胱硫醚β合成酶通过AKT/cyclin D1通路影响肺腺癌A549细胞的增殖

目的：探究胱硫醚β合成酶(CBS)通过AKT/cyclin D1通路影响肺腺癌A549细胞的增殖及其分子机制。方法:通过c Bio Portal数据库分析肺腺癌组织中CBS和AKT/cyclin D1相关蛋白的表达,收集的国人肺腺癌组织通过免疫荧光法验证CBS的表达。WB法检测A549细胞及其移植瘤中半胱氨酸代谢和AKT/cyclin D1通路相关蛋白的表达。将p CW57.1-myr AKT质粒分别与RNA干扰对照质粒p GIPZ-CBS-nc-sh RNA、干扰质粒p GIPZ-CBS-sh NRA1和p GIPZ-CBS-sh NRA2共转染A549细胞,共转染组又分多西环素(DOX)诱导组(DOX⁺)和不诱导组(DOX^-),通过细胞集落形成实验检测转染后各组A549细胞的集落形成能力。通过CBS^wtA549细胞、CBS^I278TA549细胞移植瘤实验检测过表达CBS对移植瘤生长的影响,Az MC荧光染色法和免疫组织化学法分别检测移植瘤组织中H₂S水平和Ki-67阳性率。...     

miRNA-135在调控前列腺癌细胞增殖中的应用及机制

目的 观察miRNA-135在调控激素非依赖性前列腺癌细胞增殖能力中的作用及其机制.方法 利用微小核糖核酸(miRNA)基因芯片检测激素非依赖性前列腺癌和激素依赖性前列腺癌组织中miRNA-135的表达差异.经过体外转染miRNA-135后对DU145和PC3细胞进行MTT检测,了解细胞的增殖情况.利用miRNA-135靶基因预测软件miRwalk和miRanda预测,初筛miRNA-135调控的基因和相关通路.结果 miRNA基因芯片结果显示,激素依赖性前列腺癌组织中miRNA-135的表达量高于激素非依赖性前列腺癌组织(P﹤0.05);miR-NA-135可以抑制DU145和PC3细胞的生长,尤其在第48 h和第72 h以后(P﹤0.05);转染miRNA-135后,前列腺癌细胞株DU145和PC3中STAT6的表达水平较转染NC的细胞株明显下调.结论 miRNA-135能够抑制激素非依赖性前列腺细胞DU145和PC3的增殖能力,有望成为前列腺癌治疗的新靶标.     

前列腺癌特异抗原3对前列腺癌LNCaP细胞增殖的影响

背景与目的:前列腺癌抗原3(prostate cancer antigen 3,PCA3)作为一种长链非编码RNA已被证实在前列腺癌中特异性高表达,预示其可能在前列腺癌的发生、发展中发挥重要作用。本研究拟通过靶向干扰PCA3以初步观察其对前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖的影响。方法:使用脂质体介导小干扰RNA(siRNA)转染前列腺癌LNCaP细胞,荧光倒置显微镜观察转染效率,实时定量PCR检测siRNA对PCA3的抑制程度;CCK-8法和克隆形成实验检测转染前列腺癌LNCaP细胞后细胞的增殖能力。结果:荧光倒置显微镜观察转染后48 h转染效率为50%～70%;实时定量PCR检测结果发现,与PCA3 siRNA(si731)和PCA3 siRNA(si2060)比较,PCA3 siRNA(si164)对PCA3的抑制程度最大;细胞增殖实验显示,转染PCA3 siRNA(si164)组中LNCaP细胞增殖能力较阴性对照组明显下降(P<0.05)。结论:PCA3 siRNA(si164)在前列腺癌LNCaP细胞株中能靶向沉默PCA3的表达并抑制前列腺癌细胞增殖,表明PCA3通过调节细胞增殖促进前列腺癌发展,并可成为前列腺癌新的治疗靶点。     

靶向Bcl-xL基因siRNA在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的研究Bcl-xL基因特异性RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞株体外增殖能力和凋亡的影响。方法构建靶向Bcl-xL的小干扰RNA(siRNA)表达载体,转染PC-3细胞后,采用半定量RT-PCR和Western blot法检测转染前后Bcl-xL mRNA及蛋白表达水平的改变;采用噻唑兰(MTT)法检测细胞生长增殖情况;TUNEL试剂盒测定细胞的凋亡情况。结果靶向Bcl-xL的序列特异性的siRNA可以有效地抑制PC-3细胞Bcl-xL基因的表达。转染靶向Bcl-xL的siRNA表达质粒可以显著抑制PC-3细胞的增殖（P<0.001）,诱导细胞凋亡（P<0.001）。结论Bcl-xL基因特异性RNA干扰可以显著抑制前列腺癌PC-3细胞的体外增殖并诱导细胞凋亡。     

