miR⁃93⁃5p靶向PKMYT1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨miR⁃93⁃5p靶向蛋白激酶膜相关酪氨酸/苏氨酸1（protein kinase membrane associated tyrosine/threonine 1,PKMYT1）对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法 使用LipofectamineTM 2000分别将质粒inhibitor NC、miR⁃93⁃5p inhibitor、pcDNA、pc⁃PKMYT1转染至A549细胞中,记为inhibitor NC组、miR⁃93⁃5p inhibitor组、pcDNA组和pc⁃PKMYT1组,同时将未转染的细胞记为control组。利用qRT⁃PCR检测细胞中miR⁃93⁃5p、PKMYT1 mRNA的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃93⁃5p与PKMYT1的靶向关系;CCK⁃8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中PKMYT1、细胞周期素D1（Cyclin D1）、细胞周期素B1（Cyclin B1）的蛋白表达水平。结果 与BEAS⁃2B细胞相比,SPC⁃A⁃1细胞、A549细胞、LTEP⁃α⁃2细胞中miR⁃93⁃5p表达水平均升高（均P<0.01）,PKMYT1 mRNA和蛋白表达水平均降低（均P<0.001）。转染24 h后,分别与control组、inhibitor NC组相比,miR⁃93⁃5p inhibitor组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低（均P<0.05）,G2/M期细胞比例升高（P<0.001）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR⁃93⁃5p NC+3'UTR⁃WT组相比,miR⁃93⁃5p mimic+3'UTR⁃WT组细胞相对荧光素酶活性下降（P<0.001）。转染24 h后,与pcDNA组相比,pc⁃PKMYT1组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低（均P<0.001）,G2/M期细胞比例升高（P<0.001）。结论 沉默miR⁃93⁃5p可能通过上调PKMYT1表达水平抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

IFIT3对鼻咽癌CNE⁃2R细胞侵袭转移及EMT的影响

目的 探讨干扰素诱导的具有四肽重复序列3（interferon induced protein with tetratricopeptide repeats 3,IFIT3）在鼻咽癌CNE⁃2R细胞中的表达及其对细胞侵袭、转移和上皮⁃间质转化（epithelial⁃mesenchymal transition,EMT）能力的影响。方法 采用RT⁃qPCR和 Western blot检测IFIT3在鼻咽癌细胞CNE⁃2R和正常鼻咽上皮细胞NP69中的表达水平。鼻咽癌CNE⁃2R细胞分别感染IFIT3 shRNA的3个序列LV1、LV2、LV3,并设立阴性对照组（NC组）;利用RT⁃qPCR和 Western blot检测上皮表型E⁃cadherin及间质表型N⁃cadherin和Vimentin的表达,采用划痕实验及Transwell 实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 IFIT3在鼻咽癌CNE⁃2R细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较NP69细胞显著上调（均P<0.001）。IFIT3在LV1组、LV2组和LV3组中的mRNA和蛋白表达水平均低于NC组（均P<0.001）,且以LV2组和LV3组的表达水平最低。与NC组相比,LV2组和LV3组的细胞迁移率显著下降,迁移和侵袭细胞数显著减少,E⁃cadherin蛋白表达水平显著升高,N⁃cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低（均P<0.001）。结论 IFIT3在鼻咽癌CNE⁃2R细胞中表达上调,沉默IFIT3后CNE⁃2R细胞的侵袭、转移能力以及EMT显著被抑制。      

