miR-339-5p通过抑制NUDT5增强肺癌A549细胞的放射敏感性

目的：探讨miR-339-5p通过调控Nudix结构水解酶5（Nudix hydrolase 5，NUDT5）的表达对肺癌A549细胞放射敏感 性的影响。方法：体外低浓度梯度递增结合大剂量间断冲击方法诱导产生耐X射线的肺癌A549细胞株（RA549），qPCR检测 miR-339-5p在人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）、肺癌细胞系（A549、 L78、 H1299、 H460和RA549细胞）中的表达水平。根据对 RA549细胞的处理，实验分为NC组、 5 Gy组（5 Gy X 射线处理 RA549 细胞）、 5 Gy+miR-339-5p mimic组、 5 Gy+si-NUDT5组和 5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inbibitor组，CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染流式术和WB分别检测各组细胞增殖、凋亡以及 NUDT5、 γ-H2AX 和 H2AX 蛋白表达的变化，双荧光素酶报告基因系统验证 miR-339-5p 和 NUDT5 的靶向关系。结果： miR-339-5p在各肺癌细胞系中表达显著低于BEAS-2B细胞（均P<0.05），其中RA549细胞表达水平最低。验证显示NUDT5是 miR-339-5p的靶基因。与 NC 组相比， 5 Gy 组 RA549 细胞增殖活力和 NUDT5 表达显著降低（均 P<0.01），凋亡率显著升 高（P<0.01）；与5 Gy组相比， 5 Gy+miR-339-5p mimic组RA549细胞的增殖活力显著降低（P<0.05）、凋亡率[（12.97±1.48） % vs （5.21±0.62） %， P<0.01]和γ-H2AX的表达水平（P<0.05）显 著 升 高 ， 5 Gy+si-NUDT5 组 RA549 细 胞 中 NUDT5 的表达水平 （P<0.01）和细胞增殖活力（P<0.01）均显著降低，凋亡率[（11.21±1.06） % vs（5.54±0.44） %， P<0.01]和γ-H2AX表达水平（P<0.01）均 显著升高， 而5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inhibitor组细胞中上述指标均回复至5 Gy组水平。结论：过表达miR-339-5p通过靶 向下调NUDT5表达肺癌A549细胞的放射敏感性。     

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低（P＜0.05）,LMNB1表达水平明显升高（P＜0.05）。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。     

LncRNA UCA1对肺癌细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究长链非编码RNA (LncRNA) UCA1对肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响及其机制。方法 运用qRT-PCR法检测肺癌细胞A549、H1299和人正常肺细胞HBE中UCA1、miR-513a-5p表达。将si-con组(转染si-con)、si-UCA1组(转染si-UCA1)、miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、IR+si-con组(转染si-con+照射)、IR+si-UCA1组(转染miR-NC+照射)、IR+miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics+照射)、IR+miR-NC组(转染miR-NC+照射)、IR+si-UCA1+anti-miR-513a-5p组(共转染si-UCA1和anti-miR-513a-5p+照射)均用脂质体法转染至A549、H1299细胞,然后部分组进行4Gy照射。MTT法检测各组细胞增殖,克隆形成实验检测细胞增敏比,流式细胞术检测各组细胞凋亡,双荧光素没报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果 与HBE细胞相比,A549、H1299细胞中UCA1表达显著升高(P<0.05),miR-513a-5p表达显著降低(P<0.05)。抑制UCA1、过表达miR-513a-5p均可明显抑制A549、H1299细胞增殖、促进凋亡、提高放射敏感性(放射增敏比为1.897、2.146和1.615、1.872)。miR-513a-5p可抑制野生型UCA1细胞的荧光活性,且UCA1可负向调控miR-513a-5p的表达。抑制miR-513a-5p可逆转抑制UCA1对细胞的放射敏感性的增强作用。结论 抑制LncRNA UCA1可增强放射对肺癌细胞敏感性,其机制可能与靶向抑制miR-513a-5p有关。     

miR-30a-5p通过靶向下调ATF1提高非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性北大核心

