羧酸酯酶在抗肿瘤药物研究中的作用

哺乳动物羧酸酯酶(carboxylesterase,CESs)是一个多基因家族,其基因产物定位于多种组织的内质网中.羧酸酯酶能有效催化酯类和酰胺类化合物水解,承担多种前体药物的生物转换功能药物.综述羧酸酯酶的结构、分类、生化性质、作用机制及其在抗肿瘤药物研究中的最新进展.     

羧酸酯酶1对大鼠颈动脉损伤后血管狭窄及炎性反应的影响

目的：探讨羧酸酯酶1（carboxylesterase 1,CES1）对大鼠颈动脉内膜损伤后血管狭窄及炎症反应的影响。方法随机将大鼠分为3组,CES1组使用球囊导管制备颈总动脉损伤模型,在术后0 d、1 d、2 d尾经脉注射载有CES1的慢病毒载体促进CES1高表达;空载病毒组颈动脉损伤后注射空载病毒;空白对照组给予假手术处理。于术后第14天取材,HE染色后计算内膜增生情况,免疫组化和Western Blot检测TLR-4蛋白表达,实时荧光定量PCR测定TRL-4基因表达。结果HE染色表明CES1高表达能够明显抑制血管内膜损伤后的内膜增生,降低炎症反应,减少血管狭窄,免疫组化及实时荧光定量PCR和Western blot结果显示CES1高表达能够降低血管内膜中TLR-4的蛋白及基因表达。结论 CES1高表达能够下调损伤血管内TLR-4的表达从而抑制炎症反应,减轻血管损伤后狭窄。     

BRCA1基因CpG岛甲基化所致转录抑制作用具有位点特异性

表遗传 ( Epigenetics)是一种可遗传的 ,非DNA序列改变的 ,能引起基因表达水平的异常。 DNA的甲基化是影响表遗传的主要因素 ,与基因表达抑制、基因功能缺失有关。许多抑癌基因如 p1 6、Rb、BRCA1等 ,通过 DNA的甲基化而失活 ,成为某些肿瘤和遗传性疾病发病的重要机制之一。但是 ,并不是所有的胞嘧啶 5′甲基化与基因表达下降有关。研究表明 ,基因转录抑制可能与基因启动子和第一外显子区域特别是 Cp G岛的甲基化有关。基因的 Cp G岛序列长度在 2 0 0 bp以上 ,在此区域内存在许多的Cp G位点。如 BRCA1基因的 Cp G岛即在 -567～ +…     

一种新型单羧酸转运体基因的分离与克隆

目的 分离、克隆编码肾脏甲酸盐（formate)和（或）草酸盐（oxalate)转运体的cDNA,以研究Cl^-在近端肾小管转运的机制。方法 根据细菌Oxlt(formate-oxalate交换体）的基因序列在哺乳动物表达序列标签（express sequence tag,EST)数据库中查找与其相似的cDNA。按筛选到的cDNA设计探针,应用小鼠多组织杂交膜分析该基因的组织表达谱。结果 在小鼠肾cDNA文库中有一个与Oxlt极其相似的EST,序列分析显示了其有一编码429个氨基酸蛋白质的开放阅读框。从编码的顺序中可发现该序列与单羧酸转运家族（monocarboxylate transporter,MCT)极为相近,与小鼠MCT1的氨基酸一致性为30％,与小鼠MCT2为33％,与大鼠MCT329％。其中第14－158个氨基酸中有25％与OxlT相同。Northern印迹发现,新的基因在小鼠肾脏中表达最多,肝脏和心脏中极少表达。结论 该基因是一新型的MCT家族成员,主要在肾脏中表达,其功能可能是介导肾小管的formate转运。     

单次给予氟西汀诱导小鼠肝脏甘油三酯积累的作用机制

目的:研究氟西汀对小鼠肝脏脂质代谢的影响?方法:小鼠腹腔注射10 mg/kg或25 mg/kg氟西汀,对照组给予生理盐水,以25 mg/kg氯氮平作为阳性对照,注射6 h或24 h后处死小鼠,取肝脏组织?用油红O染色观察肝脏中性脂肪积累;用试剂盒测定肝脏甘油三酯和总胆固醇含量;用Western blot技术测定小鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)?乙酰辅酶A羧化酶(ACC1)和脂肪酸合成酶(FAS)以及羧酸酯酶1和3(CES1和CES3)的蛋白表达水平?结果:氟西汀诱导小鼠肝脏脂质积累,增加肝脏甘油三酯含量;氟西汀显著增加小鼠肝脏SREBP1c?ACC1和FAS的蛋白表达,同时小鼠肝脏CES1和CES3的蛋白表达水平显著减少?结论:氟西汀可能通过增加脂质合成基因的表达及减少脂质分解基因的表达从而诱导小鼠肝脏的脂质积累?     