miR⁃449a通过NOTCH1介导铁死亡调控非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡

目的 探讨miR⁃449a对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的调控作用及其分子机制。方法 用miR⁃499a过表达类似物Agomir⁃499a（Agomir⁃499a组）及其阴性对照（NC组）分别转染非小细胞肺癌NCI⁃H1975细胞,采用qRT⁃PCR检测转染细胞中miR⁃499a的表达水平,CCK⁃8和Ki67染色法检测细胞增殖,Annexin V染色法检测细胞凋亡。采用铁死亡抑制剂ferrostatin⁃1（Fer⁃1）和谷胱甘肽（GSH）分别处理转染Agomir⁃499a的NCI⁃H1975细胞（依次记为Agomir⁃499a+Fer⁃1组和Agomir⁃499a+GSH组）,采用荧光探针法检测细胞内的Fe2+ 水平,光学比色法检测细胞内的GSH含量,qRT⁃PCR检测细胞内铁死亡和铁稳态相关基因的mRNA表达,Western blot检测NOTCH1信号通路相关蛋白的表达。结果 与NC组比较,Agomir⁃499a组NCI⁃H1975细胞的miR⁃449a表达水平明显增加（P=0.001）,细胞增殖活力明显降低（P<0.05）,细胞凋亡比例明显增加（P=0.004）;铁死亡相关因子PTGS2、ACSL4、SLC7A11和COX2的表达水平,Fe2+细胞比例以及铁稳态相关基因TF、STEAP3、TFRC和DMT1的表达水平均明显增加（均P<0.05）,但GSH含量以及NOTCH1信号通路相关分子NOTCH1、NICD、JAG1、JAG2、DLL1和HES1的表达水平均明显降低（均P<0.05）。与Agomir⁃449a组比较,Agomir⁃449a+Fer⁃1组铁死亡相关因子PTGS2、ACSL4、COX2和SLC7A11的表达水平,Fe2+细胞比例以及铁稳态相关基因TF和STEAP3的表达水平均明显降低（均P<0.05）,但GSH含量和NOTCH1信号通路相关分子NICD、JAG1和DLL1的表达水平均明显增加（均P<0.05）;Agomir⁃449a+GSH组SLC7A11、COX2和ACSL4的表达水平也较Agomir⁃449a组明显降低（均P<0.05）。 结论 miR⁃449a可诱导非小细胞肺癌NCI⁃H1975细胞凋亡和增殖抑制,其作用机制可能与抑制NOTCH1信号介导的铁死亡有关。     

SLC1A5对三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞株放射敏感性的影响及作用机制

目的 探讨溶质载体家族1成员5（solute carrier family 1 member 5，SLC1A5）对三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞株放射敏感性的影响及其作用机制。方法 采用直线加速器X射线和SLC1A5抑制剂L⁃γ⁃谷氨酰⁃对⁃硝基苯胺（L⁃γ⁃glutamyl⁃p⁃nitroanilide，GPNA）处理三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞株，选取4 Gy、8 Gy剂量单独照射或分别联合3 mmol/L GPNA处理，采用CCK⁃8法检测细胞增殖能力；然后选取8 Gy剂量单独照射或联合3 mmol/L GPNA进行处理，分为对照组（DMSO组）、SLC1A5抑制剂组（GPNA组）、照射组（IR组）、联合组（IR+GPNA组）。采用细胞克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力。采用活性氧（reactive oxygen species，ROS）荧光探针（DCFH⁃DA）检测细胞内的ROS水平，丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒检测细胞内的MDA含量，Mito⁃Tracker Red CMXRos染色实验观察细胞线粒体形态，RT⁃qPCR法检测前列素内环氧化物合成酶2（prostaglandin synthase 2，PTGS2）基因的表达水平。结果 与DMSO组相比，4 Gy组、8 Gy组、4 Gy+GPNA组和8 Gy+GPNA组细胞增殖能力均下降（均P<0.01），且4 Gy+GPNA组、8 Gy+GPNA组细胞增殖能力均低于对应的单纯照射组（均P<0.01），其中高辐射剂量组下降更明显；与DMSO组相比，IR组、GPNA组和IR+GPNA组的细胞克隆形成能力、迁移能力、侵袭能力均降低（均P<0.01），且IR+GPNA组降低更明显。与DMSO组相比，GPNA组、IR组和IR+GPNA组都存在不同程度的细胞内ROS水平增加，线粒体形态缩小，MDA含量升高以及PTGS2基因表达升高（均P<0.05），其中IR+GPNA组变化更为明显。结论 SLC1A5抑制剂在照射的基础上进一步抑制三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力，提高细胞放射敏感性，其机制可能与铁死亡激活有关。     

