吴茱萸碱联合放射治疗对舌鳞癌细胞Tca-8113裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:研究吴茱萸碱(evodiamine,EVO)联合射线对舌鳞癌细胞Tca-8113裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:建立舌鳞癌Tca-8113细胞裸鼠皮下移植瘤模型16只,随机分为空白对照组、EVO组、放射组及联合组,观察并绘制肿瘤生长曲线图,计算肿瘤抑制率;肿瘤组织通过常规苏木精-伊红染色行病理学检查;免疫组织化学法检测移植瘤组织中Ki67、Bax和Bcl-2表达情况;透射电子显微镜观察细胞凋亡形态。结果:治疗第12天起,联合组肿瘤体积与其余各组相比,明显减小(P<0.05);治疗结束时,EVO组、放射组和联合组的抑瘤率分别为15.15%、43.29%和63.20%。联合组Ki67和Bcl-2表达水平较EVO组和放射组下降,Bax表达水平增高(P<0.05)。联合组坏死细胞数增多,且细胞呈典型凋亡特征。结论:放疗联合EVO能抑制舌鳞癌Tca-8113细胞裸鼠移植瘤的生长,可能与Ki67和Bcl-2表达下调以及Bax表达上调有关。     

雷替曲塞对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响及其机制

  目的   初步探索雷替曲塞对人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及其机制。   方法   1）建立人胃癌细胞MGC-803裸鼠皮下移植瘤模型；2）药物干预后观察荷瘤鼠一般情况、体重、瘤重并计算抑瘤率；3）流式细胞仪测定瘤细胞的周期分布和凋亡；4）采用RT-PCR、Western blot印迹法检测各组肿瘤p53 mRNA及p53蛋白的表达水平。   结果   经雷替曲塞及5-Fu作用后，与对照组相比，两组裸鼠的体重明显下降，瘤体积缩小，抑瘤率分别达到49.02%和45.75%。雷替曲塞组和5-Fu组瘤细胞的G₀/G₁期比例较对照组比例明显降低（P < 0.01），而S期比例较对照组明显升高（P < 0.01）。雷替曲塞组和5-Fu组裸鼠肿瘤p53 mRNA与蛋白表达水平均显著升高（P < 0.01），但雷替曲塞组和5-Fu组之间并无差异。   结论   1）雷替曲塞对人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤生长有抑制作用，且与5-Fu抑瘤效果相似；2）雷替曲塞可以诱导人胃癌细胞MGC-803裸鼠移植瘤细胞周期S期的阻滞，并诱导移植瘤细胞凋亡；3）雷替曲塞可通过上调p53 mRNA和蛋白的表达水平来发挥抑瘤作用。       

培美曲塞对不同miR-21表达水平人肺癌细胞凋亡影响的实验研究

目的 检测不同miR-21表达水平的人肺癌细胞对培美曲塞的药物敏感性,并探讨可能作用机制。方法 采用Annexin V-EGFP荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测培美曲塞对不同miR-21表达水平的A549人肺癌细胞凋亡诱导作用,级联酶底物显色法检测caspase-3的活化状态,蛋白免疫杂交法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、 Bax的表达水平变化。结果 20μmol／L培美曲塞作用24h可以诱导高表达miR-21的A549人肺癌细胞（A549-21H0）和低表达miR-21的A549细胞（A549-21L0）的凋亡,且A549-21L0处于细胞凋亡晚期,而A549-21H0处于细胞凋亡早期。5μmol／L培美曲塞作用24h可以诱导65.3％的A549-21L0 细胞早期凋亡,仅诱导2.8％的A549-21H0细胞早期凋亡。5μmol／L培美曲塞作用6h即可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应超过2倍（P＜0.01）;在9h时活化效应最强,活化效应超过7倍（P＜0.01）;18h后活化效应超过6倍（P＜0.01）;至24h时活化效应仍在5倍以上（P＜0.01）。同样条件下,5μmol／L培美曲塞作用18h才引起A549-21H0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应接近3倍（P＜0.01）,至24h活化效应在4倍以上（P＜0.01）。5μmol／L培美曲塞作用于A549-21L0细胞9h即可引起Bax表达水平显著性升高和Bcl-2表达水平明显下降。结论 A549-21L0人肺癌细胞对培美曲塞诱导的细胞凋亡具有更高的敏感性。培美曲塞可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,并可通过调控Bax和Bcl-2表达水平诱导凋亡,这种效应具有一定的时间-效应关系。     

