川陈皮素抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭能力的机制探讨

目的:观察川陈皮素（nobiletin,Nob）对胃癌SGC-7901细胞侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:不同浓度的川陈皮素（0、30、60、120 mg/L）体外处理SGC-7901细胞。CCK8法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变;免疫印迹法检测细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物（E-cadherin、Vimentin、Fibronectin）蛋白、MMP-9、STAT3、p-STAT3蛋白表达的改变。结果:CCK8和Transwell小室法检测结果显示,与对照组（0 mg/L）比较,川陈皮素可显著抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭能力;免疫印迹结果显示,随着川陈皮素浓度的增加,SGC-7901细胞E-cadherin蛋白表达逐渐上调,同时Vimentin、Fibronectin蛋白的表达量降低,MMP-9蛋白表达下调,STAT3总量未发生变化,但p-STAT3表达逐渐降低。结论:川陈皮素可降低胃癌SGC-7901细胞侵袭能力,其机制可能为通过抑制STAT3通路,继而抑制EMT。     

AP-4基因表达下调抑制子宫内膜癌细胞侵袭和迁移能力

目的:观察靶向抑制激活增强子结合蛋白-4(AP-4)基因的表达对子宫内膜癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人子宫内膜癌细胞株HEC-1A、RL-952、HEC-1B、ishikawa中AP-4基因的表达水平。采用脂质体介导的细胞转染法将AP-4 siRNA转染至HEC-1A细胞,同时设置转染对照。转染48 h后,采用qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后各组HEC-1A细胞中AP-4的表达水平,通过细胞划痕实验观察转染后各组细胞迁移情况,采用Transwell实验检测转染后各组细胞侵袭能力。采用Western blot检测转染后各组细胞中上皮细胞标志分子E-钙粘蛋白(E-cadherin)和间充细胞标志分子N-钙粘素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:AP-1基因在四株子宫内膜癌细胞中均有表达,在HEC-1A细胞中相对表达水平最高(P<0.05),用于后续转染实验。qRT-PCR和Western blot结果均显示转染AP-4 siRNA能够成功抑制HEC-1A细胞中AP-1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。Transwell实验显示转染AP-4 siRNA后HEC-1A细胞侵袭能力明显受到抑制(P<0.05)。划痕实验显示转染AP-4 siRNA后HEC-1A细胞迁移能力明显受到抑制(P<0.05)。Western blot结果显示转染AP-4 siRNA后HEC-1A细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平升高,抑制了上皮间质转化(EMT)过程(P<0.05)。结论:AP-4基因表达下调能够有效抑制子宫内膜癌细胞的侵袭和迁移能力,该过程可能与逆转细胞EMT过程有关。     

MYEOV对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨骨髓瘤过表达基因MYEOV在人胰腺癌细胞中的表达情况及其下调对胰腺癌SW1990细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建慢病毒载体GV248,转染胰腺癌细胞株SW1990获得SW1990-sh1和SW1990-sh2两个实验组,以空白质粒转染作为阴性对照组,未干预细胞为空白对照组。qPCR和Western blot检测转染前后MYEOV mRNA与蛋白的表达水平;CCK-8法测定细胞增殖能力;划痕实验分析细胞迁移能力。qPCR检测TGF-β/SMAD通路中相关SMADs mRNA表达水平。结果与正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6相比,MYEOV mRNA在6株胰腺癌细胞中表达水平明显增加(P<0.01);但仅在PANC-1和SW1990细胞系中检测到低水平MYEOV蛋白表达。实验组中MYEOV mRNA和蛋白表达均明显下调。与对照组相比,SW1990细胞的增殖和迁移能力明显下降(P<0.001)。下调MYEOV能降低TGF-β通路中SMAD1、SMAD4、SMAD5和SMAD9 mRNA表达(P<0.01),而SMAD2、SMAD3和SMAD7 mRNA仅在SW199...     