目的:探索miR-30a-5p对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞的放射增敏效应及其相关机制,为提高NSCLC放射敏感性提供理论依据。方法:采用qRT-PCR检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺癌细胞株A549、H460中miR-30a-5p表达情况;应用miR-30a-5p agomir、antagomir及对照转染A549细胞株,联合放射,检测miR-30a-5p对A549细胞株的放射增敏效应;通过生物信息学预测并筛选miR-30a-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因检测进行验证;siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞,通过qRT-PCR、Western Blotting检测靶基因表达与miR-30a-5p的关系,并通过平板克隆形成实验检测其对A549细胞株的放射增敏效应。结果:miR-30a-5p在A549和H460细胞株中表达均低于BEAS-2B细胞株(P<0.001);miR-30a-5p agomir转染联合放射,A549细胞放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N较agomir NC组降低(均为P<0.05)。靶基因预测及验证结果显示,miR-30a-5p可以与ATF1的3'UTR特异性结合,ATF1是miR-30a-5p的一个靶基因,过表达miR-30a-5p可下调ATF1表达。siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞联合照射,A549细胞克隆形成率及放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N均低于对照组(均为P<0.05)。结论:miR-30a-5p通过靶向下调ATF1表达,在A549细胞中发挥放射增敏效应。     

miR-140-5p靶向调控VEGFA参与卵巢癌血管生成的作用机制

目的:探究miR-140-5p靶向调控VEGFA基因参与卵巢癌血管生成的作用机制。方法:采集实验组织标本和细胞系,qRT-PCR检测组织和细胞中miR-140-5p和VEGFA的表达水平。Western blot检测VEGFA及血管生成相关因子STAT3、HIF-1α和bFGF的表达。应用流式细胞术检测转染细胞凋亡情况。结果:卵巢癌组织和细胞中miR-140-5p低表达,VEGFA为高表达（均P＜0.05）。荧光素酶报告法确认VEGFA为miR-140-5p靶点。上调miR-140-5p表达,可降低卵巢癌细胞株CAOV3中VEGFA表达,下调miR-140-5p表达,可诱导VEGFA表达（均P＜0.05）。与mimic NC+VEGFA-NC组相比,miR-140-5p mimic+VEGFA-NC组miR-140-5p表达量增加（P＜0.05）,而VEGFA mRNA和蛋白表达量变化未达明显统计学差异（均P＞0.05）;与miR-140-5p mimic+VEGFA-NC组相比,miR-140-5p mimic+VEGFA-siRNA组miR-140-5p表达量显著增加,VEGFA的mRNA表达量显著下降（P＜0.05）,且STAT3、HIF-1α、bFGF mRNA和蛋白表达量均显著下降（均P＜0.05）。同时,与mimic NC+VEGFA-NC组和miR-140-5p mimic+VEGFA-NC组相比,miR-140-5p mimic+VEGFA-siRNA组细胞凋亡率明显增加,差异有显著统计学意义（P＜0.05）。结论:miR-140-5p在卵巢癌中低表达,VEGFA高表达,miR-140-5p能特异结合VEGFA基因;上调miR-140-5p表达靶向下调VEGFA表达可降低卵巢癌血管生成相关因子表达并诱导癌细胞凋亡,为卵巢癌分子靶向治疗提供生物学证据。     