miR⁃145⁃5p靶向调控LOX基因对肝癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨miR-145-5p靶向调控LOX对肝癌细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法 收集2017年9月至2019年9月广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科手术切除的73例肝癌患者肿瘤组织及其配对癌旁正常组织,以及肝癌细胞系SMMC-7721、SK-Hep1,采用RT-PCR法检测组织中miR-145-5p和LOX的表达。分别将miR-145-5p慢病毒载体、LOX过表达质粒及LOX慢病毒沉默载体转染至肝癌细胞SMMC-7721或SK-Hep1,同时用LOX过表达质粒和过表达miR-145-5p慢病毒载体共转染SMMC-7721细胞,各转染组均设置相应阴性对照组及空白对照组;然后采用Transwell实验检测肝癌细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测LOX蛋白的表达水平;通过TargetScan数据库预测miR-145-5p的靶点,并利用Cluster Profiler包进行GO和KEGG富集分析。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-145-5p在癌旁正常组织中的表达高于肝癌组织（4.196±2.288 vs 2.835±1.817,P<0.0001）;LOX在肝癌组织中的表达高于癌旁正常组织（12.17±1.369 vs 11.26±1.556,P<0.001）。Transwell检测结果显示,过表达LOX能促进肝癌细胞侵袭、迁移,敲低LOX则抑制肝癌细胞侵袭、迁移（均P<0.05）;过表达miR-145-5p能抑制肝癌细胞的侵袭、迁移能力,LOX过表达能逆转miR-145-5p对SMMC-7721细胞迁移和侵袭的抑制能力。TargetScan数据库预测显示,LOX是miR-145-5p的靶基因。Western blot检测结果显示,miR-145-5p能抑制LOX蛋白表达水平（P<0.001）。结论 miR-145-5p在肝癌组织中低表达,LOX则高表达,miR-145-5p可能通过负向调控LOX抑制肝癌细胞侵袭和迁移。     

miR⁃203a⁃3p通过靶向LASP1介导Akt/GSK⁃3β/Snail信号通路调控肝癌细胞生物学行为

目的 研究miR?203a?3p对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞生物学行为的影响及其相关分子机制。方法 将miR?203a?3p 模拟物（miR?203a?3p mimics）及阴性对照（miR?NC mimics）、LIM和SH3蛋白1（LIM and SH3 protein 1,LASP1）过表达质粒（pcDNA?LASP1）及阴性对照质粒（pcDNA?NC）分别转染至HepG2细胞。以qRT?PCR法检测细胞miR?203a?3p、LASP1 mRNA表达情况,CCK?8法和异体移植瘤实验分析细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Annexin V?FITC/PI法检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测miR?203a?3p与LASP1的靶向关系,Western blot法检测细胞中LASP1、蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、磷酸化Akt（phosphorylated Akt,p?Akt）、糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase?3β,GSK?3β）、磷酸化GSK?3β（phosphorylated GSK?3β,p?GSK?3β）、Snail表达情况。结果 与miR?NC组相比,miR?203a?3p组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、LASP1 mRNA和蛋白表达量、p?Akt/Akt和p?GSK?3β/GSK?3β比值、Snail蛋白表达量均显著降低,小鼠移植瘤体积和质量显著减少,细胞凋亡率显著升高（均P<0.01）。Targetscan软件预测显示,miR?203a?3p与LASP1 存在靶向关系;与LASP1?Wt+miR?NC组比较,LASP1?Wt+miR?203a?3p组相对荧光素酶活性显著下降（P<0.001）。与miR?203a?3p+pcDNA?NC组比较,miR?203a?3p+LASP1组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、p?Akt/Akt和p?GSK?3β/GSK?3β比值、Snail蛋白表达量均显著升高,小鼠移植瘤体积和质量显著增加,细胞凋亡率显著降低（均P<0.01）。结论 miR?203a?3p可能通过靶向抑制LASP1表达调控Akt/GSK?3β/Snail信号通路活性,从而调控HCC细胞生物学行为。     

