Erastin联合顺铂诱导顺铂耐药鼻咽癌细胞发生铁死亡

摘 要：［目的］ 探究铁死亡激活剂Erastin联合顺铂（cisplatin，DDP）能否诱导鼻咽癌顺铂耐药细胞发生铁死亡。［方法］ CCK-8法检测鼻咽癌普通细胞株HNE-1、CEN2Z、HONE-1和顺铂耐药株HNE-1/DDP对DDP以及Erastin的敏感性，CCK-8法测定Erastin、DDP联合处理后HNE-1/DDP细胞活性变化，流式细胞学检测细胞死亡及细胞活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平，Fe2+和丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒检测细胞Fe2+水平和MDA水平，Western blot检测铁死亡相关蛋白表达。［结果］ HNE-1/DDP对DDP的敏感度远低于正常HNE-1细胞系，Erastin的IC50高达（45.89±6.89） μmol/L。流式细胞学结果显示Erastin或DDP单独处理HNE-1/DDP时，死亡率不超过30%，ROS水平增高不超过15%。Erastin联合DDP能使HNE-1/DDP细胞死亡率提高至89.69%±9.48%，ROS水平提高至18.72%±3.05%。联合处理还提高了细胞内Fe2+和MDA水平，降低了铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（recombinant glutathione peroxidase 4，GPX4）的表达，且铁死亡抑制剂Ferrostatin-1能逆转Erastin联合DDP所诱导的细胞死亡，抑制ROS、Fe2+以及MDA水平的增高。［结论］ Erastin联合DDP能通过降低GPX4表达诱导顺铂耐药株HNE-1/DDP铁死亡。     

HSPA5通过抑制铁死亡调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨热休克蛋白70蛋白5（heat shock 70 kDa protein 5，HSPA5）通过铁死亡对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot，WB）检测HSPA5和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)在宫颈癌和癌旁组织中的表达情况，通过TCGA数据库分析所有宫颈鳞状细胞癌和宫颈内膜腺癌（CESC）中HSPA5与患者总生存率间的相关性。体外培养人宫颈癌HeLa和SiHa细胞系，分别感染shHSPA5和shCtrl慢病毒，构建稳定的宫颈癌HSPA5敲低株，用qRT-PCR和WB检测HSPA5敲低之后铁死亡相关蛋白GPX4的表达情况。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（Fer-1）或激活剂Erastin处理细胞后，采用CCK-8和EdU检测细胞增殖情况；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量；还原型谷胱甘肽（GSH）试剂盒和丙二醛（MDA）试剂盒分别测定GSH和MDA含量；流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（ROS）的情况。结果:与癌旁组织相比，宫颈癌组织中HSPA5与GPX4的表达显著升高，HSPA5高表达与患者预后不良有关；在HeLa和SiHa细胞中敲低HSPA5能够抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡；同时细胞内ROS、MDA和LDH的水平上调；HSPA5敲低后GPX4的mRNA和蛋白表达水平同时降低，此外细胞内GSH的含量降低；铁死亡抑制剂Fer-1逆转了HSPA5敲低导致的ROS和LDH的含量升高并抑制细胞凋亡；铁死亡激活剂Erastin和HSPA5敲低联合增加了细胞凋亡并抑制细胞增殖。结论:HSPA5在宫颈癌组织中表达上调，通过敲低HSPA5可激活铁死亡从而抑制宫颈癌细胞的增殖和促进细胞凋亡。     