miR-769-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-769-5p （miR-769-5p） 在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）技术检测miR-769-5p 在5种NSCLC细胞（A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973和GLC-82）中的相对表达量,选择相对表达量最低和最高的细胞株分别转染miR-769-5p mimics／miR-769-5p inhibitor,另设miRNA mimics control／inhibitor control对照组;采用MTS 实验、克隆形成实验及Transwell 小室实验检测miR-769-5p对NSCLC 细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力的影响。结果 miR-769-5p在A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973 及GLC-82细胞中的相对表达量分别为 0.06、0.40、0.09、1.04和2.31。在miR-769-5p表达水平最低的A549细胞中瞬时转染miR-769-5p mimics,在miR-769-5p表达水平最高的GLC-82细胞中瞬时转染miR-769-5p inhibitor。MTS结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的增殖 （P＜0.05）,而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的增殖 （P＜0.05）。平板克隆实验结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的平板克隆形成数 （124.7±14.7 vs. 399.4±46.0,P＜0.05）;而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的平板克隆形成数 （555.7±29.7 vs. 366.3±28.7,P＜0.05）。Transwell实验结果显示,与对照组迁移和侵袭跨膜细胞数比较,miR-769-5p mimics能够抑制A549细胞的迁移和侵袭 （94.4±18.1 vs. 157.8±22.9,84.4±15.1 vs. 135.6±16.7,P＜0.05）;miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的迁移和侵袭 （226.7±40.3 vs. 153.3±38.7,196.7±39.1 vs. 138.9±40.4,P＜0.05）。结论 miR-769-5p可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能成为NSCLC的潜在靶点。     

miR-3200-3p通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展的机制研究

目的:探讨miR-3200-3p能否通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展。方法:选择5株人结直肠癌细胞系,Real-time PCR检测miR-3200-3p、RNF111的表达,Western blot检测RNF111蛋白的表达;利用双荧光素酶实验验证miR-3200-3p与RNF111的靶向抑制;利用miR-3200-3p mimic/inhibitor或利用miR-3200-3p inhibitor与RNF111 siRNA共转染HCT116细胞,Real-time PCR检测miR-3200-3p表达,Western blot检测RNF111、p-SMAD2蛋白表达,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:五株人结直肠癌细胞中,HCT116细胞中miR-3200-3p相对高表达,RNF111相对低表达;miR-3200-3p mimic或inhibitor转染后,与各自NC组相比,可显著促进或抑制RNF111蛋白的表达,促进或抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,抑制或促进细胞凋亡（均P＜0.05）;与pmirGLO-MUT 3' UTR+mimics转染组相比,pmirGLO-WT 3' UTR+mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）;与miR-3200-3p NC组相比,miR-3200-3p inhibitor及miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组RNF111蛋白表达显著升高,p-SMAD2蛋白表达显著降低,细胞增殖、迁移及侵袭被显著抑制,细胞凋亡被显著促进（均P＜0.05）,与miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组相比,miR-3200-3p inhibitor+RNF111 siRNA组细胞RNF111、p-SMAD2蛋白表达、增殖、迁移、侵袭及凋亡被显著逆转（均P＜0.05）。结论:miR-3200-3p可通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡。     

肺癌细胞外泌体miR-24-3p调控CD8+T细胞抗肿瘤的功能及机制研究

目的:探究肺癌细胞外泌体miR-24-3p调控CD8+T细胞抗肿瘤的功能及机制。方法:将16HBE exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo、miR-NC exo、miR-24-3p exo与CD8+T细胞共孵育（16HBE exo组、A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组、miR-NC exo组、miR-24-3p exo组），与PBS共孵育组（PBS组）作为对照，CD8+T与miR-24-3p exo共孵育后转染FGF11质粒（miR-24-3p exo+FGF11组）。CCK8法检测CD8+T细胞的增殖能力。双荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p和FGF11的靶向关系。将各组CD8+T细胞与A549细胞以20∶1的比例共孵育4 h（16HBE exo/CD8+T组、A549 exo/CD8+T组、H522 exo/CD8+T组、H460 exo/CD8+T组、miR-NC exo/CD8+T组、miR-24-3p exo/CD8+T组、PBS/CD8+T组、miR-24-3p exo+FGF11/CD8+T组），Elisa检测共孵育后细胞上清中INF-γ和IL-2的浓度，LDH法检测CD8+T细胞对A549细胞的杀伤能力。结果:相比于PBS组，A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组CD8+T细胞增殖能力显著降低（P＜0.05）。A549 exo/CD8+T组、H522 exo/CD8+T组、H460 exo/CD8+T组细胞上清中INF-γ和IL-2的浓度显著下降（P＜0.001），CD8+T细胞杀伤能力亦显著下降（P＜0.001）。双荧光素报告基因检测结果显示FGF11为miR-24-3p的靶基因。miR-24-3p exo组CD8+T细胞增殖能力显著低于miR-NC exo组，miR-24-3p exo+FGF11组CD8+T细胞增殖能力显著高于miR-24-3p exo组（P＜0.05）。miR-24-3p exo/CD8+T组细胞上清中INF-γ和IL-2浓度及CD8+T细胞杀伤能力均显著低于miR-NC exo/CD8+T组（P＜0.001）， miR-24-3p exo+FGF11/CD8+T组细胞上清中INF-γ和IL-2浓度及CD8+T细胞杀伤能力显著高于miR-24-3p exo/CD8+T组（P＜0.001）。结论:肺癌细胞外泌体miR-24-3p可通过靶向抑制FGF11而抑制CD8+T细胞的抗肿瘤功能。     

