与凋亡影响研究

目的 左卡尼汀(levocarnitine,L-CNT)在改善由化疗药物引起的心脏毒性和周围神经毒性方面有一定的作用.本实验旨在研究联合应用时,L-CNT对多西他赛(docetaxel,DTX)抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC) GLC-82细胞增殖作用的影响,初步探讨其作用机制.方法 MTT法检测不同浓度L-CNT(0.625、1.25、2.5、5、10、20、40扣80 μg/mL)和DTX(0.01、0.1、1、5、10、20、40和80 μg/mL)分别对GLC-82细胞增殖作用的影响,倒置显微镜观察其形态的变化.以终浓度为1.25、20、80μg/mL L-CNT分别和DTX(9.301 μμg/mL)联合,同时处理GLC-82细胞24 h,MTT法检测其对细胞增殖作用的影响,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和ANT1蛋白表达的情况.结果 与阴性对照组相比,L-CNT(1.25、20和80 μg/mL)对GLC-82细胞作用24h后,促进增殖率分别为(14.52±0.73)％、(27.03±1.21)％和(19.77±0.65)％,F=42.538,P=0.001;48 h后分别为(11.37±0.13)％、(19.56±1.01)％和(14.89±0.51)％,F=52.119,P=0.001.与DTX(27.319 μg/mL)单药组相比,L-CNT(1.25、20和80 μg/mL)、DTX联合用药组的细胞增殖率由(49.49±2.52)％增加至(52.64±2.43)％、(59.44±3.20)％和(53.15±2.37)％,F=7.412,P=0.011.与DTX(9.301 μ上g/mL)单药组相比,L-CNT(1.25、20和80 μg/mL)、DTX联合用药组GLC-82细胞密度增大,细胞凋亡率由(24.67±1.95)％分别降低至(21.90±1.98)％、(14.38±2.35)％和(22.42±1.43)％,F=15.697,P=0.001.L-CNT、DTX联合作用后,抑凋亡蛋白Bcl-2表达增多,促凋亡蛋白Bax表达减少,同时ANT1蛋白表达降低.结论 L-CNT和DTX联合应用对GLC-82细胞增殖与凋亡有一定的影响,主要通过下调Bax和上调Bcl-2蛋白的表达以及影响线粒体膜通透性转换孔的开放和关闭,减弱DTX对细胞凋亡的诱导作用.     

马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的  探讨马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞,分别用不同浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL）马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞,以生理盐水溶液为阴性对照组,5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照组,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 不同浓度马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长和药物浓度的提高而增加。作用48 h后,200 μg/mL、300 μg/mL马齿苋多糖组的细胞增殖抑制率分别为（53.02±2.46）%、（57.20±2.14）%,与5-FU组细胞增殖抑制率（56.36±3.26）%相当（P＞0.05）;各浓度组的细胞凋亡率依次为31.92%、38.39%、40.45%、48.49%、55.71%,与阴性对照组比较均升高（均P＜0.05）;与5-FU组比较,低浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100μg/mL）组的细胞凋亡率降低（P＜0.05）,而高浓度（300 μg/mL）组的细胞凋亡率升高（P＜0.05）。结论 马齿苋多糖可抑制胃癌SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP 细胞凋亡

目的:观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法:A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果:对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著(P<0.01),逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著(P<0.01)。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论:A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