NDRG2通过抑制β-catenin表达和入核调控乳腺癌细胞增殖

背景与目的：乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一,肿瘤细胞的恶性增殖是造成患者死亡的重要原因。本研究利用具有相同遗传背景但不同增殖能力的乳腺癌细胞模型,研究N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)调控乳腺癌细胞增殖的作用及分子机制。方法：通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测MCF-7/LM-MCF-7细胞中NDRG2蛋白表达水平;构建NDRG2真核表达载体及siRNA干扰片段,通过转染上调或沉默NDRG2表达,流式细胞实验检测细胞增殖能力,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)表达,免疫荧光染色检测β-catenin细胞定位;共转染MCF-7细胞NDRG2 siRNA和pCMV-Tcfδ,流式细胞实验检测细胞增殖能力。结果：NDRG2的蛋白表达水平同乳腺癌细胞增殖能力负相关;在增殖的LM-MCF-7细胞中上调NDRG2表达,细胞增殖指数(proliferation index,PI)由47.18%下降至31.78%(P<0.001);在低增殖的MCF-7细胞中沉默NDRG2表达,PI由32.00%上升至52.59%(P<0.001);Western blot及免疫荧光结果显示,NDRG2可抑制β-catenin表达,并抑制其聚集入核;流式细胞检测结果显示,共转染siRNA和pCMV-Tcfδ的MCF-7细胞增殖能力未增强,进一步说明NDRG2是通过抑制β-catenin的转录调节作用抑制肿瘤细胞增殖。结论：在乳腺癌细胞中,NDRG2的表达水平下调,导致β-catenin聚集入核,并激活下游靶基因,促进乳腺癌细胞增殖。此分子机制对阐明乳腺癌细胞增殖调控机制具有重要意义。     

microRNA143表达对结肠癌组织中细胞增殖的影响及其作用机制

目的 探讨microRNA143(miR-143)表达对结肠肿瘤组织中细胞增殖和K-ras基因表达的影响.方法 采用Northern blot方法检测21例结肠癌组织和癌旁组织中miR-143的表达;构建miR-143的表达载体,将其转入人结肠癌细胞系SW480,用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)方法检测miR-143转染对细胞增殖的影响;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测K-rasmRNA和蛋白的表达变化.结果 在21例结肠癌组织标本中,有17例(81.0%)癌组织的miR-143表达水平低于癌旁组织.基因转染的SW480细胞中,miR-143表达水平显著升高,细胞增殖被抑制,K-ras蛋白的表达水平下降约40.3%,而K-ras mRNA水平未受影响.结论 miR-143在结肠癌组织中的表达明显低于癌旁组织,转染细胞中高表达的miR-143能够抑制细胞增殖,下调K-ras蛋白的表达.     

前列腺癌中锌指蛋白ZIC2表达及对细胞增殖和凋亡的影响

背景与目的：锌指蛋白ZIC2在肿瘤中的表达及作用呈组织特异性，其异常表达与肿瘤的预后紧密相关。但ZIC2在前列腺癌中的表达与作用未见相应研究。该研究拟检测前列腺癌组织及细胞中ZIC2蛋白表达情况，明确ZIC2异常与临床病理参数间的关系与及对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用免疫组织化学SP法检测31例经穿刺活检诊断的前列腺癌标本及同期35例经尿道前列腺电切（transurethral resection of the prostate，TURP）获取的良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）组织中ZIC2的表达，分析其异常表达与临床病理参数间的关系；应用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）干扰ZIC2基因并转染前列腺癌DU145细胞，采用蛋白质印迹法（Western blot）检测蛋白水平。采用四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测细胞增殖，采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡变化。结果：前列腺癌组织及BPH中ZIC2总阳性表达率分别为 90.32%（28/31）及20.00%（7/35），两者间差异有统计学意义（χ²=32.639，P=0.000）。ZIC2阳性表达率与前列腺癌 Gleason评分相关（χ²=9.753，P=0.003），与前列腺特异性抗原（prostate-specific antigen，PSA）、浸润深度无相关性（P均＞0.05）。前列腺癌细胞中ZIC2表达明显升高，受干扰后蛋白显著降低；MTT法检测结果显示，ZIC2低表达后细胞生长明显减慢；流式细胞术检测结果显示，ZIC2降低后能有效抑制癌细胞增殖并增加凋亡。结论：ZIC2在前列腺癌中高表达，属癌基因，与Gleason评分密切相关；其表达降低后能有效抑制前列腺癌细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