高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响。方法:采用实对荧光定量聚合酶链反应检测A549细胞中miR-301b和miR-769-5p的表达;使用 qRT-PCR检测增殖相关基因miRNA表达的变化,并将实验组miR-301b和miR-769-5p表达量上调(与阴性对照组比较);采用MTT法检测并对比A549细胞增殖的改变;采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果:qRT-PCR结果表明,浸染了miR-301b和miR-769-5p过表达载体的A549细胞中miR-301b和miR-769-5p水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01)。miR-301b过表达使G0/G1期的A549细胞增加,S和G2/M期的细胞减少;miR-769-5p过表达使G0/G1和G2/M期细胞增加,S期细胞减少。结论:miR-301b对靶基因FOXF2具有调控作用,miR-769-5p对靶基因ARID1A具有调控作用。miR-301b和miR-769-5p的过表达对肺癌A549细胞的细胞周期产生了明显影响,但没有影响细胞增殖和凋亡,miR-301b和miR-769-5p有可能成为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点,可以进一步探索研究。     

CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞CNE1恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:以鼻咽癌细胞系CNE1为研究对象,将CNE1细胞分NC组、si-NC组、si-CircMATR3组、miR-NC组、miR-129-5p mimic组、si-CircMATR3+inhibitor NC组、si-CircMATR3+miR-129-5p inhibitor组、si-SOX2组。RT-qPCR检测细胞中CircMATR3、miR-129-5p、SOX2 mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间的靶向关系;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Hoechst33342实验观察细胞形态学变化;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡。结果:CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间存在靶向关系;沉默CircMATR3或过表达miR-129-5p或沉默SOX2可以抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭...     

