瘦素促血管新生作用机制的探讨

目的:研究瘦素(leptin)对脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移和管状结构形成能力的影响.方法:半定量RT-PCR检测HIF-1α、VEGF Mrna的表达,蛋白质印迹法检测HIF-1α和VEGF蛋白的表达.结果:10 ng/Ml leptin呈现促增殖效应.OD值为0.572±0.027,明显高于对照组的0.284±0.031(P<0.05);10 ng/Ml瘦素迁移率为(21.1±0.32)%,明显高于对照组的(9.99±0.43)%,P<0.05;管状结构的总长度为(5.8±0.5)mm,对照组无管状结构形成,P<0.05.瘦素呈剂量依赖性的上调HU-VECs HIF-1α和VEGF蛋白表达,最大诱导效应发生在1 μg/Ml,对照组不表达;HIF-1α和VEGF Mrna上调直接导致HIF-1α和VEGF蛋白合成增加,对照组的缺氧模拟剂CoCl2对HIF-1α Mrna表达无影响.结论:瘦素通过促进HUVECs增殖、迁移和体外血管形成等作用促进血管新生.瘦素的促血管新生作用能够在转录和翻译水平上调HIF-1α表达,进而转录激活VEGF表达有关.     

STAT3和VEGF-C在甲状腺癌中表达及其与临床病理特征关系

[目的]探讨STAT3、VEGF-C在甲状腺癌中表达及其与临床病理特征关系。[方法]采用免疫组化SP技术,检测STAT3及VEGF-C在90例甲状腺癌、30例甲状腺腺瘤和瘤旁正常甲状腺组织中表达,分析其与甲状腺癌临床病理特征关系。[结果]在正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤组织及甲状腺乳头状癌组织中,STAT3、VEGF-C表达阳性率逐渐增加,其差异均有统计学意义(P<0.01),且两者存在正相关(r=0.704,P<0.01)。STAT3在甲状腺癌中表达在不同患者年龄、肿瘤大小、肿瘤包膜侵犯、淋巴结转移、临床分期及肿瘤多灶性方面差异有统计学意义。VEGF-C在甲状腺癌中表达在不同甲状腺癌大小、肿瘤包膜侵犯、淋巴结转移及肿瘤多灶性方面差异有统计学意义。[结论]对甲状腺癌进行STAT3和VEGF-C检测,有助于判断肿瘤的侵袭和转移情况。     

STAT5、VEGF 和 EGFR 在非小细胞肺癌中表达的相关研究

目的：检测信号转导与转录激活因子5（STATS）、血管内皮生长因子（VEGF）和表皮生长因子受体（EGFR）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况,探讨三者与NSCLC临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组化（sP）法检测62例NSCLC及30例癌旁正常对照组织中STAT5、VEGF和EGFR的表达情况。结果：STAT5、VEGF及EGFR在NSCLC组织中的阳性表达明显高于肺正常组织（P〈0．05）;STAT5阳性表达与NSCLC分化程度、有／无淋巴结转移及TNM分期无关（P〉0．05）,而与组织学类型有关（P〈0．05）;EGFR阳性表达与NSCLC组织学类型、分化程度无关（P〉0．05）,而与有／无淋巴结转移及TNM分期有关（P〈0．05）;VEGF阳性表达与NSCLC组织学类型无关（P〉0．05）,而与分化程度、有／无淋巴结转移及TNM分期有关（P〈0．05）。结论：STATS、VEGF及EGFR可能在肺癌的发生、侵袭和转移中起重要的作用,抑制其过度表达可望成为阻止肿瘤细胞的生长和转移的新靶点。     

