甘遂醋制前后萜类成分效应部位抗腹水、泻下作用及组成变化研究

目的?探究甘遂醋制前后抗腹水、泻下作用及组成变化。方法?将甘遂用二氯甲烷和95%乙醇依次提取,获得二氯甲烷部位及非二氯甲烷部位。采用癌性腹水小鼠模型,以腹水量、粪便含水量、尿量及肠道水通道蛋白（AQP）1、AQP3的蛋白表达水平为指标,筛选甘遂效应部位,考察甘遂醋制前后效应部位二氯甲烷提取部位的抗腹水及泻下作用变化。同时对二氯甲烷部位及非二氯甲烷部位,以及醋制前后二氯甲烷部位各成分的相对含量变化进行质谱分析。结果?与模型组相比,生甘遂总提物组、二氯甲烷提取部位高剂量组小鼠腹水量和十二指肠、空肠、回肠及结肠AQP1、AQP3蛋白的表达量均显著降低,粪便含水量显著增加,对尿量无影响;非二氯甲烷部位组无明显降低腹水及增加粪便含水量的作用,表明甘遂二氯甲烷部位是其主要效应部位;与模型组相比,醋品二氯甲烷部位高剂量组仍可显著降低癌性腹水小鼠的腹水量,增加粪便含水量,显著降低十二指肠、空肠、回肠中AQP1、AQP3蛋白表达,但对结肠AQP1和AQP3蛋白表达量无显著影响。与生品二氯甲烷部位组相比,醋制后甘遂二氯甲烷部位组小鼠腹水量显著升高,粪便含水量显著降低。此外,甘遂对腹水中癌细胞存活率没有影响,不能促使其凋亡。质谱分析发现,甘遂中萜类成分主要富集于二氯甲烷部位中,且醋制后二氯甲烷部位16个萜类成分中12个成分相对含量减少,4个成分含量增加。结论?甘遂醋制后仍保留“泻水逐饮”功效,但泻下作用缓和,效应的变化可能与所含萜类成分的组成变化有关。      

醋制对商陆促利尿作用的影响及其机制研究

目的 探索毒性中药商陆醋制前后对机体利尿作用及相关指标的影响。方法 灌胃给予盐水负荷模型大鼠商陆醋制前后的水煎液,测定给药5 h内尿量变化、血浆抗利尿激素(ADH)、醛固酮(ALD)、心房钠尿肽(ANP)含量及肾脏水通道蛋白AQP2、AQP3、AQP4表达水平。结果 商陆醋制前后均能导致大鼠尿量显著增加（P<0.01）,醋制品较生品组大鼠尿量有显著增强（P<0.05）;商陆生品仅高剂量可显著降低血浆ADH水平（P<0.01）,同时有降低ALD、增加ANP水平的趋势,但无显著性差异;商陆醋品则可显著降低血浆ADH、ALD水平,升高ANP含量（P<0.05~0.01）;商陆生品可显著抑制肾脏中AQP2、AQP3和AQP4蛋白表达（P<0.05~0.01）,醋制后可显著抑制AQP2、AQP3蛋白表达水平（P<0.01）,对AQP4蛋白表达与模型组相比无显著性影响,且醋制品较生品抑制AQP3蛋白表达更显著（P<0.05）。结论 商陆经醋制后仍具有较强的利尿作用,且分子水平的效应比生品更强。商陆利尿作用的机制除与其改变机体体液代谢相关的激素水平外,还可能与其抑制肾脏远曲小管和集合管AQPs蛋白表达,进而抑制水的重吸收有关。      

补肾法对人腰椎间盘退变中水通道蛋白AQP1、AQP3表达的影响

目的研究人体腰椎间盘退变过程中水通道蛋白AQP1、AQP3表达的变化,并观察补肾法治疗前后AQP1、AQP3表达的变化并探讨其作用机制。方法选取符合腰椎间盘突出症手术者24例,随机分为对照组(12例,直接手术)和治疗组(12例,补肾法治疗1个月后手术),脊柱创伤需要接受手术治疗者12例作为正常组。荧光定量RT-PCR法、Western blot法检测人体腰椎间盘组织退变前后AQP1、AQP3 mRNA和蛋白表达水平的变化;观察补肾法治疗前后AQP1、AQP3 mRNA和蛋白的表达变化。结果对照组AQP1、AQP3 mRNA及蛋白表达水平较正常组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组AQP1、AQP3 mRNA及蛋白表达水平较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论腰椎间盘发生退变时,AQP1、AOQP3基因和蛋白的表达水平均下降,经过补肾法治疗后AQP1、AQP3的表达有所增加,提示补肾法治疗腰椎间盘退变可能与AQP1、AQP3的表达上调有关。     

