阿司匹林抗癌作用的分子生物学机制

近年来阿司匹林的抗肿瘤作用越来越受到关注.阿司匹林可通过抑制环氧合酶,诱导一氧化碳合酶,抑制亚硝酸盐介导的DNA损伤,降低生存素,抑制核转录因子,蛋白酶体以及钙激活中性蛋白酶体基因的表达等机制发挥预防乃至抗癌作用.     

苦参碱对HepG2细胞杀伤作用及机制研究

Objective:To investigate the death mode of human hepatoma cells exposed to matrine and the role of glutathione (GSH) and cytochrome c.Methods:The MTT test and Cell Death Detection ELISA were used to identify cell death mode and viability of cells exposed to matrine.The volume of intracellular GSH was detected by GSH reductase.Finally Western blotting was chosen to analyze the expression of cytochrome c and Caspase-9 in HepG2 cells treated by matrine.Results:The apoptotic cell death induced by matrine in Hep G2 cells dramatically increased in the time-,dose-dependent manner.Matrine can exhaust intracellular GSH effectively to change the redox state in cells.Furthermore it affect the cytotoxicity of matrine.Results of Western blotting showed that matrine induced the release of cytochrome c from mitochondria to cytoplasm,and then stimulate the cleavage of Cespese-9 in a time-dependent manner.Conclusion:Matrine induced apoptosis in Hep G2 cells through the mitochondrial pathway,and oxidative stress via depletion of GSH is directly involved in the apoptotic process.     

高迁移率蛋白A2在肿瘤中的表达及作用机制

高迁移率蛋白A2(HMGA2)是一种非组蛋白染色质相关蛋白,其AT-钩结构能够特异性结合特定的DNA序列,主要功能是作为致癌基因和结构转录因子.HMGA2几乎在所有类型的恶性肿瘤中表达,与肿瘤的形成、发展以及不良预后密切相关.HMGA2在各个生物过程,包括细胞增殖、细胞周期、干细胞自我更新、上皮间质转化及DNA损伤修复中都起到了重要作用.深入研究高迁移率蛋白A2对肿瘤的影响及其作用机制具有重大意义.     

钩藤酸E对人肝癌HepG2细胞的抑制作用及其机制研究

目的:通过体外实验研究钩藤酸E(UAE)抑制人肝癌细胞HepG2的细胞增殖作用,并进一步研究其作用机制.方法:MTT法考察钩藤酸E对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,通过电镜观察细胞微细结构变化,流式细胞术进一步验证细胞凋亡,并检测细胞周期变化.结果:研究发现UAE能抑制HepG2细胞增殖.电镜分析证实UAE引起细胞凋亡.流式细胞术检测细胞凋亡主要发生于G0/G1期.结论:钩藤酸E诱导人肝癌细胞HepG2的细胞增殖,诱导其发生凋亡.     

尿多酸肽对人肺腺癌A549细胞的作用及人肺腺癌A549细胞株E-cadherin基因甲基化的研究

目的探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对人肺腺癌A549细胞的作用及检测人肺腺癌A549细胞株E-cadherin基因甲基化的状况,寻找肺癌治疗的新靶点。方法采用MTT法检测不同浓度尿多酸肽作用下A549细胞的存活率。甲基化特异性PCR(MSP)检测人肺腺癌A549细胞株E-cadherin基因甲基化的状况。结果尿多酸肽显著抑制A549细胞生长,随着剂量的增加其抑制作用增强。A549细胞株存在E-cadherin基因异常甲基化,呈部分甲基化。结论尿多酸肽具有抑制A549细胞生长的作用,A549细胞株存在E-cadherin基因的异常甲基化。     

当归化学成分及抗肿瘤作用机制的研究进展

近年来,随着天然药物化学分离和提纯技术水平的不断提高,以及药理学研究的深入,当归抗肿瘤活性成分作用机制的研究取得了较大进展。对当归有效成分进行研究后,发现其具有抗肿瘤、调节免疫、造血、抗血小板聚集、平喘和镇痛等多种作用。当归抗肿瘤作用机制主要包括抑制肿瘤血管生成、影响肿瘤细胞周期、抑制肿瘤细胞生长和增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、降低黏附性和侵袭力、抑制肿瘤细胞转移、逆转肿瘤耐药和放化疗增敏等。本文通过对国内外相关文献进行系统梳理和归纳,为明确当归抗肿瘤作用机制和新型抗肿瘤药物的研发提供参考。     