非小细胞肺癌血管新生与血管内皮生长因子和血小板反应蛋白表达的关系

我们采用免疫组化技术研究非小细胞肺癌(NSCLC)血管新生与血管内皮生长因子(VEGF)和血小板反应蛋白(TSP)-1表达的关系，了解。NSCLC血管新生的可能机制。     

circRNA-NDUFA10抑制膀胱癌血管新生的机制研究

目的 揭示circNDUFA10(has＿circ＿0001118)在膀胱癌组织中的表达情况,并进一步探究其是否通过调控第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)/人血管内皮生长因子A(VEGF-A)信号通路抑制膀胱癌血管新生。方法 收集2016-08-02-2018-07-26于中山大学孙逸仙纪念医院行根治性膀胱切除术的膀胱癌患者癌组织和配对癌旁正常组织标本62例,qRT-PCR检测circNDUFA10在临床组织标本及人正常膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)和人膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3和5637)的表达。选取T24和UM-UC-3细胞进行siRNA转染以沉默circNDUFA10的表达,分别获得si-NC组、si-circNDUFA10#1组和si-circNDUFA10#2组。成管实验和Transwell实验分别检测各组细胞成管长度及细胞迁移情况。RNA pull-down实验检测miR-20b-5p与circNDUFA10的结合情况。选取T24和UM-UC-3细胞进行inhibitor和siRNA转染,分别获得NC inhib...     

基于网络药理学的防己黄芪汤治疗乳腺癌机制探讨

目的:对防己黄芪汤进行网络药理学分析，探讨该方治疗乳腺癌的潜在靶点及作用机制。方法:通过TCMSP等数据库建立防己黄芪汤有效成分和靶点数据集，利用GeneCards数据库及OMIM数据库建立乳腺癌相关靶点数据集，并与中药靶点数据相匹配。通过STRING数据库分析关键靶点蛋白间的相互作用关系，并利用生物学信息注释数据库进行靶点基因本体（GO）生物过程分析以及京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析，运用Cytoscape 3.6.0软件进行活性成分-疾病靶点的网络分析。结果:共发现防己黄芪汤治疗乳腺癌有108个可能的重要靶点，包括IL-6、ALB、CASP3、VEGFA、EGFR等；GO富集分析得到与乳腺癌相关的118个细胞生物学过程（P＜0.05）；KEGG富集分析得到与乳腺癌相关的113条通路（P＜0.05），包括细胞凋亡、TNF信号通路等。体外实验表明防己黄芪汤具有诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用，部分验证了网络药理学的预测结果。结论:防己黄芪汤对乳腺癌的治疗作用可能是多靶点、多途径、多机制的，本研究结果为防己黄芪汤的临床应用提供了更多证据支持。     

重组内皮抑素对肿瘤血管结构和乏氧改善作用的实验观察

目的 观察重组内皮抑素作用下小鼠Lewis肺癌移植瘤在血管退化前是否存在血管正常化时间窗,在此时间窗内肿瘤乏氧是否改善.方法 激光共聚焦显微镜动态观察重组内皮抑素作用下肿瘤血管的形态学变化,免疫组化染色检测不同时间段肿瘤乏氧细胞比例,观测肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线.结果 重组内皮抑素处理后肿瘤血管密度逐渐下降,连续治疗9 d较对照组下降最为明显.重组内皮抑素处理后周细胞覆盖内皮细胞比例逐渐增加,第3天开始明显增加,第5天增加最明显,第7天后明显下降.对照组基底膜与内皮细胞连接松散,厚度增加,而重组内皮抑素处理后,基底膜与内皮细胞连接紧密,厚度下降.在重组内皮抑素处理后第5天肿瘤乏氧细胞比例下降最明显,连续5 d用重组内皮抑素,肿瘤生长未见加快.结论 重组内皮抑素能使肿瘤血管正常化,其时间窗为治疗后3～7 d;此时肿瘤氧供明显改善,为临床联合应用放疗和重组内皮抑素提供了实验依据.