父母胱硫醚β合酶基因多态性对后代发生先天性心脏病的影响

背景与目的：探讨父母胱硫醚β合酶基因（Cystathionine beta synthase,CBS）多态性对后代发生先天性心脏病（Congenital heart disease,CHD）的影响。材料与方法：根据辽宁省出生缺陷登记卡选择127名CHD患者及其生物学父母作为病例组。在同一地区选取129名正常人及其生物学父母作为对照组。采用PCR-RFLP方法检测CBS G919A位点的基因多态性。结果：病例组和对照组父母基因型分布和等位基冈频率差异具有统计学意义。与野生基因型携带者相比较,突变杂合和突变纯合基因型携带者的子代罹患CHD的OR值为0．46（95％CI：0．31～0．69）：按照不同类型CHD进行进一步分析发现,在房间隔缺损患者的母亲、室间隔缺损患者的母亲、父亲以及其它类利CHD患者的母亲和父亲组中,基因型的分布在病例组和对照组中的差异具有统计学意义。传递不平衡分析未能发现在CHD核心家庭巾存在突变化点的传递不平衡现象：结论：父母CBS基因G919A位点的突变可能能够降低后代发生CHD的危险．     

CREB及p-CREB在前列腺癌细胞增殖中的作用

目的:探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)及磷酸化CREB(p-CREB)在前列腺癌细胞增殖中的作用.方法:采用组织芯片技术检测人正常前列腺、前列腺增生、不同分级前列腺癌组织中CREB及p-CREB的表达水平;免疫荧光及Western blotting检测人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1、前列腺癌细胞PC3及LNCap中CREB及p-CREB的表达水平;构建重组人源CREB质粒,并转染PC3及LNCap细胞,Western blotting及CCK-8试剂盒检测转染效率及细胞增殖水平的变化.结果:CREB及p-CREB在前列腺癌组织中表达率明显高于正常前列腺(96％vs 50％,88％ vs 40％,P＜0.05)和前列腺增生组织(96％ vs 80％,88％vs 60％,P＜0.05);CREB及p-CREB蛋白水平在前列腺癌PC3及LNCap细胞中表达量显著高于正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1[PC3细胞:(5.10±0.62)vs(2.31±0.40)、(4.31±0.54)vs(2.02±0.38);LNCap细胞:(7.5±0.83)vs(2.31±0.40)、(6.15±0.69) vs (2.02±0.38),均P＜ 0.05)];转染重组质粒CREB可上调前列腺癌细胞PC3及LNCap中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达(均P＜0.05),且转染后的PC3及LNCap细胞增殖水平明显增加(P＜0.05).结论:CREB及p-CREB在前列腺癌组织、体外培养前列腺癌细胞PC3及LNCap中高表达,并可上调PC3及LNCap中增殖相关基因PCNA的表达,提高细胞增殖水平.     

脂肪酸合成酶在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:研究脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase,FAS)在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义。方法:对107名随访5年的非小细胞肺癌手术患者的石蜡标本进行FAS的免疫组织化学染色和半定量分析,并与肺良性病变,肺正常组织进行对照。结果:与肺部良性病变,肺正常组织相比,FAS在肺癌组织中高表达,阳性表达率40.2%(43/107),有显著性的差异(P<0.01)。FAS的表达与患者性别,年龄,肿瘤部位,淋巴结转移,病理类型,分化无关;与pTNM分期,原发肿瘤T分期有关(P<0.05)。FAS阳性表达患者的5年生存率远低于阴性患者(16%vs43%,P<0.01)。结论:FAS在非小细胞肺癌组织中表达增高,酶活性增强;FAS在肺癌组织中表达增高有提示不良预后的作用。     

miR-421在胃癌中的表达及对BGC-823细胞增殖的作用

目的探讨miR-421在胃癌细胞中的表达水平及对BGC-823胃癌细胞增殖的作用。方法利用PCR方法分析miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中的表达水平,并通过RNA转染技术将miR-421 mimics与miR-421 inhibitors转染BGC-823胃癌细胞;通过CKK-8试剂盒检测转染后BGC-823细胞的增殖情况。结果 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均表达增强（P〈0.05）;miR-421 mimics转染BGC-823后,癌细胞增殖能力增强（P〈0.05）,而miR-421 inhibitors转染的BGC-823细胞则增殖力受到明显抑制（P〈0.05）。结论 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均过表达,而miR-421可能直接或间接参与调控BGC-823胃癌细胞的增殖。     