电针不同穴组对功能性便秘大鼠结肠黏膜超微结构及AQP3、AQP8表达的影响

目的 探讨电针不同穴组治疗功能性便秘（FC）大鼠的作用机理。方法 FC动物模型采用0 ℃ 0.9%氯化钠溶液对SD大鼠灌胃复制,随机分为模型组、电针1组（EAⅠ组）、电针2组（EAⅡ组）和电针3组（EAⅢ组）,正常组采用SD大鼠。EAⅠ组取天枢、大肠俞（双侧）、EAⅡ组取曲池、上巨虚（双侧）、EAⅢ组取天枢、大肠俞、曲池、上巨虚（单侧）进行电针治疗。观测粪便性状和肠道炭末推进率评定大鼠肠动力,透射电镜检测大鼠结肠黏膜超微结构,Western blot检测大鼠结肠AQP3、AQP8蛋白表达,qPCR检测大鼠结肠AQP3、AQP8 mRNA表达。结果 EAⅡ组大鼠24 h粪便粒数、24 h粪便含水量和肠道炭末推进率均显著增加,首次黑便时间显著减少（P<0.05）,结肠黏膜超微结构经EAⅡ干预后显著改善,模型组大鼠结肠黏膜AQP3、AQP8蛋白和AQP3、AQP8 mRNA表达显著高于正常组（P<0.05）,经EAⅡ干预后表达显著降低,具有统计学意义（P<0.05）。结论 电针刺激曲池、上巨虚可能通过降低FC大鼠结肠黏膜AQP3、AQP8蛋白和AQP3、AQP8 mRNA表达,减少结肠水分重吸收,增加结肠粪便含水量,调节水分转运,改善结肠黏膜超微结构,增强肠动力,起到改善便秘症状的作用。      

水通道蛋白8在人羊膜上皮细胞WISH株的表达和定位

目的:研究水通道蛋白8(AQP8)在人羊膜上皮细胞WISH株的表达和定位,羊水膜内吸收的分子机制.方法:培养人羊膜上皮细胞WISH株,采用Western blot技术检测WISH细胞AQP8蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测WISH细胞AQP8 mRNA的表达,免疫荧光组织化学方法检测WISH细胞上 AQP8的分布.结果:WISH细胞能表达较低水平的AQP-8 mRNA,WISH细胞AQP8蛋白在34ku处有一明显的糖基化条带.在细胞内微粒体膜和细胞膜上均检测到标记AQP8的荧光.结论:人羊膜上皮细胞WISH有AQP8的蛋白和mRNA表达,AQP8可能介导了羊水膜内吸收.     

AQP1、AQP2和AQP3在人膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其意义

目的:观察水通道蛋白1(Aquaporin 1,AQP1)、水通道蛋白2(Aquaporin 2,AQP2)、水通道蛋白3(Aquaporin 3,AQP3)在膀胱尿路上皮癌组织及正常膀胱组织中的表达与分布,探讨其意义。方法:取膀胱尿路上皮癌组织25例及正常膀胱组织25例,应用免疫组织化学方法检测AQP1、AQP2和AQP3在膀胱尿路上皮癌和正常膀胱组织中的表达及分布。结果:AQP1散在表达于正常膀胱组织中微血管和小动脉的内皮细胞的细胞膜及细胞质,在膀胱尿路上皮癌组织中AQP1大量表达于肿瘤的血管内皮细胞的细胞膜及细胞质;膀胱尿路上皮癌中AQP1表达水平较正常膀胱组织明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);AQP2主要表达于膀胱尿路上皮癌组织及正常膀胱组织的细胞间质中,两者表达强度基本相同,差异无统计学意义(P>0.05);AQP3主要表达在膀胱尿路上皮癌组织及正常膀胱组织的黏膜上皮细胞的胞质及胞膜,在癌组织中的表达强度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AQP1、AQP3在膀胱尿路上皮癌组织中表达明显增高。提示AQP1、AQP3可能与膀胱尿路上皮癌的发生和发展密切相关,其机制需要进一步深入研究。     