胸苷酸合成酶、胸苷酸磷酸化酶的表达与培美曲塞时辰化疗的疗效分析

目的构建肺腺癌A549细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,研究按昼夜不同时辰给予培美曲塞是否能提高疗效和降低不良反应,分析胸苷酸合成酶（TS）mRNA和胸苷酸磷酸化酶（TP）mRNA表达高低与培美曲塞疗效以及不良反应的关系。方法 常规方法体外培养肺腺癌A549细胞。待肿瘤体积生长至0.5~1.5 cm³,随机将荷瘤鼠分为四组,每组5只,其中三组严格按照每昼夜24 h的三个时间点给药即:早晨7点（光照后0 h）、中午15点（光照后8 h）、晚间23点（光照后16 h）进行腹腔给药,第四组为对照组,腹腔给予同体积的0.9%氯化钠溶液。培美曲塞按照150 mg/kg应用,每天一次,连续4天。以后每周测量瘤体积,裸鼠体重,观察裸鼠的行为状态、精神以及食欲变化。实验结束时称量剥离的裸瘤重量。应用实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）检测肿瘤组织中TS mRNA和TPmRNA的表达水平。结果7 h给药组裸鼠体重增长较快（P=0.041）,化疗不良反应较小,瘤体积生长最慢（P=0.032）,抑瘤率最大（P=0.000）。7 h给药组的肿瘤组织中TS mRNA相对表达量最低,TP mRNA的相对表达量对高,差异有统计学意义（P<0.01）。结论培美曲塞对肺腺癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,疗效及不良反应与时辰给药有关,7 h给药组疗效最佳,化疗不良反应最小;TS和TP可以作为培美曲塞的疗效预测因子,为培美曲塞的个体化临床用药提供参考。     

环状RNA circ_MTHFD2对mircoRNA-124的调控在肺癌培美曲塞耐药中的作用

目的 探讨circ_MTHFD2调控microRNA 124（miR 124）的表达在肺癌培美曲塞耐药发生过程中的作用。方法 采用高浓度反复间歇诱导法建立肺癌培美曲塞耐药细胞株A549／PEM。通过瘤内注射建立培美曲塞耐药的裸鼠移植瘤模型;采用Lipofectamine脂质体法将miR-124模拟物、miR-124抑制剂及阴性对照转染至A549和A549／PEM细胞,并分为miR-124上调组、miR-124抑制组及阴性对照组;采用CCK-8 法和流式细胞术检测各组细胞的增殖及凋亡情况,比较各组细胞对培美曲塞的敏感性;采用实时荧光定量PCR（QPCR）和基因芯片检测miR 124和环状RNA的表达;通过测序技术检测耐药细胞及耐药裸鼠的肿瘤组织与对照组间环状RNA的表达,预测环状RNA上的miR-124结合位点。结果 亲本细胞A549和耐药细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为 （30.78±1.97）μmol／L和（913.53±14.1）μmol／L,最终获得耐药指数（RI）为29.69±1.49的培美曲塞耐药细胞,命名为A549／PEM。耐药细胞A549／PEM中miR 124的表达显著降低,相比A549细胞,下降约145.952倍;下调miR-124表达的A549细胞对培美曲塞敏感性降低,miR-124抑制组及阴性对照组细胞的IC50分别为（80.45±3.50）μmol／L和（9.94±1.90）μmol／L,差异有统计学意义（P＜0.05）;流式细胞术检测显示miR 124表达上调可以显著诱导A549、A549／PEM细胞的凋亡;通过高通量测序提示在耐药的细胞及组织中环状RNA表达明显上调,表达量上调的circ_MTHFD2可与miR-124结合。结论 circ_MTHFD2可能通过调控miR-124的表达,参与肺癌培美曲塞耐药的发生发展。     