BLOC⁃3介导Rab32线粒体定位改变对肝癌细胞生长的作用研究

目的 观察溶酶体相关细胞器生物发生复合体⁃3 （biogenesis of lysosome⁃related organelles complex⁃3,BLOC⁃3）亚基Hps1和Hps4对肝癌细胞中Rab32线粒体定位的影响及在肝癌细胞生长中的作用。 方法 通过公共数据库GenDoma,String和InBio Discover分析Hps1和Hps4与Rab32的相互作用情况。体外培养人肝癌细胞系SNU⁃739和Hep⁃3B,利用脂质体转染方法分别转染Hps1和Hps4相关的siRNAs和质粒,采用免疫荧光和Western blot观察Hps1和Hps4对Rab32线粒体定位的影响,细胞划痕、克隆形成、EdU、MTS及Transwell侵袭实验检测Hps1和Hps4调控Rab32线粒体定位后肝癌细胞迁移、增殖和侵袭的变化情况。通过公共数据库UALCAN中的数据集CPTAC分析Rab32蛋白在肝癌和正常肝脏组织中的表达差异。 结果 数据库分析结果显示,Hps1和Hps4均可以与Rab32相互作用;与正常肝脏组织相比,Rab32蛋白在肝癌组织中的表达显著降低（P<0.001）。在肝癌细胞系SNU⁃739中干涉Hps1或Hps4或同时干涉Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位均减少（均P<0.01）,细胞线粒体Rab32蛋白表达均降低（均P<0.001）,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强（均P<0.05）;在肝癌细胞系Hep⁃3B中过表达Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位增多（P<0.01）,细胞线粒体Rab32蛋白表达增加（P<0.001）,细胞增殖、迁移和侵袭能力均受抑制（均P<0.01）,而单独过表达Hps1或Hps4时无显著抑制作用（均P>0.05）。结论 BLOC⁃3亚基Hps1和Hps4均可与Rab32相互作用并增加Rab32线粒体定位,进而抑制肝癌细胞生长。     

miR-1271-5p在胃癌组织的表达及对胃癌AGS细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 收集2011年6月至2014年6月广西医科大学附属肿瘤医院90例手术切除胃癌组织及相应癌旁组织。采用qRT-PCR法检测胃癌组织及相应癌旁组织,人胃癌细胞系（SGC-7901、MGC-803、AGS）和人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miR-1271-5p的表达情况。利用瞬时转染法将miR-1271-5p mimics（过表达miR-1271-5p组）和miR-NC（阴性对照组）分别转染胃癌AGS细胞,建立过表达miR-1271-5p的胃癌AGS细胞系,然后采用CCK-8法检测转染后的胃癌AGS细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-1271-5p在胃癌组织和胃癌细胞（SGC-7901、MGC-803、AGS）中的表达均低于相应癌旁组织及人正常胃黏膜上皮GES1细胞（均P<0.01）。与阴性对照组相比,过表达miR-1271-5p组胃癌AGS细胞增殖活力降低（P<0.01）,细胞集落形成数减少（P<0.01）,迁移和侵袭细胞数量亦减少（P<0.01）。结论 miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中低表达,上调miR-1271-5p可抑制胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭。     

lncBRM对乳腺癌细胞生长的影响及作用机制

目的  探讨Brahma相关长链非编码RNA （long non-coding RNA for association with Brahma,lncBRM）对人乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-453）生长、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法 采用RT-PCR实验检测lncBRM在不同乳腺癌细胞（MCF-7、 ZR-75-30、BT474、MDA-MB-231和MDA-MB-453）和正常人乳腺上皮细胞株MCF 10A中的表达;利用siRNA在MCF-7、MDA-MB-453细胞中敲低lncBRM,分别转染si-lncBRM质粒（si-lncBRM组）和空载质粒（si-Ctrl组）,采用CCK-8实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blot检测迁移相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达水平,并采用miRDB数据库预测lncBRM靶点。结果 lncBRM在不同乳腺癌细胞中的表达水平均高于正常人乳腺上皮细胞株MCF 10A （P<0.01）。si-Ctrl组比较,敲低lncBRM可抑制MCF-7、MDA-MB-453细胞增殖能力（P<0.05）,提高细胞凋亡率（P<0.01）,细胞侵袭和迁移细胞数目较少（均P<0.01）;同时E-cadherin表达明显上调,而N-cadherin表达下调（均P<0.01）。miRDB数据库预测发现lncBRM和68个miRNAs存在结合位点,敲低lncBRM导致评分最高的前5个miRNA中的4个（miR-4646-5p、miR-204-3p、miR-204-5p和miR-6832-3p）表达上调。结论 lncBRM可能通过调控miRNAs的表达而抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移并诱导其凋亡。     