Abstract：

Objective To investigate whether recombinant human endostatin can create a time window of vascular normalization prior to vascular pruning to alleviate hypoxia in Lewis lung carcinoma in mice. Methods Kinetic changes in morphology of tumor vasculature in response to recombinant human endostatin were detected under a confocal microscope with immunofluorescent staining in Lewis lung carcinomas in mice. The hypoxic cell fraction of different time was assessed with immunohistochemical staining . Effects on tumor growth were monitored as indicated in the growth curve of tumors . Results Compared with the control group vascularity of the tumors was reduced over time by recombinant human endostatin treatment and significantly regressed for 9 days. During the treatment, pericyte coverage increased at day 3, increased markedly at day 5, and fell again at day 7. The vascular basement membrane was thin and closely associated with endothelial cells after recombinant human endostatin treatment, but appeared thickened, loosely associated with endothelial cells in control tumors. The decrease in hypoxic cell fraction at day 5 after treatment was also found. Tumor growth was not accelerated 5 days after recombinant human endostatin treatment. Conclusions Recombinant human endostatin can normalize tumor vasculature within day 3 to 7, leading to improved tumor oxygenation. The results provide important experimental basis for combining recombinant human endostatin with radiation therapy in human tumors.     

食管鳞癌细胞系中STAT3的激活及VEGF和Bcl-2的表达

目的：探讨信号转导子及转录活化子3（STAT3）在食管鳞癌细胞系中的激活情况以及STAT3与其下游靶基因产物VEGF和Bcl～2的表达情况方法：采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞系中STAT3及p-Stat3（STAT3蛋白的活化形式），VEGF和Bcl-2蛋白的表达情况，并采用凝胶电泳迁移率（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）法检测两株食管鳞癌细胞核中STAT3与DNA的结合活性结果：食管鳞癌细胞中存在激活的STAT3信号传导通路，通路蛋白STAT3、p-STAT3及其下游靶基因产物VEGF．Bcl-2在细胞中均有表达，蛋白在细胞核中具有较高的DNA结合活性结论：两种食管鳞癌细胞系中均有组成性激活的STAT3信号通路，提示STAT3信号通路可能在食管鳞癌发生、发展中起重要作用。     

结直肠癌组织STAT3和MMP-9表达及其与血管生成相关性的研究

目的:探讨结直肠癌组织中信号转导与转录激活因子3(STAT3)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及其与血管生成的相关性。方法:应用免疫组化SP法检测60例结直肠癌组织和20例癌旁正常组织中STAT3和MMP-9的表达,以及CD-105标记的微血管密度(MVD)情况。结果:STAT3和MMP-9在结直肠癌组织中阳性表达率分别为61.7%和73.3%,明显高于癌旁正常组织的30.0%和35.0%,P值均<0.05。癌组织中MVD值为36.02±9.74,明显高于癌旁正常组织11.25±7.35,t=11.97,P<0.01。癌组织中STAT3和MMP-9均阳性表达时MVD值明显高于均阴性组或单一阳性组,P值均<0.01。STAT3、MMP-9和MVD三者均与肿瘤分化程度、Duke分期、淋巴结转移及肝转移相关,P值均<0.05;而与年龄、性别及肿瘤大小无关,P值均>0.05。结论:STAT3、MMP-9及MVD的高表达与结直肠癌的浸润及转移有关,联合检测3项指标对判断结直肠癌的侵袭转移及预后有重要意义。     

PSTAT3和VEGF蛋白在肾癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨磷酸化信号转导及转录活化因子( PSTAT3)和血管内皮生长因子(VEGF)在肾癌组织中的表达.方法 应用免疫组织化学法检测56例肾癌组织及10例正常肾组织中PSTAT3和VEGF的表达,并分析两者与各临床病理参数之间的关系.结果 肾癌组PSTAT3和VEGF的阳性表达率均高于正常组,比较差异均有统计学意义(...     