和厚朴酚通过SMAD2/3通路抑制胰腺癌KPC小鼠肿瘤生长及其原代细胞的侵袭和迁移北大核心

目的:探究和厚朴酚(honokiol,HNK)在胰腺癌KPC小鼠(LSL-Kras^(G12D/+);Trp53^(fl/+);Pdx1-Cre)肿瘤生长及其原代肿瘤细胞侵袭、迁移及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)中的作用和机制。方法:自发性胰腺癌转基因小鼠KPC成瘤后灌胃给药,1个月后剖杀观察肿瘤大小和周围浸润情况,免疫组化染色检测EMT相关指标;提取KPC小鼠原代肿瘤细胞培养,以不同浓度和厚朴酚干预,Transwell小室检测其侵袭、迁移能力,Westren blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、p-SMAD2/3、t-SMAD2/3蛋白的表达;利用分子对接模型,预测和厚朴酚和SMAD2的最小距离氢键结合位置;使用外源性TGF-β1作为SMAD2/3的激动剂,联合和厚朴酚,干预肿瘤细胞,Transwell小室和Western blot检测细胞侵袭、迁移和EMT相关蛋白表达情况。结果:和厚朴酚能抑制KPC小鼠自发胰腺肿瘤的大小和EMT,细胞实验也证实和厚朴酚能抑制KPC小鼠原代肿瘤细胞的侵袭、迁移,抑制N-cadherin、Vimentin蛋白的表达,促进E-cadherin蛋白的表达,同时抑制SMAD2/3的磷酸化。软件预测SMAD2的459号脯氨酸残基与和厚朴酚羟基形成0.24 nm的氢键。回复实验证实和厚朴酚能够抑制TGF-β1激活SMAD2/3促进的胰腺癌细胞的侵袭、迁移和EMT。结论:动物和细胞实验都证实和厚朴酚可能封闭SMAD2蛋白质口袋,抑制SMAD2/3的磷酸化,进而抑制KPC小鼠肿瘤的侵袭、迁移和EMT。     

缺氧微环境下HIF-1α对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响

目的:探讨缺氧微环境下缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对胰腺癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及侵袭迁移的影响。方法:首先比较缺氧和常氧培养的胰腺癌细胞形态和体外侵袭迁移能力,以及HIF-1α和EMT相关因子的表达水平。然后通过HIF-1α抑制剂YC-1和siRNA基因沉默分别从蛋白和mRNA水平抑制HIF-1α的表达,检测缺氧培养的胰腺癌细胞体外侵袭迁移能力,以及EMT相关基因的表达水平。结果:形态学和分子水平证实缺氧诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1、Capan-2、Panc-1的EMT改变,增强其体外侵袭和迁移能力。缺氧上调HIF-1α、Snail、N-cadherin的表达,下调E-cadherin的表达。抑制HIF-1α的表达后,Snail和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调,并且体外侵袭迁移能力降低。结论:HIF-1α介导EMT在缺氧促进胰腺癌细胞侵袭迁移中发挥重要作用。     

下调转录因子HOXB7抑制胰腺癌BXPC3细胞侵袭及迁移机制研究

目的:研究在胰腺癌细胞株BXPC3中转染shRNA干扰转录因子HOXB7的表达后,BXPC3细胞侵袭及迁移能力的变化。方法:Real-time PCR及Western blot印迹方法分别检测HOXB7基因mRNA及蛋白在正常人胰腺导管上皮细胞HPDE、胰腺癌细胞株BXPC3中的表达;在胰腺癌细胞株BXPC3细胞中转染HOXB7 shRNA及阴性对照shRNA,mRNA及蛋白水平检测转录因子HOXB7的干扰效果;Transwell侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力;划痕实验检测各组细胞迁移能力的变化。结果:Real-time PCR及Western blot结果显示HOXB7基因mRNA及蛋白在BXPC3细胞株中表达明显高于正常人胰腺导管上皮细胞HPDE（P＜0.05）。在BXPC3细胞中转染HOXB7 shRNA后HOXB7的mRNA及蛋白表达水平均明显受到抑制;Transwell侵袭实验及划痕实验显示细胞侵袭能力及迁移能力均显著降低。结论:胰腺癌细胞株BXPC3中干扰转录因子HOXB7表达后,细胞侵袭及迁移能力明显降低。     

