丹酚酸B对急性脑缺血小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨丹酚酸B对急性脑缺血小鼠的抗炎作用及Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响。方法:建立小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。造模后阳性组(尼莫地平30μg/kg)、丹酚酸B低剂量组(丹酚酸B 11.25 mg/kg)、丹酚酸B高剂量组(丹酚酸B 22.5 mg/kg)分别尾静脉注射给药1次,模型组和假手术组给予同等体积的生理盐水。造模后6 h,分别采用酶联免疫吸附法测定脑组织中IL-1β及TNF-α的含量,采用实时定量PCR法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65 mRNA的表达,采用Western blot法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65蛋白的表达。结果:与模型组比较,丹酚酸B高、低剂量组均能显著降低小鼠脑组织中IL-1β、TNF-α含量(P0.01,P0.05);丹酚酸B高、低剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4 mRNA、NF-κBp65 mRNA表达显著降低(P0.01,P0.05);丹酚酸B高剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:丹酚酸B可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低TLR4和NF-κB相关基因蛋白的表达,减少炎症因子IL-lβ和TNF-α的含量,进而发挥抗脑缺血的作用。     

Akt信号通路对肾小管上皮细胞分泌核因子-κB的影响

目的:探讨Akt信号通路在肾小管上皮细胞(NRK-52E)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)和核因子-κB(NF-κB)表达中的作用。方法:体外培养NRK-52E细胞,分别加入不同浓度(5,15,30g/L)白蛋白和/或Akt抑制剂Ly294002。应用RT-PCR方法测定TGF-β1mRNA表达,Western blot测定Akt和TGF-β1蛋白的表达。应用凝胶电泳迁移率(EMSA)检测NF-κB活化。两两比较用t检验。结果:白蛋白呈浓度依赖性上调肾小管上皮细胞TGF-β1mRNA表达增加。TGF-β1蛋白表达也增加。白蛋白激活NF-κB活性,增加磷酸化Akt表达。Ly294002能够抑制白蛋白引起的NF-κB活性以及TGF-β1的表达。NF-κB活化与TGF-β1表达呈显著正相关(r=0.61,P<0.05)。结论:白蛋白刺激肾小管上皮细胞分泌TGF-β1和NF-κB的活性增加,其机制部分依赖于Akt的磷酸化作用。     

基于网络药理学与分子对接技术探讨黄芪建中汤治疗腹泻型肠易激综合征的作用机制研究

背景 肠易激综合征（IBS）是一种常见的复杂性功能性胃肠病，临床治疗效果欠佳。中药黄芪建中汤治疗腹泻型肠易激综合征（IBS-D）临床运用普遍且疗效肯定，但确切机制尚不十分明确，相关研究亦不多见。 目的 通过运用网络药理学和分子对接技术，初步探讨黄芪建中汤治疗IBS-D的潜在作用机制。 方法 通过TCMSP数据库获取黄芪建中汤的活性成分和潜在作用靶点，利用GeneCards、OMIM、TTD、Drug Bank、PharmGKB数据库获取IBS-D靶点，对疾病靶点和药物靶点取交集，获取黄芪建中汤治疗IBS-D的潜在靶点。使用Cytoscape软件、String数据库、Metascape数据库分别绘制"药材-活性成分-靶点"网络图、构建蛋白相互作用（PPI）网络和基因本体论（GO）功能及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析，利用AutoDock Vina和PyMOL进行分子对接和结果的可视化。 结果 最终得到黄芪建中汤活性成分123个，潜在靶点247个，IBS-D相关靶点3 486个，药物与疾病的交集靶点180个。GO功能富集分析中生物过程得到2 376个条目，分子功能得到194个条目，细胞成分得到115个条目；KEGG信号通路富集分析获得丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、核因子κB（NF-κB）信号通路、cAMP信号通路、雌激素信号通路等通路。分子对接显示，黄芪建中汤治疗IBS-D的主要活性成分槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、异鼠李素、刺芒柄花素、豆甾醇、毛蕊异黄酮、7-O-甲基-异微凸剑叶莎醇与核心蛋白丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）、细胞肿瘤抗原p53（TP53）、肿瘤坏死因子（TNF）、白介素（IL）-6、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（CASP3）、IL-1B、表皮生长因子受体（EGFR）、连环蛋白β1（CTNNB1）有较好的结合性。 结论 黄芪建中汤可能通过增强肠屏障功能、降低内脏敏感性、减轻炎性反应、调节肠道菌群起到治疗IBS-D的作用。     