Modulating Antiangiogenic Resistance by Inhibiting the Signal Transducer and Activator of Transcription 3 Pathway in Glioblastoma

Determining the mechanism of treatment failure of VEGF signaling inhibitors for malignant glioma patients would provide insight into approaches to overcome therapeutic resistance. In this study, we demonstrate that human glioblastoma tumors failing bevacizumab have an increase in the mean percentage of p-STAT3-expressing cells compared to samples taken from patients failing non-antiangiogenic therapy containing regimens. Likewise, in murine xenograft models of glioblastoma, the mean percentage of p-STAT3-expressing cells in the gliomas resistant to antiangiogenic therapy was markedly elevated relative to controls. Administration of the JAK/STAT3 inhibitor AZD1480 alone and in combination with cediranib reduced the infiltration of VEGF inhibitor-induced p-STAT3 macrophages. Thus, the combination of AZD1480 with cediranib markedly reduced tumor volume, and microvascular density, indicating that up regulation of the STAT3 pathway can mediate resistance to antiangiogenic therapy and combinational approaches may delay or overcome resistance.     

乳腺癌血管生成图像分析定量研究

目的探讨乳腺癌肿瘤血管生成与淋巴结转移的生物学行为关系。方法在９２例原发性乳腺浸润性导管癌术后病例的石蜡包埋肿瘤组织标本中,应用免疫组化方法检测血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）表达程度和新生血管数目,并采用目镜网格测微尺和图像分析系统分别对二者进行定量观察。结果ＶＥＧＦ表达程度与肿瘤新生血管数目之间具有极为显著的正相关关系（Ｐ＜０００１）,新生血管数目随着ＶＥＧＦ表达程度的增高而增加。乳腺癌的淋巴结转移与ＶＥＧＦ表达程度、新生血管数目密切相关,淋巴结转移组的ＶＥＧＦ表达程度及新生血管数目明显高于淋巴结无转移组（Ｐ＜０００５～０００１）。结论ＶＥＧＦ在原发性乳腺癌的血管生成中起着重要作用,肿瘤的血管生成促进肿瘤的淋巴结转移。     

VEGF及其受体KDR在非小细胞肺癌中的表达及与肿瘤血管形成关系

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（KDR）的表达与非小细胞肺癌（NSCLC）血管形成的关系。方法：分别应用免疫组织化学S-P法和原位分子杂交法检测62例NSCLC组织和16例肺的良性瘤样病变组织中的VEGF和KDR mRNA的表达，并对血管进行染色、计数。结果：62例肺癌组织中46例有VEGF的表达（占74．29％），阳性表达位于肿瘤细胞胞膜及胞质；KDR mRNA在49例中有阳性表达（占79．03％），阳性表达位于肿瘤血管内皮细胞、肿瘤细胞胞膜及胞质。VEGF和KDR mRNA的表达与有无淋巴结转移和临床病理分期密切相关；VEGF和KDR mRNA阳性表达组微血管密度明显高于阴性表达组，P〈0．01。结论：VEGF和KDR的表达与NSCLC的发生、发展和转移可能密切相关，可作为评估NSCLC患者预后的一项指标。     

STAT3在鼻咽癌中的表达特征及其与bcl-2和LMP1表达的关系

目的:探讨鼻咽癌中信号传导和转录激活子3(STAT3)的表达特征及其与bcl2和EB病毒潜在膜蛋白1(LMP1)表达的关系。方法:采用原位杂交和免疫组化法分别检测62例鼻咽癌组织中EB病毒EBER1的表达和STAT3、bcl2和LMP1蛋白的表达。结果:鼻咽癌中EBER1阳性率为1000%(62/62);LMP1阳性率为613%(38/62);STAT3和bcl2阳性癌细胞占癌细胞总数的百分率跨度分别为50%~950%和0~1000%。STAT3与bcl2表达呈正相关,rs=0444,P=0000。STAT3与LMP1表达无显著相关性。结论:鼻咽癌细胞中STAT3呈持续表达状态(即异常激活状态)。STAT3的异常激活可能通过上调bcl2这一抗凋亡基因的表达,从而延长了鼻咽癌细胞的生存时间。     

