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1.
目的 构建稳定过表达/下调表达miR-125b-5p的Jurkat T细胞株,为miR-125b-5p在免疫性疾病中的发病机制研究奠定基础。 方法 扩增质粒,经293T细胞包装产生慢病毒颗粒,感染Jurkat T细胞,RT-qPCR检测miR-125b-5p表达情况,Western blotting检测下游靶基因UVRAG表达情况。采用单因素方差分析,2组之间比较应用LSD检验,P<0.05为差异具有统计学意义。 结果 hsa-miR-125b-5p慢病毒过表达载体及对照转染Jurkat T细胞后均有绿色荧光表达,hsa-miR-125b-5p慢病毒干扰载体及对照转染Jurkat T细胞后均有红色荧光表达;RT-qPCR显示和对照组比较慢病毒过表达载体组miR-125b-5p表达水平明显增高(P<0.01),慢病毒干扰载体组miR-125b-5p表达水平明显降低(P<0.01),差异均有统计学意义。Western blotting显示和对照组比较,慢病毒过表达载体组下游靶基因UVRAG表达明显降低(P<0.001),慢病毒干扰载体组下游靶基因UVRAG表达明显升高(P<0.001),差异均有统计学意义。 结论 成功建立了稳定过表达/下调表达hsa-miR-125b-5p的Jurkat T细胞株。 相似文献
2.
目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) MIR34AHG通过miR-296-5p/SRCIN1轴对喉癌细胞增殖和迁移的作用。方法 qPCR检测MIR34AHG在喉癌细胞系(TU686、Hep-2、TU177、AMC-NH-8、TU212)以及支气管上皮细胞系(16HBE)中的表达。选取MIR34AHG表达最低细胞系,分别构建MIR34AHG过表达细胞系(MIR34AHG组)和对照细胞系(对照组)。MTT法、细胞划痕实验分别检测上调MIR34AHG对细胞增殖和迁移的影响。生物信息学工具预测MIR34AHG的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测MIR34AHG与靶基因之间的相互作用。qPCR和Western blot法检测上调MIR34AHG对相关基因和蛋白表达的影响。结果 与16HBE细胞比较,喉癌细胞系中MIR34AHG呈低表达(P<0.01),且以TU686细胞中表达最低(P<0.01)。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制TU686细胞的增殖和迁移(P<0.05)。MIR34AHG和miR-296-5p之间存在靶向关系(P<0.01),miR-296-5p的靶基因可能是SRCIN1。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制miR-296-5p表达(P<0.01),促进SRCIN1基因的表达(P<0.01)。结论 MIR34AHG可能通过下调miR-296-5p的表达、上调SRCIN1的表达从而抑制喉癌细胞的增殖和迁移。 相似文献
3.
目的 探讨miR-181b-5p通过下调CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-181b-5p在膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637)和人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中的表达水平。在T24和UM-UC-3细胞中转染miR-181b-5p模拟物 (miR-181b-5p组)和miR-NC(对照组),CCK-8实验和克隆形成实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞迁移和侵袭的影响。采用生物信息学预测miR-181b-5p潜在下游靶基因CYLD,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p是否与CYLD的3′-UTR结合,qRT-PCR检测过表达miR-181b-5p对CYLD mRNA的影响,Western blot法检测过表达miR-181b-5p对CYLD蛋白的影响。在T24和UM-UC-3细胞中沉默CYLD的表达,采用CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测沉默CYLD对T24和UM-UC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与SV-HUC-1比较,膀胱癌细胞系中miR-181b-5p的表达水平升高(P<0.05)。与对照比较,过表达miR-181b-5p和沉默CYLD均促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,过表达miR-181b-5p 明显降低野生型CYLD 的荧光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot法结果显示过表达miR-181b-5p显著下调CYLD mRNA和蛋白的水平(P<0.05)。结论 miR-181b-5p通过负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。 相似文献
4.
