抗纤灵对慢性肾功能衰竭小鼠模型肾组织相关炎症因子的干预作用

目的:观察抗纤灵对小鼠慢性肾功能衰竭(CRF)模型肾组织相关炎症因子的干预作用。方法:将40只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、雷帕霉素组和抗纤灵组,每组10只,除假手术组仅分离肾组织外,其他各组采用Platt 5/6肾切除方法制备CRF模型,雷帕霉素组、抗纤灵组分别予雷帕霉素、抗纤灵水煎剂,假手术组及模型组予等量生理盐水灌胃,疗程8周。免疫组化法检测肾组织中F4/80细胞的表达,RT-PCR法检测肾组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,ELISA法检测大鼠肾组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:与假手术组比较,模型组小鼠肾组织F4/80阳性细胞,MMP-2、MMP-9mRNA水平明显升高,IL-6、TNF-α含量明显增加(P<0.01);与模型组比较,雷帕霉素、抗纤灵组F4/80阳性细胞减少,MMP-2、MMP-9mRNA水平下降,IL-6、TNF-α含量降低(P<0.05或P<0.01);雷帕霉素和抗纤灵组比较,两组无显著性差异(P>0.05)。结论:抗纤灵能够减轻CRF小鼠肾组织的炎症反应,抑制肾脏纤维化。     

姜黄素联合粪菌移植对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的改善作用

目的：探讨姜黄素联合粪菌移植对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的改善作用,并阐明其相关作用机制。方法：50只小鼠随机分为对照组、模型组、姜黄素组、粪菌移植组和联合组,除对照组小鼠自由饮用纯净水外,其余各组小鼠自由饮用含2%DSS的蒸馏水建立UC模型。姜黄素组小鼠灌胃给予60 mg·kg^-1姜黄素溶液0.4 mL,每日1次,连续10 d;粪菌移植组小鼠灌肠粪菌液0.2 mL,每日1次,持续10 d;联合组小鼠给予0.2 mL粪菌液灌肠后,给予60 mg·kg^-1姜黄素溶液0.4 mL灌胃。实验结束后,计算各组小鼠疾病活动指数(DAI)和结肠大体形态损伤指数(CDMI),HE染色观察各组小鼠结肠组织病理形态表现,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠结肠组织中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、IL-4和IL-10水平,实时荧光定量PCR (RT-q PCR)法和Westernblotting法检测各组小鼠结肠组织中闭合蛋白(occludin)和闭锁小带蛋白1 (ZO-1) m RNA及蛋白表达水平...     

白头翁皂苷B4基于调节巨噬细胞极化对小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的 探究白头翁皂苷B4基于调节巨噬细胞极化对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）小鼠的作用。方法 将40只SPF级雄性C57BL/6小鼠（体重18～20 g）按随机数字表法分为对照组、模型组、B4组和阳性药组,每组10只。模型组、B4组和阳性药组连续给予3%DSS 5 d构建UC模型,造模成功后B4组灌胃白头翁皂苷B4(5 mg/kg,1次/d),阳性药组灌胃美沙拉秦（400 mg/kg,1次/d）,对照组和模型组灌胃等量生理盐水,四组均连续干预7 d。观察干预期间小鼠体重的变化。干预结束后对小鼠结肠组织进行苏木精-伊红染色并进一步评估其病理组织学指数,并对四组炎症相关指标进行检测。q RT-PCR检测四组结肠组织中核因子κB(NF-κB)p50、p65及M1型巨噬细胞特异性指标诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、M2型巨噬细胞特异性指标精氨酸-1(Arg1)的mRNA表达水平。对四组结肠组织进行免疫组织化学染色,观察四组结肠组织中巨噬细胞极化的情况。结果 模型组干预6、9、12 d的体重均低于对照组,B4组干预12 d的体重高于模型组（P<0.05或P<0.01...     