肥胖症患者血清对人源单核细胞细胞上Toll样受体4/转录因子-κB信号通路的影响

目的 探讨肥胖症及伴相关代谢紊乱患者血清对人源单核细胞(THP-1)细胞表面Toll样受体4/转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的活化作用.方法 分别用10例单纯性肥胖及伴不同代谢紊乱患者血清干预THP-1细胞株24、48 h后,测定THP-1细胞表面TLR4和细胞内NF-κB p65磷酸化的表达水平及其分泌白细胞介素(IL-1)β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的能力.Western印迹检测TLR4蛋白和细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白水平;RT-PCR检测TLR4 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清液中IL-1 β和TNF-α的水平.结果 THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化的蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力差异有统计学意义(P＜0.05);THP-1细胞表面TLR4、细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌IL-1β和TNF-α的能力随肥胖症代谢紊乱组分的增加而增高,并随干预时间的延长而增高(P＜0.05).正常对照组、单纯性肥胖组、肥胖伴高血糖组、肥胖伴血脂紊乱组以及肥胖伴3种代谢紊乱组血清孵育THP-1细胞48 h,TNF-α的浓度(ng/L)分别为(222±32)、(246±52)、(322±32)、(322±34)和(490±83),IL-1β(ng/L)分别为(94±19)、(133±19)、(174±22)、(180±30)、(279±38)(P＜0.05).结论 单纯性肥胖及肥胖伴不同组分代谢紊乱患者的血清可不同程度地诱导TLR4/NF-κB信号通路的活化,伴代谢紊乱组分越多的肥胖患者的血清诱导TLR4/NF-κB信号通路活化的能力越强.     

黄芪多糖对高血压病患者血清致伤血管内皮细胞TLR4、NF-κB表达的影响

目的 观察黄芪多糖(APS)对TLR-NF-κB信号转导通路的影响,探讨其对高血压病患者血清损伤的血管内皮细胞的保护机制.方法 用10%的高血压痛患者及健康人血清干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)24 h,实时荧光定量(PCR)法检测TLR4 mRNA表达.不同浓度的APS干预脂多糖(LPS)诱导的HUVEC-C TLR4表达(24 h)及核转录因子(NF-κB)活化(2 h),PCR法检测TLR4 mRNA及NF-κB mRNA的表达,免疫印迹(Western-blot)技术检测TLR4蛋白及NF-κB蛋白的表达.结果 血清作用24 h后,高血压病组TLR4 mRNA的表达较健康组增高(P＜0.01).APS可呈剂量依赖性减少LPS诱导的TLR4 mRNA高表达,抑制LPS诱导的TLR4蛋白高表达和IκBα蛋白的降解(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 TLR-NF-κB信号途径介导的炎症反应和免疫紊乱是高血压病血管内皮损伤的机制之一,APS可通过抑制其表达保护血管内皮细胞损伤.     

RAGE／NF-κB 信号通路调控溶血卵磷脂诱导的人视网膜内皮细胞TGF-β1表达

目的：探讨糖基化终产物受体（RAGE）／核因子κB（NF-κB）信号通路在调控溶血卵磷脂（LPC）诱导的人视网膜内皮细胞（HERCs）转化生长因子β1（TGF-β1）表达中的作用。方法利用 RAGE siRNA 及 NF-κB 抑制剂作用 RAGE／NF-κB 信号通路,实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）及 Western blot 检测 RAGE 及 TGF-β1基因表达。结果LPC 能增加 HERCs 的 RAGE、TGF-β1基因表达,RAGE 基因沉默后能抑制 LPC 诱导的 RAGE、TGF-β1的表达。加入 NF-κB 抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）能显著减少 LPC 诱导的 RAGE、TGF-β1基 因 表达。结论 RAGE／NF-κB 信号通路在调控 LPC 诱导的 HERCs 表达TGF-β1中起重要作用。     

