TAN通过Galectin-9及其配体Tim-3途径促进子宫内膜癌细胞迁移、侵袭及血管生成

目的:探究肿瘤相关中性粒细胞（tumor associated neutrophil,TAN）对子宫内膜癌（endometrial cancer,EC）进展的影响,并初步研究相关的分子机制。方法:免疫组织化学染色检测15例子宫内膜癌患者肿瘤组织及癌旁组织内半乳糖凝集素9（Galectin-9）及其受体T细胞免疫球蛋白结构域分子3（Tim-3）、TAN的表达,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot检测组织内Galectin-9与Tim-3在mRNA和蛋白上的表达水平;从患者血液中分离TAN细胞,通过瑞士-吉姆萨染液染色和流式细胞术进行鉴定;建立人子宫内膜癌Ishikawa细胞与TAN细胞共培养体系,并用Tim-3/Galectin-9信号竞争性拮抗剂α-lactose或rhGAL-9培养Ishikawa细胞,CCK-8检测Ishikawa细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移与侵袭能力,体外血管生成实验检测细胞血管生成情况,免疫荧光染色检测细胞内Galectin-9与Tim-3的荧光表达。结果:子宫内膜癌组织内Galectin-9和Tim-3均呈高表达,且存在中性粒细胞浸润现象;从患者血液中成功分离到TAN;Ishikawa细胞与TAN细胞共培养后,Ishikawa细胞增殖活性升高,迁移数目与侵袭数目均增加,形成血管的管道分支数目增加,Galectin-9与Tim-3的平均光密度值升高（P＜0.01）;在Ishikawa细胞与TAN细胞共培养体系中添加40 μmol/L α-lactose处理后,Ishikawa细胞增殖活性下降,迁移数目与侵袭数目均减少,血管管道分支数目也减少,Galectin-9与Tim-3的平均光密度值降低（P＜0.01）;而在Ishikawa细胞与TAN细胞共培养体系中添加2.0 μg/mL rhGAL-9作用后,Ishikawa细胞增殖活性升高,迁移数目与侵袭数目均明显增加,血管管道分支数目增加,同时,Galectin-9与Tim-3的平均光密度值升高（P＜0.01）。结论:肿瘤相关中性粒细胞能够提高子宫内膜癌细胞增殖活性,促进肿瘤细胞的迁移、侵袭以及血管生成,其分子机制可能与调控Galectin-9及其受体Tim-3表达相关。     

JAK/STAT3和MAPK/ERK在乳腺癌细胞侵袭转移中的交互作用及意义

目的研究应用JAK酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231 STAT3和ERK磷酸化的影响,初步探讨JAK/STAT3和MAPK/ERK两条信号转导通路的交互作用以及在乳腺癌细胞侵袭转移中的调控意义。方法以JAK酶抑制剂AG490处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,Western blot检测细胞中P-STAT3、P-ERK蛋白水平变化;RT-PCR检测细胞中STAT3、ERK1、ERK2mRNA的变化;明胶酶谱法检测细胞分泌MMP-2、MMP-9的变化,Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验。结果应用JAK酶抑制剂AG490后人乳腺癌细胞MDA-MB-231中P-STAT3、P-ERK蛋白均减少,STAT3、ERK1、ERK2mRNA表达下降,同时可使细胞分泌MMP-2、MMP-9减少,使细胞侵袭、迁移能力降低。结论JAK/STAT3和MAPK/ERK两条信号转导通路之间存在交互作用,通过JAK酶抑制可改变转录因子STAT3和激酶ERK磷酸化水平,进而可以交互影响其基因转录的表达。JAK酶抑制对两条信号转导通路的激活有阻断作用而可以抑制乳腺癌细胞的侵袭转移。     