Nrf2/ARE信号通路在槲皮素抑制异烟肼诱导的肝细胞线粒体氧化损伤中的作用

目的：探讨核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路在槲皮素抑制异烟肼（INH）诱导的L-02细胞线粒体氧化损伤中的作用。方法：将L-02细胞随机分为阴性对照组、INH组（10 mmol/L INH）、单独槲皮素组（50 μmol/L槲皮素）、槲皮素保护组（10 mmol/L INH+50 μmol/L槲皮素）,各组细胞处理24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率;荧光探针DCFH-DA检测细胞线粒体活性氧（ROS）水平;比色法测定细胞内丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽（GSH）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性,评价细胞线粒体氧化损伤状态。Western blot检测Nrf2、血红素氧合酶1（HO-1）蛋白表达水平,评价细胞内Nrf2/ARE信号通路的变化。结果：与阴性对照组比较,INH组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,线粒体ROS水平和MDA含量显著升高（P < 0.01）,GSH含量及SOD活性明显降低（P < 0.01）;与INH组相比较,槲皮素保护组细胞存活率明显增加（P < 0.01）,线粒体ROS水平和MDA含量显著减少（P < 0.01）,GSH含量及SOD活性明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。INH组细胞质中HO-1蛋白及细胞核中Nrf2蛋白表达较阴性对照组明显增加（P < 0.01）;槲皮素保护组细胞质中HO-1蛋白及细胞核中Nrf2蛋白表达明显高于INH组（P < 0.01）。结论：槲皮素能够抑制INH诱导的肝细胞线粒体氧化损伤,这可能与槲皮素对Nrf2/ARE信号通路的活性调节相关。     

α-常春藤皂苷诱导肝癌Bel-7402细胞铁死亡的作用机制

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hederin)诱导肝癌Bel-7402细胞发生铁死亡(ferroptosis)的可能机制。方法:采用梯度浓度的α-常春藤皂苷处理肝癌Bel-7402细胞24 h,MTT法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC50)。将细胞分为空白对照组、α-常春藤皂苷（25 μmol/L）组和α-常春藤皂苷（50 μmol/L）组。谷胱甘肽试剂盒测定分组后细胞内GSH含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白胱氨酸-谷氨酸的反向转运体亚基xCT、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二价金属转运蛋白1(DMT1)的表达,DCFH-DA探针用以检测细胞活性氧(ROS)水平。利用铁死亡抑制剂进行细胞功能恢复试验,测定了同时使用Ferrostatin-1和α-常春藤皂苷后的细胞活力、GSH含量、铁死亡相关蛋白表达水平以及ROS水平。结果:随α-常春藤皂苷浓度增加Bel-7402细胞的存活率显著降低,24 h对应Bel-7402细胞的IC50为40.32 μmol/L。α-常春藤皂苷能减少细胞内GSH含量,下调xCT和GPX4的表达,上调DMT1的表达和升高ROS水平。Ferrostatin-1可有效抑制α-常春藤皂苷诱导的细胞铁死亡,主要表现为细胞活力、GSH含量恢复以及ROS生成减少。结论:α-常春藤皂苷可通过抑制GPX4和xCT的表达,促进DMT1的表达,诱导ROS大量生成并导致肝癌Bel-7402细胞铁死亡。     

重楼皂苷通过JNK/p53诱导肺癌细胞铁死亡的作用机制研究

目的 分析重楼皂苷对肺癌细胞铁死亡的诱导作用及可能机制。方法 取对数期A549细胞，分为对照组、重楼皂苷组、SP600125组、联合组，对照组常规培养，重楼皂苷组加入重楼皂苷(4 g/L),SP600125组加入SP600125(10μmol/L),联合组加入重楼皂苷(4 g/L)及SP600125(10μmol/L)。MTT实验检测细胞铁死亡抗性；荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)堆积；检测细胞丙二醛(MDA)水平；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot法检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK、p53蛋白表达。结果 与对照组比较，重楼皂苷组铁死亡抗性，SLC7A11、GPX4蛋白表达降低，ROS阳性细胞数增加，细胞内MDA水平、细胞凋亡率、p-JNK/JNK及p53蛋白表达升高(P<0.05),SP600125组铁死亡抗性，SLC7A11、GPX4蛋白表达升高，ROS阳性细胞数减少，细胞内MDA水平、细胞凋亡率、p-JNK/JNK及p53蛋白表达降低(P<0.05);与重楼皂...     