基于数据库挖掘5种胃癌干性基因在胃癌中潜在价值研究

目的 挖掘异常表达的胃癌干性基因LGR5、CD44、ASPM、ABCG2及PSCA在胃癌诊断、治疗及预后中的潜在生物学价值。方法 UALCAN和Oncomine数据库分析LGR5、CD44、ASPM、ABCG2及PSCA的基因表达水平;借助cBioPortal分析干性基因变异及其与患者生存之间的影响;Kaplan-Meier plotter分析干性基因表达与患者生存之间的关系;LinkedOmics分析干性基因正负相关的网络基因;MetaScape数据库分析干性基因及网络基因功能注释及基因通路;IMER数据库研究干性基因与免疫细胞浸润的相关性,并分析免疫细胞对胃癌患者生存的影响。结果 胃癌组织中LGR5、CD44及ASPM mRNA水平及DNA拷贝数高于相应的正常组织（P<0.05）,ABCG2和PSCA mRNA水平低于正常组织（P<0.05）,而PSCA的DNA拷贝数高于正常组织（P<0.05）,ABCG2的DNA拷贝数无统计学意义;LGR5、CD44、ABCG2高表达组的总生存期明显短于低表达组（HR>1,P<0.05）;ASPM高表达组长于对照组（...     

MTA1基因在鼻咽癌中表达与肿瘤转移和EB病毒感染的关系

[目的]探讨EB病毒感染对MTA1在鼻咽癌中表达的影响以及MTA1表达对鼻咽癌转移的可能作用.[方法]检测60例不同临床分期鼻咽癌患者血VcA-IgA和DNA酶以及鼻咽癌标本MTA1表达水平.[结果]鼻咽癌患者血中VcA-IgA、DNA酶的水平高低与MTA1基因表达无相关,其相关系数分别为0.105和0.096.不同性别和T2～T4各级中,MTA1基因表达无明显差异(P>0.05).而在不同N分级中,MTA1基因在第Ⅰ期和第Ⅱ期与第Ⅲ和第Ⅳ期之间有明显差异(P<0.05).[结论]EB病毒在鼻咽癌中的感染不会诱发或导致MTA1基因表达.MTA1基因表达在鼻咽癌的侵袭中未起作用,其也不是诱发鼻咽癌转移的原因,但可能在鼻咽癌转移的后期起了一定的协同作用.     

胃癌细胞系中组蛋白H3-K9甲基化与错配修复基因hMLH1表达及DNA甲基化的关系

目的 探讨胃癌细胞系中组蛋白H3-K9甲基化与DNA甲基化及错配修复基因hMLHI表达的关系.方法 应用去甲基化制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)作用于2个胃癌细胞系,MGC-803和BGC-823.应用染色质免疫沉淀(CHIP)、甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析药物作用前后hMLH1基因启动子区域组蛋白H3-K9甲基化、DNA甲基化和hMLH1基因表达.结果 MGC-803细胞系中,沉默的hMLH1基因启动子区域表现为DNA甲基化和组蛋白H3-K9高甲基化,5-Aza-dC不但能使DNA发生去甲基化,使沉默的hMLH1基因重新表达,而且能降低沉默位点的H3-K9甲基化水平.BC,C-823细胞不表达hMLH1基因,其DNA非甲基化,与MGC-803细胞相比较,其组蛋白H3-K9甲基化水平低.5-Aza-dC对BGC-823细胞中的基因表达、DNA甲基化和H3-K9甲基化没有影响.结论 在胃癌中,hMLH1基因启动子区组蛋白H3-K9的甲基化与DNA甲基化及基因沉默相关,去甲基化制剂可调控DNA甲基化、基因表达和组蛋白1-13-K9甲基化.     

