芹菜素对脑胶质瘤细胞U87增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 探讨芹菜素对脑胶质瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及作用机制。方法 体外培养脑胶质瘤U87细胞,加入20、40、80 μmol/L芹菜素干预,以培养基作为空白对照组。使用MTT法检测U87细胞的增长抑制率,使用Hocst染色法观察细胞凋亡情况;使用Transwell检测U87细胞侵袭能力;划痕实验法检测U87细胞迁移能力;使用免疫印迹法检测U87细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、Bak1、Caspase-3表达水平。结果 与空白对照组比较,芹菜素组细胞抑制率显著增加（P<0.05）、细胞凋亡数目明显增加（P<0.05）、细胞侵袭数目显著下降（P<0.05）、细胞迁移数目明显减少（P<0.05）,U87细胞MMP-2、MMP-9、Bak1蛋白表达显著下降（P<0.05）,Caspase-3蛋白表达显著升高（P<0.05）;而且均呈浓度依赖性。结论 芹菜素可有效抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、促进凋亡,可能与下调MMP-2、MMP-9、Bak1蛋白表达水平,上调Caspase-3表达有关。     

钙蛋白酶-1在胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨钙蛋白酶-1在人脑胶质瘤组织中的表达及其对U87胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法 收集2015年1月至2018年3月手术切除的胶质瘤组织和瘤旁正常脑组织各57例。体外培养U87细胞,将阴性对照小干扰RNA（NC组）和钙蛋白酶-1小干扰RNA（钙蛋白酶-1组）转染至人胶质瘤细胞株U87,以未转染的U87细胞为对照组。采用RT-PCR和免疫印迹法检测mRNA和蛋白表达水平,Transwell实验检测U87细胞侵袭能力,划痕实验评估U87细胞迁移能力。结果 胶质瘤组织钙蛋白酶-1 mRNA和蛋白表达水平均显著高于瘤旁正常脑组织（P<0.05）。钙蛋白酶-1组U87细胞钙蛋白酶-1 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率以及转化生长因子-β、基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9 mRNA表达水平均明显低于对照组和NC组（P<0.05）,而对照组和NC组均无统计学差异（P>0.05）。结论 钙蛋白酶-1在人脑胶质瘤中表达升高,而抑制钙蛋白酶-1表达可能通过影响上皮间质转化,抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移。     

lncRNA ZNF674-AS1过表达对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）ZNF674-AS1过表达对胶质细胞瘤增殖、侵袭、迁移的影响。方法 体外培养正常星形胶质细胞（HA1800）和胶质瘤细胞（A172、U251、U87、U373）,RT-PCR检测lncRNA ZNF674-AS1表达水平。将ZNF674-AS1 mimics转染U87细胞上调ZNF674-AS1表达,以转染阴性对照序列为对照,CCK8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。Starbase软件预测lncRNA ZNF674-AS1靶基因并应用双荧光素酶报告基因实验验证。结果 与正常星形胶质细胞（HA1800）比较,胶质瘤细胞（A172、U251、U87、U373）lncRNA ZNF674-AS1的表达水平均明显降低（P<0.05）,其中U87细胞表达水平最低。上调U87细胞lncRNA ZNF674-AS1表达,明显抑制U87细胞增殖、侵袭、迁移能力（P<0.05）。Starbase软件预测显示lncRNA ZNF674-AS1与性别决定区 Y 框蛋白 9（SOX9）基因有结合位点,双荧光素酶报告基因实验结果显示,SOX9基因是lncRNA ZNF674-AS1靶基因。上调U87细胞lncRNA ZNF674-AS1表达的同时沉默SOX9基因表达,明显增强U87细胞增殖、侵袭和迁移能力（P<0.05）。结论 胶质瘤lncRNA ZNF674-AS1呈低表达,可能通过靶向下调SOX9基因表达,促进胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA SNHG16对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨沉默长链非编码RNA核内小RNA宿主基因16（SNHG16）对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR检测正常胶质细胞HEB、NHA和胶质瘤细胞A172、U251、U87、SHG-4中SNHG16的表达。用siRNA沉默U251细胞SNHG16的表达,分为NC-siRNA组和SNHG16-siRNA组,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。结果 与正常胶质细胞HEB和NHA比较,胶质瘤细胞A172、U251、U87和SHG-4的SNHG16表达水平明显升高（P<0.05）。与NC-siRNA组比较,SNHG16-siRNA组细胞增殖能力、细胞侵袭能力和细胞迁移能力均明显降低（P<0.05）。结论 SNHG16在胶质瘤细胞中高表达,特异性沉默SNHG16基因可以抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