CLU基因干扰质粒的构建及其对鼻咽癌细胞生物学功能的影响

目的 构建CLU基因干扰重组质粒及建立CLU基因干扰转染鼻咽癌细胞及动物模型,检测CLU对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。方法 首先以real-time PCR和Western blot法验证CLU在鼻咽癌细胞系5-8F,6-10B中的表达,以高表达CLU的5-8F细胞作为干扰转染的目标细胞;设计及构建shRNA表达载体pSR-GFP/Neo-CLU-shRNA,将其转染至5-8F鼻咽癌细胞系中,通过Transwell小室迁移及侵袭实验来检测对其迁移和侵袭功能的影响。结果 与6-10B细胞比较,CLU基因在5-8F中的表达显著上调（P<0.05）;干扰鼻咽癌细胞5-8F中的CLU可使细胞迁移和侵袭功能明显减弱（P<0.05）,使其体外成瘤能力显著降低（P<0.05）。结论 CLU基因在鼻咽癌细胞系5-8F中明显高表达;pSR-GFP/Neo-CLUshRNA 可成功干扰5-8F中CLU的表达;CLU可抑制5-8F细胞的迁移、侵袭及体内成瘤能力。     

miR-491-5p靶向FGFR4调节肝母细胞瘤细胞增殖和迁移

目的 探讨miR-491-5p靶向调节FGFR4对肝母细胞瘤增殖和迁移的影响及可能的作用机制。方法 采用qRT-PCR检测15例小儿肝母细胞瘤组织及其癌旁正常组织,正常肝细胞LO2和肝母细胞瘤细胞HuH-6中miR-491-5p和FGFR4 mRNA的表达;Western blot检测FGFR4蛋白表达;TargetScan数据库预测miR-491-5p靶点;双荧光素酶报告基因实验检测miR-491-5p与FGFR4的靶向关系。将mimic NC、miR-491-5p mimic、pcDNA3.1和pcDNA3.1-FGFR4质粒分别转染至HuH-6细胞后,采用qRT-PCR与Western blot检测FGFR4的表达,CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western blot检测GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 小儿肝母细胞瘤组织和HuH-6细胞中miR-491-5p表达水平均低于癌旁正常组织及肝细胞LO2（P<0.05）,而FGFR4表达水平高于癌旁正常组织及肝细胞LO2（P<0.05）;TargetScan数据库预测显示miR-491-5p与FGFR4存在结合位点。与mimic NC组比较,过表达miR-491-5p可抑制FGFR4表达、HuH-6细胞增殖和迁移能力及p-GSK3β/GSK3β、p-β-catenin/β-catenin及p-C-myc/C-myc比值（均P<0.05）。与mimic+Pc组比较,过表达FGFR4可逆转过表达miR-491-5p对HuH-6细胞增殖、迁移及p-GSK3β/GSK3β、p-β-catenin/β-catenin和p-C-myc/C-myc比值的抑制作用（均P<0.05）。结论 miR-491-5p通过负向调控FGFR4抑制肝母细胞瘤细胞增殖和迁移,可能与GSK3β/β-catenin信号通路失活有关。       

miR-125b-5p对喉鳞状细胞癌细胞能量代谢及增殖的影响

目的  探讨miR-125b-5p对喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）细胞能量代谢和增殖的影响及其可能的作用机制。方法 实验分为miR-125b-5p转染组（miR-125b-5p模拟物转染LSCC）和对照组（空质粒转染LSCC细胞）。采用RT-qPCR 检测miR-125b-5p在正常支气管上皮细胞和LSCC细胞中的表达,CCK-8和流式细胞术检测LSCC细胞增殖、凋亡情况,Western blot检测miR-125b-5p过表达后LSCC中HK2的表达,3H-2DG法和乳酸盐比色测定实验分别检测LSCC细胞葡萄糖消耗和乳酸产生的情况。结果 RT-qPCR实验结果显示,与正常支气管上皮细胞相比,LSCC细胞中miR-125b-5p的表达降低（0.68±0.03 vs 0.22±0.05,t=7.025,P=0.001）。CCK-8实验结果显示,转染72 h和96 h后,miR-125b-5p转染组LSCC细胞的增殖能力均较对照组明显降低（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,miR-125b-5p转染组LSCC细胞凋亡率较对照组升高 ［（37.52±2.34）% vs （12.46±3.52）%,t=7.025,P<0.001）］,但细胞集落形成能力降低（0.29±0.02 vs 1.02±0.03,t=5.689,P=0.005）;荧光素酶报告基因测定实验结果显示,miR-125b-5p转染组的荧光素酶活性低于对照组（0.32±0.03 vs 1.01±0.02,t=7.543,P=0.001）;Western blot法实验结果显示,miR-125b-5p转染组HK2蛋白表达水平较对照组降低（0.12±0.02 vs 0.75±0.03,t=5.875,P=0.023）;miR-125b-5p转染组葡萄糖消耗量［（3.85±0.86） dpm/mg vs （10.52±1.34） dpm/mg,t=6.118,P=0.005］以及乳酸产生量［（4.23±1.36） dpm/mg vs （10.96±2.45） dpm/mg,t=5.907,P=0.002］亦较对照组降低。结论 miR-125b-5p可能通过下调HK2表达降低喉鳞状细胞癌细胞的能量代谢和增殖能力,诱导细胞凋亡。     