白头翁汤对溃疡性结肠炎模型小鼠肠道菌群及短链脂肪酸的影响

目的 探究白头翁汤对溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)模型小鼠的治疗作用及可能机制.方法 采用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulphate sodium,DSS)诱导UC模型小鼠,给予白头翁汤干预.实验过程中,每日记录小鼠体质量、腹泻、便血情况.实验结束后测量小鼠结肠长度,HE染色观察结肠病理...     

雷帕霉素对大鼠主动脉瓣膜间质细胞增殖的影响

目的利用雷帕霉素靶向抑制mTOR并探讨其对大鼠心瓣膜间质细胞增殖的影响。方法体外分离大鼠瓣膜间质细胞后 培养并鉴定;细胞随机分为两组：雷帕霉素组与对照组;MTT法检测并绘制大鼠瓣膜间质细胞用药前后的生长曲线;流式细胞 仪检测雷帕霉素对细胞周期的影响;RT-PCR 检测细胞中S6、P70S6K的mRNA表达水平;Western blotting 检测细胞中S6、 P70S6K、P-S6、P-P70S6K蛋白的表达水平。结果体外分离获得的大鼠瓣膜间质细胞分离培养成功;对照组细胞活性显著高于 加药组细胞（P<0.05）,加药组细胞生长变缓。流式细胞术检测发现加药组和对照组细胞的各周期占比均没有明显差别;加药组 细胞的S6蛋白与P70S6K蛋白的磷酸化水平降低（P<0.05）。结论雷帕霉素能抑制瓣膜间质细胞的增殖其原因,可能不是通过 改变细胞周期而是通过抑制mTOR后下调其靶蛋白S6和P70S6K的磷酸化水平引起的。     

雷帕霉素对人胶质母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨雷帕霉素对人胶质母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法:细胞培养技术培养人胶质母细胞瘤细胞系A172,将其分为对照组与实验组。MTT检测两组细胞增殖;细胞免疫化学检测磷酸化核糖体S6激酶(p-P70S6K)1蛋白表达;TUNEL检测A172凋亡。结果:MTT表明,实验组细胞存活增殖与对照组比差异有统计学意义(P<0.05);实验组p-P70S6K1与对照组比差异有统计学意义(P<0.05);雷帕霉素可诱导A172凋亡(P<0.05)。结论:雷帕霉素能有效抑制人胶质母细胞瘤A172增殖,也可诱导其凋亡。雷帕霉素可能通过m TOR/P70S6K1信号通路发挥抗肿瘤作用。     

雷帕霉素对肝脏缺血再灌注损伤修复的影响

目的 应用小鼠肝脏缺血损伤模型研究雷帕霉素对损伤肝脏修复的延迟作用并初步探讨其机制.方法 建立Balb/c小鼠肝左中叶缺血损伤模型.将实验小鼠随机分为4组,A组(n=16):雷帕霉素手术组;B组(n=16):生理盐水手术组;C组(n=12):雷帕霉素假手术组;D组(n=12):生理盐水假手术组.给药后第4天对各组小鼠行手术及假手术处理.术后第1天、第4天分批处死各组动物,取出损伤肝组织作组织病理学榆测;免疫组织化学方法检测组织内增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D,)的表达.结果 ①在术后各检测时间点,A组小鼠肝组织病理学变化明显重于B组,表现为肝细胞有明显肿胀变性,肝板结构紊乱,肝窦结构不清晰,伴有肝细胞坏死;C组及D组未见明显组织病理损伤.②在各时间点.A组小鼠肝组织中PCNA阳性率显著低于B组;而且Cyelin D1的阳性率也低于B组,差异有统计学意义(均P<0.05).C组及D组未见明显PCNA及Cyclin D1的表达.结论 雷帕霉素阻抑了缺血再灌注损伤肝脏的修复过程,而对正常肝脏无明显损伤作用.     