FOXC2过表达通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胶质瘤U87细胞增殖、迁移

目的 探讨FOXC2过表达对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其机制.方法 体外培养人脑胶质瘤U87细胞和人脑胶质细胞HEB.U87细胞随机分为空白组(未转染任何质粒)、空载体组(转染pcDNA3.1空载体质粒)、FOXC2过表达组(转染pcDNA3.1-FOXC2过表达质粒)、FOXC2+抑制剂组[转染pcDN...     

CXCR4表达上调对U251细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨CXC趋化因子-4受体（CXCR4）表达上调对U251细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法 构建携带CXCR4基因的质粒,采用电转染法将携带CXCR4基因的质粒整合到胶质瘤U251细胞的基因组中,然后将细胞分为空白对照组、阴性对照组和CXCR4上调组,分别从mRNA水平和蛋白水平检测CXCR4及其他相关基因的表达;MTT试验检测细胞增殖能力的改变;划痕试验检测细胞的迁移能力;Transwell侵袭试验检测细胞侵袭性的变化。结果 与空白对照组和阴性对照组相比,CXCR4上调组U251细胞CXCR4在mRNA和蛋白水平上表达都增强,细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著增强;而空白对照组和阴性对照组之间并无明显变化。结论 CXCR4在胶质瘤的增殖、侵袭、迁移行为中发挥着重要的作用,可以被视为胶质瘤治疗的靶向基因。     

CREPT对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制

目的 探讨肿瘤高表达细胞周期相关蛋白（CREPT）对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 体外培养人胶质瘤细胞株U373、U251、A172、U87-MG、SHG44,并构建过表达或沉默CREPT的U251细胞;免疫印迹法检测蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 U251细胞CREPT蛋白表达水平最高,SHG44细胞最低。沉默CREPT后,U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显下降（P<0.05）,p-Wnt和p-β-catenin蛋白表达水平下降（P<0.05）。过表达CREPT后,U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增强（P<0.05）,p-Wnt和p-β-catenin蛋白水平明显升高（P<0.05）。Wnt/β-catenin通路抑制剂KYA1797K可逆转过表达CREPT对细胞增殖、侵袭和迁移的影响（P<0.05）。结论 CREPT可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和迁移。     

长链非编码RNASPRY4-IT1在脑胶质瘤中的表达及对U87细胞功能的影响

目的探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1在脑胶质瘤中的表达,以及对胶质瘤细胞系U87细胞生物学功能的影响。方法收集我科40例胶质瘤手术标本(包括肿瘤组织和瘤周组织),荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测40对标本中SPRY4-IT1的表达情况;用慢病毒介导shRNA干扰SPRY4-IT1表达后,分别采用CCK-8法、流式细胞仪和Transwell法检测其对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。结果 SPRY4-IT1在肿瘤组织中的表达量为11.73±0.55,高于瘤周组织的9.14±0.59,差异有统计学意义(P0.05)。SPRY4-IT1表达被干扰后,胶质瘤细胞株U87迁移能力明显降低,差异有统计学意义(P0.05),但细胞增殖无明显变化,差异无统计学意义(P0.05),细胞凋亡变化亦不明显,差异无统计学意义(P0.05)。结论 SPRY4-IT1在胶质瘤组织中高表达,并且能促进U87细胞迁移,可能成为胶质瘤诊断和判断预后的重要分子标记物。     