长链非编码RNA FGD5-AS1在肺癌组织中的表达及其对细胞增殖的影响

目的:研究长链非编码RNA（LncRNA）FGD5-AS1在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞增殖的影响。方法:RNA-seq分析肺癌组织中LncRNA及微小RNA(miRNA)的表达改变,根据表达量的改变确定候选LncRNA FGD5-AS1;RT-qPCR检测分析肺癌组织及肺癌细胞中FGD5-AS1的表达;免疫荧光检测分析肺癌组织中细胞增殖和抗原Ki-67的表达;通过线性回归分析肺癌组织中FGD5-AS1与Ki-67的表达相关性。生物在线软件联合miRNA测序结果,并通过荧光素酶检测分析FGD5-AS1与miR-129-5p结合可能性。将A549细胞分成空白对照组（Control）、si-FGD5-AS1组、miR-mimics组（miR-129-5p mimics）、si-FGD5-AS1与miR-mimics联合组,利用脂质体法将si-FGD5-AS1、miR-129-5p mimics分别或联合转染入A549细胞,24 h后,利用CCK-8检测细胞活力、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡、蛋白印迹（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白（Bad、Bcl-2、Cleaved Caspase-3）的表达。结果:FGD5-AS1在肺癌组织及肺癌细胞中的表达均显著升高（P＜0.01）,其表达量与Ki-67的表达呈正相关（r=0.641 8,P=0.000）。miR-129-5p在肺癌组织及细胞中的表达均显著降低（P＜0.01）,生物在线软件及荧光素酶检测验证,FGD5-AS1与miR-129-5p存在结合位点;在肺癌组织中,miR-129-5p的表达与Ki-67的表达呈负相关（r=-0.752 8,P=0.000）。与Control组比较,si-FGD5-AS1可显著抑制A549细胞的增殖（P＜0.01）、促进其凋亡（P＜0.01）,Bad及Cleaved caspase-3的表达均显著升高（均P＜0.01）,Bcl-2的表达显著降低（P＜0.05）;与si-FGD5-AS1组比较,si-FGD5-AS1与miR-mimics联合组可进一步抑制细胞增殖（P＜0.01）,促进细胞凋亡（P＜0.01）,Bad及Cleaved caspase-3的表达均显著提高（均P＜0.01）,Bcl-2的表达显著降低（P＜0.01）。结论:肺癌组织中FGD5-AS1的表达显著上调,可能通过抑制hsa-miR-129-5p的表达而促进肺癌细胞增殖,参与肺癌的发生及进展。     

miR-383-3p对鼻咽癌6-10B细胞生物学功能的影响及其可能作用机制

目的:探讨miR-383-3p对鼻咽癌6-10B细胞功能的影响及其可能作用的靶基因。方法:采用脂质体介导法将miR-383-3p模拟物（miR-383-3p mimic）、miR-383-3p抑制物（miR-383-3p inhibitor）以及对照模拟物（NC）转染6-10B细胞,MTT 法检测各组6-10B细胞的增殖能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组6-10B细胞的凋亡情况,Transwell实验检测各组6-10B细胞的迁移能力,双荧光素酶报告基因实验确定miR-383-3p与高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)的靶向作用情况,qRT-PCR检测不同鼻咽癌细胞中miR-383-3p及各组6-10B细胞中miR-383-3p和HMGA2 mRNA表达水平,Western blot检测各组6-10B细胞中水通道蛋白5（aquaporins 5,AQP5)、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein,CREB)、p-CREB以及HMGA2蛋白表达水平,免疫荧光染色检测各组6-10B细胞中AQP5和核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB)的荧光强度。结果:与NP69细胞相比,miR-383-3p在鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、HONE1、HNE-1、C666-1、6-10B中的表达量均明显下降（P＜0.05或P＜0.001）;与NC组相比,miR-383-3p mimic 组能够显著抑制鼻咽癌6-10B细胞的增殖和迁移并诱导细胞凋亡（P＜0.05）,而miR-383-3p inhibitor组6-10B细胞增殖和迁移能力明显升高,细胞凋亡水平则明显下降（P＜0.05）;HMGA2是miR-383-3p的靶基因,与NC组相比,miR-383-3p mimic 组HMGA2 mRNA 和蛋白的表达水平下降（P＜0.05）,而miR-383-3p inhibitor组明显升高（P＜0.05）;与NC组相比,miR-383-3p mimic 组AQP5和p-CREB蛋白表达量明显升高（P＜0.05）,而miR-383-3p inhibitor组明显下降（P＜0.05）;与NC组相比,miR-383-3p mimic组AQP5荧光信号较强,而 NF-κB荧光信号较弱,miR-383-3p inhibitor组检测结果与此相反。结论:miR-383-3p可能通过负调控HMGA2的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移,进而促进鼻咽癌细胞凋亡,该作用可能与AQP5/CREB途径的信号通路有关。     