骨桥蛋白及诱导型一氧化氮合成酶在胃癌中的表达

目的　研究骨桥蛋白在胃癌组织中的表达及其与诱导型一氧化氮合成酶表达的关系。方法　应用免疫组织化学方法检测胃癌组织中骨桥蛋白和诱导型一氧化氮合成酶的表达 ,并进行随访。结果　 66例胃癌组织中骨桥蛋白和诱导型一氧化氮合成酶表达的阳性率分别为 72 .7% ( 4 8/66)、75 .7% ( 5 0 /66) ,骨桥蛋白的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移程度及有无远处转移有关 ,iNOS的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移程度有关。结论　骨桥蛋白在胃癌组织中表达均增强 ,能够作为反映肿瘤的生物学特性 ,评估预后的重要参考指标。骨桥蛋白和iNOS表达有协同作用。     

骨桥蛋白及诱导型一氧化氮合成酶在胃癌中的表达

目的 研究骨桥蛋白在胃癌组织中的表达及其与诱导型一氧化氮合成酶表达的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测胃癌组织中骨桥蛋白和诱导型一氧化氮合成酶的表达，并进行随访。结果 66例胃癌组织中骨桥蛋白和诱导型一氧化氮合成酶表达的阳性率分别为72．7％(48／66)、75．7％(50／66)，骨桥蛋白的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移程度及有无远处转移有关，iNOS的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移程度有关。结论 骨桥蛋白在胃癌组织中表达均增强，能够作为反映肿瘤的生物学特性，评估预后的重要参考指标。骨桥蛋白和iNOS表达有协同作用。     

RU486对前列腺癌细胞增殖相关基因表达的影响

目的:探讨米非司酮(RU486)对人前列腺癌PC-3和LNCap细胞增殖及相关基因Cyclin E、CDK2、p21和p27表达的影响.方法:体外培养前列腺癌PC-3和LNCap细胞,用RU486处理PC-3和LNCap细胞,CCK-8检测对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测对细胞周期的影响;RT-PCR法检测细胞增殖相关基因Cyclin E、CDK2,p21和p27mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞增殖相关蛋白CDK2、pCDK2的表达.结果:RU486对PC-3和LNCap细胞体外增殖均有明显的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;25 μmol/L RU486处理PC-3和LNCap细胞24 h后,2种细胞均被阻滞在G1/S期;不同浓度的RU486处理PC-3和LNCap细胞24 h后,随着RU486浓度的增加,Cyclin E mRNA表达下降,p21和p27 mRNA表达增加,CDK2 mRNA表达无明显变化,但pCDK2表达呈下降趋势.结论:RU486能使前列腺癌LNCap和PC-3细胞周期阻滞在G1/S期,并能通过上调p21和p27 mRNA的表达,下调Cyclin E mRNA及磷酸化的CDK2蛋白而抑制细胞增殖.     

脂肪酸合成酶与ECT骨显像对前列腺癌骨转移的诊断价值

目的:探讨脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASE)与ECT骨显像对前列腺癌骨转移的诊断价值。方法:以同位素全身骨扫描为金标准,对51例前列腺癌骨转移患者和17例非骨转移患者病理标本行FASE的免疫组织化学染色,并探讨FASE与骨转移的关系。结果:FASE阴性者骨转移的发生率极低;FASE弱阳性或阳性者有骨转移可能;FASE强阳性者骨转移的可能性极大。结论:FASE染色强度可预测前列腺癌患者骨转移情况,与ECT骨显像相比无差异性,但能更早的发现,评价预后。     