红景天苷通过JAK2/STAT3 通路影响宫颈鳞癌C33A细胞的增殖、侵袭和凋亡

目的：观察红景天苷对宫颈鳞癌C33A细胞增殖、侵袭及凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法：将C33A细胞分为4 组：对照组、低剂量组（红景天苷50 μg/ml）、高剂量组（红景天苷150 μg/ml）、抑制剂AG490 组（JAK2/STAT3 信号通路抑制剂AG490 50 μmol/L）,采用MTT 法、EdU 标记实验、Transwell 实验、Rh123 染色和流式细胞术分别检测红景天苷和AG490 对C33A 细胞增殖、侵袭和凋亡的影响,Western blotting 检测红景天苷和AG490 对C33A 细胞中JAK2/STAT3 通路相关蛋白（p-JAK2、p-STAT3）和凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、caspase-3）表达的影响。结果：与对照组相比,低剂量组C33A细胞的增殖和DNA的合成明显受到抑制（均P<0.05）、侵袭能力明显降低（均P<0.05）、Rh123 荧光强度明显减弱（均P<0.05）、线粒体膜结构受到破坏、细胞凋亡率明显增加（均P<0.05）;p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2 水平显著下降（均P<0.05）、Bax、caspase-3 的表达水平显著升高（P<0.05）;与低剂量组相比,高剂量组、抑制剂组对C33A细胞增殖、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的影响更为显著（P<0.05）;而高剂量组、抑制剂组间无显著差异。结论：红景天苷可以抑制C33A细胞的增殖和侵袭、促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3 信号通路有关。     

微小RNA-526b-3p通过JAK/STAT3信号通路对黑色素瘤细胞侵袭迁移的影响

目的 探讨微小RNA-526b-3p(miR-526b-3p)对黑素瘤细胞侵袭与迁移的影响及潜在机制。方法 实时定量PCR(qPCR)检测黑色素瘤组织和A2058细胞中miR-526b-3p和信号转导子与激活子3(STAT3)的表达水平，双荧光素酶报告基因实验验证miR-526b-3p和STAT3的靶向关系。成功构建miR-526b-3p模拟物(mimics)和过表达STAT3的质粒pcDNA3.1-STAT3后进行转染，将A2058细胞分为miR-NC组(对照)、miR-526b-3p mimics组(过表达miR-526b-3p)、miR-526b-3p mimics+pcDNA3.1-STAT3组(过表达miR-526b-3p和STAT3)。采用CCK-8法检测细胞增殖，划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭；运用qPCR和Western blot方法检测miR-526b-3p和JAK/STAT3信号通路相关基因STAT3和p-JAK1的表达水平。结果 黑色素瘤组织和细胞中miR-526b-3p表达下调，而STAT3表达上调(P<0.05)。相较于miR...     

神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间STAT3信号的交互作用

目的： 探讨神经胶质瘤细胞（A172/U251）与人血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell, HBMEC)之间STAT3信号通路的交互作用。方法：建立A172、U251细胞与HBMEC的Transwell共培养体系,ELISA检测A172、U251细胞及其分泌因子VEGF对HBMEC分泌IL-6的影响,Western blotting检测HBMEC与A172/U251细胞共培养30 min时HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞STAT3蛋白及其磷酸化状态p-STAT3的影响,CCK-8、Transwell侵袭实验分别检测HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞增殖和侵袭的影响。结果：VEGF(50 ng/ml) 组和共培养组（HBMEC分别和A172,U251细胞共培养） HBMEC的IL-6的表达量明显高于对照组(P<0.01)。共培养30 min时,A172/U251细胞的IL-6(50 ng/ml)组、共培养组及（共培养+AZD1480）组的STAT3/p-STAT3蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01),（共培养+AZD1480）组的胶质瘤细胞STAT3/p-STAT3蛋白的表达能力显著低于共培养组(P<0.01)。IL-6(50 ng/ml)组,共培养组及（共培养+AZD1480）组的A172/U251细胞增殖及侵袭能力明显高于对照组(P<0.01),（共培养+AZD1480）组的细胞增殖及侵袭能力显著低于共培养组(P<0.01)。结论：神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间存在信号交互作用,且与JAK2/STAT3信号通路密切相关。     