延胡索乙素对放射所致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨延胡索乙素(THP)对放射所致血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法:以THP预处理人血管内皮细胞株EA.hy926后,以10 Gyγ射线照射,建立放射性细胞损伤模型。光镜及电镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度计检测细胞照射前后乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的含量变化,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)生成,蛋白质印迹法检测细胞色素C蛋白表达,酶标仪检测Caspase-3的活性变化。结果:细胞经照射后,细胞形态及超微结构改变均显示典型的凋亡改变,而THP预处理组的细胞凋亡改变明显轻于其他实验组。流式检测结果示,单纯照射组血管内皮细胞凋亡率为(75.35±7.55)%,而THP+R处理组明显降低,最低达(32.05±4.15)%,P<0.01;单纯照射组血管内皮细胞脂质氧化损伤指标LDH、MDA明显升高,而低中高剂量的THP+R处理组明显降低,P<0.01。单纯照射组血管内皮细胞内的ROS含量及Caspase-3的活性亦明显升高,而THP+R组细胞内的ROS含量及Caspase-3的活性明显降低,P<0.01。同时,THP+R组细胞内细胞色素C蛋白表达均显著低于单纯照射...     

槲皮素对异烟肼诱导肝细胞毒性的保护作用及其机制

目的： 探讨活性氧（ROS）介导的线粒体氧化损伤在异烟肼（INH）诱导肝细胞毒性中的作用及槲皮素对INH肝细胞毒性的保护效应及机制。方法： 将L-02细胞随机分为5组：异烟肼组（10 mmol/L INH）、槲皮素处理组（10 mmol/L INH和50 μmol/L槲皮素）、谷胱甘肽（GSH）预处理组（20 mg/mL GSH、10 mmol/L INH和50 μmol/L槲皮素）、谷胱甘肽组（20 mg/mL GSH）、对照组（等体积的无血清培养基）,作用24 h后,采用差速离心法制备细胞线粒体,荧光探针DCFH-DA和Rho-123检测细胞线粒体ROS水平及膜电位;TBA比色法测定丙二醛（MDA）含量;DPNH比色法测定蛋白质羰基含量;ELISA法检测8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷（8-OHdG）含量。结果： 与对照组相比,INH处理细胞后细胞线粒体ROS水平升高（P < 0.01）,膜电位降低（P < 0.01）。与异烟肼组相比,槲皮素处理组细胞线粒体ROS水平降低（P < 0.01）,膜电位升高（P < 0.05）;谷胱甘肽预处理组细胞线粒体ROS水平低于槲皮素处理组（P < 0.05）,线粒体膜电位高于槲皮素处理组（P < 0.05）。与对照组相比,细胞经INH处理后MDA、蛋白质羰基及8-OhdG的含量增加（P < 0.01）。与异烟肼组比较,应用槲皮素后可使MDA、蛋白羰基、8-OHdG的含量减少（P < 0.01）;谷胱甘肽预处理组MDA、蛋白羰基、8-OHdG含量低于槲皮素处理组（P < 0.05）。结论： 在本实验条件下,INH可诱导L-02细胞线粒体氧化损伤,且ROS参与了此过程;槲皮素对INH诱导的线粒体氧化损伤具有保护效应,其机制可能与其抑制ROS水平有关。     