腺苷基蛋氨酸合成酶表达在紫杉醇诱发的乳腺癌细胞凋亡中的作用探讨

目的研究紫杉醇诱发细胞凋亡的基因调控机制。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术和酶活性检测以及流式细胞术对紫杉醇诱发的人乳腺癌细胞凋亡过程中腺苷基蛋氨酸合成酶基因ｍＲＮＡ水平表达及其生物学功能进行分析。结果紫杉醇处理细胞可使腺苷基蛋氨酸合成酶基因表达逐渐增高,在４８小时时达到高峰。腺苷基蛋氨酸合成酶基因表达上调与抗微管药物紫杉醇和秋水仙碱的细胞毒作用有关。进一步研究发现,１％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）对乳腺癌细胞腺苷基蛋氨酸合成酶活性有降低作用,抑制率为１４％,ＤＭＳＯ后处理不仅对紫杉醇诱导的该酶活性的增高产生抑制,抑制率为３４％,而且促进紫杉醇和秋水仙碱等诱发的细胞凋亡反应。结论ＤＭＳＯ后处理对紫杉醇诱导细胞凋亡反应的增强效应可能与其对腺苷基蛋氨酸合成酶活性抑制有关,该酶表达增高可能在紫杉醇诱发的细胞凋亡过程中起着保护细胞核ＤＮＡ免受裂解的作用。     

转移相关蛋白在前列腺癌组织中的表达及其意义

目的:检测转移相关蛋白P63、CXCR-4和MMP-9在骨转移状态不同的前列腺癌组织及骨转移潜能不同的前列腺癌细胞株中的表达情况,初步分析前列腺癌骨转移的分子学病因及预后指标.方法:采用免疫组织化学及Western blot法检测并分析60例前列腺癌组织(其中发生骨转移30例,未发生骨转移30例),以及骨转移潜能不同的PC-3和PC-3M1E8细胞株中P63、CXCR-4和MMP-9的差异表达情况.结果:免疫组织化学结果表明:CXCR-4和MMP-9在无骨转移组中的阳性表达率为33.3%和40.0%,在骨转移组中的阳性表达率高达73.3%和66.7%,两组差异具有统计学意义;P63在无转移组中的阳性表达率为76.7%,在骨转移组中的表达率为20.0%,两组差异具有统计学意义;Western blot结果表明:CXCR-4和MMP-9在PC-3中均表达缺失(灰度值均为0),在PC-3M1E8中均高表达(灰度值分别为1.98±0.16和2.31±0.26),P63在PC-3中高表达(灰度值为1.74±0.32),在PC-3M1E8中表达缺失(灰度值为0).结论:CXCR-4和MMP-9与前列腺癌骨转移呈正相关,P63与前列腺癌骨转移呈负相关,这3种蛋白指标的表达水平将有助于判断前列腺癌骨转移潜能及预后.     

PDCD5蛋白联合米非司酮对前列腺癌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的 观察PDCD5蛋白协同米非司酮(MIF)对前列腺癌细胞增殖及相关基因表达的影响.方法 MTT法分别检测10、20、50和100μmol/L MIF作用于PC-3M细胞24～96 h的吸光度(A)值.扩增包含PDCD5序列的真核表达载体PCI-neo-PDCD5,用脂质体介导的方法转染前列腺癌PC-3M细胞.在转染PDCD5的细胞中分别加入10、20 μmol/L MIF,继续培养24 h,MTT比色法检测细胞增殖,RT-PCR方法检测细胞增殖相关基因CyclinDl、Ki-67的表达.结果 MTT实验表明,与对照组相比,10 μmol/L MIF组的A值差异无统计学意义(P<0.05),20、50和100 μmol/L MIF组的A值显著降低(P<0.05),MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈剂量依赖性;PDCD5真核表达载体成功转染PC-3M细胞并得到了瞬时表达,转染PCI-neo-PDCD5并加入MIF后,与对照组及单独应用MIF组相比,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),增殖相关基因CyclinD1、Ki-67表达降低.结论 PDCD5蛋白能够协同米非司酮抑制前列腺癌PC-3M细胞增殖,可能是通过调节某些增殖相关基因的表达来实现的,并有望成为前列腺癌的辅助治疗药物.     

下调Ezrin表达对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响

 目的研究Ezrin蛋白对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响。方法采用前列腺癌PC-3细胞系作为研究对象,针对Ezrin蛋白的编码序列设计小干扰RNA片段,重组为shRNA表达载体转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆,RT-PCR和Western blot分别检测Ezrin在基因和蛋白水平表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化。结果PCR和Western blot显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著的下调作用,转染后的前列腺癌细胞生长速度明显减慢,细胞周期显示处于分裂期的细胞比例由(24.58±4.23)%下降到(18.65±2.21)%,处于G1期的细胞数量则由(58.69±3.48)%上升到(66.54±4.13)%。穿过人工基底膜的细胞数量也由(38.6±5.4)减少为(24.5±2.7)(P<0.01)。结论Ezrin对于前列腺癌细胞的增殖和运动能力有重要影响,可能成为肿瘤治疗的重要靶点。