水通道蛋白1、3在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的探讨膀胱尿路上皮癌中水通道蛋白1、3(AQP1、AQP3)的表达与分布,及其与组织学分级和病理分期之间的关系及临床意义。方法采用免疫组化S-P法、蛋白免疫印迹(Western-blot)法对60例膀胱尿路上皮癌组织及30例正常膀胱组织中AQP1及AQP3的表达进行检测,并分析与其不同组织学分级、不同病理分期和有无淋巴结转移的关系。结果 AQP1在膀胱尿路上皮癌组织及正常膀胱组织中主要表达在微血管的内皮细胞的细胞膜及细胞质中,AQP3主要表达在膀胱尿路上皮癌的癌细胞的胞膜及胞质中。免疫组织化学S-P法和Western blot法检测的结果基本一致。正常膀胱组织与不同分级的膀胱尿路上皮癌组织中AQP1及AQP3的蛋白表达量分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);正常膀胱组织与不同病理分期的膀胱尿路上皮癌组织中AQP1及AQP3的蛋白表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.01);AQP1及AQP3在有淋巴结转移的膀胱癌组织中的表达量分别与无淋巴结转移的膀胱癌组织比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 AQP1和AQP3的表达与膀胱癌的组织学分级及病理分期有关,在膀胱癌形成及发展过程中起重要作用,对预测膀胱癌的侵袭性、分期及临床诊疗有指导意义。     

ARDS状态下大鼠肺泡II型细胞水通道蛋白1表达变化的研究

[摘要] 目的　观察大鼠ARDS状态下II型细胞(水通道蛋白1)AQP1表达的变化,为ARDS发病机制的研究提供新的实验和理论依据。方法　运用免疫组化、Western Bloting和图像分析技术,对正常大鼠和ARDS大鼠II型细胞AQP1的表达水平进行对比观察,分析变化。结果　Western blot分析显示ARDS大鼠肺泡II型细胞AQP1蛋白条带较对照组明显减弱,免疫组化及Western blot经图像分析结果为ARDS状态下II型细胞上水通道蛋白1的表达较对照组有明显的下降。结论　ARDS状态下肺泡II型细胞AQP1的表达较对照组有显著的下降（P<0.05）,提示AQP1对呼吸系统水转运起到重要作用。     

百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞株A549增殖与凋亡的影响

目的 研究人工合成百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞A549的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法 将细胞分为5组：空白对照组、A549细胞组、A549细胞+ATQTHB干预(400μg/mL)组、人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)组、BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组。采用CCK-8法分析细胞增殖抑制情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果 与A549细胞组相比,400μg/mL ATQTHB干预对A549细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05);ATQTHB干预后,人正常肺上皮细胞BEAS-2B增殖与未干预细胞间差异无统计学意义(P>0.05);与A549细胞组相比,A549细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P<0.05),促凋亡蛋白Bax表达增加(P<0.05);与BEAS-2B细胞组相比,BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率无显著改变(P>0.05),Bcl-2和Bax的蛋白表达水平差异无统计学意义(...     

小胶质细胞NF-κB与AQP4协同表达的研究

目的观察原代培养的小胶质细胞划痕损伤后NF-κB与水通道蛋白质4(AQP4)表达的相关性。方法原代培养小胶质细胞,用免疫细胞化学鉴定其特异性表面标记物巨噬细胞分化抗原-1(Mac-1)抗体。采用划痕致伤构建细胞损伤模型。于伤后12 h及1、3、57、d用RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达,Western blot检测AQP4蛋白的表达。结果伤后12 h,NF-κB、AQP4表达不显著,1 d时表达达高峰,后逐渐降低,5、7 d时几乎无表达。结论致伤后,NF-κB与AQP4的表达具有协同性,炎症反应在创伤后脑水肿的发生、发展中发挥了重要作用。     

AQPs在宫颈鳞癌癌变过程中的表达及意义

目的研究水通道蛋白(aquaporins,AQPs)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样变(CIN)和宫颈鳞癌中的表达,分析其与宫颈鳞癌临床病理资料的相关性,探讨其在宫颈鳞癌病变中的可能作用及意义。方法免疫组化检测47例宫颈鳞癌、37例CIN、16例正常宫颈组织中AQPs的表达及分布。双重免疫组化染色法检测宫颈鳞癌中AQP1与VEGF,AQP3与VEGF,AQP8与VEGF的共同表达与分布。结果①AQP1在3组宫颈组织间质的微血管内皮细胞中表达;②AQP3、AQP4、AQP5和AQP8在正常宫颈鳞状上皮细胞、CIN异形细胞及宫颈鳞癌癌细胞胞质和(或)胞膜中表达;③AQP1在CIN的表达高于正常宫颈组织和宫颈鳞癌(P<0.05),在临床Ⅰ期宫颈鳞癌的表达高于临床Ⅱ期(P<0.05);④AQP3、AQP4、AQP5、AQP8在正常宫颈组织、CIN、宫颈鳞癌的表达逐渐增高;⑤AQP3在低分化组宫颈鳞癌中的表达高于中-高分化组(P<0.05);⑥AQP1和VEGF,AQP3和VEGF,AQP8和VEGF在宫颈鳞癌中共同表达。结论 AQP1、AQP3、AQP4、AQP5和AQP8在宫颈鳞癌癌变过程中起了一定的作用;AQP1、AQP3和AQP8可能参与宫颈鳞癌微血管的形成。     