TLR4信号促进前列腺癌PC3细胞VEGF/IL-8分泌及相关信号机制

目的研究TLR4在人前列腺癌PC3细胞中的表达意义及相关胞内信号机制。方法利用TLR4特异性配体脂多糖(LPS)刺激人前列腺癌PC3细胞,分别于LPS刺激0、2、6、12、24、48 h后收集细胞和上清,通过RT-PCR和蛋白质印迹方法检测TLR4在基因和蛋白水平的表达变化,通过RT-PCR方法检测胞内TGF-β、VEGF、IL-8、COX-2和MMP3的mRNA表达变化和ELISA方法检测上清VEGF、IL-8蛋白的表达变化;为了进一步研究相关信号通路,分别采用MAPK和NF-κB信号通路抑制剂预处理PC3细胞,然后利用同等浓度的LPS刺激,分别于4 h和24 h后收集上清,通过RT-PCR和ELISA方法重复上述细胞因子的检测。结果在LPS刺激后,人前列腺癌PC3细胞的TLR4功能性表达上调,引起胞内TGF-β、VEGF、IL-8、COX-2和MMP3的mRNA表达升高和上清中VEGF、IL-8的分泌增多(P<0.05);进一步研究表明胞内p38 MAPK和NF-κB信号通路参与了此过程。结论TLR4信号通过p38 MAPK和NF-κB信号通路促进VEGF和IL-8的分泌。     

大黄治疗慢性肾衰竭的网络药理学机制

【目的】基于网络药理学探讨大黄治疗慢性肾衰竭的作用机制。【方法】通过中药系统药理学技术平台(TCMSP)检索大黄化学成分,通过SwissTargetPrediction数据库得到大黄的预测靶点,通过GeneCards数据库获取慢性肾衰竭相关靶点。将大黄的预测靶点与慢性肾衰竭相关靶点进行映射,得到大黄治疗慢性肾衰竭的预测靶点。通过Cytoscape 3.6.0软件,生成大黄治疗慢性肾衰竭的蛋白与蛋白相互作用(PPI)网络,再在DAVID网站进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。【结果】大黄活性化合物有16种,筛选出大黄可能与慢性肾衰竭相关的靶点93个,关键靶点共30个,包括SRC、ESR1、CSNK2A1、FYN、STAT3、MAPK1、EGFR、SMAD3、STAT1、MAPK3、AKT1等。通过KEGG通路分析得到122条通路,结合文献检索,筛选出治疗慢性肾衰竭的可能通路为20条,主要通路包含磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)—苏氨酸激酶(Akt)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、Foxo信号通路、核因子κB(NF-κB)信号通路、Wnt信号路、Hippo信号通路、转化生长因子β(TGF-β)信号通路等。【结论】大黄通过多成分、多靶点、多通路治疗慢性肾衰竭,其机制主要与调控肾纤维化相关通路有关。     

大鼠中晚期纤维化肝组织NF-κB、TGF-β1及其Ⅰ型受体表达的改变

目的探讨肝纤维化中、晚期大鼠肝组织核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)表达的改变.方法采用12.5% CCl4 诱导的大鼠肝纤维化模型,分别于造模的第8、13周末处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片,免疫组化S-P法检测NF-κB p65、 TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达,原位杂交检测TGF-β1及TβRⅠmRNA的表达,并用MetaMorph图像分析系统对免疫组化及原位杂交结果进行定量分析.结果第8、13周纤维化肝组织NF-κB p65蛋白、TGF-β1及TβRⅠ蛋白和mRNA的表达均较正常组显著增强(P《0.01),其表达相互间均呈正相关(P《0.01).结论中晚期肝纤维化中,TGF-β1及TβR Ⅰ mRNA水平的增高是其蛋白表达上调的主要机制,NF-κB、TGF-β1及TβR Ⅰ共同作用促进肝纤维化发展.     

NLRP3/NF-κB通路在慢性前列腺炎的变化和意义

为探讨慢性前列腺炎患者中核苷酸结合寡聚化结构域 (NOD)样受体家族3 (NLRP3)炎症小体介导的核因子κB(NF-κB)信号通路的表达及变化。采用酶联免疫吸附法(Elisa)检测血清中NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1 (Caspase 1)、Toll样受体4(TLR4)和NF-κB的表达。采用Real-Time PCR检测患者血清中NLRP3、人细胞凋亡相关斑点样蛋白 (PYCARD)、Caspase 1、NF-κB mRNA表达。与健康对照组相比,慢性前列腺炎患者血清炎性因子NLRP3、TLR4和NF-κB含量显著升高,L-Iβ、IL-18、TNF-α和Caspase 1含量显著增高,NLRP3、PYCARD、Caspase 1、NF-κB mRNA含量显著增高。说明检测患者血清中NLRP3/NF-κB信号通路有利于了解患者慢性前列腺炎状态并协助前列腺炎患者的疾病监测。     

基于NF-κB信号通路探讨鼻渊合剂对急性鼻窦炎的作用机制

目的 基于NF-κB信号通路探讨鼻渊合剂对急性鼻窦炎的作用机制.方法 通过中药系统药理学技术平台(TCMSP)及Uniprot数据库,筛选出鼻渊合剂中各药物的有效活性成分和对应靶基因.借助人类基因数据库(GeneCards)筛选出急性鼻窦炎相关的作用靶基因,取两靶基因的交集.使用生信在线分析全能网站(Metascape...     