海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺功能及mTOR蛋白表达的影响

目的通过研究海藻甘草反药组合在海藻玉壶汤中的加减应用对甲状腺肿大模型大鼠甲状腺功能及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响,为海藻甘草反药组合配伍应用提供实验依据。方法选取雄性Wistar大鼠84只,随机分为空白组、模型组、优甲乐组(20.00μg/kg)、海藻玉壶汤组(10.08g/kg)、海藻玉壶汤减海藻组(9.00g/kg)、海藻玉壶汤减甘草组(9.18g/kg)和海藻玉壶汤减海藻甘草组(8.10g/kg),除空白组其余各组给予丙硫氧嘧啶复制甲状腺肿大病理模型,以优甲乐作为阳性对照药,其余各组给予相应药液。采用放射免疫法检测各组大鼠血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平,免疫组化法检测甲状腺组织Ki67蛋白表达情况,Western blotting检测甲状腺组织磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、mTOR蛋白表达情况。结果与模型组比较,优甲乐组大鼠血清T3、T4、FT3、FT4水平升高,TSH水平降低(P<0.01);海藻玉壶汤组及各拆方组大鼠血清T3、T4、FT3、...     

白头翁复方灌肠对溃疡性结肠炎模型大鼠MUC2、IL-6及IL-10的影响

目的 研究白头翁复方灌肠治疗溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠的疗效及机制.方法 采用三硝基苯磺酸(TNBS)制备 UC模型大鼠,随机分为正常对照组(CON 组)、TNBS 造模组(TNBS 组)、中药白头翁复方治疗组(ZY组)和柳氮磺砒啶肠溶片治疗组(SASP组).观察大鼠一般情况、肠黏膜大体形态学和组织学改变,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测大鼠血清 IL-6、IL-10水平,实时荧光定量PCR法检测大鼠结肠组织 IL-6、IL-10含量,免疫组织化学法检测大鼠结肠组织 MUC2表达情况.结果 与 TNBS组相比,ZY组与 SASP 组均可减轻 UC 模型大鼠的炎症程度,DAI评分、CMDI评分和组织病理学评分明显改善,血清及组织 IL-6水平下降,IL-10水平升高,结肠黏膜 MUC2表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 白头翁复方灌肠对 TNBS 复制的大鼠UC模型有治疗作用效果,可能通过降低促炎因子 IL-6的表达、升高抑炎因子 IL-10的表达和上调黏蛋白 MUC2表达量,进而增强肠道黏膜免疫屏障和抗炎能力,对 UC起到治疗作用.     

雷帕霉素对PAN肾病小鼠肾脏病变和VEGF及受体表达的影响

目的 探讨雷帕霉素对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病模型小鼠肾脏病变和肾小球VEGF及受体(VEGFR)表达的影响.方法 24只BALB/c小鼠随机分为PAN 组(单次尾静脉注射PAN造模,n=8)、雷帕霉素干预组(单次尾静脉注射PAN造模+雷帕霉素干预,n=8)和对照组(单次尾静脉注射PBS,n=8).各组动物留取24 h尿液,BCA蛋白定量试剂盒测定24 h尿蛋白排泄量.于造模后第10天处死动物取肾脏制备肾组织标本,透射电子显微镜观察各组肾小球足突结构改变;分别采用Real-time PCR、Western b1otting和免疫组织化学方法检测各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA以及VEGF、VEGFR2蛋白表达.结景24 h尿蛋白排泄量为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组,组间差异均有统计学意义(P<0.05).电子显微镜观察发现PAN 组肾小球上皮细胞足突广泛融合.各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及蛋白表达为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组(P<0.05),且各组VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及VEGF蛋白表达与24 h尿蛋白排泄量呈正相关(P<0.05).结论 雷帕霉素能减轻PAN肾病小鼠蛋白尿的程度,作用机制可能与下调肾小球VEGF及其受体基因表达有关.     