电针复合耳穴埋籽对妇科开腹手术患者术后恶心呕吐的影响

  目的  观察术前1 d电针复合术后耳穴埋籽对妇科开腹手术患者术后恶心呕吐(postoperative nausea and vomiting,PONV)的影响。  方法  选择2016年12月—2018年12月在南京中医药大学附属医院行妇科开腹手术的患者90例,采用随机数字表法分为术前电针组(A组)、术后耳穴埋籽组(B组)和术前电针复合术后耳穴埋籽组(C组)。A组术前1 d进行电针治疗,B组术后耳穴埋籽治疗,C组术前1 d电针复合术后耳穴埋籽治疗。记录患者术后6、24、48 h恶心、呕吐发生率,术后使用止吐药情况,术后首次通气时间,VAS评分。  结果  3组患者中,C组患者术后6、24 h的术后恶心(PON)和术后呕吐(POV)的发生率最低, 术后6 h PON的发生率为30.00%, POV的发生率为26.67%,术后24 h PON的发生率为33.33%,POV的发生率为.30.00%,差异有统计学意义(均P < 0.05)。C组患者术后首次通气时间[(19.44±3.36)h]明显缩短,且术后止吐药的使用率最低(30.00%),差异有统计学意义(均P < 0.05)。3组患者术后48 h的PON和POV的发生率比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。3组患者,术后6 h、24 h和48 h的疼痛评分比较差异无统计学意义(均P>0.05)。  结论  妇科开腹手术术前给予电针复合术后耳穴埋籽,可有效降低患者PONV的发生率,缩短术后首次通气时间,同时可以减少术后止吐药使用。      

电针预处理对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活的影响

目的 观察电针预处理“足三里”穴和“尺泽”穴对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活的影响,探讨电针预处理在脓毒症ALI中发挥的保护效应及可能机制。方法 将SD大鼠随机分为对照组、电针预处理+对照组、模型组、电针预处理+模型组,每组10只。各模型组采用腹腔注射脂多糖(LPS)的方法建立脓毒症ALI大鼠模型。各电针预处理组于LPS造模前1周进行连续7 d电针预处理,疏密波,频率4 Hz/20 Hz,强度1～2 mA,持续30 min。检测各组大鼠肺功能;HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化;测定大鼠肺组织湿/干质量比值(W/D);ELISA法检测大鼠血浆及肺组织中炎症因子IL-1β、IL-18含量;免疫荧光观察大鼠肺组织中ASC蛋白阳性表达;Western blot法检测大鼠肺组织中NEK7、NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白的表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠用力肺活量(FVC)、第0.1秒用力呼气量(FEV_0.1)、第0.3秒用力呼气量(FEV_0.3)、FEV_0.1/FVC、...     

非酒精性脂肪性肝病患者肝组织水通道蛋白表达差异与多烯磷脂酰胆碱疗效相关性分析

目的 分析非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者肝组织水通道蛋白(aquaporin,AQPs)3、7、9表达水平对多烯磷脂酰胆碱(plyene posphatidyl coline,PPC)疗效的影响.方法 分析2014-2016年本院收治的NAFLD患者87例,按病程分组:肝硬化组(n=30),肝纤维化组(n=24),肝炎组(n=33);超声疗效评估分组:有效组和无效组.随访不同病程的NAFLD患者PPC治疗前后的肝功能酶变化,按照PPC疗效进行分组,比较患者肝组织AQP3、7、9蛋白的表达差异,并进一步分析PPC疗效与AQPs表达水平的相关性.结果 PPC对NAFLD患者治疗整体有效率35.63％,PPC对NAFLD疗效与病程严重程度无关,但与超声的评分密切相关,表现为按照超声评分有效和无效分组的不同病程组患者的谷丙转氨酶(ALT)在PPC治疗后,在每种病程患者中差异有统计学意义,且ALT在PPC治疗后,其变化程度与超声的变化程度呈正相关,肝硬化组(R=0.780,P＜0.01),肝纤维化组(R =0.879,P＜0.01),肝炎组最高(R=0.900,P＜0.01).PPC治疗NAFLD效果与患者初始的肝组织AQPs的表达存在相关性:NAFLD患者肝组织AQP7、9表达量与肝功能酶的变化量呈正相关(AQP9:R=0.972,AQP7:R=0.537),而AQP3的表达水平与肝功能酶的变化量呈负相关(R=-0.881);AQP7、9表达量与超声评分的变化量呈正相关(AQP9:R=0.763,AQP7:R=0.311),而AQP3的表达水平与肝功能酶的变化量呈负相关(R=-0.795).结论 多烯磷脂酰胆碱对非酒精性脂肪性肝病的疗效与水通道蛋白表达差异密切相关,提示AQPs表达水平可能影响PPC疗效.     

