T-bet基因转染对哮喘小鼠脾脏Th1/Th2平衡的影响

【目的】 观察气道内T-bet基因转染对哮喘小鼠脾脏淋巴细胞Th1/Th2平衡､T-bet及GATA-3 mRNA表达的影响｡ 【方法】 将C57BL/6小鼠32只随机分为4组,每组8只,分别为正常对照组(A组)､哮喘模型组(B组)､空质粒干预组(C组) 和T-bet质粒干预组(D组)｡卵白蛋白(OVA) 抗原溶液腹腔注射致敏,滴鼻造模｡空质粒组和T-bet质粒干预组OVA激发24 h前,分别经鼻滴入50 μg空质粒､重组T-bet质粒,对照组用生理盐水代替OVA｡最后一次滴鼻激发48 h后处死小鼠,流式细胞仪检测各组实验小鼠的脾脏淋巴细胞的Th1/Th2, RT-PCR检测小鼠脾脏淋巴细胞的T-bet及GATA-3mRNA表达｡ 【结果】 哮喘小鼠气道转染pcDNA3-T-bet质粒后:①流式细胞仪检测发现,脾脏Th1百分率较哮喘模型组显著升高[(2.29 ± 1.55)% vs. (1.93 ± 1.14)%,P﹤0.05],Th2百分率显著降低[(0.93 ± 0.64)% vs. (1.63 ± 0.59)%];②RT-PCR检测发现脾脏淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著增加(0.53 ± 0.027 vs. 0.28 ± 0.035,P﹤0.05), GATA-3 mRNA表达水平显著降低(0.24 ± 0.022 vs. 0.58 ± 0.038,P﹤0.05)｡而pcDNA3空质粒干预后与哮喘模型组比较无显著差异｡【结论】 气道内转导pcDNA3-T-bet质粒后,可显著上调哮喘小鼠体内T-betmRNA表达,下调GATA-3 mRNA表达,有效改善哮喘小鼠体内Th1/Th2比例失衡,从而抑制哮喘小鼠的气道炎症,为哮喘的T-bet基因治疗提供依据｡     

哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA比值及其与Th1/Th2平衡间的关系

【目的】研究转录因子T-bet/GATA-3在小儿哮喘发病以及Th1/Th2失衡中的作用。【方法】本实验拟通过半定量RT-PCR检测部分哮喘患儿外周血单个核细胞（PBMC）中T-bet、GATA-3 mRNA表达情况,同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Th1、Th2细胞数量,并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Th1、Th2细胞比率进行相关分析,了解T-bet/GATA-3对哮喘患儿的Th细胞分化的调节作用。【结果】哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著低于正常对照组,其中哮喘发作组显著低于缓解组（P〈0.05）;转录因子GATA-3 mRNA表达水平显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组（P〈0.05）。哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Th1百分率显著低于正常对照组,其中哮喘发作组又显著低于缓解组（P〈0.05）;Th2细胞百分率显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组（P〈0.05）。哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Th1细胞比率呈正相关（r=0.731）,与Th2细胞比率呈负相关（r=-0.685）;GATA-3 mRNA表达量与Th1细胞比率呈负相关（r=-0.692）,与Th2细胞比率呈正相关（r=0.717）;T-bet/GATA-3 mRNA比值与Th1细胞比率呈正相关（r=0.793）,与Th2细胞比率呈负相关（r=-0.639）,与Th1/Th2比值呈正相关（r=0.801）。【结论】哮喘患儿T-bet/GATA-3 mRNA表达水平失调,与哮喘患儿Th1/Th2失衡密切相关,可作为衡量Th1/Th2平衡的新指标。     

GATA-3与Th1/Th2的分化

机体清除病原体需要辅助性T细胞的参与,根据其产生细胞因子的不同可将辅助性T细胞分为两类:Th1细胞和Th2细胞。GATA3在调节Th1和Th2细胞分化中起重要作用。转录因子GATA家族(GATA-3)不仅在转录水平上调节Th2类细胞因子的表达,而且在染色体结构的重组和IL-4位点的开放方面都起着重要的作用。作为一个重要的调控,GATA3通过两种方式使Th2细胞表型稳定,首先,GATA3通过抑制IL-12受体β2链的表达来限制Th1细胞的分化;其次,GATA3通过正反馈调节来加强自身的表达。     