沉默SEMA4D对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制

目的:研究沉默SEMA4D对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响,并探索其作用机制。方法:体外培养人骨肉瘤HOS和U2OS细胞并转染SEMA4D-siRNA（si-SEMA4D）。采用CCK-8、Annexin-V/PI双染、Caspase 3/7活性细胞凋亡、Transwell实验检测si-SEMA4D对细胞增殖、凋亡和侵袭等的影响。结果:SEMA4D在骨肉瘤组织和细胞中高表达。转染si-SEMA4D可有效地抑制HOS和U2OS细胞中SEMA4D的表达,同时转染si-SEMA4D显著降低了HOS和U2OS细胞的增殖能力和侵袭能力,诱导了HOS和U2OS细胞的凋亡。此外,转染si-SEMA4D显著抑制了MMP2/9、RhoA、ROCK1/2的表达。结论:SEMA4D在骨肉瘤组织和细胞中表达上调。抑制SEMA4D可能通过调控RhoA-ROCK信号通路和MMP2/9的表达诱导骨肉瘤细胞凋亡并抑制细胞增殖和侵袭。     

微小RNA-375对鼻咽癌细胞侵袭迁移及JAK2／STAT3 信号通路的影响

目的 探讨微小RNA-375（miR-375）调节鼻咽癌细胞侵袭、迁移的作用及对Janus激酶2／信号转导与转录激活子3（JAK2／STAT3）信号通路的靶向调控。方法 选取鼻咽癌CNE-1细胞并采用Lipofectamine 2000脂质体分别转染miR-375模拟物（miR-375组）和miR-375 阴性对照（NC组）,同时设不行转染的CNE-1细胞为对照组,采用实时荧光定量 PCR（QPCR）检测转染48 h各组miR-375的表达情况;划痕实验和Transwell 小室实验分别检测各组细胞的迁移能力和侵袭能力变化;Western blotting检测JAK2／STAT3信号通路中JAK2、STAT3蛋白的变化情况。结果 QPCR检测显示,miR-375在miR-375组的表达量为10.74±1.21,高于NC组的1.09±0.14和对照组的1.12±0.17,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR-375组的细胞迁移率为（18.22±1.78）％,低于对照组的（43.67±2.60）％和NC组的（49.70±1.31）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。miR-375组的穿膜细胞数为（45.76±4.34）个,亦低于对照组的（144.98±3.65）个和NC组的（126.23±6.32）个,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR 375组JAK2、STAT3蛋白的表达水平分别为0.31±0.6和0.27±0.05,均低于对照组的0.54±0.05和0.41±0.06以及NC组的0.50±0.06和0.43±0.07（P＜0.05）,NC组和对照组以上指标的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 上调miR-375表达可抑制CNE-1细胞的侵袭和迁移能力,可能与抑制JAK2／STAT3 信号通路的激活有关。     

丙泊酚抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化及其机制探讨

目的:探究丙泊酚对白细胞介素-6（IL-6）诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化（EMT）的作用及机制。方法:将A549细胞随机分成四组:对照组、IL-6组（50 ng/ml重组IL-6蛋白）、IL-6+丙泊酚低剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和5 μmol/L丙泊酚）、IL-6+丙泊酚高剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和10 μmol/L丙泊酚）。MTT法检测细胞活力，Transwell检测细胞迁移情况，Real-time PCR方法检测EMT相关基因（E-cadherin、Vimentin和Snail1）mRNA的表达水平，Western blot检测EMT相关蛋白及JAK2和STAT3的磷酸化表达水平。使用0.5 μmol/L STAT3激活剂colivelin处理细胞，检测其对丙泊酚调节的IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响。结果:与对照组相比，IL-6组中细胞的活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均增加（P均<0.05）；与IL-6组相比，IL-6+丙泊酚组中细胞活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均降低（P均<0.05），这些变化均具有剂量依赖性。STAT3激活剂能够减弱丙泊酚对IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响（P均<0.05）。结论:丙泊酚能够抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞EMT进程，这种作用是通过抑制JAK2/STAT3的活化发挥作用的。     

JAK2/STAT3 targeted therapy suppresses tumor invasion via disruption of the EGFRvIII/JAK2/STAT3 axis and associated focal adhesion in EGFRvIII-expressing glioblastoma

Background

As a commonly mutated form of the epidermal growth factor receptor, EGFRvIII strongly promotes glioblastoma (GBM) tumor invasion and progression, but the mechanisms underlying this promotion are not fully understood.