基于网络药理学研究杜仲叶提取物改善非酒精性脂肪肝的作用及机制

  目的  基于网络药理学探讨杜仲叶提取物(Eucommia ulmoides leaf extracts, ELE)改善非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)的有效成分、作用靶点及可能的作用机制。  方法  使用CNKI、万方、TCMSP、Pubmed等数据库、获取并筛选杜仲叶活性成分; 使用TCMSP数据库和SwissTargetPrediction数据库检索并预测ELE活性成分的靶点; 使用Genecard数据库和Drugbank数据库收集NAFLD疾病的靶点; 使用String 11.0构建蛋白互作(Protein-protein interaction)网络图, 分析蛋白靶点之间的关系; 使用Cytoscape 3.7.1软件构建化合物-疾病靶点-通路网络图, 分析三者之间相互作用的关系; 使用DAVID数据库, 对靶点进行GO分析和KEGG通路富集分析, 并对关键靶点进行实验验证。  结果  ELE改善NAFLD疾病靶点网络主要包含9个化合物和35个靶点, 与脂质代谢相关的靶点有PPARα和CPT-1A, 与NAFLD相关的通路主要有胰岛素抵抗、AMPK信号通路。体内、体外实验发现ELE能通过激活AMPKα及增强靶点PPARα和CPT-1A的表达, 增强脂质氧化, 改善NAFLD。  结论  ELE能增强脂质代谢, 改善NAFLD, 其机制主要与AMPK信号通路相关。      

全反式维甲酸对巨噬细胞中白介素-1β表达的调控及机制研究

  目的  探究全反式维甲酸（all-trans retinoic acid, ATRA）对巨噬细胞中白介素（interleukin, IL）-1β表达的调控及作用机制。  方法  巨噬细胞经1 μmol/L ATRA处理24 h后转录组测序,筛选差异表达基因,进行KEGG通路分析、GO功能分析和PPI网络分析。不同剂量ATRA处理巨噬细胞24 h后,qRT-PCR和Western blot验证炎症因子IL-1β的表达水平。Western blot和免疫荧光染色检测核因子（neuclear factor, NF）-κB信号和半胱天冬酶-1（caspase-1）的变化。  结果  测序结果显示,与空白对照组相比,巨噬细胞经ATRA处理后71个差异表达基因上调,KEGG分析显示上调基因参与IL-17信号通路、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）信号通路等,GO分析显示上调基因参与IL-1β的产生、对脂多糖的反应等生物学过程,PPI分析揭示炎症因子,黏附分子和趋化因子为ATRA作用的核心基因。体外实验表明,ATRA呈浓度依赖性促进巨噬细胞中IL-1β的表达,ATRA组中磷酸化（p）-NF-κB、NF-κB和caspase-1的表达较对照组升高（P<0.05）,且p-NF-κB发生了核转移。  结论  ATRA可能通过激活巨噬细胞中的NF-κB信号和caspase-1促进炎症因子IL-1β的表达。     

基于网络药理学分析灯盏乙素治疗动脉粥样硬化的分子机制和体内验证

  目的  基于网络药理学分析灯盏乙素（Scutellarin） 治疗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS） 潜在的分子生物学机制。  方法  通过PubChem数据库进行灯盏乙素潜在的靶点预测,运用Disgenet,CeneCards筛选与AS关联的靶基因,利用Cytoscape 3.9.0建立疾病-靶点-成份可视化网络,使用String构建蛋白互作网络图,利用David数据库进行GO及KECG的网络构建。另外,高脂喂养复制APOE-/-小鼠AS模型, 用不同浓度的灯盏乙素灌胃治疗,利用RT-PCR方法验证筛选所得核心通路的表达变化。  结果   （1）网络药理学预测结果:灯盏乙素治疗AS的核心靶点共有肿瘤坏死因子-α （TNF-α）,AKT丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT serine/threonine kinase,MAPK）,低密度脂蛋白受体（Low density lipoprotein receptor）,载脂蛋白E（apolipoprotein E,APOE）等共106个。灯盏乙素调控PI3K/AKT信号通路（hsa04151）、Ras信号通路（hsa04014）、MAPK信号通路（hsa04010）（P < 0.05）等涉及细胞的增殖,炎症反应,氧化应激,及细胞凋亡等生物学过程来治疗AS;（2） 体内实验验证的结果:和模型组相比,灯盏乙素组呈浓度依耐性地下调PI3K、AKT、mTOR和Bcl-2 的mRNA表达,上调Bax和Caspase-3的mRNA表达,（ P < 0.05）。另外,和模型组相比,灯盏乙素则呈浓度依耐性地下调小鼠血清TNF-α和IL-1β的含量（ P < 0.05）。  结论  经过网络药理学筛选和RT-PCR验证,灯盏乙素通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制APOE-/-小鼠AS模型炎症反应,促进细胞凋亡而治疗AS。     