老年非小细胞肺癌患者Th1/Th2漂移状态与T-bet/GATA3基因表达的关系

目的探讨老年非小细胞肺癌患者Th1/Th2漂移状态及其与T-bet、GATA3基因表达的关系。方法选取老年非小细胞肺癌患者及健康受试者各120例,双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测各组血浆中Th1类细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)和Th2类细胞因子IL-4、IL-10的浓度;梯度离心法分离出单个核细胞(PB-MC),采用RT-PCR方法检测其T-bet、GATA3mRNA水平。结果老年非小细胞肺癌患者Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2水平与老年健康受试者比较明显下降[(10.28±0.88)pg/mL vs(16.94±1.05)pg/mL;(9.06±0.85)pg/mL vs(13.96±0.87)pg/mL)],差异均具有统计学意义;老年非小细胞肺癌患者Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平与老年健康受试者比较明显升高[(5.98±0.98)pg/mL vs(3.89±0.28)pg/mL;(47.59±2.89)pg/mL vs(40.47±1.28)pg/mL)],差异均具有统计学意义。老年非小细胞肺癌患者Th1型核转录因子T-bet mRNA的表达水平较老年健康受试者下降[(0.85±0.11)vs(1.46±0.09)];老年非小细胞肺癌患者Th2型核转录因子GATA3mRNA的表达水平较老年健康受试者明显增高[(1.51±0.12)vs(0.89±0.10)],差异均具有统计学意义。结论老年非小细胞肺癌患者存在着Th2漂移现象,该现象可能与影响Th1/Th2的极化状态的关键因子T-bet和GATA3的表达失常有关。     

氧化苦参碱对肺纤维化大鼠肺内Th1/Th2平衡的影响

目的：观察博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化肺内Th1/Th2状态,以及氧化苦参碱（OMT）对肺纤维化大鼠的干预作用。方法：气管内注射博来霉素制作大鼠肺纤维化模型。将72只雄性SD大鼠分组为正常对照组、模型组、氧化苦参碱治疗组。治疗组于造模后第2天起予腹腔注射氧化苦参碱注射液,直至处死。每组在造模后第3、7、14、28天随机处死6只,观察肺组织病理变化,计算机图形自动分析系统（C IAS）评估肺纤维化程度;检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量及肺组织匀浆γ-干扰素（IFN-γ）及白介素-4（IL-4）。结果：与正常组比较,模型组表现为明显肺泡炎,炎性细胞浸润、严重肺纤维化。治疗组与模型组比较,肺泡炎和肺间质的纤维胶原组织增生均减轻（P〈0.05）。模型组第14、28天肺HYP含量高于同期正常组（P〈0.05）;治疗组第28天肺HYP含量明显低于同期模型组（P〈0.05）。与正常组比较,模型组IFN-γ均降低（P〈0.05）,但治疗组各时间点IFN-γ水平较模型组升高（P〈0.05）,且与正常组比较无统计学差异（P〉0.05）。正常组、治疗组和模型组各时间点IL-4含量均无统计学差异（P〉0.05）。结论：博莱霉素肺纤维化大鼠体内存在Th1反应不足现象,氧化苦参碱能减轻博莱霉素导致的大鼠肺纤维化程度,其可能与纠正肺纤维化大鼠Th1/Th2的失衡有关。     

哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA比值及其与Th1/Th2平衡间的关系

 【目的】 研究转录因子T-bet/GATA-3在小儿哮喘发病以及Th1/Th2失衡中的作用。【方法】 本实验拟通过半定量RT-PCR检测部分哮喘患儿外周血单个核细胞（PBMC）中T-bet、GATA-3 mRNA表达情况，同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Th1、Th2细胞数量，并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Th1、Th2细胞比率进行相关分析，了解T-bet/GATA-3对哮喘患儿的Th细胞分化的调节作用。【结果】 哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著低于正常对照组，其中哮喘发作组显著低于缓解组（P<0．05）；转录因子GATA-3 mRNA表达水平显著高于正常对照组，哮喘发作组又显著高于缓解组（P<0．05）。哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Th1百分率显著低于正常对照组，其中哮喘发作组又显著低于缓解组（P<0．05）； Th2细胞百分率显著高于正常对照组，哮喘发作组又显著高于缓解组（P<0．05）。哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Th1细胞比率呈正相关（r＝0．731），与Th2细胞比率呈负相关（r＝-0．685）；GATA-3 mRNA表达量与Th1细胞比率呈负相关（r＝-0．692），与Th2细胞比率呈正相关（r＝0．717）；T-bet/GATA-3 mRNA比值与Th1细胞比率呈正相关（r＝0．793），与Th2细胞比率呈负相关（r＝-0．639），与Th1/Th2比值呈正相关（r＝0．801）。【结论】 哮喘患儿T-bet/GATA-3 mRNA表达水平失调，与哮喘患儿Th1/Th2失衡密切相关，可作为衡量Th1/Th2平衡的新指标。     

黄连阿胶汤对失眠大鼠血清Th1/Th2平衡的影响

目的观察黄连阿胶汤对失眠模型大鼠Th1/Th2平衡的影响。方法将36只SD大鼠随机分为3组,PCPA法复制失眠大鼠模型,ELISA法检测大鼠血清IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-10及IFN-γ/IL-4的水平。结果模型组大鼠IFN-γ、IL-1β的水平明显下降（P〈0.01）,IL-4、IL-10的表达则明显升高（P〈0.01）,IFN-γ/IL-4比值降低（P〈0.01）;黄连阿胶汤组IFN-γ、IL-1β的表达有不同程度的升高（P〈0.05,P〈0.01）,IL-4、IL-10的表达降低（P〈0.05）,IFN-γ/IL-4比值升高（P〈0.01）。结论黄连阿胶汤能提高失眠大鼠Th1细胞因子的表达,降低Th2细胞因子的表达,促进Th1/Th2平衡向Th1方向偏移,是其治疗失眠的可能机制之一。     

咳喘穴位敷贴对哮喘大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响

目的 探讨咳喘穴位敷贴对哮喘大鼠辅助性T淋巴细胞1(Th1)/辅助性T淋巴细胞2(Th2)免疫平衡的影响.方法 60只雄性SD大鼠随机分为6组:正常对照组、哮喘模型组、生芥子组、生炒各半组、炒芥子组、地塞米松组,每组10只.采用卵清蛋白致敏并激发的方法制备大鼠慢性哮喘模型,白芥子不同配比咳喘穴位敷贴散贴敷穴位干预治疗.采用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)测定各组大鼠血清中干扰素(IFN)-γ、白介素(IL)-4、白介素(IL)-13的含量.结果 与正常对照组比较,哮喘模型组大鼠血清IFN-γ含量明显降低,而IL-4、IL-13的含量明显升高(P＜0.01).与哮喘模型组比较,生芥子组、生炒各半组、炒芥子组和地塞米松组的大鼠血清IFN-γ含量明显升高,而IL-4、IL-13的含量明显降低(P＜0.01),各治疗组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 咳喘穴位敷贴能够调节哮喘大鼠Th1/Th2免疫平衡,改善炎症反应,从而改善哮喘病情.     

T-bet对Th1/Th2分化调节作用与恶性肿瘤的关系

T-bet是T-box基因家族的新型转录因子,选择性地表达于Th1细胞,能诱导干扰素γ的产生,在Th1细胞的分化中起决定性的作用。在生理条件下,机体Th1和Th2细胞的免疫功能处于动态平衡态,这种平衡的偏离,对肿瘤发生、发展有重要的影响。现已发现,肿瘤宿主体内Th1/Th2向Th2漂移,Th2优势状态与肿瘤的免疫逃逸密切相关。研究表明,将T-bet基因导入肿瘤细胞,可将Th2细胞逆转为Th1细胞,这将对肿瘤的免疫治疗具有重要的意义。     