IP6对结肠癌裸鼠皮下移植瘤细胞生长抑制及其机制的探讨

目的:研究肌醇六磷酸(IP6)对HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:建立HT-29细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组(生理盐水组)、低剂量IP6组和高剂量IP6组,用药20 d后处死小鼠.比较各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,透射电镜观察移植瘤细胞形体变化,TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况,并运用RT-PCR、蛋白质印迹法检测移植瘤Bcl-2及Bax基因和蛋白的表达.结果:IP6组出现典型凋亡现象,PCR及蛋白检测也显示IP6可显著上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05);在移植瘤质量和体积方面,用药组与对照组差异无统计意义,P＞0.05,但用药组移植瘤呈现下降趋势.结论:IP6可能通过促进细胞凋亡而起到抑制和延缓肿瘤生长的作用,其机制可能与上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关.     

槲皮素联合顺铂对肺腺癌小鼠移植瘤Bcl-2和Bax表达的调控及意义

目的：观察槲皮素联合顺铂对肺腺癌LA795细胞的T739小鼠移植瘤的抑制作用，检测移植瘤中Bcl-2和Bax的表达水平及肿瘤细胞凋亡指数，探讨其作用机制。方法：将32只接种了LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成对照组（A组）、顺铂组（B组）、槲皮素组（C组）、槲皮素＋顺铂组（D组）。用药16d后，观察肿瘤生长情况，接种后24d活杀各组小鼠，移植瘤标本称瘤体质量和测量体积，免疫组织化学和图像分析系统定量检测肿瘤组织的Bcl-2和Bax表达，原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果：B、C、D各用药组肿瘤的生长受到明显抑制，瘤体质量明显低于A组，其抑瘤率分别为38．57％、26．03％和51．58％，联合用药组抗瘤作用进一步增强。Bcl-2表达在A组高于B、C、D组，Bax表达在A组明显低于B、C、D组，各用药组与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；肿瘤细胞的凋亡指数在各用药组都比对照组明显提高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：槲皮素联合顺铂可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长，其作用机制可能是通过调控肿瘤中Bcl-2和Bax的表达，从而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。     

藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的效果和机制

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸（gambognic acid,GA）与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制。方法: 建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和（或）GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平。结果: 联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制（抑瘤率达67.0%）和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达。结论: GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性。     

健择联合电子线照射对人胰腺癌裸鼠移植瘤凋亡的影响

目的探讨健择联合电子线外照射对人胰腺癌细胞株(panc-1)裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用。方法建立人胰腺癌panc-1裸鼠移植瘤模型,36只裸鼠随机分为6组：对照组（A组）、单纯放疗组(B组)、健择25mg/kg组(C组)、健择50 mg/kg组(D组)、联合治疗1组（E组）、联合治疗2组（F组）。A组裸鼠尾静脉注射0.9%氯化钠溶液,B组荷瘤鼠背部肿瘤局部以6MeV电子线照射。C、D组分别以25 mg/kg、50 mg/kg健择裸鼠尾静脉注射,E、F组分别以25、50 mg/kg健择裸鼠尾静脉注射加背部肿瘤6MeV电子线照射。采用TUNEL法检测凋亡指数（AI）,免疫组织化学检测凋亡抑制蛋白Bcl-2、凋亡相关蛋白Bax的表达情况。结果干预组较对照组肿瘤细胞凋亡明显增加,干预组各组之间凋亡指数比较差异有统计学意义（P＜0.05）。免疫组织化学结果示：与对照组比较,干预各组均可不同程度下调Bcl-2蛋白表达,Bax蛋白表达上调（P＜0.05）,联合治疗组与其他各组比较,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义（P ＜0.05）。结论健择联合电子线对人胰腺癌移植瘤的凋亡有促进作用。     