线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥诱导BEAS-2B细胞损伤的影响

目的: 探讨线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥(HN2)诱导人支气管上皮细胞系BEAS-2B的影响。方法: BEAS-2B细胞分为正常对照组、Mito-TEMPO对照组、HN2染毒组和Mito-TEMPO干预组,其中正常对照组和Mito-TEMPO对照组分别给予含DMSO(体积分数为0.1%)和Mito-TEMPO(100μmol/L)的无血清培养基处理26 h,HN2染毒组给予含DMSO的无血清培养基预处理2 h,然后给予HN2(8μmol/L)染毒24 h,Mito-TEMPO干预组给予Mito-TEMPO(100μmol/L)预处理2 h,然后HN2(8μmol/L)和Mito-TEMPO(100μmol/L)共处理24 h。分别采用CCK-8法检测细胞活性,速率法检测细胞培养基上清乳酸脱氢酶(LDH)活性,倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI探针法流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1探针法检测线粒体膜电位,紫外分光光度法检测细胞匀浆ATP含量,MitoSOX、DCFH-DA、DHE探针法分别检测细胞内线粒体ROS、H2O2及总ROS水平,实时荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。结果: 与HN2染毒组相比,Mito-TEMPO干预组细胞活性降低了约42.6%(P<0.05),细胞上清LDH水平显著增加(P<0.05),同时伴有异常形态细胞增多,Mito-TEMPO干预组细胞线粒体ROS水平降低了53.6%(P<0.05),细胞内H2O2水平及总ROS水平分别升高了171%和43.4%(均为P<0.05)。Mito-TEMPO干预对HN2染毒导致的细胞凋亡比例、线粒体膜电位、ATP含量、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平等指标改变均无显著影响(P>0.05)。结论: 100μmol/L的Mito-TEMPO干预在HN2染毒BEAS-2B细胞模型中促进了细胞损伤,其机制可能与提高细胞内H₂O₂水平及总ROS水平有关。     

热疗调控铁死亡通路对舌鳞癌细胞生物学行为影响的研究

目的探讨热疗(HT)对舌鳞癌细胞系CAL-27铁死亡的调控作用和可能机制。方法采用CCK-8法检测铁死亡抑制剂Fer-1的半抑制浓度(IC50)并用于后续实验。CAL-27细胞系按实验设计分为HT组、对照组、Fer-1组以及HT+Fer-1组。采用各自检测试剂盒检测活性氧水平、铁离子浓度, 采用实时反转录PCR检测p53、转铁蛋白受体1(TfR1)的mRNA水平, 细胞划痕法检测细胞迁移, 流式细胞术检测细胞凋亡。结果热疗组CAL-27细胞系活性氧水平(P<0.01)和铁离子浓度(P<0.001)显著上调, p53及TfR1的mRNA表达量也明显增加(P值均<0.01), 细胞迁移能力下降(P<0.001), 凋亡率升高(P<0.01)。HT+Fer-1组与HT组相比活性氧水平(P<0.001)、铁离子浓度(P<0.001)、p53及TfR1的mRNA表达量均降低(P值均<0.01), 细胞迁移能力恢复(P<0.01), 凋亡率也降低(P<0.01)。结论热疗可能通过激活p53/TfR1通路诱导舌鳞癌细胞系CAL-27铁死亡,...     

长链非编码RNA LINC00313通过铁死亡抵抗促进肺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨长链非编码RNA（LncRNA）LINC00313促进肺癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法:选用肺癌细胞株A549、H466、H1299、H522,通过实时荧光定量PCR检测LncRNA LINC00313在肺癌细胞中的表达。采用Transwell实验和划痕实验等表型实验检测肺癌细胞侵袭和迁移情况。敲除LINC00313,CCK-8实验及流式细胞仪检测过量GPX4对肺癌细胞增殖和细胞凋亡的影响。LINC00313基因敲除后,检测在Erastin或RSL-3处理的A549细胞内的铁水平及ROS含量,探讨LINC00313与肺癌细胞铁死亡的关系。结果:与正常细胞相比,肺癌细胞中LINC00313的表达明显升高（P＜0.05）;表型实验结果显示LINC00313促进肺癌细胞增殖,同时抑制其凋亡。Transwell实验和划痕实验结果表明LINC00313可以促进肺癌细胞侵袭和迁移。GPX4过表达可以逆转LINC00313敲除导致肺癌细胞的增殖下降和凋亡增加。在Erastin或RSL3处理的A549细胞中,LINC00313基因敲除后细胞内的铁和Fe2+水平下降,脂质过氧化ROS（Lipid ROS）含量产生显著减少。结论:肺癌细胞中LINC00313表达明显升高,过表达LINC00313可以促进肺癌细胞侵袭和迁移,作用机制可能与促进肺癌细胞铁死亡抵抗,从而导致肺癌的发生及转移有关。     