电磁辐射急性暴露对Th1/Th2细胞因子平衡的影响

目的 观察电磁辐射对Th1/Th2细胞因子平衡的影响.方法 以平均功率密度为90 mW/cm2 的微波辐照昆明小鼠(4～6周龄,体质量20～25 g,40只,均为雌性)20 min,采用RT-PCR、ELISA检测微波辐照后不同时相点干扰素(interferon-gamma,INF-γ)、白细胞介素4(interleukin4,IL-4)表达量的变化,分析微波辐照对Th1/Th2平衡的偏移.结果 90 mW/cm2 的微波急性辐照会导致INF-γ表达量的增高,辐照后第5天达到峰值,增幅为135.5%(P<0.01);90 mW/cm2 的微波急性辐照使IL-4的表达有降低的趋势,但与对照组相比没有显著差异(P>0.05).结论 平均功率密度为90 mW/cm2 的微波急性辐照会导致昆明种小鼠Th1/Th2平衡向Th1方向偏移.     

二黄方对EAE大鼠细胞因子及Th1/Th2平衡的影响

目的探讨二黄方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠不同时间点血浆IFN-γ、IL-4及Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)平衡的影响。方法用髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫Lewis大鼠诱导EAE模型,采用随机数字表法分为模型组、激素组、中药组及正常对照组,分别在免疫后第7天、14天和28天采集血样,检测血浆细胞因子水平。结果免疫后第28天,模型组和激素组IL-4水平均显著下降,低于正常组(P<0.01),中药组IL-4水平升高,与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05);免疫后第28天,模型组和激素组Th1/Th2水平均显著升高,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01),中药组Th1/Th2水平降低,与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论二黄方可减轻EAE疾病严重程度,可能通过上调IL-4水平,下调Th1/Th2比值发挥对EAE的治疗作用。     

藿朴夏苓汤对脾胃湿热证Th1/Th2平衡的影响

目的：探讨藿朴夏苓汤调节脾胃湿热证Th平衡的趋势方向。方法方便收集2015年6月＿2016年6月广州医科大学附属第二医院中医门诊慢性胃病脾胃湿热证患者,随机分为中药组与西药组,每组30例;采用酶联免疫吸附试验(ELISA﹚检测患者服药前后外周血细胞因子IFN-γ、IL-4水平表达变化。结果慢性胃病脾胃湿热证治疗中药组总有效率为93.3%,西药组总有效率为90.0%;治疗前各组外周血IFN-γ、IL-4表达差异无统计学意义(P﹥0.05﹚;经治疗后,慢性胃病脾胃湿热证患者外周血IFN-γ水平明显下降(P﹤0.05﹚,其中中药组(47.91±17.06﹚较西药组(60.35±16.12﹚下降更明显(P﹤0.05﹚;IL-4水平上升,其中中药组较西药组上升,但差异无统计学意义。结论藿朴夏苓汤具有介导Th1免疫优势,调节中医正邪平衡,可作为临床中医选方用药的依据。     

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠的治疗作用

目的 通过对BALB/c小鼠多点注射透明带多肽,造成免疫性卵巢早衰模型,研究左归丸对免疫性卵巢早衰模型的治疗作用. 方法 (1)建立小鼠免疫性卵巢早衰模型:以小鼠透明带3所合成透明带多肽为免疫原,以其免疫SPF级BALB/C雌性小鼠.以出现动情周期紊乱、卵巢细胞受损,表示造模成功.(2)造模成功后,将BALB/c小鼠随机分为模型组、左归丸高、中、低剂量组,泼尼松组、己烯雌酚组和对照组,共灌胃给药4周. 结果 模型组小鼠在第3～8周的体重与对照组比较,具有显著性差异(P<0.05).模型组仅有16.7%(2/12)的动物维持正常的性周期,而空白对照组有91.7%(11/12)的动物维持正常的性周期.模型组小鼠卵巢中颗粒细胞、卵母细胞的凋亡率与对照组比较,具有显著性差异(P<0.05). 结论 左归丸可能具有改善免疫性卵巢早衰小鼠症状的作用.     