基于ATM/CHK2/p53信号通路探究下调XRCC6对结 直肠癌细胞的影响

目的 探究下调XRCC6对人结直肠癌细胞凋亡、侵袭的影响及其与ATM/CHK1/p53信号通路的相关性。方法 将人结 直肠癌细胞SW620分为对照组、si⁃NC组和si⁃XRCC6组。MTT法检测各组细胞活力;流式细胞法检测各组细胞凋亡水平;细胞划 痕实验检测各组细胞迁移能力;Transwell检测各组细胞侵袭能力;定量聚合酶链反应（qPCR）检测ATM、CHK2、p53的转录水平; 免疫印迹（Western blot）检测ATM、CHK2、p53的蛋白表达和磷酸化（p⁃ATM、p⁃CHK2、p⁃p53）水平。结果 MTT实验结果表明,与 对照组和si⁃NC组相比,si⁃XRCC6组细胞活力显著降低（P<0.05）;流式细胞实验结果表明,与对照组和si⁃NC组相比,si⁃XRCC6组 细胞存活比例降低（P<0.01）,早期凋亡比例增加（P<0.01）,晚期凋亡细胞比例显著增加（P<0.01）,si⁃NC组和si⁃XRCC6组差异无 统计学意义（P>0.05）;细胞划痕及Transwell实验结果表明,与对照组和si⁃NC组相比,si⁃XRCC6组细胞迁移能力降低（P<0.01）, 侵袭能力降低（P<0.01）。qPCR及Western blot结果表明,与对照组和si⁃NC组相比,si⁃XRCC6组细胞ATM、CHK2、p53的转录和 蛋白表达水平有上升的趋势,其磷酸化蛋白p⁃ATM、p⁃CHK2、p⁃p53表达水平也具有上升的趋势。结论 下调XRCC6可以抑制人 结直肠癌细胞活性,诱导细胞早期凋亡,其机制可能与ATM、CHK2、p53信号通路的调控及其磷酸化水平的调控相关。     

TIPIN分子与肝细胞癌预后的关系及其生物学作用机制

目的 分析节律分子Timeless（TIM）相互作用蛋白（TIM interacting protein,TIPIN）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中的表达及其与患者预后的关系,并探究TIPIN对肝癌细胞增殖的影响及可能的生物学作用机制。方法 通过UALCAN数据库分析TIPIN在HCC组织中的表达情况及其与HCC患者预后的关系。将siTIPIN及其阴性对照序列分别转染至肝癌MHCC⁃97H细胞,采用qRT⁃PCR和Western blot检测TIPIN的表达情况,采用MTS实验和平板细胞克隆形成实验检测TIPIN表达对细胞增殖的影响。利用UALCAN数据库对TIPIN进行GO和KEGG富集分析,以及TIPIN与TIM、TP53的关联分析。 结果 UALCAN数据库分析结果显示,TIPIN在HCC组织中的表达明显高于正常肝组织（P<0.01）;TIPIN高表达患者的总生存期和无病生存期均明显短于TIPIN低表达患者（P=0.037,0.021）。与正常肝细胞HL7702相比,肝癌细胞MHCC⁃97H、MHCC⁃97L、HepG2、BEL⁃7402中TIPIN的mRNA和蛋白表达水平均明显升高（均P<0.01）。MTS和克隆形成实验结果显示,沉默TIPIN表达后肝癌MHCC⁃97H细胞的增殖和平板细胞克隆形成能力明显受到抑制（均P<0.05）。GO和KEGG富集分析结果显示,TIPIN可能通过调控细胞分裂、DNA复制、细胞周期的相互作用通路促进肝癌的恶性进程。Pearson相关性分析结果显示,TIPIN分子与TIM表达呈明显正相关（r=0.67,P<0.01）。TIPIN在TP53突变HCC患者中的表达显著高于TP53野生型HCC患者（P<0.01）。 结论 TIPIN在肝癌中表达上调,且与患者不良预后密切相关,沉默TIPIN可抑制肝癌细胞增殖。TIPIN在肝癌中可能通过与TIM形成复合体或调控TP53信号通路发挥其生物学作用。     