沉默circZFR通过调控miR-497-5p表达抑制脊索瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:研究环状RNA（circular RNAs,circRNAs）circZFR是否通过调控微小RNA（microRNA,miRNA/miR）-497-5p的表达影响脊索瘤细胞增殖、迁移及侵袭。方法:实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测脊索瘤组织中circZFR和miR-497-5p的表达。在脊索瘤U-CH1细胞中转染si-circZFR或miR-497-5p。噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭情况,蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloprotease-2,MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloprotease-9,MMP-9）蛋白表达,StarBase预测工具和双荧光素酶报告实验分析circZFR与miR-497-5p的靶向结合。si-circZFR和anti-miR-497-5p共转染,观察下调miR-497-5p表达对沉默circZFR表达诱导的U-CH1细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结果:与髓核组织比较,脊索瘤组织中的circZFR表达量明显增加,miR-497-5p表达量显著减少（P＜0.05）。沉默circZFR表达或过表达miR-497-5p明显降低U-CH1细胞48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量,显著提高p21蛋白水平（P＜0.05）。circZFR靶向调控miR-497-5p的表达。下调miR-497-5p表达逆转了沉默circZFR表达对脊索瘤U-CH1细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP-2及MMP-9蛋白表达的抑制作用,和对p21蛋白表达的促进作用。结论:沉默circZFR表达可以抑制脊索瘤细胞的增殖、迁移及侵袭,其作用机制与靶向调控miR-497-5p的表达有关。     

miR-125a-5p靶向RRM2调控A549/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探究微小RNA-125a-5p（microRNA-125a-5p,miR-125a-5p）对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:使用ENCORI在线数据库分析miR-125a-5p在非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）的方法检测人肺上皮正常细胞（BEAS-2B）与非小细胞肺癌细胞系（A549、A549/DDP、SK-MES-1）中miR-125a-5p的表达水平;使用RT-qPCR与蛋白免疫印迹法（Western blot）检测A549、A549/DDP细胞中核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)的表达情况;生物信息学方法分析miR-125a-5p与RRM2的靶向调控序列;双荧光素酶基因报告实验与Western blot测定miR-125a-5p与RRM2在A549/DDP细胞中的调控关系;细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞的存活率与半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在非小细胞肺癌组织与细胞系中miR-125a-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与A549细胞相比,A549/DDP细胞中RRM2的表达水平显著升高（P＜0.05）;过表达miR-125a-5p部分恢复了顺铂对A549/DDP细胞的抑制作用,使细胞存活率显著降低（P＜0.05）,凋亡率显著增加（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实miR-125a-5p能够靶向结合RRM2（P＜0.05）;过表达RRM2逆转了miR-125a-5p对A549/DDP的作用,降低了A549/DDP对顺铂的敏感性（P＜0.05）。结论:miR-125a-5p可通过靶向下调RRM2基因的表达,从而部分恢复A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

lncRNA RHPN1-AS1靶向miR-485-5p调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及其分子机制

目的:探讨lncRNA RHPN1反义RNA1（RHPN1-AS1）靶向miR-485-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响和机制。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测20例骨肉瘤组织与其对应的癌旁组织、人正常成骨细胞hFOB1.19以及3种骨肉瘤细胞（U-2OS、SAOS-2、HOS）中RHPN1-AS1和miR-485-5p的表达水平。利用脂质体转染法将RHPN1-AS1小干扰RNA（si-RHPN1-AS1）、小干扰RNA阴性对照（si-NC）、miR-485-5p模拟物（miR-485-5p mimics）、miRNA阴性对照（miR-NC）分别转染U-2OS细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶14（MMP-14）蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RHPN1-AS1和miR-485-5p的靶向调控关系。结果:与癌旁组织比较,骨肉瘤组织中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与hFOB1.19细胞比较,3种骨肉瘤细胞中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-RHPN1-AS1组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表达水平显著降低,p21、p27和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）;与miR-NC组比较,miR-485-5p组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平显著降低,p21和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）。RHPN1-AS1靶向负性调控miR-485-5p表达。干扰miR-485-5p表达逆转了抑制lncRNA RHPN1-AS1表达对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:抑制RHPN1-AS1通过上调miR-485-5p抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。