短干扰RNA抑制人宫颈癌HeLa细胞Ku80基因表达

目的 针对内源性Ku80基因序列体外构建短干扰RNA（siRNA）线性DNA转录载体，观察其在细胞内产生的siRNA对该基因表达的影响。方法 构建的线性DNA转录载体经脂质体导入宫颈癌HeLa细胞内，转录产生21bp的短双链siRNA，并用免疫印迹法分析Ku80基因在蛋白水平表达的情况。结果 体外成功构建出siRNA线性DNA转录载体LS1／LAS1和LS2／LAS2；载体分别导入HeLa细胞内生成相应siRNA；与空白对照组比较，实验组均能特异性抑制Ku80基因的表达；其抑制效果和时间点与所选基因靶位相关。结论 由线性DNA载体转录生成的siRNA在细胞内特异性抑制内源性基因表达，为Ku80用于肿瘤靶向基因治疗提供了一个新的实验依据。     

基因表达谱芯片技术筛选乙型肝炎病毒DNA多聚酶P结构域反式调节基因

目的：应用基因芯片技术，对乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)聚合酶P结构域蛋白／逆转录酶(PR)的基因表达谱进行分析，探索PR对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能。方法：设计并合成PR基因序列特异性的引物，应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增PR蛋白编码基因片段，以常规的分子生物学技术将获得的PR编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定，构建真核表达载体pcDNA3．1(-)-PR。以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2，提取mRNA，逆转录为cDNA，与转染空白表达载体pcDNA3．1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析。结果：基因芯片技术所检测的1152个基因表达谱的筛选中，79条基因表达水平上调，90条基因表达水平下调。结论：应用基因表达谱芯片成功筛选了HBVDNA聚合酶PR转染细胞后差异表达基因，为进一步阐明PR蛋白可能的分子生物学机制提供依据。     

伴异柠檬酸脱氢酶1基因突变急性髓系白血病的临床特征及预后

目的 评估异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因突变在急性髓系白血病(AML)患者中的发生率、临床特征及预后意义。方法 选取2015年1月至2018年9月于我院初诊的220例AML患者,应用PCR方法扩增IDH1基因的4号外显子,通过基因测序检测IDHl基因突变情况,分析IDH1突变患者的临床特征及预后意义。结果 220例AML患者中检出IDH1基因突变者9例,突变率为4.09％,均为R132H突变。突变组患者中位年龄为50岁,未突变患者中位年龄为43岁,两组间比较有差异,P＜0.05;突变组患者初诊血小板计数为68(48～175)×10⁹/L,未突变组患者初诊血小板计数为43(10～253)×10⁹/L,两组间比较有差异,P＜0.05。IDH1基因突变均发生在AML-M5和AML-M4中,未见其他亚型。正常核型组IDH1基因突变率6.48%(7/108),高于异常核型组IDH1基因突变率1.43%(1/70),无统计学差异。IDH1基因突变与NPM1基因突变有相关性,P＜0.05 ,与FLT3-ITD基因突变无明显相关性。IDH1基因突变患者免疫表型易出现CD34^-、CD33⁺、CD64⁺( P均<0.05)。IDH1突变组化疗完全缓解率为50%(4/8),低于非突变组化疗完全缓解率80.92%(140/173), P＜0.05 。所有随访患者中,IDH1突变组2年总生存率为25%(1/4),低于非突变组2年总生存率67.32%(103/153), P＜0.05;正常核型患者中,IDH1突变组2年总生存率为28.57%(2/7),低于非突变组2年总生存率65.91%(58/88),P＜0.05 ;不伴有NPM1突变的患者中,IDH1突变组2年总生存率为0%,明显低于非突变组2年总生存率67.20%(84/125),P＜0.05;伴有NPM1突变的患者中,IDH1突变组2年总生存率为40%(2/5),非突变组2年总生存率为67.86%(19/28),差异无统计学意义。结论 IDH1基因突变患者年龄较大,血小板计数较高。IDH1基因突变易发生于正常核型患者,易见于AML-M5和AML-M4。IDH1基因突变与NPM1基因突变有相关性。IDH1基因突变对AML患者的预后有不良影响,是预后不良的分子标志,伴有NPM1突变时,对患者的预后无明显影响。     