没食子酸乙酯对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力及其作用机制研究

目的：研究没食子酸乙酯（EG）对高转移性乳腺癌细胞株黏附、侵袭和迁移能力影响及其作用机制。方法观察EG干预后高转移性乳腺癌MDA-MB-231与对照组相比黏附、侵袭、迁移能力的变化,采用SABC法和实时PCR法检测EG对丝/苏氨酸激酶（AKT-2）和eIF-4E的蛋白表达及mRNA表达的影响。结果加入EG干预的高转移性乳腺癌细胞株的黏附、侵袭和迁移能力均低于对照组（P﹤0.05）;EG组的AKT-2和eIF-4E蛋白表达及mRNA表达量均低于对照组,两组间差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论体外EG能降低MDA-MB-231的侵袭能力,可能与抑制癌细胞中原癌基因和延长因子蛋白以及mRNA的表达有关。     

CD45分子在NK细胞激活中的作用及其分子机制研究

为研究NK细胞表面分子在NK细胞激活及释放细胞园子中的作用及其机制，作者用系列粘附分子单抗、配体及基困转染细胞刺激或共刺激NK细胞．定量检测IFN-γ的分泌。结果表明，CD45分子交联可独立擞话NK细胞，CD45分子的信号传递作用对CD16分子无依赖性。随着NK细胞的成熟与分化．其表面CD45分子的表达呈现RA向RO变化的特征．而RO的交联，对NK细胞的刺激显著强于RA的交联。CD22α和CD22β基因转染细胞能显著粘附NK细胞系NK3.3(RO’)，但并不能有效刺激其产生IFN-γ。作者推测．CD45分子．尤其是CD45RO．是NK细胞表面独特的信号传递分子，通过直接激活Src家横的PTK成员．开启独立的、非CDl6分子参与的NK细胞内信号传递途径。     

热疗对免疫细胞的影响及机制

热疗作为内科常规治疗肿瘤的辅助方法之一,近年来得到了众多研究结果的支持。临床研究结果表明热疗可增强机体的抗肿瘤免疫反应。然而,关于热疗增强机体抗肿瘤作用的免疫机制了解有限,阻碍了热疗像放化疗一样常规应用于临床,而仅是作为肿瘤治疗的辅助疗法。近年来,随着分子生物学及转化医学的发展,热疗的作用机制有了进一步的发展。研究表明:热疗在分子水平上及细胞水平上可引起各类免疫细胞的活化,及免疫细胞数量的增加,从而增强了机体的抗肿瘤反应。     

PARP1对黑素瘤细胞克隆形成的影响及其作用机制

目的:探究聚二磷酸腺苷核糖多聚酶1［poly (ADP-ribose) polymerase 1,PARP1］对黑素瘤细胞克隆形成的影响及可能的作用机制。方法:在黑素瘤A2058细胞系中利用小干扰RNA干涉PARP1表达水平,利用平板克隆形成实验观察干涉PARP1对黑素瘤细胞克隆形成的影响。提取PARP1干涉片段及对照片段转染细胞的总RNA进行全基因组表达谱芯片检测。Realtime RT-PCR对部分差异性基因进行验证。应用DAVID数据库对差异性基因进行GO及KEGG通路富集分析。Realtime RT-PCR对富集分析结果中可疑靶基因进行验证。结果:干涉PARP1表达可显著抑制黑素瘤细胞克隆形成。全基因组芯片结果显示干涉PARP1表达可引起128个基因表达上调,77个基因表达下调。通过Realtime RT-PCR对部分差异表达基因进行验证,结果表明与芯片筛选结果一致。GO和KEGG富集分析结果显示PARP1调控的差异性表达基因在生物学功能及参与的信号通路中存在部分交集,即MAPK信号通路及其正向调控机制。双特异性磷酸酶5（DUSP5）作为MAPK通路中的抑制分子,Realtime RT-PCR证实干涉PARP1可促进其表达水平升高。结论:干涉PARP1可能通过促进DUSP5表达从而抑制MAPK信号通路活性,进而发挥抑制黑素瘤细胞克隆形成的作用。     

Brivanib 对 HepG2细胞的抑制作用及机制

目的：探讨 Brivanib 对人 HepG2肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法：MTS 法检测 Brivanib 对HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测不同浓度 Brivanib 处理后 HepG2细胞的凋亡率,Western blot 检测凋亡相关蛋白 Bcl -2、Bax 的表达情况,免疫荧光观察 Brivanib 处理后 HepG2细胞内源性 LC3表达情况, Western blot 检测自噬关键蛋白 LC - I 向 LC - II 的转换及 p62的表达。结果：与空白对照组相比,Brivanib 对HepG2肝癌细胞的增殖抑制率随剂量增加和时间延长而增加,呈剂量和时间依赖性。不同浓度 Brivanib 作用72h 后 HepG2细胞的凋亡率分别为（13.06±4.06）%、（20.89±1.83）%、（44.29±2.56）%,其诱导凋亡与下调 Bax、上调 Bcl -2表达相关。2.5μmol/ L Brivanib 处理 HepG2细胞48h 后内源性 LC3表达增加。Western blot 分析表明,LC3- I 向 LC3- II 转换增加,p62表达降低。结论：Brivanib 抑制 HepG2人肝癌细胞增殖,诱导凋亡和自噬活化。     