目的 探究miR-146b-5p促进食管鳞状细胞癌恶性表型的分子机制。方法 选取2020年10月-2021年12月在四川省西南医科大学附属医院行食管癌根治术治疗的38名食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁正常组织(NAT)样本,核酸原位杂交法检测miR-146b-5p在食管鳞癌及癌旁正常组织中的表达水平;通过siRNA敲低miR-146b-5p的表达水平,细胞增殖实验、划痕实验检测敲低miR-146b-5p后细胞行为学表型变化;生物信息学分析预测miR-146b-5p的下游靶基因为CD82;免疫印迹法(Western-blot)检测靶基因CD82的表达水平,双荧光素酶报告基因实验确定miR-146b-5p与CD82之间的调控关系。结果 核酸原位杂交法检测结果显示,与NAT组织病理评分比较,miR-146b-5p在ESCC组织中的病理评分较高(P<0.05);EdU细胞增殖实验结果显示,与NC组比较,KD组EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,与NC组比较,KD组划痕愈合比例显著下降(P<0.05)。ENCORI数据库预测CD82是miR-146... 相似文献
5.
目的:探讨miR-1229-5p对SW480细胞生物学功能的影响和作用机制。方法:采用瞬时转染在SW480细胞中过表达miR-1229-5p,进行细胞克隆、EdU实验、MTT、细胞划痕、Transwell小室迁移及侵袭实验,检测miR-1229-5p mimics组与对照组结直肠癌细胞SW480生物学功能变化。转染过表达miR-1229-5p慢病毒后进行裸鼠皮下成瘤实验,观察miR-1229-5p在体内对细胞增殖能力的影响。通过预测软件TargetScan筛选出X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)作为miR-1229-5p的潜在下游靶基因,并检测miR-1229-5p对其蛋白表达的影响。在SW480细胞中转染XAF1过表达质粒,共转染miR-1229-5p后进行回复实验验证miR-1229-5p通过靶向XAF1促进SW480细胞增殖及侵袭。结果:miR-1229-5p mimics组较miR-NC组细胞的增殖、迁移及侵袭能力均提高(P<0.01);miR-1229-5p组瘤体体积高于miR-NC组(P<0.01);miR-1229-5p组对靶基因XAF1表达量低于miR... 相似文献
6.
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:收集47例骨肉瘤组织及对应瘤旁组织,RT-qPCR法检测组织中HCG18和miR-34b-5p表达,Pearson相关分析评价骨肉瘤组织中HCG18和miR-34b-5p表达的相关性。体外培养骨肉瘤U2OS细胞,分别转染si-HCG18、miR-34b-5p mimics、共转染si-HCG18与anti-miR-34b-5p或miR-34b-5p mimics与pcDNA-FOXP1后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell分别检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法检测细胞中FOXP1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HCG18和miR-34b-5p及miR-34b-5p和FOXP1调控关系。结果:骨肉瘤组织中HCG18表达量高于瘤旁组织(P<0.01),而miR-34b-5p表达量低于瘤旁组织(P<0.01)。Pearson相关分析结果显示,骨肉瘤组织中HCG18与miR-34b-5p的表达呈负相关关系(r=-0... 相似文献
7.
目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,... 相似文献
8.
目的:探讨微小RNA-216a-5p(miR-216a-5p)靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白(WASL)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法:收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物(miR-216a-5p)、模拟物阴性对照(miR-con)、沉默对照(si-con)、沉默WASL的小干扰RNA(si-WASL)、抑制物阴性对照(anti-miR-con)、miR-216a-5p抑制物(anti-miR-216a-5p)、miR-216a-5p及空载质粒(pcDNA)和miR-216a-5p及WASL过表达质粒(pcDNA-WASL)分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR(Real-time RT-qPCR)和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果:与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低(P<0.05),WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),两者呈负相关关系(r=-0.317,P<0.01)。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平(P<0.01)和细胞增殖活性均明显降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。 相似文献
9.