不同剂量天麻素对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的影响

目的 探讨不同剂量的天麻素（Gastrodin,Gas）对甲基苯丙胺（Methamphetamine,Meth）依赖条件性位置偏爱（Conditioned place preference,CPP）大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB通路的作用。方法 建立Meth(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,采用低中高剂量的天麻素（10、30、100 mg/kg）干预14 d后,采用Western blotting和RT-qPCR方法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中关键因子的蛋白和mRNA在海马中的表达水平。结果 天麻素干预后TLR4、MyD88、NF-κB p65、TRAF6的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性降低（P <0.001、P <0.01或P <0.05）、p-NF-κB p65的蛋白表达呈剂量依赖性降低（P <0.01或P <0.05）、IκB-α的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性升高（P <0.01或P <0.05）,天麻素干预后p-IκB-α的蛋白表达降低（P <0.01）。结论 天麻素干预对甲基...     

黄龙止咳颗粒治疗哮喘的网络药理学研究及实验验证

  目的  结合网络药理学方法和实验验证探讨黄龙止咳颗粒治疗哮喘的作用靶点及潜在机制。  方法  借助TCMSP、TCMID、Swiss Target Prediction等数据库检索黄龙止咳颗粒的化学成分和作用靶点。通过GeneCards、OMIM、Disgenet、Drugbank数据库筛选出哮喘的疾病靶点。使用Cytoscape软件构建“药物-成分-靶点-疾病”的网络图和潜在靶点的相互作用关系, 通过富集分析预测作用机制。构建哮喘小鼠模型, 通过病理染色, ELISA检测, qPCR及Western blot来验证网络药理学富集分析结果。  结果  共获得黄龙止咳颗粒中175种活性成分、1 026个药物靶点, 哮喘900个疾病靶点, 得到药物-疾病共同靶点153个, GO富集分析共得到条目1 967个, KEGG通路富集筛选出包括TNF信号通路在内的共计84条信号通路。动物实验表明, 黄龙止咳颗粒能有效改善哮喘小鼠的气道炎症, 并通过影响TNF信号通路从而抑制MAPK和NF-κB信号通路。  结论  该研究初步揭示了黄龙止咳颗粒治疗哮喘的作用机制, 为临床用药和后续研究提供参考依据。      

黄芪汤调节TLR4/NF-κB信号通路改善高糖诱导足细胞损伤的研究

  目的  探讨黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的作用及机制。  方法  体外培养人足细胞, 采用30 mmol·L-1葡萄糖干预24 h诱导足细胞损伤, 分别设置对照组、模型组、黄芪汤低浓度组(10 μg·mL-1)、黄芪汤中浓度组(30 μg·mL-1)和黄芪汤高浓度组(100 μg·mL-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖能力, 划痕实验检测细胞迁移能力,qPCR法检测TNF-α、IL-6等炎症因子mRNA表达, ELISA法检测足细胞上清TNF-α、IL-6的含量,Western blot法检测足细胞TLR4、NF-κB、p-NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达。  结果  与对照组比较, 模型组细胞划痕愈合率明显降低(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6、CCL24 mRNA表达水平,上清液中TNF-α、IL-6的含量和TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达均显著增加(P < 0.05,P < 0.01)。与模型组相比, 黄芪汤组细胞划痕率明显升高(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6的含量和mRNA表达,以及TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达均显著减少(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  黄芪汤能有效减轻高糖对人足细胞的炎症损伤, 增强细胞增殖、迁移能力, 抑制细胞凋亡, 其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路、下调炎症因子的表达有关。      