强心饮对心衰病模型大鼠心功能及心肌肥厚影响的实验研究

目的：观察强心饮对阿霉素诱导的心肌肥厚大鼠相关调控细胞生长与增殖蛋白表达的变化,以探讨强心饮对心肌肥厚潜在的作用机制。方法40只SD大鼠随机分为5组：模型组、正常组、雷帕霉素组、强心饮大剂量组、强心饮小剂量组。采取腹腔注射阿霉素复制大鼠心肌肥厚模型,观察大鼠心肌形态学、血流动力学、心衰指标及调控心肌肥厚相关蛋白表达的变化。结果与模型组比较,强心饮治疗组明显改善心肌肥厚大鼠心脏结构及功能,降低心肌组织BNP含量,抑制调控细胞生长蛋白mTOR及p70S6K的磷酸化（P＜0.01或P＜0.05）。结论强心饮能改善心肌肥厚大鼠心功能及抑制心肌肥厚,其机制可能调控p-mTOR及p-p70S6K的表达有关。     

逍遥散通过PI3K/AKT/mTOR通路调节mPFC-BLA髓鞘功能改善VaD小鼠焦虑抑郁行为

目的 研究逍遥散(XYP)对血管性痴呆(VaD)小鼠焦虑抑郁行为表型的作用及可能机制.方法 3月龄雄性C57BL/6小鼠,采用双侧颈总动脉狭窄术(BCAS)并给予慢性束缚应激(CRS),构建VaD伴焦虑抑郁小鼠模型.将造模小鼠分为模型组、氟西汀(阳性对照)组以及逍遥散低、中、高剂量组,对照组为假手术无束缚组.逍遥散低、...     

mTOR/P70S6激酶信号通路在腮腺腺癌发生中的作用

目的 :研究mTOR/P70S6激酶信号通路激活在腮腺腺癌发生中的作用。方法 :用免疫组织化学方法及Western印迹分析测定腮腺腺癌中mTOR和P70S6激酶的表达。结果 :免疫组化与Western印迹分析的结果一致 ,与正常组织相比 ,腮腺腺癌中mTOR和P70S6激酶的表达明显增加。结论 :口腔腮腺腺癌mTOR和P70S6激酶的表达增加可能是介导腮腺腺癌发生的主要机制之一     

胎儿出生体重与p~(70) S6K关系及胰岛素调节出生体重的机制研究

目的 探讨胎儿出生体重与胎盘组织细胞中p~(70)S6K关系及在胎盘组织细胞中胰岛素是否可通过磷酸肌醇三激酶/苏氨酸激酶/雷帕霉素靶蛋白(P~(70)S6激酶)[P13K/AKT/mTOR(p~(70)S6K)]信号通路调节p~(70)S6K,进而调节胎儿出生体重.方法 (1)60例足月无妊娠期合并症及并发症孕妇剖宫产后胎盘组织按胎儿出生体重分3组,1组:出生体重≥4000 g,2组:3000 g≤出生体重＜4000 g,3组:出生体重＜3000 g.(2)10例足月剖宫产后胎盘组织及20例早孕绒毛组织,按刺激因素分成3组,胰岛素组,雷帕霉素组及对照组,采用免疫沉淀、[r-32P]ATP掺入、组织细胞培养、Wester印迹技术对P~(70)S6K活性及胰岛素通过信号通路发挥作用的机制进行研究.结果 (1)在足月胎盘组织中p~(70)S6K活性分别为(2546±357)、(2333±318)及(2111±315)cpm/mg,1组＞2组＞3组,两两比较差异有统计学意义.(2)胰岛素作用足月胎盘组织细胞的P70S6K使其活性增强,mTOR特异性抑制剂雷帕霉素作用后p~(70)S6K活性下降,均与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).(3)胰岛素作用后使早孕滋养细胞p~(70)S6K活性增强及蛋白表达增加,雷帕霉素作用后使早孕滋养细胞p~(70)S6K活性及蛋白表达明显下降,均与对照组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 P~(70)S6K活性随出生体重增加而增加,因此在胎盘组织细胞中P~(70)S6K活性与胎儿出生体重相关,胰岛素可调节早孕滋养细胞及足月胎盘组织中P~(70)S6K.     