槐定碱通过Wnt/β-catenin信号通路抑制人胶质瘤U87细胞迁移、侵袭

目的 探讨槐定碱对人胶质瘤U87细胞迁移、侵袭能力的影响及其作用机制。方法 体外培养人胶质瘤U87细胞,加入槐定碱[0 mg/ml（对照组）,1.0 mg/ml,2.0 mg/ml,3.0 mg/ml]共培养24 h,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,免疫印迹法检测细胞β-catenin、E-cadherin、Vimentin和MMP-9蛋白表达,RT-PCR检测细胞Vimentin、MMP-9 mRNA表达。结果 槐定碱明显抑制U87细胞迁移、侵袭能力（P<0.001）,而且随浓度增加抑制作用明显增强（P<0.001）。槐定碱明显抑制U87细胞β-catenin蛋白、Vimentin和MMP-9 mRNA和蛋白表达（P<0.01）,明显增强E-cadherin蛋白表达（P<0.01）,而且随浓度增加抑制作用明显增强（P<0.01）。结论 槐定碱能抑制人胶质瘤U87细胞的迁移和侵袭,机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性,阻断细胞上皮间质转化过程。     

慢病毒干扰Chk1、Chk2表达对脑胶质瘤系U87细胞的放射治疗敏感性的影响

目的 探讨慢病毒干扰细胞周期检测点激酶1、2(Chk1、Chk2)基因表达对脑胶质瘤细胞放射治疗敏感性的影响.方法 根据基因库数据提供的Chk1及Chk2基因核苷酸序列,各选择设计一条适合转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,构建慢病毒并转染胶质瘤细胞系U87细胞进行传代扩增.用实时PCR和免疫印迹法分别在mRNA和蛋白水平上测定Chk1及Chk2的表达.转染后U87胶质瘤细胞经X线照射48 h后,进行细胞周期和凋亡的检测.结果 成功包装慢病毒后转染U87细胞,实时PCR检测Chk1和Chk2的干扰效应,其抑制率分别为73.74%和85.12%.细胞周期检测显示照射组和照射干扰Chk2组的细胞大部分阻滞在G2/M期;照射干扰Chk1组细胞放射治疗后的凋亡率较对照组和干扰Chk2组细胞明显增高(P<0.05).结论 慢病毒转染细胞可以有效的将干扰Chk1和干扰Chk2基因带到U87细胞并发挥作用,干扰Chk1和Chk2可以增加U87细胞对放射治疗的敏感性,为胶质瘤的治疗提供了新的治疗途径.     

替莫唑胺通过TFRC抑制U87胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的 探讨转铁蛋白受体（TFRC）在替莫唑胺抑制U87胶质瘤细胞增殖和侵袭中的作用。方法 体外培养U87胶质瘤细胞,加入50 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L替莫唑胺作用;构建control siRNA、siTFRC转染U87细胞沉默TFRC表达,构建pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1/TFRC转染U87细胞过表达TFRC;利用CCK-8方法检测U87细胞增殖;利用Transwell小室实验检测U87细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR和免疫印迹法检查U87细胞TFRC mRNA和蛋白表达。结果 与空白组相比,替莫唑胺处理后,U87细胞的增殖和侵袭能力显著下降（P<0.05）,TFRC mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,当替莫唑胺浓度为200 μmol/L时,对U87细胞的抑制能力最强（P<0.05）。当利用pcDNA3.1/TFRC过表达U87细胞TFRC处理后,替莫唑胺对U87细胞增殖和侵袭的抑制能力显著下降（P<0.05）;而当利用siTFRC沉默U87细胞TFRC表达后,替莫唑胺对U87细胞增殖和侵袭的抑制能力显著增强（P<0.05）。结论 替莫唑胺可能通过抑制TFRC的表达而抑制U87胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