目的 探讨miR-148b-3p通过调节脂代谢基因对肝癌细胞增殖、转移及侵袭能力等恶性生物学行为的影响。方法 通过癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库寻找miR-148b-3p、肝癌及脂代谢三者的交集基因,筛选miR-148b-3p治疗肝癌的潜在靶点基因;采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-148b-3p在正常肝脏细胞LO2和肝癌细胞Huh7、Hep1中的表达水平,选取miR-148b-3p表达量最低的细胞Huh7作为研究对象;Huh7肝癌细胞分为对照组(转染miR-148b-3p NC)和实验组(转染miR-148b-3p mimics),CCK8实验和克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验、以及油红O染色分别检测两组肝癌细胞的增值、迁移、侵袭能力及脂滴形成情况,采用RT-PCR和Western blot检测交集基因及脂肪生成指标基因FASN、PPAR-γ及SCD1的mRNA和蛋白表达水平。结果 miR-148b-3p在Huh7细胞中mRNA相对表达量显著低于Hep1细胞(P<0.01)和LO2细胞(P<0.001);与对照组相比,实验组H... 相似文献
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目的:探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G (NCAPG)的靶向关系及其对肝细胞肝癌(HCC)细胞生物学功能的影响,为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。方法:通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照(mimic NC)组、miR-150-5p模拟物(miR-150-5p mimic)组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照(miR-150-5pmimic+ovNC)组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG(miR-150-5p mimic+ovNCAPG)组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平,5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测各组细胞EdU阳性率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性... 相似文献
12.
目的:探讨miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的分子机制。方法:取经病理诊断确诊为胃癌的68例患者的胃癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌组织、癌旁组织和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞、人胃癌细胞(MKN-28、MGC-803、 MKN-45、 SGC-7901和HGC-27)中miR-431-3p及羧基末端结构域磷酸酶1 (CTDP1)mRNA表达水平,Western blotting法检测上述细胞中CTDP1蛋白和各组SGC-7901细胞中细胞色素C(Cyt C)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析miR-431-3p与CTDP1 mRNA表达水平的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-431-3p和CTDP1的靶向关系。将miR-431-3p mimic和CTDP1过表达慢病毒分别或同时转染至SGC-7901细胞中,将细胞分为空白组、空载过表达(mimic NC)组、miR-431-3p过表达(miR-431-3p mimic)组、空载慢病毒(Ve... 相似文献
13.
目的:探讨microRNA-9-5p (miR-9-5p)靶向肌细胞增强因子2C (MEF2C)对腺泡状横纹肌肉瘤(ARMS)细胞生物学行为的影响,为ARMS的分子诊断和靶向治疗提供依据。方法:qRT-PCR法检测ARMS组织和细胞中miR-9-5p和MEF2CmRNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因检测293T细胞中荧光素酶活性,Western blotting法检测细胞中MEF2C蛋白表达水平。结果:ARMS组织和细胞中miR-9-5p表达水平高于正常骨骼肌组织和HSKMC细胞(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中miR-9-5p表达水平降低(P<0.01),细胞增殖率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞侵袭和迁移数降低(P<0.05)。加入miR-9-5p后,共转染MEF2C-3'-UTR-WT的293T细胞中荧光素酶活性降低(P<0.01);与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中MEF2C mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。ARMS组织中MEF2C mRNA表达水平低于正常骨骼肌组织(P<0.01),且与ARMS组织中miR-9-5p表达呈负相关关系(r=-0.542,P<0.05);RH30细胞和PLA802细胞中MEF2CmRNA表达水平低于HSKMC细胞(P<0.01)。与转染对照质粒(EV)比较,转染MEF2C过表达质粒后RH30细胞中MEF2C mRNA表达水平升高(P<0.01),细胞增殖率降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞侵袭数降低(P<0.05),细胞迁移数降低(P<0.01)。与转染si-NC比较,转染MEF2CsiRNA后RH30细胞中MEF2C mRNA表达水平降低(P<0.05),细胞增殖率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞侵袭数升高(P<0.01),细胞迁移数升高(P<0.01)。结论:miR-9-5p通过直接靶向MEF2C mRNA的3'-UTR诱导mRNA降解而抑制MEF2C表达,从而促进RH30细胞的增殖、侵袭、迁移以及抗凋亡能力。 相似文献
14.