lncRNA BCAR4在肝癌细胞系中的表达及对增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察肝癌细胞系中长链非编码RNA BCAR4（lncRNA BCAR4）的表达,及对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其机制。方法:采用荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721和正常肝细胞系L02中lncRNA BCAR4的表达。将Huh7细胞系分为BCAR4-siRNA组、NC-siRNA组和Blank组,BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组经LipofectamineTM 2000分别转染BCAR4-siRNA序列和NC-siRNA序列,Blank组以PBST为阴性对照。CCK-8法和流式细胞数测定细胞增殖和凋亡,细胞划痕实验测定迁移能力。Western blot测定细胞周期相关蛋白（Cyclin D1）和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721中lncRNA BCAR4的表达显著高于正常肝细胞系L02(P<0.05)。转染BCAR4-siRNA后,Huh7的lncRNA BCAR4表达下调（P<0.01）。CCK-8示:转染72 h及96 h后,BCAR4-siRNA组 vs NC-siRNA组的OD450 nm值分别为0.71±0.07 vs 0.92±0.10（P<0.05）及0.93±0.08 vs 1.37±0.11（P<0.01）。BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组细胞凋亡率分别为（17.52±3.21）%和（4.69±1.56）%（P<0.01）。BCAR4-siRNA组细胞划痕愈合率为（19.65±2.41）%,显著低于NC-siRNA组的（47.50±5.88)%(P<0.05)。与NC-siRNA组比较,BCAR4-siRNA组Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下调,分别为0.27±0.03 vs 1.0±0.05(P<0.01)、0.48±0.04 vs 1.0±0.04(P<0.05),Bax蛋白表达上调,为2.83±0.19 vs 1.0±0.03(P<0.01)。结论:lncRNA BCAR4高表达于肝癌细胞系,敲低lncRNA BCAR4的表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移,并促进凋亡,其机制可能与Cyclin D1和Bcl-2蛋白下调表达,Bax蛋白表达上调表达有关。     

吗啡对人肺腺癌A549细胞增殖的作用研究

目的 观察不同浓度吗啡对A549细胞增殖及凋亡的影响。方法 采用不同浓度的吗啡（0.3、3、30 μg/ml）处理A549细胞48 h后采用CCK-8法检测其增殖情况,Annexin-V FITC/PI双染法检测30 μg/ml吗啡作用48 h后的细胞凋亡率,Western blotting检测30 μg/ml吗啡作用48 h后的X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、Survivin、Bcl-2、caspase-3和Bax蛋白表达水平。 结果 吗啡可以剂量依赖性促进A549细胞增殖,各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。与对照组相比,30 μg/ml吗啡降低了A549细胞的凋亡率（P＜0.05）,且Survivin和XIAP蛋白水平升高,而caspase-3蛋白水平降低（P＜0.05）。 结论 吗啡可促进人肺腺癌A549细胞增殖并抑制其凋亡,可能与吗啡上调XIAP、Survivin蛋白的表达和抑制caspase-3蛋白活化有关。     

虫草素抑制食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究

目的:探讨虫草素对食管癌细胞Eca-109的作用及其潜在的机制。方法:不同浓度（35、70、140、280 μg/mL）虫草素分别处理Eca-109细胞24 h、48 h、72 h和96 h,CCK-8检测细胞活力,筛选虫草素最佳作用浓度（70 μg/mL）和时间（24 h）。实验分为4组:对照组、虫草素组（70 μg/mL虫草素）、SB203580组（10 μg/mL SB203580）和虫草素+SB203580组（70 μg/mL虫草素+10 μg/mL SB203580）。培养24 h后,CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;qRT-PCR和Western blot分别检测细胞周期相关、凋亡相关和p38 MAPK信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组相比,虫草素组、SB203580组和虫草素+SB203580组细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞发生G2期阻滞,凋亡率显著升高（P＜0.05）,cyclinB1、CDK4、p-p38、ERK1和ERK2的表达下调（P＜0.05）,CKI和Caspase-3的表达上调（P＜0.05）。结论:虫草素可抑制食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其作用机制与p38 MAPK信号通路有关。     

大蒜素联合5-FU对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨大蒜素与5-FU联合应用治疗结肠癌的作用机制。方法 利用HT-29细胞模拟结肠癌,设置空白对照组、大蒜素组(15 μg/mL)、5-FU组(15 μg/mL)和大蒜素+5-FU组(各15 μg/mL)共4组,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术观察细胞凋亡情况,Real-time PCR检测mTOR、PTEN、Bcl-2与Bax mRNA表达情况。结果 CCK-8检测结果显示,与空白对照组比较,各用药组均可以抑制HT-29细胞的增殖(P＜0.05)。其中大蒜素+5-FU组的抑制作用最为显著;流式细胞术检测结果显示,各用药组凋亡细胞显著多于空白对照组,大蒜素+5-FU组凋亡细胞最为显著;Real-time PCR结果显示,与空白对照组比较,各用药组Bcl-2、mTOR的mRNA表达量显著降低而Bax、PTEN的mRNA表达量显著升高,大蒜素+5-FU组变化最为显著。结论 大蒜素与5-FU联合应用可以抑制HT29细胞的增殖,促进凋亡,并且大蒜素具有增强5-FU诱导结肠癌细胞凋亡的能力。     