Methods

Through gene manipulation, we established EGFRvIII-, wild-type EGFR-, and vector-expressing GBM cells. We used cDNA microarrays, bioinformatics analysis, target-blocking migration and invasion assays, Western blotting, and an orthotopic U87MG GBM model to examine the phenotypic shifts and treatment effects of EGFRvIII expression in vitro and in vivo. Confocal imaging, co-immunoprecipitation, and siRNA assays detected the focal adhesion-associated complex and their relationships to the EGFRvIII/JAK2/STAT3 axis in GBM cells.

Results

The activation of JAK2/STAT3 signaling is vital for promoting migration and invasion in EGFRvIII-GBM cells. AG490 or WP1066, the JAK2/STAT3 inhibitors, specifically destroyed EGFRvIII/JAK2/STAT3-related focal adhesions and depleted the activation of EGFR/Akt/FAK and JAK2/STAT3 signaling, thereby abolishing the ability of EGFRvIII-expressing GBM cells to migrate and invade. Furthermore, the RNAi silencing of JAK2 in EGFRvIII-expressing GBM cells significantly attenuated their ability to migrate and invade; however, as a result of a potential EGFRvIII-JAK2-STAT3 activation loop, neither EGFR nor STAT3 knockdown yielded the same effects. Moreover, AG490 or JAK2 gene knockdown greatly suppressed tumor invasion and progression in the U87MG-EGFRvIII orthotopic models.

Conclusion

Taken together, our data demonstrate that JAK2/STAT3 signaling is essential for EGFRvIII-driven migration and invasion by promoting focal adhesion and stabilizing the EGFRvIII/JAK2/STAT3 axis. Targeting JAK2/STAT3 therapy, such as AG490, may have potential clinical implications for the tailored treatment of GBM patients bearing EGFRvIII-positive tumors.     

通讯作者：花宝金(1964-),男,黑龙江人,主任医师,博士研究生导师,研究方向: 中医药防治肿瘤复发转移。稿件联系人：蒋树龙,E-mail:jnsljiang@163.com。联系电话：13506383007。

【】　目的：总结JAK2/STAT3/SOCS3信号通路的作用特点及其与肿瘤转移潜能的最新研究进展。方法：应用PubMed及CNKI期刊全文数据库,以“JAK2、STAT3、SOCS3、肿瘤和信号转导”为关键词,检索2000-01~2013-10的相关文献,共检索到英文文献343篇,中文文献66篇。文献纳入标准：１)JAK2/STAT3/SOCS3信号通路的生物学特征及作用机制;２)JAK2/STAT3/SOCS3信号通路与肿瘤微环境的关系及其与肿瘤侵袭转移之间的内在联系。根据纳入标准符合条件的30篇。结果：JAK2/STAT3信号通路的激活参与了肿瘤发生、发展、侵袭和转移等多个环节;SOCS3负性调控JAK2/STAT3通路,从而抑制肿瘤的增殖和生长;STAT3信号通路的激活促成了肿瘤炎性微环境的形成,参与了肿瘤血管生成、上皮间质转化(EMT)、细胞外基质(ECM)降解等多个环节,在肿瘤的侵袭和转移过程中发挥重要作用。结论：JAK2/STAT3/SOCS3信号通路与肿瘤转移密切相关,针对JAK2/STAT3/SOCS3信号通路多靶点干预是肿瘤防治研究的一个新方向。     