新城疫病毒对小细胞肺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)7793株在体内对肿瘤生长的抑制作用及机制.方法:体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞,通过皮下接种NCI-H446细胞建立人小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型.NDV组裸鼠瘤内注射新城疫病毒,阳性对照组注射顺铂(cisplatin,DDP),阴性对照组注射PBS.观察移植瘤生长情况和裸鼠体质量变化,绘制肿瘤生长曲线.6周后处死裸鼠剥取肿瘤组织,HE染色观察细胞学变化,免疫组织化学法检测移植瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达情况.结果:NDV注射对肿瘤生长有显著抑制作用,抑瘤率达34.1%;NDV对荷瘤鼠无不良反应;光学显微镜下观察发现,NDV治疗组肿瘤组织有许多散在分布的凋亡/坏死区域.NDV能明显上调Bax蛋白的表达量(P＜0.01),对Bcl-2蛋白表达则无影响.结论:新城疫病毒7793株在体内能够有效抑制移植瘤生长,其抗肿瘤机制可能与上调Bax蛋白的表达有关.     

JNJ-26481585 primes rhabdomyosarcoma cells for chemotherapeutics by engaging the mitochondrial pathway of apoptosis

Rhabdomyosarcoma (RMS) is a common soft-tissue sarcoma in childhood with a poor prognosis, highlighting the need for new treatment strategies. Here we identify a synergistic interaction of the second-generation histone deacetylase inhibitor (HDACI) JNJ-26481585 and common chemotherapeutic drugs (i.e. Doxorubicin, Etoposide, Vincristine, Cyclophosphamide and Actinomycin D) to trigger apoptosis in RMS cells. Importantly, JNJ-26481585/Doxorubicin cotreatment also significantly suppresses long-term clonogenic survival of RMS cells and tumor growth in vivo in a preclinical RMS model. Mechanistically, JNJ-26481585/Doxorubicin cotreatment causes upregulation of the BH3-only proteins Bim and Noxa as well as downregulation of the antiapoptotic proteins Mcl-1 and Bcl-x_L. These changes in the ratio of pro- and antiapoptotic Bcl-2 proteins contribute to JNJ-26481585/Doxorubicin-mediated apoptosis, since knockdown of Bim or Noxa significantly inhibits cell death. Also, JNJ-26481585 and Doxorubicin cooperate to stimulate activation of Bax and Bak, which is required for JNJ-26481585/Doxorubicin-induced apoptosis, since silencing of Bax or Bak protects against apoptosis. Consistently, overexpression of Bcl-2 significantly reduces JNJ-26481585/Doxorubicin-mediated apoptosis. JNJ-26481585/Doxorubicin cotreatment leads to caspase activation and caspase-dependent apoptosis, since the broad-range caspase inhibitor N-benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone (zVAD.fmk) rescues cells from apoptosis. In conclusion, the second-generation HDACI JNJ-26481585 cooperates with chemotherapeutics to engage mitochondrial apoptosis in RMS cells, demonstrating that JNJ-26481585 represents a promising strategy for chemosensitization of RMS.     

Neuropilin1单克隆抗体对胶质瘤大鼠Bcl-2/Bax表达的影响

目的:研究Neuropilin1单克隆抗体对胶质瘤大鼠Bcl-2/Bax表达的影响。方法:将36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组12只;假手术组只行颅骨开窗手术,其余各组均建立胶质细胞瘤模型。模型组腹腔注射0.9%氯化钠,治疗组腹腔注射NRP-1 MAb,均每日1次。干预14天后取材。对肿瘤组织称重,免疫组化检测Bax和Bcl-2表达,Western blot检测NRP-1蛋白、Bax蛋白和Bcl-2蛋白表达量,qPCR检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达情况,TUNEL检测细胞凋亡情况。结果:假手术组无肿瘤,治疗组肿瘤组织重量显著小于模型组,差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫组化显示:与假手术组比较,模型组和治疗组Bax表达显著下降,Bcl-2表达显著上升,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,治疗组Bax表达上升,Bcl-2表达下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测显示:与假手术组比较,模型组和治疗组NRP-1蛋白和Bcl-2蛋白表达量显著上升,Bax蛋白表达量显著下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,治疗组NRP-1蛋白和Bcl-2蛋白表达量显著下降,Bax蛋白表达量显著上升,差异具有统计学意义（P<0.05）。qPCR检测显示:与假手术组比较,模型组和治疗组Bax mRNA表达显著下降,Bcl-2 mRNA表达显著上升,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,治疗组Bax mRNA表达上升,Bcl-2 mRNA表达下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。TUNEL检测显示:与假手术组比较,模型组和治疗组的细胞凋亡率显著上升,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,治疗组的细胞凋亡率显著下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:NRP-1 MAb可通过抑制NRP-1表达而上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达促进胶质细胞瘤凋亡。     