重度宫腔粘连相关基因的生物信息学分析

目的 从分子水平探讨重度宫腔粘连（intrauterine adhesion,IUA）的发生机制。方法 重度宫腔粘连组织及正常子宫组织每组13例标本,各组取3例用于芯片分析,10例用于RT-PCR验证芯片结果。应用芯片检测两组中差异表达的基因,采用GO数据库及京都基因与基因组大百科全书数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）对差异表达的基因进行基因功能分析与信号传导通路分析（pathway analysis）。结果 筛选出1 425个差异基因,其中上调基因731个,下调基因694个,对其进行生物信息学分析发现,差异表达基因功能主要包括：信号传导、多种细胞有机体发育、细胞粘连、细胞分化、单核细胞活化等。对部分差异表达基因COL16A1、ADAM-9,CDH2、LOX进行RT-PCR验证,结果表明其表达趋势与芯片结果一致。结论 利用生物信息学分析能有效挖掘基因芯片内在数据,对部分差异表达基因进一步分析表明,宫腔粘连发生发展中可能存在通过调节细胞外基质的表达与功能的机制,调节宫腔粘连的形成。     

Kcnh6点突变单基因糖尿病家系的小鼠模型构建及表型分析

目的 通过CRISPR/Cas9技术构建Kcnh6基因P235L位点基因敲入定点突变小鼠模型,并验证该突变能否成功复制人类糖尿病家系表型,为接下来研究Kcnh6基因在糖尿病发病中的作用提供更精确的实验工具。方法 设计针对已知糖尿病家系点突变位点的sgRNA(small guide RNA,sgRNA),同时制作一个携带靶位点同源臂、突变位点序列的供体DNA敲入载体。将sgRNA、cas9 mRNA和敲入载体通过显微注射移入小鼠的受精卵,选取其中存活的受精卵将其移植入假孕小鼠子宫,繁育得到子代小鼠。采用聚合酶链反应和基因测序等方法检测子代小鼠Kcnh6基因碱基突变情况。监测基因敲入小鼠的体质量和并对小鼠做糖耐量和胰岛素分泌实验。结果 成功构建Kcnh6-P235L位点基因敲入纯合子小鼠。在高脂饲料喂养条件下,与同窝野生型(wild type, WT)小鼠相比,Kcnh6 基因插入(knock in, KI)点突变小鼠的体质量增加,糖耐量及胰岛素分泌功能受损。结论 成功构建了Kcnh6基因点突变敲入小鼠模型,且此模型具有糖尿病相关表型。     

利用二代测序数据探索SPRY基因家族与中国人群非综合征型唇腭裂的关联

目的 探索SPRY基因家族中的单核苷酸多态性及亲源效应与中国人群非综合征型唇腭裂发病风险的关联。方法 研究基于病例-双亲设计,以2016—2018年于北京大学口腔医院募集的 183个中国人群非综合征型唇裂合并或不合并腭裂(non-syndromic cleft lip with or without cleft palate,NSCL/P)核心家系(549人)为研究对象。利用其二代测序数据中的SPRY基因家族相关信息,展开单核苷酸多态性和亲源效应分析。该测序研究采用二阶段设计,第一阶段对24个家系进行全外显子组测序探索潜在阳性信号,第二阶段在159个家系的独立样本中对第一阶段结果进行验证。采用问卷调查收集NSCL/P患者及其父母的基本情况、患病情况、临床特征及孕期环境暴露等信息。收集患儿及其父母的血液并提取DNA进行基因检测以获取遗传信息。单核苷酸多态性分析采用传递不平衡检验,亲源效应分析采用Z检验,统计分析使用PLINK(v1.07)软件完成。第一阶段的多位点分析采用以家系为基础的序列核心关联检验方法,由R软件(v3.5.1)famSKAT-RC包完成。采用Bonferroni法对验证结果进行多重检验校正。结果 经过质量控制,第一阶段共有22个SPRY基因家族的位点纳入分析,结合位点的注释、功能预测结果及统计检验结果,纳入rs1298215244 (SPRY1)和rs504122 (SPRY2)两个位点进入二阶段验证。二阶段传递不平衡检验发现,rs1298215244: T>C、rs504122: G>C两种常见变异以及rs504122: G>T罕见变异与NSCL/P的关联达到Bonferroni多重检验校正后的显著性水平,位于SPRY1的rs1298215244: T>C其亲源效应矫正前具有统计学意义,但未能通过多重检验校正。结论 发现SPRY基因家族中的单核苷酸多态性与中国人群NSCL/P的发病风险存在关联,但未发现SPRY基因家族具有亲源效应。     