毛蕊异黄酮通过Nrf2/HO-1信号途径诱导人甲状腺癌FTC-133细胞发生铁死亡

目的:观察毛蕊异黄酮（CA）是否可诱导人甲状腺癌细胞系FTC-133细胞铁死亡并探讨其可能机制。方法: 采用RPMI 1640培养液培养FTC-133细胞,分为对照和CA、铁死亡抑制剂ferrostatin-1、血红素氧合酶-1（HO-1）激动剂CoPP、CA+ferrostatin-1和CA+CoPP组。CCK-8法检测细胞增殖。相应试剂盒检测细胞活性氧（ROS）、还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、总铁和二价铁离子水平。Western Blot检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、铁蛋白重链1（FTH1）、核因子E2相关因子2（Nrf2）和HO-1蛋白表达。结果:与对照组比较,CA（50、100和150 μmol/L）处理在24 h、48 h和72 h三个时间点均降低细胞存活率,并呈现剂量依赖性（均P＜0.05）。与对照组比较,CA（50、100和150 μmol/L）处理48 h降低细胞中GSH的浓度（均P＜0.05）,增加了FTC-133细胞中ROS、MDA、总铁和二价铁离子浓度（均P＜0.05）。与对照组比较,CA（50、100和150 μmol/L）处理48 h显著降低细胞中GPX4（P＜0.05）和FTH1（P＜0.05）蛋白表达水平（均P＜0.05）。Ferrostatin-1部分逆转了CA诱导FTC-133细胞铁死亡的作用（均P＜0.05）。与对照组比较,CA（50、100和150 μmol/L）处理均降低Nrf2在细胞核中的表达及Nrf2在细胞核中表达与Nrf2总蛋白表达的比值（均P＜0.05）,而没有影响Nrf2总蛋白表达（均P＞0.05）。与对照组比较,CA（50、100和150 μmol/L）处理均降低细胞中HO-1的蛋白表达（均P＜0.05）。CoPP部分逆转了CA诱导FTC-133细胞铁死亡的作用（均P＜0.05）。结论:CA诱导了人甲状腺癌细胞系FTC-133细胞发生铁死亡,而其机制可能是通过Nrf2/HO-1信号通路。     

Targeting ferroptosis in rhabdomyosarcoma cells

Recent data suggest that rhabdomyosarcoma (RMS) cells might be vulnerable to oxidative stress-induced cell death. Here, we show that RMS are susceptible to cell death induced by Erastin, an inhibitor of the glutamate/cystine antiporter x_c⁻ that can increase reactive oxygen species (ROS) production via glutathione (GSH) depletion. Prior to cell death, Erastin caused GSH depletion, ROS production and lipid peroxidation. Importantly, pharmacological inhibitors of lipid peroxidation (i.e., Ferrostatin-1, Liproxstatin-1), ROS scavengers (i.e., α-Tocopherol, GSH) and the iron chelator Deferoxamine inhibited ROS accumulation, lipid peroxidation and cell death, consistent with ferroptosis. Interestingly, the broad-spectrum protein kinase C (PKC) inhibitor Bisindolylmaleimide I as well as the PKCα- and β-selective inhibitor Gö6976 significantly reduced Erastin-induced cell death. Similarly, genetic knockdown of PKCα significantly protected RMS cells from Erastin-induced cell death. Furthermore, the broad-spectrum nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-oxidase (NOX) inhibitor Diphenyleneiodonium and the selective NOX1/4 isoform inhibitor GKT137831 significantly decreased Erastin-stimulated ROS, lipid ROS and cell death. These data provide new insights into the molecular mechanisms of ferroptosis in RMS, contributing to the development of new redox-based treatment strategies.     