lncRNA BCAR4在肝癌细胞系中的表达及对增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察肝癌细胞系中长链非编码RNA BCAR4（lncRNA BCAR4）的表达,及对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其机制。方法:采用荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721和正常肝细胞系L02中lncRNA BCAR4的表达。将Huh7细胞系分为BCAR4-siRNA组、NC-siRNA组和Blank组,BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组经LipofectamineTM 2000分别转染BCAR4-siRNA序列和NC-siRNA序列,Blank组以PBST为阴性对照。CCK-8法和流式细胞数测定细胞增殖和凋亡,细胞划痕实验测定迁移能力。Western blot测定细胞周期相关蛋白（Cyclin D1）和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721中lncRNA BCAR4的表达显著高于正常肝细胞系L02(P<0.05)。转染BCAR4-siRNA后,Huh7的lncRNA BCAR4表达下调（P<0.01）。CCK-8示:转染72 h及96 h后,BCAR4-siRNA组 vs NC-siRNA组的OD450 nm值分别为0.71±0.07 vs 0.92±0.10（P<0.05）及0.93±0.08 vs 1.37±0.11（P<0.01）。BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组细胞凋亡率分别为（17.52±3.21）%和（4.69±1.56）%（P<0.01）。BCAR4-siRNA组细胞划痕愈合率为（19.65±2.41）%,显著低于NC-siRNA组的（47.50±5.88)%(P<0.05)。与NC-siRNA组比较,BCAR4-siRNA组Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下调,分别为0.27±0.03 vs 1.0±0.05(P<0.01)、0.48±0.04 vs 1.0±0.04(P<0.05),Bax蛋白表达上调,为2.83±0.19 vs 1.0±0.03(P<0.01)。结论:lncRNA BCAR4高表达于肝癌细胞系,敲低lncRNA BCAR4的表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移,并促进凋亡,其机制可能与Cyclin D1和Bcl-2蛋白下调表达,Bax蛋白表达上调表达有关。     

Twist调控对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响及其机制探讨

目的:探究Twist调控对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响及其机制。方法:从我院2016年3月至2017年3月间确诊的卵巢癌患者中选择75例作为研究组,其中早期14例,中期42例,晚期19例;另随机选择同期来我院体检的健康人75例作为对照组。收集两组患者的卵巢组织,用免疫组化的方法检测Twist、N-cadherin与E-cadherin和MMP-9蛋白的表达情况,用RT-PCR法检测Twist、N-cadherin与E-cadherin、细胞凋亡相关基因（Bcl-2、Bax）mRNA表达水平。结果:研究组患者卵巢组织中的Twist、MMP-9蛋白阳性表达率显著高于对照组患者（P<0.05）;研究组患者卵巢组织中N-cadherin蛋白阳性表达率显著高于对照组患者（P<0.05）,而对照组患者E-cadherin蛋白阳性表达率显著高于研究组患者（P<0.05）;研究组患者卵巢组织中Twist、N-cadherin mRNA表达水平显著高于对照组患者（P<0.05）,对照组患者E-cadherin mRNA表达水平显著高于研究组患者（P<0.05）;研究组患者卵巢组织中Bcl-2 mRNA表达水平显著高于对照组患者（P<0.05）,对照组患者Bax mRNA表达水平显著高于研究组患者（P<0.05）。 结论:Twist在卵巢癌的侵袭与转移中发挥了重要的作用,其参与了上皮间质转化的过程。     