环孢素A调控自噬诱导肿瘤相关巨噬细胞极化干预子宫内膜癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究环孢素A（CsA）对肿瘤相关巨噬细胞极化的调控作用及其与子宫内膜癌（EC）细胞恶性生物学行为之间的联系,并初步探讨相关机制。方法:采用佛波酯（PMA）和白细胞介素-4（IL-4）诱导THP-1细胞向具有肿瘤相关巨噬细胞极化分型特点的M2样巨噬细胞分化,分别以50、100、150、200 ng/mL CsA处理诱导后的细胞24 h,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测CD86和CD206表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测诱导型一氧化氮合酶 （iNOS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β)、重组人精氨酸酶1（Arg-1)的mRNA相对表达量。将人子宫内膜癌Ishikawa细胞随机分为4组并进行相应处理:对照组,Ishikawa细胞加入细胞培养液培养24 h;CsA组,200 ng/mL CsA干预Ishikawa细胞24 h;肿瘤相关巨噬细胞（TAM）组,肿瘤相关巨噬细胞培养液上清干预Ishikawa细胞24 h;CsA+TAM组,经200 ng/mL CsA处理肿瘤相关巨噬细胞的培养液上清干预Ishikawa细胞24 h。处理结束后,CCK-8法检测细胞活性,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blotting检测自噬相关蛋白表达,免疫荧光染色检测自噬标记物LC3表达,透射电子显微镜观察自噬体形成。结果:经过不同浓度CsA处理肿瘤相关巨噬细胞后,细胞存活率未发生变化（P＞0.05）,而细胞中CD86表达增加、CD206表达下降,iNOS、TNF-α的mRNA相对表达量升高,TGF-β、Arg-1的mRNA相对表达量降低（P＜0.01）;与对照组比较,CsA组Ishikawa细胞存活率下降,迁移数目与侵袭数目减少,细胞凋亡率增加,Beclin-1蛋白表达下降、p62蛋白表达增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下调,LC3荧光表达减弱,细胞内未见自噬体,而TAM组细胞迁移数目与侵袭数目增加,细胞凋亡率减少,Beclin-1蛋白表达增加、p62蛋白表达下降,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,LC3荧光表达增强,细胞内自噬体数目较多（P＜0.01）;与TAM组比较,CsA+TAM组细胞存活率下降,迁移数目与侵袭数目减少,细胞凋亡率增加,Beclin-1蛋白表达下降、p62蛋白表达增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下调,同时,LC3荧光表达减弱,细胞内自噬体减少（P＜0.01）。结论:CsA通过调控肿瘤相关巨噬细胞的极化,抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移与侵袭能力,其机制可能与细胞自噬水平相关。     

顺阿曲库铵通过miR-526b-3p/FMNL3通路抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨顺阿曲库铵对胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:选取2019年1月至2022年1月胃癌手术切除组织及癌旁正常胃黏膜组织30例。实验设置对照组（正常培养）、顺阿曲库铵低（10 mmol/L）、中（20 mmol/L）、高（30 mmol/L）浓度组、miR-NC组、miR-526b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-526b-3p组、Cis+anti-miR-NC组、Cis+anti-miR-526b-3p组。Cis+anti-miR-NC组、Cis+anti-miR-526b-3p组分别转染miR-526b-3p阴性对照质粒、miR-526b-3p抑制剂后用30 mmol/L顺阿曲库铵处理。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖抑制率;Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-526b-3p和FMNL3 mRNA表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-526b-3p和FMNL3的靶向关系。结果:胃癌组织中miR-526b-3p表达水平低于正常组织,FMNL3蛋白及mRNA表达水平高于正常组织（P＜0.05）。与对照组相比,顺阿曲库铵低、中、高浓度组胃癌AGS细胞中细胞增殖抑制率升高,迁移和侵袭细胞数降低,miR-526b-3p表达水平升高,FMNL3 mRNA和蛋白表达水平降低,且呈浓度依赖性（P＜0.05）。miR-526b-3p过表达抑制胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-526b-3p靶向调控FMNL3的表达,抑制miR-526b-3p表达逆转了顺阿曲库铵对胃癌AGS细胞的抑制作用。结论:顺阿曲库铵可抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-526b-3p和FMNL3有关。