GBX2过表达促进人宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭

[摘要] 目的：探讨GBX2 基因在人宫颈癌SiHa 细胞增殖和侵袭转移中的作用及其机制。方法：应用质粒转染技术,分别将过表达GBX2 基因重组质粒pCMV6-entry-GBX2（实验组）及空载体质粒pCMV6-entry（阴性对照组）转染到宫颈癌SiHa 细胞中,用WST-1 法、集落形成实验、流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、集落形成和细胞周期,用划痕愈合实验、Transwell 实验检测细胞的迁移、侵袭能力,用ELISA 法检测细胞培养上清中IL-6 的表达水平,用WB检测EMT相关蛋白的表达变化并探讨其可能的作用机制。结果：与SiHa/pCMV6 组相比,上调GBX2 表达后：（1）SiHa/GBX2 组细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显增强（均P<0.01）,G0/G1 期的细胞比例减少、S期与G2/M期的细胞比例增加（均P<0.01）;（2）SiHa/GBX2 组细胞EMT相关蛋白上皮钙黏蛋白表达水平下降,神经钙黏蛋白、波形蛋白和snail 表达水平上调（均P<0.01）;（3）SiHa/GBX2 组细胞培养上清中IL-6 的表达水平明显增高（P<0.01）;（4）SiHa/GBX2 组细胞STAT3 磷酸化水平增强,并能被STAT3 抑制剂S31-201 抑制（P<0.01）。结论：GBX2可能通过IL-6/STAT3 通路诱导宫颈癌SiHa 细胞EMT,从而促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

白花丹素抑制上皮间质转化对卵巢癌细胞SKOV3侵袭和迁移能力影响

目的 探讨白花丹素(PB)通过对上皮间质转化的抑制从而调控卵巢癌细胞SKOV3侵袭和迁移能力的作用和机制.方法 将卵巢癌细胞分为Control组、PB(1 μmol/L)组、PB(2 μmol/L)组和PB(5 μmol/L)组,各组加入相应浓度的PB处理细胞,CCK8检测细胞增殖,Hoechst检测细胞凋亡,蛋白质印...     

下调RAB3C减低上皮间质转化抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭和转移

目的:探讨RAB3C表达对非小细胞肺癌细胞A549及NCI-H1299细胞侵袭转移的影响及其机制。方法:构建siR-RAB3C慢病毒载体转染A549及NCI-H1299细胞,使用qRT-PCR及Western blotting法验证每种细胞中RAB3C的mRNA及蛋白表达情况。应用Transwell实验及细胞划痕试验检测下调RAB3C后细胞侵袭情况的变化。Western blotting法比较对照组及siR-RAB3C组细胞中E-cadherin、N-cadherin及Vimentin的表达水平。结果:siR-RAB3C转染组细胞RAB3C的mRNA及蛋白表达量均下调。划痕试验结果显示,与对照组细胞相比,siR-RAB3C组细胞迁移率显著减少。Western blotting实验结果显示,下调RAB3C表达促进E-cadherin,抑制N-cadherin及Vimentin蛋白的表达。结论:调控RAB3C表达通过抑制上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549及H1299细胞侵袭转移。     

黄卡瓦胡椒素B促进EGFR的降解进而抑制H1975肺癌细胞的增殖和迁移

目的:研究黄卡瓦胡椒素B对肺癌细胞H1975增殖及迁移的影响并探讨其机制。方法:培养H1975肺癌细胞株,用不同浓度的黄卡瓦胡椒素B处理细胞24、48和72 h后,采用CCK-8法检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞增殖的影响。Transwell实验检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞迁移能力的影响。Western blotting 检测20 μmol/L和40 μmol/L黄卡瓦胡椒素B处理16 h后对H1975细胞EGFR-AKT信号通路相关蛋白表达的影响。采用qPCR技术检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞EGFR mRNA水平的影响。Western blotting 检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达的影响。CCK-8实验和Transwell实验分别检测黄卡瓦胡椒素B与EGFR小分子抑制剂联用对H1975细胞增殖和迁移的影响。结果:黄卡瓦胡椒素B在体外能抑制H1975细胞的增殖,且抑制作用呈浓度依赖性。黄卡瓦胡椒素B处理组细胞迁移数明显减少（P＜0.05）。Western blotting结果显示,使用黄卡瓦胡椒素B 处理16 h后,H1975肺癌细胞的EGFR、p-AKT和AKT蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),但EGFR mRNA水平无显著改变。当巴佛洛霉素A1（Bafilomycin A1,BAF）或氯喹 (Chloroquine,CQ)阻断自噬时,黄卡瓦胡椒素B诱导的对EGFR蛋白的抑制作用被逆转,并且10、20和40 μmol/L黄卡瓦胡椒素B可促进H1975细胞LC3-Ⅱ蛋白表达。黄卡瓦胡椒素B与EGFR小分子抑制剂联用能够抑制H1975细胞的增殖和迁移以及p-EGFR和p-AKT的表达。结论:黄卡瓦胡椒素B通过促进EGFR的降解进而抑制H1975肺癌细胞的增殖和迁移。     