姜黄素通过调节TLR4/NF⁃κB信号通路抑制肾细胞癌 恶性表型的研究

目的 探究姜黄素通过调节Toll样受体4/核转录因子⁃κB（TLR4/NF⁃κB）信号通路,抑制人肾细胞癌（RCC）恶性表型。方 法 将体外培养的HK⁃2、786⁃0、ACHN细胞株分为对照组、姜黄素组、TLR4/NF⁃κB信号通路抑制剂组（瑞沙托维,TAK⁃242组）,其中 姜黄素组依据不同干预剂量分为姜黄素10、20、40 μmol/L亚组。CCK⁃8法、Annexin V⁃FITC/碘化丙啶染色、划痕实验、Transwell小室 实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力;ELISA法检测细胞白介素⁃1β（IL⁃1β）、白介素⁃6（IL⁃6）和肿瘤坏死因子⁃α（TNF⁃α）含 量;蛋白印迹法检测TLR4、NF⁃κB p65、B细胞淋巴瘤⁃2（Bcl⁃2）、Bcl⁃2相关X的蛋白质（Bax）、基质金属蛋白酶9（MMP⁃9）的表达。结 果 姜黄素在40 μmol/L以下浓度时不存在毒性作用;在RCC细胞株786⁃0、ACHN中,与对照组相比,姜黄素10、20、40 μmol/L亚组能 够明显抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡;IL⁃1β、IL⁃6和TNF⁃α、TLR4、NF⁃κB p65、Bcl⁃2、MMP⁃9水平降低,Bax水平升高,差 异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 姜黄素可通过抑制TLR4/NF⁃κB信号通路,抑制RCC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。     

MCUR1表达对卵巢癌细胞生长的影响及作用机制

 目的 探讨线粒体钙单向转运体调节分子1（mitochondrial calcium uniporter regulator 1，MCUR1）与卵巢癌患者预后的关系，及其对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响和可能的作用机制。方法 从TCGA（the cancer genome atlas）数据库下载372例卵巢癌患者数据集，采用Kaplan-Meier法分析MCUR1与卵巢癌患者预后的关系。采用免疫组织化学法检测MCUR1在卵巢癌组织中的表达水平。转染MCUR1干扰片段及过表达质粒至卵巢癌Ａ2780细胞（siMCUR1组和MCUR1组），分别设置相应阴性对照（siCtrl组和EV组）。采用qRT-PCR和Western blot实验检测转染效果。采用MTS法、克隆形成实验检测细胞增殖情况。裸鼠皮下荷瘤后采用免疫组织化学法和组织TUNEL法检测增殖和凋亡情况，Western blot检测细胞增殖和凋亡相关分子的表达情况。结果 MCUR1高表达组中位生存期高于低表达组（53.7 个月 vs 41.3 个月，P=0.003）。与siCtrl组相比，siMCUR1组细胞增殖能力升高（P<0.01），裸鼠皮下荷瘤生长速度加快（P<0.01），Ki67表达升高（P<0.01），细胞凋亡能力减弱（P<0.05），p53、Caspase-3和Bax蛋白表达下调，而Bcl2、Cyclin D1和Cyclin E蛋白表达上调；与EV组相比，MCUR1组细胞增殖能力下降（P<0.01），裸鼠皮下荷瘤生长速度减缓（P<0.01），Ki67表达降低（P<0.01），细胞凋亡能力增强（P<0.05），p53、Ｃaspase-3和Bax蛋白表达上调，而Bcl2、Cyclin D1和Cyclin E蛋白表达下调。结论 MCUR1通过调控p53通路进而调控卵巢癌细胞的增殖与凋亡，MCUR1可能作为抑癌因子在卵巢癌中发挥作用，有望成为卵巢癌诊断及治疗靶点。     