白藜芦醇对肺癌紫杉醇耐药细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：研究白藜芦醇作用后人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇敏感性的改变,并探讨其作用机制。方法：建立人肺腺癌紫杉醇耐药细胞A549/Taxol-R,用不同浓度白藜芦醇、紫杉醇单独或联合干预A549/Taxol-R细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;概率单位法计算半数抑制浓度（IC₅₀）;观察不同浓度白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞IC₅₀的变化;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果：白藜芦醇对A549/Taxol-R细胞增殖的抑制率具有浓度和时间的双重依赖性（P均 < 0.05）。白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞的IC₅₀值下降,从（17.50±1.24）μg/mL降低至（4.18±0.62）μg/mL。白藜芦醇和紫杉醇联合干预的A549/Taxol-R细胞凋亡率、坏死率高于单独干预组（P < 0.05）,联合干预组A549/Taxol-R细胞的Bax、Caspase-3的表达较单独干预组上调,而Bcl-2的表达则相对下调（P < 0.05）。结论：白藜芦醇可能通过促进细胞的凋亡来增强人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的敏感性,其机制可能和促进Bax、Caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达有关。     

阿帕替尼调控WWOX对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨阿帕替尼（Apatinib）是否通过包含氧化还原酶的WW结构域（WWOX）影响子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭。方法:噻唑蓝（MTT）比色法检测4 μmol/L、8 μmol/L、16 μmol/L、32 μmol/L Apatinib作用于子宫内膜癌细胞HEC-1 24 h、48 h、72 h后的细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、WWOX蛋白水平,Transwell小室法检测迁移细胞数、侵袭细胞数。在HEC-1中转染pcDNA3.1-WWOX,或转染si-WWOX并用16 μmol/L Apatinib进行处理,采用上述方法评估细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况。结果:Apatinib明显降低HEC-1细胞活性（P＜0.05）,呈剂量、时间依赖性;Apatinib显著增加HEC-1细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;Apatinib明显降低Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;16 μmol/L Apatinib显著减少HEC-1细胞的迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量（P＜0.05）,明显提高E-cadherin、WWOX蛋白表达量（P＜0.05）。过表达WWOX明显降低HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数（P＜0.05）,提高p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量及细胞凋亡率（P＜0.05）。抑制WWOX表达逆转了Apatinib对HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移、侵袭的抑制作用,以及逆转了其对p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量、细胞凋亡的促进作用。结论:阿帕替尼通过调控WWOX表达,抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。     

帕米膦酸二钠抑制人肝癌细胞增殖及诱导凋亡机制研究

目的 肝癌是常见的恶性肿瘤之一,寻找其低毒有效的化疗药物具有重要的临床价值.本研究旨在探讨一种临床常用的骨吸收抑制剂帕米膦酸二钠对人肝癌HepG2及Bel-7402细胞体外增殖和凋亡的影响及其机制.方法 采用MTS法检测不同浓度的帕米膦酸二钠对HepG2和Bel-7402细胞体外增殖的影响;以TUNEL末端标记法和Annexin-Ⅴ-FITC双标记流式法检测帕米膦酸二钠对细胞凋亡的影响采用蛋白质印迹法检测帕米膦酸二钠对凋亡相关蛋白:聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、Caspase-9、Caspase-3、active-Caspase-3、Bax及Bcl-2表达的影响.结果 MTS检测显示,帕米膦酸二钠对HepG2及Bel-7402细胞均具有明显抑制作用,并呈剂量依赖性,药物的半数抑制浓度(50％inhibitory concentration,IC50)分别为46.12和51.35 μmol/L.流式细胞术检测发现,帕米膦酸二钠可诱导肝癌细胞剂量依赖性凋亡,20、40和60 μmol/L作用HepG2细胞24 h凋亡率分别为(25.70±6.00)％、(43.53±4.06)％和(74.73±2.90)％,与对照组的(3.43土1.07)％相比差异有统计学意义,F=175.5,P＜0.001;20、40和60 μmol/L作用Bel-7402细胞24 h凋亡率分别为(25.50±3.00)％、(48.30±1.02)％和(68.97±4.90)％,与对照组(3.33±0.05)％相比差异有统计学意义,F=81.97,P＜0.001.蛋白质印迹法检测结果显示,帕米磷酸二钠可诱导细胞内凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3及PARP的活化,促凋亡蛋白Bax的上调,抑凋亡蛋白Bcl-2的下调.结论 帕米膦酸二钠可以明显抑制人肝癌HepG2及Bel-7402细胞的体外增殖,其机制可能与线粒体凋亡途径的激活而诱导癌细胞发生凋亡相关,帕米膦酸二钠可能成为潜在的肝癌治疗药物.     