miR-885-5p通过靶向CTNNB1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-885-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明miR-885-5p和CTNNB1基因在胰腺癌细胞中的作用机制。方法:MTT、细胞划痕和Transwell实验测定各组细胞增殖、迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验分析CTNNB1是否为miR-885-5p的靶基因。使用胰腺癌TCGA数据进行预后分析,并进行miR-885-5p与CTNNB1表达的相关性分析。结果:下调miR-885-5p明显促进胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭,而过表达miR-885-5p则相反。miR-885-5p可靶向CTNNB1 3' UTR并抑制其转录后表达。在下调miR-885-5p的细胞中进行回复性实验,结果表明,miR-885-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用部分依赖于CTNNB1。TCGA数据库结果显示,miR-885-5p高表达的胰腺癌患者有较好的预后,且与CTNNB1表达呈负相关。结论:miR-885-5p通过靶向CTNNB1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭,miR-885-5p有望成为胰腺癌治疗的新靶点。     

沉默RAI14表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成

目的:探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默维甲酸诱导蛋白14（RAI14）表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成的影响。方法:首先向胃癌细胞株MKN-45随机转染成功构建的靶向沉默RAI14表达的shRNA载体片段（沉默组）或无义shRNA片段（对照组）,然后采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组转染后的RAI14 mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法（Western blotting）检测各组转染后的RAI14蛋白和磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶（p-AKT）的表达情况,克隆形成及细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测增殖情况,Transwell实验和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力,体外细胞成管实验分析RAI14对胃癌肿瘤血管生成的影响。结果:qRT-PCR和Western blotting结果显示沉默组的RAI14 mRNA和蛋白表达水平分别显著低于对照组（P＜0.05)。沉默组的胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成能力显著低于对照组（P＜0.05)。沉默组的p-AKT蛋白相对表达量为0.44±0.01,低于对照组1.00±0.08,差异有统计学意义（P＜0.05)。结论:沉默RAI14表达可抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成,可能与下调p-AKT蛋白表达有关。     

Survivin参与胰腺癌PaTu8988细胞对吉西他滨的耐药

目的:探讨凋亡抑制蛋白survivin在胰腺癌细胞株PaTu8988中的表达,及其与吉西他滨(gemcitabine,GEM)耐药的关系。方法:MTT法检测GEM(0.01、0.1、1.0、2.5、5.0、10.0μg/ml)对PaTu8988细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测GEM作用后PaTu8988细胞的凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA在PaTu8988细胞中的表达。结果:高质量浓度GEM(≥1.0μg/ml)可显著抑制PaTu8988细胞的增殖、促进PaTu8988细胞的凋亡;而低质量浓度GEM(0.01、0.1μg/ml)作用不明显。低质量浓度GEM时间依赖性地上调PaTu8988细胞中survivin mRNA的表达;而质量高浓度GEM作用PaTu8988细胞后,sur-vivin mRNA的表达48 h时逐渐下降,而后逐渐上升。结论:胰腺癌PaTu8988细胞中survivin mRNA高表达,可能是其对GEM产生耐药的原因之一。     

FMNL2通过Rho信号通路促进胃癌细胞的侵袭和迁移

目的:研究同源形成素样蛋白2（FMNL2）是否通过Rho信号通路促进胃癌细胞的侵袭和迁移。方法:利用Oncomine数据库中的大数据分析FMNL2在胃癌及癌旁组织中的表达水平。运用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测胃癌细胞系中FMNL2 mRNA和蛋白的表达情况,使用shFMNL2质粒和空载质粒转染胃癌细胞系,并分为敲减组和对照组。采用 CCK8法、划痕实验、Transwell侵袭实验分析细胞的生物学功能,包括增殖、迁移及侵袭能力,利用Western blot方法检测两组细胞经Rho信号通路抑制剂Y27632处理后的E-cadherin、Vimentin及Rho信号通路相关蛋白的表达情况。结果:经生物信息学分析发现FMNL2在胃癌组织中高表达。同样FMNL2在胃癌细胞中表达水平升高。划痕实验和Transwell侵袭实验结果表明敲减组的迁移和侵袭能力显著下降。Western blot结果显示与对照组相比,E-cadherin在敲减组表达上调,Vimentin、RhoA、ROCK在敲减组表达下调。加入通路抑制剂Y27632后,EMT相关蛋白表达可被逆转。结论:下调FMNL2的表达可抑制胃癌细胞的侵袭迁移能力,并且可通过抑制Rho信号通路来实现。