Effect of methotrexate combined with Sanhuang Yilong decoction on serum and synovial fluid aquaporin levels in rheumatoid arthritis dampness-heat blockage syndrome

OBJECTIVE

To study the effect of methotrexate (MTX) combined with Sanhuang Yilong decoction (SYD) on aquaporin (AQP) expression, and to explore the role of AQPs in the pathogenesis of rheumatoid arthritis (RA).

高氧致慢性肺疾病新生鼠肺组织水通道蛋白1、5的表达及其调控作用的研究

目的水通道蛋白(AQP)是新近发现的一组与水通透性有关的细胞膜转运蛋白,该文旨在探讨高氧损伤状态下,肺组织内AQP1、AQP5的动态变化规律及其调控作用。方法新生鼠160只,依据吸氧浓度(FiO2)分为实验组1(FiO2800 mL/L)、实验组2(FiO2600 mL/L)、实验组3 FiO2400 mL/L)和空气对照组(FiO2210 mL/L)。每组分别于实验后1、3、5、7和14 d行AQP1、AQP5、细胞外信号调节激酶(ER K)的免疫组织化学检测,同时行AQP1、AQP5 Western blotting印迹检测。结果随吸氧浓度及暴露时间的增加,实验组AQP1第3天表达开始降低,第5天和第7天明显降低(P<0.05),第14天有所恢复。实验组AQP5表达低于对照组,第1天和第3天呈稍高表达,以后随日龄增加逐渐降低(P<0.05)。总趋势上AQP1、AQP5的表达在实验组3、实验组2、实验组1依次降低;肺组织ERK1/2表达对照组维持在较低的水平,实验组ERK1/2表达于第7天和第14天均明显高于对照组。ER K1/2变化与AQP1表达呈正相关(r=0.625,P<0.001;r=0.572,P<0.001;r=0.798,P<0.001;r=0.645,P<0.001)。结论 AQP1、AQP5在高氧肺损伤时表达降低,高氧肺损伤中AQP合成、分泌信号可能是ERK途径转导的。     

电针干预豚鼠膜迷路积水的参数优选及其对耳蜗AQP2表达的影响

[目的]观察不同频率电针对豚鼠膜迷路积水的干预情况,以期优选出电针治疗膜迷路积水的适宜治疗参数,并初步探讨电针治疗梅尼埃病的可能机制。[方法]健康雄性豚鼠48只,采用完全随机法分为空白组、模型组、假电针组、电针组(据不同频率分为3个亚组),每组8只。除空白组外,其余各组均通过腹腔注射醋酸去氨加压素的方法建立膜迷路积水模型。空白组不进行干预;模型组造模后仅采取与各治疗组动物相同的固定方式,不行其他干预;电针组中各个亚组,取"百会"和左侧"听宫"穴,分别以2、15、100Hz 3种不同频率进行电针治疗,1次/d,输出电流1mA,留针20min;假电针组予针刺"百会"和左侧"听宫"穴,但不通电,其余处理同电针组,均连续治疗10d。干预结束后,采用听觉脑干诱发电位仪检测各组豚鼠听性脑干反射(auditory brairstem response,ABR)反应阈值,HE染色检测耳蜗积水程度,并通过公式蜗管横截面积/(蜗管横截面积+前庭阶横截面积)计算出比值(R值),免疫组化染色法检测耳蜗水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达情况。[结果]各组豚鼠ABR反应阈值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组豚鼠耳蜗R值增加(P<0.01);与模型组比较,各治疗组豚鼠耳蜗R值均降低(P<0.01,P<0.05);与假电针组比较,100Hz电针组R值降低(P<0.01),2、15Hz电针组R值均较假电针组降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。各电针组组间比较,100Hz电针组R值较2、15Hz电针组降低,差异有统计学意义(均P<0.05);2、15Hz电针组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组豚鼠耳蜗AQP2表达增强(P<0.01);与模型组比较,各治疗组豚鼠耳蜗AQP2表达减弱(P<0.01,P<0.05);各治疗组间比较AQP2表达差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]假电针及电针治疗均能减轻豚鼠膜迷路积水,其中100Hz电针效果最佳,其作用机制可能与下调耳蜗AQP2的表达有关。