SLC7A11在急性髓系白血病患者中的表达及抑制HL-60细胞增殖的机制

目的:探讨SLC7A11 siRNA及Erastin对人急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）细胞株HL-60细胞活性的影响。方法:应用生物信息学方法分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中AML患者样本的数据,比较SLC7A11不同表达水平患者的预后。利用实时荧光定量聚合酶联反应（quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印记法(Western-blot)检测SLC7A11在AML患者和缺铁性贫血（iron deficiency anemia,IDA）患者中mRNA和蛋白的表达水平。培养人AML细胞株HL-60,用病毒介导的siRNA转染HL-60细胞,建立SLC7A11基因沉默的HL-60细胞株(siSLC7A11),用Erastin和DMSO分别处理HL-60细胞。利用qRT-PCR和Western-blot方法检测HL-60细胞和siSLC7A11细胞中SLC7A11的mRNA和蛋白的表达水平。利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况。结果:SLC7A11的mRNA和蛋白表达水平在AML患者中明显高于IDA患者(P＜0.05)。siSLC7A11细胞中SLC7A11的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.05)。siSLC7A11细胞增殖率明显低于对照组(P＜0.05)。结论:SLC7A11在AML患者中表达增加,通过siRNA或Erastin抑制SLC7A11能明显抑制人AML细胞株HL-60细胞增殖,SLC7A11基因可能成为治疗AML的新靶点。     

Heme oxygenase-1 accelerates erastin-induced ferroptotic cell death

The oncogenic RAS-selective lethal small molecule Erastin triggers a unique iron-dependent form of nonapoptotic cell death termed ferroptosis. Ferroptosis is dependent upon the production of intracellular iron-dependent reactive oxygen species (ROS), but not other metals. However, key regulators remain unknown. The heme oxygenase (HO) is a major intracellular source of iron. In this study, the role of heme oxygenase in Erastin-triggered ferroptotic cancer cell death has been investigated. Zinc protoporphyrin IX (ZnPP), a HO-1 inhibitor, prevented Erastin-triggered ferroptotic cancer cell death. Furthermore, Erastin induced the protein and mRNA levels of HO-1 in HT-1080 fibrosarcoma cells. HO-1^+/+ and HO-1^−/− fibroblast, HO-1 overexpression, and chycloheximide-treated experiments revealed that the expression of HO-1 has a decisive effects in Erastin-triggered cell death. Hemin and CO-releasing molecules (CORM) promote Erastin-induced ferroptotic cell death, not by biliverdin and bilirubin. In addition, hemin and CORM accelerate the HO-1 expression in the presence of Erastin and increase membranous lipid peroxidation. Thus, HO-1 is an essential enzyme for iron-dependent lipid peroxidation during ferroptotic cell death.     

Hsp90抑制剂减弱肝癌耐药细胞株对索拉非尼诱导铁死亡的耐受性北大核心

目的:检测热休克蛋白90(heat shock protein 90,Hsp90)抑制剂协同索拉非尼(Sorafenib)对肝癌耐药细胞的作用机制,并研究其对Sorafenib诱导肝癌耐药细胞铁死亡的增敏效应。方法:MTT法检测格尔德霉素(Geldanamycin)联用Sorafenib在抑制HepG2/Sorafenib细胞增殖中的联合效应;流式细胞术检测HepG2/Sorafenib及HepG2细胞株在Sorafenib作用下,细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化,以及Geldanamycin对细胞内ROS的协同诱导效应;FerroOrange染色法检测HepG2/Sorafenib及HepG2细胞株在Sorafenib作用下,细胞内二价铁离子水平变化;RT-PCR及Western blot实验检测Geldanamycin对铁死亡相关基因SLC7A11及GPX4等转录和表达的调节作用。结果:Geldanamycin可增强HepG2/Sorafenib耐药细胞株对Sorafenib的敏感性,经30 nmol/L浓度的Geldanamycin预处理后,Sorafenib的半数抑制率IC_(50)由原来的(2.6±0.1)×10^(3) nmol/L降为(37.2±6.9)nmol/L,变化差异显著(P<0.01)。当Sorafenib浓度高于32 nmol/L后,二者的联用指数CI小于0.2,表明Geldanamycin与Sorafenib联用处理HepG2/Sorafenib耐药细胞株具有强烈的协同效应;HepG2/Sorafenib耐药细胞株经30 nmol/L Geldanamycin预处理后,其细胞内的ROS水平可重新被Sorafenib诱导,相同浓度下与无Geldanamycin处理组比较,增强了4.2倍(P<0.01);30 nmol/L Geldanamycin可显著增强Sorafenib诱导HepG2/Sorafenib细胞内二价铁离子水平提高,提示其协同Sorafenib促细胞铁死亡作用;Geldanamycin能通过Akt-Nrf2途径下调SLC7A11蛋白的转录,并影响GPX4蛋白的表达。结论:抑制Hsp90能减弱肝癌耐药细胞株对Sorafenib诱导铁死亡的耐受性,其机制可能是通过阻断Akt/Nrf2介导的SLC7A11转录下调实现的。     