黄芪多糖降低A549/DDP肺腺癌细胞顺铂耐药机制研究

目的:研究黄芪多糖对A549/DDP肺腺癌细胞顺铂耐药的影响及可能机制。方法:将A549/DDP顺铂耐药肺腺癌细胞分为CON组（未行黄芪多糖及顺铂处理）、APS组（仅用黄芪多糖处理）、DDP组（仅用顺铂处理）及A+D组（黄芪多糖联合顺铂处理）,比较四组细胞增殖、细胞周期及凋亡率和耐药基因表达的差异。结果:A+D组细胞d1-d7吸光度、S期、G2/M期和PI均显著低于CON组、APS组和DDP组细胞（均P<0.05）,G0/G1期和凋亡率均显著高于CON组、APS组和DDP组细胞（均P<0.05）;APS组和A+D组细胞MDR1和MRP基因mRNA表达无明显差异（均P>0.05）,且均显著低于CON组和DDP组（均P<0.05）。结论:黄芪多糖可显著改善A549/DDP肺腺癌细胞对顺铂耐药性,可能与黄芪多糖显著降低MDR1和MRP有关。     

肺癌A549细胞诱导RAW264.7破骨细胞分化中AMPK信号通路的作用

目的:探讨AMPK信号通路在体外肺癌细胞诱导破骨细胞分化中的作用。方法:将肺癌A549细胞与RAW264.7细胞共培养后随机分为阴性对照组、阳性对照组、AICAR组,药物干预后行TRAP染色观察破骨细胞的分化,流式细胞仪观察破骨细胞细胞凋亡情况,qPCR检测破骨细胞AMPK、mTOR和CTSK mRNA的表达,Western blot检测破骨细胞AMPK、p-AMPK、mTOR和p-mTOR蛋白的表达。结果:与阴性对照组比较,AICAR组破骨细胞数明显减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）;对诱导破骨细胞凋亡的作用无差异;上调AMPK的mRNA和蛋白表达,下调mTOR的mRNA和蛋白表达,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:AICAR可以抑制肺癌细胞诱导破骨细胞分化,而AMPK/mTOR信号通路可能参与了肺癌细胞诱导破骨细胞分化过程。     

HDAC6对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的:明确HDAC6对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法:应用Western blot技术检测正常肝细胞系LO2和肝癌细胞系HepG2细胞中 HDAC6的表达。应用HDAC6抑制剂Tubastatin A抑制HepG2细胞中HDAC6的表达,运用Western blot及荧光定量PCR技术检测HepG2细胞中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和上皮间充质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关分子标志物（N-cadherin,β-catenin,Vimentin）的表达;用TGF-β1抑制剂SB431542刺激HepG2细胞后,检测HepG2细胞中 EMT标志蛋白的表达,应用TGF-β1刺激HepG2细胞后观察HepG2细胞的形态变化。应用过表达HDAC6的质粒P3-HDAC6、P3-HDAC6+TGF-β1分别作用于HepG2细胞,通过Western blot检测HepG2细胞中EMT相关分子标志物的表达,应用划痕及Transwell技术检测HepG2细胞处理前后的迁移和侵袭能力变化。结果:肝癌细胞系HepG2细胞内HDAC6的蛋白表达量明显低于正常肝细胞系LO2（P＜0.05）。 HepG2细胞Tubastatin A组中N-cadherin、β-catenin、Vimentin、TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平相较于空白对照组明显增高（P均<0.05）。SB431542组中EMT标志蛋白表达水平相较于空白对照组明显降低（P均<0.01）。 TGF-β1刺激HepG2细胞后细胞变得分散且狭长。同时发现P3-HDAC6+TGF-β1组的细胞迁移和侵袭能力在48 h后明显强于P3-HDAC6组且弱于空白对照组（P均<0.05）。结论:HDAC6可通过下调TGF-β1的表达从而抑制HepG2细胞的EMT进而抑制HepG2细胞的迁移和侵袭。     