葛根素抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用

  目的  探索葛根素（Puerarin）治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的作用和机制。  方法  将C57BL/6小鼠随机分为对照组、EAE组、Puerarin处理EAE组（Puerarin组）。从诱导EAE当日开始，Puerarin组用葛根素（80 mg/kg）灌胃，其余2组用同体积生理盐水灌胃，每日1次。每天记录神经功能评分及体重变化；劳克坚劳蓝（luxol fast bBlue，LFB）髓鞘染色检测脊髓脱髓鞘情况；ELISA法检测血清中IL-6、IL-10、IL-17、IL-22和TGF-β的水平；Western 印迹法检测脊髓组织NF-κB、IκBα、IL-17、Foxp3等蛋白表达。  结果  Puerarin组小鼠神经功能评分及平均分均较EAE组明显降低（P < 0.01），而体重明显增加（P < 0.01）。应用葛根素后，EAE小鼠脱髓鞘面积（P < 0.01）及病理评分（P < 0.05）均明显下降。Puerarin组小鼠促炎因子IL-6、IL-17和IL-22水平显著降低（P < 0.01），抑炎因子IL-10和TGF-β显著增加（P < 0.05）。应用葛根素后:NF-κB及IL-17表达明显减少（P < 0.05）；IκBα及Foxp3表达显著增加（P < 0.01）。  结论  葛根素可缓解EAE小鼠症状，减少脱髓鞘。作用机制是抑制NF-κB通路，调节IL17/Tregs平衡，实现对免疫功能的调节。     

基于网络药理学探讨益骨汤防治骨质疏松症的靶标和机制研究

  目的  探讨益骨汤防治骨质疏松的物质基础及其靶标,阐明益骨汤防治骨质疏松症的潜在靶点和作用机制。  方法  通过TCMSP等数据库筛选益骨汤组分中的活性成分及其作用靶点。通过OMIM、GeneCards等数据库预测益骨汤治疗骨质疏松症的相关靶点,构建“药物-成分-靶点-疾病”网络。利用Cytoscape软件构建益骨汤组分治疗骨质疏松症的成分作用靶点网络,采用STRING数据库构建PPI网络,利用通过生物学信息注释数据库分析靶点的GO富集和KEGG信号通路。  结果  共纳入益骨汤6味中药相关的有效活性成分159个,589个药物靶标,按照君臣佐使配对,其中334个靶点有相互作用关系;蛋白互作分析提示INS、AKT1、IL6、MAPK3、VEGFA等为蛋白互作网络中的核心靶点;靶标富集结果显示3 148个GO术语被显著富集(均P < 0.05);PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、cGMP-PKG信号通路、Wnt信号通路、破骨细胞分化等175个信号通路被显著富集(均P < 0.05)。  结论  中药复方君臣佐使配伍可以转换为靶标相互作用的化合物形式,阐明益骨汤的物质基础及配伍机制。益骨汤组分靶标和通路不仅具有调节成骨细胞和破骨细胞功能的双重作用,还通过影响和干预骨微循环境,体现补肾健脾活血法治疗骨质疏松的物质基础,符合骨质疏松的病理生理机制。      

黄芩苷对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞表达炎症因子的影响

  目的  从PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)损伤的影响及机制。  方法  运用LPS诱导建立人牙龈成纤维细胞损伤模型,设置正常对照组、模型组和模型+黄芩苷(1、10和20μg/mL)组,每组设3个复孔,经不同浓度的黄芩苷干预后,Western blotting检测p-Akt、Akt、NF-κB p65等蛋白的表达,采用qPCR法检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6等基因的表达。用PI3K抑制剂LY294002作用半小时后,再用黄芩苷干预,qPCR和Western blotting法检测Akt、p-Akt、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6等基因和蛋白的表达。  结果  与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量能有效降低TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达水平,促进p-Akt蛋白表达,抑制NF-κB p65核蛋白表达,并呈剂量依赖性(均P < 0.05)。与模型组比较,模型+黄芩苷组p-Akt表达升高(P＜0.05),NF-κB p65表达降低(P＜0.01)。PI3K抑制剂LY294002作用后,模型+黄芩苷组p-Akt/Akt表达量(0.63±0.18)较模型组(0.56±0.14)升高(P＜0.05),模型+黄芩苷组NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量较模型组降低(均P＜0.01)。黄芩苷对LY294002作用后,p-Akt/Akt、NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量与模型组比较,差异无统计学意义。  结论  黄芩苷可抑制LPS诱导的人牙龈成纤维细胞损伤引起的炎症反应,其作用机制可能与促进Akt的磷酸化,抑制NF-κB p65核转录和炎性因子的释放有关。