老年肾癌患者血清T淋巴细胞亚群变化对其预后及生存的影响

目的:探讨分析老年肾癌患者血清T淋巴细胞亚群变化对其预后及生存的影响。方法:选择2013年4月至2015年3月我院收治的78例老年肾癌患者，再选择同期来我院体检的健康人群50例作为对照组，术前以及术后2周采用流式细胞技术检测肾癌患者外周血T淋巴细胞亚群水平变化情况，并与对照组比较。对患者进行随访分析，采用Kaplan-Meier生存分析术后不同T淋巴细胞亚群水平对患者生存预后的影响。结果:肾癌组患者术前、术后2周外周血CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+水平均显著低于对照组（P＜0.05）。肾癌组术后2周外周血CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+水平较术前有显著升高（P＜0.05）。CD3+>48%肾癌患者总体生存情况显著优于CD3+≤48%患者（P＜0.05）。CD4+>30%肾癌患者总体生存情况显著优于CD4+≤30%患者（P＜0.05）。CD8+>25%肾癌患者总体生存情况与CD8+≤25%患者生存情况无差异（P＞0.05）。CD4+/CD8+>1.0肾癌患者总体生存情况显著优于CD4+/CD8+≤1.0患者（P＜0.05）。结论:老年肾癌患者存在广泛的细胞免疫功能紊乱现象，手术治疗后能够有效去除瘤负荷而从一定程度上逆转免疫功能，术后免疫功能指标可反映患者预后情况，免疫功能状态越差的患生存情况越差。     

MEF2C silencing downregulates NF2 and E-cadherin and enhances Erastin-induced ferroptosis in meningioma

BackgroundFerroptosis, a programmed cell death characterized by lipid peroxidation, is implicated in various diseases including cancer. Although cell density-dependent E-cadherin and Merlin/Neurofibromin (NF2) loss can modulate ferroptosis, the role of ferroptosis and its potential link to NF2 status and E-cadherin expression in meningioma remain unknown.MethodsRelationship between ferroptosis modulators expression and NF2 mutational status was examined in 35 meningiomas (10 NF2 loss and 25 NF2 wild type). The impact of NF2 and E-cadherin on ferroptosis were examined by lactate dehydrogenase (LDH) release, lipid peroxidation, and western blot assays in IOMM-Lee, CH157, and patient-derived meningioma cell models. Luciferase reporter and chromatin immunoprecipitation assays were used to assess the ability of MEF2C (myocyte enhancer factor 2C) to drive expression of NF2 and CDH1 (E-cadherin). Therapeutic efficacy of Erastin-induced ferroptosis was tested in xenograft mouse models.ResultsMeningioma cells with NF2 inactivation were susceptible to Erastin-induced ferroptosis. Meningioma cells grown at higher density increased expression of E-cadherin, which suppressed Erastin-induced ferroptosis. Maintaining NF2 and E-cadherin inhibited ferroptosis-related lipid peroxidation and meningioma cell death. MEF2C was found to drive the expression of both NF2 and E-cadherin. MEF2C silencing enhanced Erastin-induced ferroptotic meningioma cell death and lipid peroxidation levels in vitro, which was limited by forced expression of MEF2C targets, NF2 and E-cadherin. In vivo, anti-meningioma effect of Erastin was augmented by MEF2C knockdown and was counteracted by NF2 or E-cadherin.Conclusions NF2 loss and low E-cadherin create susceptibility to ferroptosis in meningioma. MEF2C could be a new molecular target in ferroptosis-inducing therapies for meningioma.