柴胡皂苷d通过AKT/mTOR信号通路调控胶质瘤C6细胞自噬

目的 探讨柴胡皂苷d在胶质瘤C6细胞自噬中的作用及其机制。方法 分别以终浓度为0 μmol/L（Control组）、2 μmol/L、4 μmol/L、6 μmol/L、8 μmol/L、10 μmol/L、12 μmol/L的柴胡皂苷d作用胶质瘤C6细胞后,用CCK⁃8检测细胞增殖能力,后续分别采用克隆形成实验、划痕实验检测柴胡皂苷d（8 μmol/L）对胶质瘤C6细胞增殖能力和细胞迁移能力的影响,Western blot和qRT⁃PCR检测胶质瘤C6细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和AKT/mTOR信号通路相关蛋白及基因的表达情况。结果 与Control组比较,各浓度柴胡皂苷d均能抑制胶质瘤C6细胞增殖且增殖抑制率随着药物浓度的升高而升高（均P<0.01）。8 μmol/L柴胡皂苷d作用24 h后,与Control组比较,胶质瘤C6细胞的克隆形成数目显著减少［（479.33±30.66）个 vs （258.66±73.35）个,P<0.01］,细胞迁移率显著降低［（70.83±4.29）% vs （19.47±1.71）%,P<0.001］,自噬相关蛋白Beclin1和LC3的蛋白及mRNA表达水平均显著升高（均P<0.01）,而AKT和mTOR信号蛋白及mRNA表达水平均降低（均P<0.01）。结论 柴胡皂苷d可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导胶质瘤C6细胞发生自噬并抑制其增殖与迁移。     

水通道蛋白4与人星形胶质细胞瘤迁移的相关性

目的 探讨水通道蛋白4（aquaporin-4, AQP4）和星形胶质细胞瘤恶性程度和迁移能力的相关性。方法 收集临床组织标本,培养获得正常星形胶质细胞、低级别星形细胞瘤和高级别星形细胞瘤细胞,荧光定量PCR法检测细胞中AQP4基因相对表达量,免疫印迹法检测AQP4蛋白水平,Transwell法检测细胞迁移能力。结果 荧光定量PCR结果提示低级别组和高级别组内AQP4基因相对于对照组的扩增倍数分别为（1.65±0.052）和（2.04±0.196）,差异有统计学意义（P<0.05）;免疫迹检测结果提示AQP4/β-actin 灰度值比,对照组（0.103±0.012）,低级别组（0.185±0.100）,高级别组（0.248±0.028）,各组间差异有统计学意义（P<0.05）,AQP4蛋白表达水平随细胞恶性程度而增高（P<0.05）;Transwell法检测结果提示各组细胞脱色液吸光度值分别为对照组（0.408±0.010）,低级别组（0.590±0.033）,高级别组（0.986±0.026）,差异有统计学意义（P<0.05）,各组细胞迁移随AQP4表达的增高,细胞迁移能力也增强（P<0.05）。结论 星形胶质细胞瘤中水通道蛋白4的表达随恶性程度的增高而增高,随AQP4表达的上升,星形胶质细胞瘤的迁移能力也增强。     

LncRNA OIP5-AS1对膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探讨lncRNA OIP5-AS1对膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法：实验选取人正常膀胱细胞系（SV-HUC-1）和膀胱癌细胞系（EJ、T24、BIU87）为研究对象,采用Real-time PCR检测细胞lncRNA OIP5-AS1的表达。选取lncRNA OIP5-AS1表达较高的T24细胞进行后续实验,设置组别为control组、siRNA-NC组、siRNAOIP5-AS1组、Vector组、OIP5-AS1组,通过CCK-8检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Real-time PCR检测细胞lncRNA OIP5-AS1的表达,Western blot检测细胞Vimentin、E-Cadherin蛋白表达。结果：与SV-HUC-1细胞相比,lncRNA OIP5-AS1在膀胱癌细胞中的表达明显升高,T24细胞表达量较高（P <0.05）。与control组相比,siRNA-OIP5-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低,Vimentin蛋白表达明显降低,E-Cadherin蛋白表达明显升高（P &l...