Twist调控对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响及其机制探讨

目的:探究Twist调控对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响及其机制。方法:从我院2016年3月至2017年3月间确诊的卵巢癌患者中选择75例作为研究组,其中早期14例,中期42例,晚期19例;另随机选择同期来我院体检的健康人75例作为对照组。收集两组患者的卵巢组织,用免疫组化的方法检测Twist、N-cadherin与E-cadherin和MMP-9蛋白的表达情况,用RT-PCR法检测Twist、N-cadherin与E-cadherin、细胞凋亡相关基因（Bcl-2、Bax）mRNA表达水平。结果:研究组患者卵巢组织中的Twist、MMP-9蛋白阳性表达率显著高于对照组患者（P<0.05）;研究组患者卵巢组织中N-cadherin蛋白阳性表达率显著高于对照组患者（P<0.05）,而对照组患者E-cadherin蛋白阳性表达率显著高于研究组患者（P<0.05）;研究组患者卵巢组织中Twist、N-cadherin mRNA表达水平显著高于对照组患者（P<0.05）,对照组患者E-cadherin mRNA表达水平显著高于研究组患者（P<0.05）;研究组患者卵巢组织中Bcl-2 mRNA表达水平显著高于对照组患者（P<0.05）,对照组患者Bax mRNA表达水平显著高于研究组患者（P<0.05）。 结论:Twist在卵巢癌的侵袭与转移中发挥了重要的作用,其参与了上皮间质转化的过程。     

SREBP-1c基因过表达细胞模型的构建及对HepG2细胞脂滴含量的影响

目的：构建SREBP-1c过表达HepG2细胞模型并观察其对脂滴含量的影响,为进一步深入研究肝癌脂滴代谢异常机制提供细胞模型。方法：采用DNA重组技术,将SREBP-1c基因克隆至慢病毒表达载体pLenti 6.3/V5中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带目的基因的质粒pLenti6.3-SREBP-1c共转染293T细胞,收集上清,感染HepG2细胞。通过Real-time PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。采用免疫荧光检测HepG2细胞中脂滴的数量、大小及细胞内甘油三酯的含量。结果：成功构建了过表达SREBP-1c基因的慢病毒载体pLenti6.3-SREBP-1c,转染后HepG2细胞中可见明显的SREBP-1c蛋白表达。Real-time PCR检测结果显示转染SREBP-1c基因的HepG2细胞中SREBP-1c mRNA水平较对照组升高了约11.4倍。Western blot结果显示SREBP-1c蛋白水平较对照组提高3.2倍。免疫荧光显示过表达SREBP-1c能够明显增加HepG2细胞内脂滴的数量和大小。细胞内甘油三酯定量结果显示甘油三酯含量较对照组明显升高（P < 0.01）。结论：成功构建了SREBP-1c基因过表达的重组慢病毒载体及其稳定转染细胞株。高表达SREBP-1c的HepG2细胞增加了细胞中脂滴的数量、大小和甘油三酯的含量,可用于从脂滴代谢方面对肝癌发病分子机制的研究。     

肿瘤中TOB1功能相关的调控及其潜在的临床应用价值

TOB1基因编码蛋白是TOB/BTG抗增殖蛋白家族成员之一,目前已在多种肿瘤中发现TOB1表达下调、磷酸化积累和亚细胞分布异常。诸多研究表明TOB1基因的表达既受多种上游转录因子的调控,又能通过多种途径调控其下游靶基因的表达来影响肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移和凋亡等,与肿瘤的发生发展密切相关。因此,深入探讨肿瘤中TOB1基因表达调控及相关功能改变在临床中的价值具有重要意义。本文旨在阐述TOB1基因及其相关功能的调控机制在临床肿瘤诊疗和预后评估中的潜在应用。     

防己诺林碱对肺癌H1299和A549细胞的作用及其分子机制研究

目的 探究防己诺林碱在肺癌中的作用及其分子机制。方法 MTS法检测经10、15、20、30、40和60 μM/L防己诺林碱处理的肺癌H1299和A549细胞的增殖情况,通过Caspase3、Caspase8和Caspase9活性检测试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况。Western blot检测MAPK信号通路(p-Akt、PI3K、mTOR和Akt蛋白)、增殖和转移(MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1和P21蛋白)、周期和凋亡(Cyclin D2、Bcl2、MCL-1、Bax和p53蛋白)相关蛋白的表达情况,通过Real-time PCR检测PI3k、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2、MCL-1、Bax、Bcl2和TP53基因表达情况。结果 防己诺林碱会抑制肺癌H1299和A549细胞的增殖,诱导细胞凋亡,增加Caspase3、Caspase8和Caspase9酶活性。经防己诺林碱处理后,PI3K、p-Akt、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2蛋白表达降低,P21、MCL-1、Bax和p53蛋白表达升高,并且表现为剂量依赖性,但对Akt蛋白表达无影响;PI3K、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2基因表达降低,TP53、MCL-1和Bax基因表达增加。结论 防己诺林碱通过调控MAPK信号通路、增殖和转移、周期和凋亡相关蛋白和基因的表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。