一个蛇苔氧甲基转移酶基因的克隆与功能鉴定

目的 克隆蛇苔氧甲基转移酶(CcOMT1)基因并对其进行功能鉴定。 方法 通过RT-PCR技术获得CcOMT1基因的cDNA全长。构建原核表达质粒pET32a-CcOMT1,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达后,利用Ni-NTA吸附柱对表达的重组蛋白进行纯化,并通过体外酶活分析其活性。采用DNAMAN 7.0和MEGA 5.1软件分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析。 结果 克隆得到的CcOMT1开放读码框为837 bp,编码278个氨基酸,预测分子量为30.95 kDa,等电点为5.59。与来自钝鳞紫背苔、紫花苜蓿和冰叶日中花的氧甲基转移酶的同源性分别为73.18%、53.60%和44.60%。对纯化的重组蛋白进行酶活检测,结果表明融合蛋白可以催化具有邻二酚羟基的黄酮和苯丙类化合物,产生相应的氧甲基化产物,其最适底物为槲皮素。 结论 克隆并鉴定了一个CcOMT1基因,为通过酶法实现化合物的氧甲基化修饰提供了一个候选基因。     

组织蛋白酶B通过瞬时受体电位黏蛋白-1对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化的影响

目的 探索在细胞氧化应激模型和特异性基因沉默细胞模型中,组织蛋白酶B(CTSB)通过瞬时受体电位黏蛋白-1(TRPML1)对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法 对体外培养的BV2细胞分别用H₂O₂、钙敏感性受体激动剂GdCl₃、CTSB抑制剂CA-074Me单独或同时处理,用酶联免疫吸附实验方法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和半胱天冬酶-1-蛋白;用定量PCR方法检测各组BV2细胞的NLRP3 mRNA。用MTT法检测各组BV2细胞生长活力。用定量PCR方法检测BV2细胞中胱抑素C和TRPML1的mRNA,用Western blot检测TRPML1、CTSB、组织蛋白酶D(CTSD)、组织蛋白酶L(CTSL)、组织蛋白酶V(CTSV)蛋白。针对TRPML1基因靶序列设计特异性小干扰RNA(siRNA),在BV2细胞中建立TRPML1基因沉默细胞株(命名为Tr-si-BV2细胞),通过H₂O₂处理,再用Western blot检测Tr-si-BV2细胞或对照组细胞中的TRPML1、CTSB和转录因子EB(TFEB)蛋白。结果 用H₂O₂处理后,BV2细胞中半胱天冬酶-1蛋白和NLRP3 mRNA表达增加,加用GdCl₃处理后,BV2细胞中IL-1β显著增加(P=0.0036);使用CA-074Me处理后,NLRP3 mRNA(P=0.037)、半胱天冬酶-1(P=0.021)、IL-1β(P= 0.036)均显著减少。H₂O₂组和H₂O₂+GdCl₃组的细胞生长较慢。在H₂O₂浓度为200 μmol/L的处理组,BV2细胞中CTSB mRNA与TRPML1 mRNA、或CTSB与TRPML1蛋白的表达均有相似的变化;沉默TRPML1基因表达水平后能够抑制H₂O₂诱导的CTSB蛋白表达。组织蛋白酶CTSD、CTSL、CTSV的变化不受H₂O₂处理浓度高低的影响。在进行TRPML1基因沉默处理的BV2细胞中,H₂O₂ +siRNA处理组与H₂O₂处理组比较,CTSB蛋白的表达显著减少(P=0.021)。结论 在小胶质细胞的氧化应激模型中,CTSB具有调节NLRP3炎症小体活化的作用,这种作用有可能通过钙离子通道蛋白TRPML1介导。     