STIP1对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨下调磷酸化应激诱导蛋白1（STIP1）表达对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和凋亡的影响,及其对JAK2/STAT3信号通路的调控作用。方法 免疫印迹法检测体外培养的正常胶质细胞（SVG）和人胶质瘤细胞（U251、U87和U37）STIP1蛋白表达水平。NC-siRNA或STIP1-siRNA质粒转染U251细胞,CCK-8法检测U251细胞增殖;Transwell实验检测U251细胞侵袭能力;流式细胞术检测U251细胞凋亡率;免疫印迹法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平。结果 与正常胶质细胞SVG比较,胶质瘤细胞U251、U87和U373的STIP1蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）。与NC-siRNA组比较,STIP1-siRNA组STIP1蛋白表达水平、细胞增殖活力和细胞侵袭力明显明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率明显增高（P<0.05）,而且,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论 STIP1在胶质瘤细胞中呈高表达,抑制STIP1表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭、促进凋亡,机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

Hax-1对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用

目的 探讨造血干细胞特异性相关结合蛋白-1(Hax-1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 选择2018年9月至2019年6月手术切除并得到术后病理证实的胶质瘤组织35例和颅脑损伤内减压术切除的正常脑组织35例,采用qRT-PCR检测Hax-1 mRNA水平;同时检测胶质瘤细胞系(U87、A172、T98及U34...     

胶质瘤干细胞外泌体通过PI3K/Akt信号通路促进胶质瘤U87细胞侵袭、迁移

目的 探讨胶质瘤干细胞（GSCs）外泌体（exo）对胶质瘤U87细胞侵袭、迁移的影响。方法 取对数生长期U87细胞,应用干细胞培养液分离、培养胶质瘤U87细胞中GSCs并提取、鉴定GSCs-exo。取对数生长期U87细胞随机分为4组:对照组和高、中、低GSCs-exo浓度组（分别加入20、40、80 μg/ml的GSCs-exo）。Transwell实验检测U87细胞侵袭能力,划痕实验检测U87细胞迁移能力,免疫印记法检测U87细胞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、L1CAM的表达水平。结果 成功分离GSCs并获得GSCs-exo。GSCs-exo组U87侵袭细胞数、细胞迁移率明显高于对照组（P<0.05）,L1CAM、PI3K及p-AKt/Akt表达水平明显高于对照组（P<0.05）,而且均呈浓度依赖性（P<0.05）。结论 GSCs-exo可促进胶质瘤侵袭与转移,其机制可能与上调L1CAM、PI3K表达,促进Akt磷酸化有关。     

上调LRIG1对胶质瘤U251细胞侵袭、迁移的影响

目的 探讨上调LRIG1表达对胶质瘤U251细胞侵袭及迁移的影响.方法 体外培养U251细胞,应用Lipofectami-neTM2000试剂盒将质粒pLRIG1-GFP(pLRIG1-GFP组)及其空载pEGFP-N1质粒(pEGFP-N1组)转染U251细胞,G418挑选具有抗性的细胞并扩增,以供进一步实验.另选择...     

下调BAG3表达对胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨下调BAG3表达对胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养U87细胞,转染pEGFP-BAG3-shRNA质粒构建BAG3低表达胶质瘤U87细胞株（低表达组）,转染pEGFP-shRNA对照质粒为对照组;利用RT-PCR和免疫印迹法鉴定;利用CCK8和EdU检测U87细胞增殖,利用流式细胞术检测U87细胞凋亡。结果 与对照组相比,RT-PCR和免疫印迹法检测结果显示低表达组BAG3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,低表达组24、48、72 h细胞增殖水平均明显降低（P<0.05）,低表达组细胞凋亡率明显增高（P<0.05）。结论 下调胶质瘤U87细胞BAG3表达显著抑制其增殖、促进其凋亡。