来氟米特对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠Th1/Th2平衡的影响

目的探讨来氟米特(LEF)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的防治作用及其可能的免疫学机制。方法将36只雌性C57BL/6小鼠依据随机数字表法分为大、小剂量LEF防治组及EAE对照组,每组12只。采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55构建EAE模型。从造模前3 d开始起EAE对照组及大、小剂量LEF防治组分别予以生理盐水、LEF 8 mg/(kg·d)、2 mg/(kg·d)灌胃,连续10 d。观察小鼠发病情况及外周血中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平及其比值变化。结果与EAE对照组相比,LEF各防治组小鼠临床症状较轻,且外周血中IL-4、IL-4/INF-γ值增高(P<0.01),INF-γ水平显著降低(P<0.01),且与小剂量相比大剂量降低更明显。结论 LEF对EAE具有防治作用,且效果呈剂量依赖性。其防治作用可能与调节Th1/Th2比例平衡,Th0分化向Th1漂移有关。     

归肾丸对DOR小鼠卵巢超微结构的影响

目的 探讨归肾丸对卵巢储备功能低下（diminished ovarian reserve,DOR）小鼠的颗粒细胞超微结构的影响。方法 将20只C57BL/6J雌性小鼠随机分为正常组、模型组、归肾丸组和脱氢表雄酮（DHEA）组。连续序贯腹腔注射孕马血清（PMSG）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）、前列腺素F2α（PGF2α）产生连续超数排卵,再结合臭氧吸入构建DOR模型。其后各治疗组给予相应药物灌胃,而正常组与模型组给予生理盐水灌胃。21d后,采用透射电镜观察各组小鼠卵巢颗粒细胞超微结构的变化。结果 模型组中线粒体肿胀明显,还出现了空泡化改变,且较少看到脂滴,各治疗组卵巢超微结构较模型组有明显差异,颗粒细胞线粒体形态规则,管型明显,胞质内脂滴丰富。结论 归肾丸对DOR模型小鼠卵巢超微结构有较明显的改善作用。     

益胃汤对子宫内膜异位症模型大鼠Th1/Th2漂移的影响

目的:观察子宫内膜异位症模型大鼠血清IL-4,INF-γ水平和血浆IL-10的变化,研究益胃汤对子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)模型大鼠外周血Th1/Th2平衡的干预作用。方法:选择40只造模成功的自体移植EMs模型大鼠随机分成模型对照组、丹那唑组(0.02 g/kg)、益胃汤高(27.00 g/kg)、中(13.5 g/kg)、低(6.75 g/kg)三剂量组,并取8只建立假手术组,药物组和假手术组均采用灌胃给药方式给药,治疗组给予对应药物,给药体积10 m L/kg,一次/d,假手术组给予等体积蒸馏水,药物连续干预4 w,4 w后取异位子宫内膜观察其病理形态学以及观察大鼠血清IL-4,INF-γ水平和血浆IL-10,计算IL-4/INF-γ和IL-10/INF-γ比值并分析其变化。结果:与假手术组比较,模型对照组大鼠子宫内膜纤维组织增生,内膜呈乳头状增生,腺体呈囊性扩张明显,可见腺体及内膜间质浸及肌层,内膜间质变小;IL-10/INF-γ显著升高(P0.05)。与模型对照组比较,益胃汤各给药组大鼠子宫内膜病理形态学均显著改善,血清INF-γ显著增高(P0.05),IL-4/INF-γ和IL-10/INF-γ比值均明显变小(P0.05)。结论:益胃汤改善外周血炎症因子浓度,减轻临床症状,其作用机制之一EMs可与其调节Th1/Th2失衡有关。     

更年期大鼠血清雌二醇水平与Th1/Th2平衡的增龄性改变

性激素与免疫功能之间的复杂关系提示更年期性激素的缺乏会对免疫功能产生多方面影响。临床资料显示雌二醇(E2)在免疫功能的调节中起重要作用[1]。给体外培养的淋巴细胞添加E2可增加免疫球蛋白的分泌[2]。另一方面,雌激素水平的增高使妇女对某些自身免疫性疾病易感[3]。已证实在老年机体纯真T细胞数量大幅减少,记忆T细胞和NK细胞功能减退[4,5]。目前有关更年期雌激素水平的变化对Th1/Th2平衡影响的研究国内还较少。Kamada等报道[6],与绝经前妇女相比,绝经后妇女外周全血细胞培养液经PHA刺激后Th1型细胞因子(IL-2和IFN-γ)的水平呈现…