MAP2K6-FP和紫杉醇对上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究靶向融合肽MAP2K6-FP（mitogen-activated protein kinase kinase 6-fusion protein)、紫杉醇单独和两者联合对上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:建立卵巢癌HO8910细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,分为空白对照组（予生理盐水 5 ml/kg腹腔注射治疗）、MAP2K6-FP组（予0.25 mg/kg MAP2K6-FP腹腔注射治疗）、紫杉醇组（予15 mg/kg 紫杉醇腹腔注射治疗）、联合用药组（予0.25 mg/kg MAP2K6-FP+15 mg/kg 紫杉醇腹腔注射治疗）,比较4组裸鼠的移植瘤生长速度、体积、裸鼠体质量;TUNEL法、免疫组织化学法和蛋白印迹法分别检测移植瘤中细胞凋亡情况、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达以及Bcl-2、Beclin 1蛋白的表达。结果:联合用药组裸鼠移植瘤体积（90 mm3）,小于MAP2K6-FP组（324 mm3）、紫杉醇组（215 mm3）和空白对照组（804 mm3）（P<0.05）。联合用药组肿瘤细胞的凋亡指数（apoptosis index,AI）(28.88±2.03)%,高于MAP2K6-FP组(14.36±0.56)%、紫杉醇组(15.78±0.87)%以及空白对照组(4.78±0.87)%（P<0.05）。联合用药组VEGF蛋白表达水平(0.14±0.06),低于MAP2K6-FP组(0.32±0.10)、紫杉醇组(0.29±0.08)及空白对照组(0.78±0.14）（P<0.01);联合用药组PCNA表达水平(18.4%),低于MAP2K6-FP组(32.3%)、紫杉醇组(29.8%)及空白对照组(81.4%）（P<0.05）。联合用药组Beclin 1/Bcl-2比例较单一用药组高(P<0.05)。结论:MAP2K6-FP联合紫杉醇能够显著抑制卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与促进细胞凋亡有关。     

氯硝柳胺联合顺铂对裸鼠肾上腺皮质癌移植瘤的抑制作用

  目的   研究氯硝柳胺联合低剂量顺铂对裸鼠肾上腺皮质癌移植瘤的抑制作用,并探讨其机制。   方法   建立SW-13细胞裸鼠移植瘤模型,设对照组、氯硝柳胺组、顺铂组、联合用药组,比较各组终末肿瘤体积、瘤重、生化指标。TUNEL检测移植瘤组织的细胞凋亡率,免疫组织化学法和Western blot检测移植瘤组织Bcl-2、caspase-3的表达。   结果   联合用药组的终末肿瘤体积、瘤重低于氯硝柳胺组、顺铂组（均P < 0.001）;顺铂组、联合用药组的白细胞低于对照组（均P < 0.001）,顺铂组与联合用药组比较差异无统计学意义（P=0.29）;顺铂组、联合用药组的肌酐、谷丙转氨酶高于对照组（均P < 0.001）,顺铂组与联合用药组的肌酐、谷丙转氨酶比较差异无统计学意义（均P > 0.05）。TUNEL检测显示联合用药组的细胞凋亡率高于氯硝柳胺组（P=0.004）、顺铂组（P=0.005）,免疫组织化学法、Western blot检测显示联合用药组中Bcl-2表达较氯硝柳胺组、顺铂组降低（均P < 0.001）,caspase-3的表达升高（均P < 0.001）。   结论   氯硝柳胺能够增强低剂量顺铂对肾上腺皮质癌生长的抑制作用且不增加毒副作用,可能与影响Bcl-2、caspase-3表达促进肿瘤细胞凋亡相关。      