VEGF及其受体KDR在非小细胞肺癌中的表达及与肿瘤血管形成关系

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)血管形成的关系。方法:分别应用免疫组织化学S-P法和原位分子杂交法检测62例NSCLC组织和16例肺的良性瘤样病变组织中的VEGF和KDRmRNA的表达,并对血管进行染色、计数。结果:62例肺癌组织中46例有VEGF的表达(占74·29%),阳性表达位于肿瘤细胞胞膜及胞质;KDR mRNA在49例中有阳性表达(占79·03%),阳性表达位于肿瘤血管内皮细胞、肿瘤细胞胞膜及胞质。VEGF和KDR mRNA的表达与有无淋巴结转移和临床病理分期密切相关;VEGF和KDR mRNA阳性表达组微血管密度明显高于阴性表达组,P<0·01。结论:VEGF和KDR的表达与NSCLC的发生、发展和转移可能密切相关,可作为评估NSCLC患者预后的一项指标。     

Expression of vascular endothelial growth factor in renal cell carcinoma and the relation to angiogenesis and p53 protein expression

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Vascular endothelial growth factor (VEGF) seems to play an important role in tumor angiogenesis. The tumor-suppressor gene p53 has been thought to regulate VEGF expression. We investigated the effect of VEGF expression on renal cell carcinoma (RCC) and the correlation between the expression of VEGF and tumor angiogenesis and p53 protein expression. METHODS: Sixty-two RCCs were examined by immunohistochemical studies with anti-VEGF, anti-p53, and anti-CD34 antibodies. RESULTS: Forty tumors (80.6%) were classified as VEGF positive, and 28 tumors (45.2%) were positive for p53 protein. The microvessel density was 75.3 +/- 33.5. A significant correlation was found between VEGF expression and both the nuclear grade (P < 0.05) and the TNM stage (P < 0.05). The tumors with VEGF expression had a significantly higher microvessel density than those without VEGF expression (P < 0.01). There was no statistically significant correlation between p53 protein and VEGF expression. No statistically significant differences in survival were found to be associated with microvessel density, VEGF expression or p53 protein expression. By using multivariate survival analyses, nuclear grade (P < 0.05) and TNM stage (P < 0.05) were the only independent prognostic factors. CONCLUSIONS: Our data do not show a direct regulation of VEGF expression by p53. We suggest that VEGF expression plays a role in the promotion of angiogenesis in RCC.     

信号传导子及转录激活子3、Nanog基因在食管癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨信号传导子及转录激活子3（STAT3）、Nanog基因在食管癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集本院收治的100例行手术切除的食管癌患者为研究对象。采用免疫组织化学法、Western blot法检测癌组织、癌旁组织中STAT3、Nanog的表达,记录患者临床病理参数并随访。统计分析STAT3、Nanog表达与患者临床病理参数的关系及对患者预后的影响。结果:免疫组化结果显示,STAT3、Nanog蛋白均主要表达于食管癌细胞的胞核及胞质,在癌旁组织中也有少量表达。STAT3在癌组织中的阳性率（56.0%,56/100）显著高于癌旁组织（30.0%,30/100）;Nanog在癌组织中的阳性率（74.0%,74/100）也明显高于癌旁组织（18.0%,18/100）。肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移是影响患者STAT3阳性表达的独立性危险因素,且分化程度越低、TNM分期越晚,STAT3阳性率越高。肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移是影响患者Nanog阳性表达的独立性危险因素,且分化程度越低、N分期、M分期越晚,Nanog阳性率越高。Western blot检测结果显示,STAT3、Nanog的分子量分别为88 kDa、66 kDa,且在癌组织内的表达强度显著高于癌旁组织。随访时间截止至2017年11月30日,全组患者随访3～46个月,中位随访时间12.5个月。STAT3（＋）与STAT3（-）患者的中位生存时间分别为9.5个月、17.8个月,差异具有统计学意义（χ2=16.33,P=0.000）;Nanog（＋）与Nanog（-）患者的中位生存时间分别为7.8个月、16.6个月,差异具有统计学意义（χ2=17.93,P=0.000）。结论:STAT3、Nanog在食管癌患者中阳性率较高,与肿瘤分化程度、TNM分期有一定的关系。与阴性患者相比,STAT3、Nanog阳性表达患者的中位生存时间明显较短,可作为判断患者预后的潜在因子。