新疆石河子地区绝经后2型糖尿病女性SOST基因联合LRP5基因多态性及突变与骨代谢关系的研究

目的 探讨SOST基因和低密度脂蛋白5 (low density lipoprotein 5, LRP5)基因多态性及突变与石河子地区绝经后2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)女性骨代谢的关系,为绝经后T2DM伴骨质疏松(osteoporosis,OP)的发生给予指导。方法 选取2018年7月至2019年7月期间在新疆石河子大学医学院第一附属医院内分泌代谢科门诊就诊的135例绝经后女性作为研究对象(45岁≤年龄<87岁),按照骨密度(bone mineral density,BMD)结果分为骨量正常组(n=52)和骨量异常组(n=83),再依据是否伴T2DM分为4个亚组,血糖正常伴骨量正常组(n=26)、血糖正常伴骨量异常组(n=28)、T2DM伴骨量正常组(n=26)及T2DM伴骨量异常组(n=55);记录其年龄等一般基线资料;生化分析仪(全自动性)检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)与空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)等生物化学指标参数;双能X线吸收检测法(dual-energy X-ray absorptiometry, DXA)法检测BMD;飞行时间质谱(time-of-flight mass spectrometry,TOF-MS)法检测LRP5基因与SOST基因位点的多态性。结果 在LRP5基因rs901825位点中,与A组相比,D组基因型分布差异有统计学意义(P<0.01);在LRP5基因rs7125942位点中,与A组相比,B组基因型分布差异有统计学意义(P<0.05)。在D组中,SOST基因rs10534024位点,TCC.DEL/TCC.TCC基因型(突变型)的BMD(股骨颈)低于DEL.DEL基因型(野生型)(0.69±0.13 vs 0.76±0.10,P<0.05);LRP5基因rs7125942位点,在TG上,CC基因型(野生型)、CG基因型(突变型)分别为4.12±0.79、3.22±1.04,前者显著偏高 (P<0.01)。在B组分析SOST基因rs851054位点发现,在TG上,相较AG/AA基因型(突变型),GG基因型(野生型)显著偏高 (2.11±1.19 vs 1.30±0.80,P<0.05)。交互作用:SOST基因rs851054位点与LRP5基因rs7125942位点的交互作用对BMD(股骨颈)产生影响(P<0.05);SOST基因和LRP5基因4个位点的交互作用对BMD(股骨颈)产生影响(P<0.01)。多元线性回归分析:SOST基因rs10534024位点、体质量指数、TG与于BMD(L1-4)水平正向相关;LRP5基因rs7125942位点、绝经年限(BMD股骨颈)水平与负向相关。结论 通过调查石河子区域绝经后女性发现,其LRP5基因rs901825位点基因多态性和骨代谢、糖代谢可能相关;在LRP5基因rs7125942位点,基因多态性与骨代谢有关且是BMD降低的危险因素,基因突变可能与脂代谢有关。对石河子区域绝经后女性调查发现,其SOST基因rs10534024位点的基因突变和BMD可能相关。SOST基因和LRP5基因的交互作用可能是BMD(股骨颈)降低的危险因素。     

双荧光素酶报告基因系统验证hsa-miR-1291对ARHGAP29基因的调控作用

目的 验证hsa-miR-1291对ARHGAP29基因的靶向调控作用。方法 利用PCR方法,根据目的基因ARHGAP29的3'非编码区(3' untranslated region,3'UTR)序列信息设计扩增引物,以293T细胞基因组DNA为模板,扩增ARHGAP29基因的野生型3'UTR片段(ARHGAP29-WT 3'UTR)及突变型3'UTR片段(ARHGAP29-MUT 3'UTR),并将其分别克隆到双荧光素酶报告pmiR-RB-Report载体中,构建双荧光素酶基因报告载体,即野生型载体ARHGAP29-WT 3'UTR pmiR-RB-Report和突变型载体ARHGAP29-MUT 3'UTR pmiR-RB-Report。将hsa-miR-1291 mimic、阴性对照(non-target control,NC组)同野生型载体、突变型载体载体分别共转染于293T细胞中,进一步检测相对荧光值。结果 成功构建ARHGAP29-WT 3'UTR pmiR-RB-Report载体(野生型载体)、ARHGAP29- MUT 3'UTR pmiR-RB-Report载体(突变型载体)。荧光检测结果显示,野生型载体转染hsa-miR-1291 mimic后,其荧光表达较NC组明显下降(0.67±0.04 vs 1.00±0.08, P=0.014);转染hsa-miR-1291 mimic后,突变型载体的荧光表达相对于野生型载体的荧光表达有所上升(1.20±0.05 vs 0.67±0.04, P<0.001)。结论 初步证实hsa-miR-1291很可能对ARHGAP29 3'UTR上的该位点有靶向调控作用。