胆南星拮抗热性惊厥模型小鼠脑组织损伤及炎症的作用研究

  目的  研究胆南星拮抗热性惊厥模型小鼠脑组织损伤及炎症的药效作用。  方法  采用干酵母混悬液及戊四氮溶液构建热性惊厥小鼠模型, 考察不同剂量胆南星水提物对模型小鼠肛温、惊厥潜伏期及惊厥持续时间的影响, HE染色观察小鼠海马神经元形态, ELISA法检测小鼠血清cAMP、PGE₂水平, Western blot法检测脑组织COX-2、iNOS、γ-氨基丁酸A型受体(GABAAR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白表达, qPCR法检测海马组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达。  结果  与模型组比较, 胆南星高剂量组能够降低模型小鼠肛温(P < 0.05), 延长惊厥潜伏期(P < 0.05), 缩短惊厥持续时间(P < 0.01), 上调GABAAR蛋白表达(P < 0.05);同时降低血清cAMP、PGE₂水平(P < 0.01), 改善海马神经元细胞形态学变化, 下调脑组织COX-2、iNOS、GFAP蛋白表达(P < 0.05), 降低海马组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平(P < 0.05)。  结论  胆南星具有良好的抗热性惊厥作用, 其机制可能与解热、拮抗脑组织炎症有关。      

柴参解郁汤对腹泻型肠易激综合征小鼠粪便胆汁酸代谢轮廓的影响

目的 通过研究柴参解郁汤对腹泻为主型肠易激综合征(Diarrhea predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)模型小鼠粪便中胆汁酸代谢轮廓的影响,探讨柴参解郁汤改善IBS-D的可能机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为3组,空白组、模型组、柴参解郁汤组(15 g·kg-1)...     

白头翁醇提物的抗肿瘤作用

目的：主要探索中药白头翁抗肿瘤的有效组分，研究其醇提物的作用及安全性。方法：采用小鼠移植性肿瘤模型（S180肉瘤、HepA肝癌、EAC腹水癌）、碳末廓清试验及口服最大耐量试验进行观察。结果：白头翁醇提物30、20、109／kg／d口服共9天，对S180肉瘤、HepA肝癌的抑瘤率分别为35．6、30．1、27．9％及40．2、38．0、31．8％；对EAC的生命延长率为12．5、7．0及1．2％。各剂量组均能提高非特异性免疫功能。口服最大耐量超过105g／kg。结论：醇提物口服毒性小，确有较高抑瘤和提高免疫功能的作用。     

雷帕霉素协同去甲氧柔红霉素诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡的作用

目的:探讨去甲氧柔红霉素( idarubicin,IDA)联合雷帕霉素(rapamycin,Rapa)抗人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL) Jurkat细胞株的效应及机制.方法:应用CCK-8法分析两药联用对细胞增殖的影响;Isobologram法分析两药联合作用的性质;电镜形态学观察和Annexin V/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测凋亡相关基因Caspase3、PARP、Caspase8、Caspase9及Akt、p-Akt、P85S6K、p-P85S6K、P70S6K、p-P7OS6K、ERK1/2、p-ERK1/2等蛋白质水平表达.结果:CCK-8法示IDA联合Rapa能明显降低IDA的半数抑制浓度(50% inhibition concentration,IC50)值.Isobologram法示两药联合指数小于1.免疫印迹法示两药联用组较IDA单用组更能激活Caspase3和底物PARP,Caspase8和Caspase9在两药联用组均呈现明显激活.IDA联用Rapa后能使mTOR 信号通路上游的Akt及下游的P85S6K、P70S6K分子磷酸化水平明显降低,并能协同下调ERK的磷酸化水平.结论:Rapa和IDA对Jurkat细胞的生长抑制具有协同作用,两药联用时细胞凋亡增加,且通过线粒体和细胞膜双途径增强凋亡效应.其协同机制可能与Rapa逆转IDA引起的Akt/mTOR信号通路激活,并抑制ERK信号活化有关.