左旋棉酚对小鼠宫颈癌移植瘤细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨左旋棉酚［(-)-gossypol,LGP］对顺铂诱导小鼠宫颈癌移植瘤凋亡的影响及可能的作用机制。方法建立小鼠宫颈癌U14细胞皮下移植瘤模型,将60只小鼠按随机原则分为左旋棉酚组、顺铂(Cisplatin,DDP)组、左旋棉酚+顺铂(LGP+DDP)组及模型对照（Model Control）组4组,用药干预8天后采用电子天平称量瘤重并计算抑瘤率;采用TUNEL法检测各组瘤组织的凋亡情况;采用免疫组织化学法检测各组肿瘤组织中Bcl-2、Bax和P-gp蛋白的表达水平。结果各干预组小鼠移植瘤瘤重均低于Model组,其中LGP+DDP组瘤重最低,其次为DDP组(P＜0.01);各组移植瘤组织内AI均高于Model组（P＜0.05）,且LGP+DDP组最高（P＜0.01）;含LGP组移植瘤组织内P-gp、Bcl-2蛋白的表达降低（P＜0.05）, Bax蛋白的表达升高（P＜0.05）,Bax/Bcl-2比值升高,LGP+DDP组的上述作用明显优于单药组（P＜0.01）;相关性分析表明P-gp蛋白的表达量与Bcl-2的表达量呈正相关,与Bax的表达量呈负相关（P＜0.01）。结论 LGP能抑制小鼠宫颈癌移植瘤的生长,且与DDP联合后抑制作用更显著;其可能的机制:LGP可能是通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白诱导小鼠宫颈癌细胞凋亡,降低P-gp蛋白的表达,增加肿瘤组织对DDP的化疗敏感度。     

STAT3基因沉默对胰腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制

目的:探讨信号转导和转录激活因子3（STAT3）基因沉默对人胰腺癌细胞AsPC-1和PANC-1放射敏感性的影响及其机制。方法:体外培养人胰腺癌细胞AsPC-1和PANC-1，通过脂质体转染STAT3 shRNA作为实验组（shSTAT3组），设置阴性对照（shNC组）和空白对照组（NC组）。采用qRT-PCR检测转染后各组AsPC-1和PANC-1细胞中STAT3 mRNA表达水平，Western blot检测细胞中STAT3蛋白表达水平。MTT实验检测各组细胞增殖能力，流式细胞仪检测各组细胞电子射线照射后的凋亡情况，qRT-PCR和Western blot分别检测各组细胞电子射线照射后的Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达情况。结果:shSTAT3组AsPC-1和PANC-1细胞中STAT3 mRNA和蛋白表达水平比NC组和shNC组明显降低（P<0.05）。接受电子射线照射后，shSTAT3组AsPC-1和PANC-1细胞增殖率显著低于shNC组（P<0.05），其细胞凋亡率较shNC组明显升高（P<0.05）。接受电子射线照射后，转染STAT3 shRNA后能够明显上调细胞中Bax和Caspase-3的表达和下调Bcl-2的表达（P<0.05）。结论:沉默STAT3基因能够通过上调Bax和Caspase-3的表达和下调Bcl-2的表达促进细胞凋亡，增强胰腺癌细胞的放射敏感性。     

HA14-1 联合环磷酰胺调控肺癌小鼠Bcl-2、Bax蛋白的表达*

目的:探讨HA14-1 联合环磷酰胺对肺癌小鼠Bcl- 2、Bax 蛋白的表达。方法:建立小鼠肿瘤模型,分为生理盐水组、HA14-1 组、环磷酰胺组和HA14-1 + 环磷酰胺组,应用Western blot和免疫组化方法检测Bcl- 2、Bax 的蛋白表达。结果:HA14-1组、环磷酰胺组、HA14-1 + 环磷酰胺组较生理盐水组Bcl- 2 表达减少、Bax 表达增加（P<0.05）,HA14-1 + 环磷酰胺组较单一的HA14-1 组或环磷酰胺组Bcl- 2 表达明显减少、Bax 表达明显增加（P<0.05）。 结论:HA14-1 可以通过抑制Bcl- 2 的表达,增加Bax的表达,从而促进肿瘤细胞的凋亡,同时增强环磷酰胺的抗肿瘤特性。      

RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖、抑制其凋亡的相关研究

目的:探究RNA干扰RhoBTB1基因表达对结肠癌HT29细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Lipofectamine 2000将siRNA RhoBTB1或siRNA NC转入HT29细胞中，实验分为Control组、转染对照组和siRNA Rho组，噻唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测细胞的的活力和凋亡率，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞中RhoBTB1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组相比，HT29细胞转染siRNA RhoBTB1后，细胞中RhoBTB1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05），细胞活力显著升高（P<0.05），凋亡率显著降低（P<0.05），Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著增加（P<0.05）。结论:RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖，抑制其凋亡，可能通过调节线粒体凋亡通路相关蛋白的表达量发挥作用。