目的:分析微小RNA-223 (miR-223)在卵巢癌组织中的表达情况,探讨miR-223对卵巢癌OVCAR3细胞增殖和侵袭的影响,并阐明其分子调控机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测45例卵巢癌患者手术切除组织样本和不同卵巢癌细胞中miR-223表达水平,分析不同临床病理特征卵巢癌患者癌组织中miR-223表达水平。体外培养卵巢癌OVCAR3细胞,采用生物信息学、双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法分析miR-223对N-myc下游调节基因1(NDRG1)的靶向调控关系。OVCAR3细胞分别转染阴性对照模拟物(NC组)、 miR-223抑制剂(MiR in组)和同时转染miR-223抑制剂及siRNA-NDRG1质粒(MiR in+si-NDRG1组),克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数。结果:与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中miR-223表达水平明显升高(P<0.01),miR-223表达水平与卵巢癌患者组织学分化程度、FIGO分期和淋巴结转移有密切... 相似文献
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目的:探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法:选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组(未转染)、miR-NC组(转染miR-302b-3p mimics阴性对照)、miR-302b-3p组(转染miR-302b-3p mimics)、anti-miR-NC组(转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照)和anti-miR-302b-3p组(转染miR-302b-3p inhibitor)。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2(ECT2)蛋白的表达水平。结果:与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低(P<0.05)。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低(P<0.05);与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高(P<0.05)。结论:miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。 相似文献
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目的 探讨上调Mg2+/Mn2+依赖性蛋白磷酸酶1F(PPM1F)对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。 方法 鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1质粒)和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组(转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞中PPM1F和E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测2组细胞增殖活性和克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中迁移细胞数。 结果 与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Flag-PPM1F 组细胞中PPM1F mRNA表达水平明显升高(P<0.01),且PPM1F蛋白表达量明显增加,细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞增殖活性、克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.05)。 结论 上调PPM1F表达能够抑制鼻咽癌HONE-1 细胞增殖和迁移,其机制可能与细胞间的黏附作用有关。 相似文献
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目的:探讨人环状RNA_0114428 (circ_0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ_0114428通过调节微小RNA-139-5p (miR-139-5p)/转化生长因子β受体2 (TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法:体外培养HK-2细胞,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2的靶向调控关系,CCK-8法筛选合适的LPS干预浓度和时间。给予10 mg·L-1 LPS干预12 h构建HK-2细胞损伤模型,HK-2细胞分为对照组、LPS组、LPS+circ_0114428沉默对照(LPS+si-NC)组、 LPS+circ_0114428沉默(LPS+si-circ_0114428)组、LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂对照(LPS+si-circ_0114428+in-NC)组和LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂(LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p)... 相似文献
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目的:探讨冠心病(CAD)患者心外膜脂肪组织(EAT)和血浆中脂联素(APN,又称ADIPOQ)相关差异表达miR-371b-5p对脂肪细胞因子APN、Kruppel样因子4(KLF4)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞因子趋化蛋白1(MCP-1)分泌的影响,阐明miR-371b-5p在CAD中的作用机制。方法:收集CAD (CAD组,n=34)和非CAD (non-CAD组,n=16)患者的EAT和血液标本,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测2组患者EAT和血浆中miR-371b-5p的表达水平。将诱导成功的3T3-L1前体脂肪细胞分为空白对照组(不做任何处理)、miR-371b-5p过表达组(转染miR-371b-5p模拟物)和miR-371b-5p抑制剂组(转染miR-371b-5p抑制剂)。qRT-PCR法检测转染24 h后各组3T3-L1前脂肪细胞中APN、KLF4、IL-6和MCP-1 mRNA表达水平,并对miR-371b-5p进行生物信息学分析。结果:与non-CAD组比较,CAD组患者EAT和血浆中miR-371b-5p表达水平均升高(P<0.01)。与空白对照组比较,miR-371b-5p过表达组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4 mRNA表达水平降低(P=0.043,P=0.045),IL-6和MCP-1mRNA表达水平升高(P=0.037,P=0.041);miR-371b-5p抑制剂组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4mRNA表达水平升高(P=0.025,P=0.027),IL-6和MCP-1mRNA表达水平降低(P=0.039,P=0.041)。miR-371b-5p预测靶基因富集于多个生物学功能及过程,KEGG通路主要富集于脂肪细胞因子等信号通路;蛋白互作,miR-371b-5p预测靶基因APN、瘦素(LEP)和AKT1编码蛋白位于互作网络中核心位置。结论:CAD患者EAT中过表达miR-371b-5p转染成熟的3T3-L1脂肪细胞后可使细胞的抗炎因子表达水平降低,炎性因子表达水平升高,miR-371b-5p有望成为CAD治疗的新靶点。 相似文献