小檗胺对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

目的:探讨小檗胺对胃癌细胞（AGS和SGC-7901）增殖、凋亡的影响并探讨其分子机制。方法:利用MTT 实验检测胃癌细胞的增殖,利用集落形成实验检测胃癌细胞的生长, 流式细胞技术检测胃癌细胞的凋亡率以及细胞周期, Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果:小檗胺（0~64 μg/ml）能够剂量依赖性以及时间依赖性的抑制 AGS和SGC-7901细胞的增殖 （P＜0.05）。集落形成实验结果显示小檗胺(32 μg/ml)能够抑制AGS和SGC-7901细胞的生长 （P＜0.05）。流式细胞实验显示,小檗胺(32 μg/ml)同时能够促进AGS和SGC-7901细胞的凋亡 （P＜0.05）,增殖G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例 （P＜0.05）。Western blot实验结果显示小檗胺(32 μg/ml)能够增加AGS和SGC-7901细胞的cleaved caspase-3,cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平,同时降低Bcl-2的蛋白水平 （P＜0.05）。结论:小檗胺能够抑制胃癌细胞的增殖,其机制可能与改变细胞周期以及促进细胞凋亡有关。     

斑蝥提取物通过细胞周期G2/M期阻滞诱导人胆管细胞癌QBC939细胞凋亡

目的:研究斑蝥提取物(cantharis extract,CTE)体外诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡作用及其对细胞周期分布的影响。方法:体外培养人胆管细胞癌QBC939细胞,CTE作用于QBC939细胞48小时,利用CCK-8法检测QBC939细胞增殖率并计算半数抑制浓度(IC50);光学显微镜下观察细胞形态的改变;AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡情况;用PI染色检测对QBC939细胞周期分布的影响;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化。结果:CTE显著抑制QBC939细胞增殖,呈浓度及时间依赖性,处理48小时的IC50为4.16μg/ml。经光学显微镜下观察可见随着药物浓度增加,细胞密度减少,游离变圆的细胞明显增多。AnnexinⅤ/PI双染流式凋亡检测示,随着药物浓度的增加,凋亡细胞数量逐渐增加,药物处理组(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml)的细胞凋亡率分别为(9.52±1.01)%、(15.62±1.88)%、(46.03±4.88)%,与对照组(4.59±0.43)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。PI检测细胞周期示,CTE能将QBC939细胞周期阻滞在G2/M期,随药物浓度增加而增加,G2/M期细胞比例逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义,而G1期细胞比例逐渐减少。Western blot检测示,CTE处理组细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)表达降低,相对蛋白表达量与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2家族蛋白Bax和Bid表达增加,而Bcl-2、Mcl-1表达降低,抑制凋亡蛋白家族蛋白Survivin表达显著下降,凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达下降,与对照组比较CTE处理组上述相对蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);CTE处理组细胞周期相关蛋白Chk1表达无显著改变,相对蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05),磷酸化的Chk1蛋白及p53蛋白表达逐渐增加,相对蛋白表达量与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CTE显著抑制QBC939细胞增殖,诱导QBC939细胞凋亡,其可能机制与CTE调节凋亡相关蛋白表达,同时调节肿瘤细胞周期相关。