载银羟基磷灰石抗菌涂层螺钉体内抗菌及成骨性能的实验研究

目的采用银(Ag)作为抗菌剂制备羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)/Ag抗菌涂层,初步探讨其体内抗菌及成骨性能。方法采用真空等离子体喷涂技术在不锈钢外固定螺钉表面制备HA及HA/Ag抗菌涂层(Ag质量百分比为3%)。取成年雄性比格犬18只,体重15～20 kg,制备犬右后肢胫骨骨折模型。根据植入螺钉不同分为两组,分别于胫骨截骨平面远端植入HA/Ag涂层螺钉2枚(实验组,n=18),近端植入HA涂层螺钉2枚(对照组,n=18)。以金黄色葡萄球菌沾染螺钉伤口,通过伤口分级、X线片观察及硬组织切片染色观察钉道感染及涂层螺钉-骨界面情况。结果对照组伤口随时间延长感染程度加重(χ2=13.492,P=0.001),实验组无明显变化(χ2=0.208,P=0.901);术后1、2、3周实验组伤口分级情况均优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后3周激光扫描共聚焦显微镜观察示,两组涂层螺钉表面均有细菌黏附,对照组以绿色活细菌为主,实验组以红色死细菌为主。术后6周硬组织切片扫描电镜观察,对照组涂层螺钉与骨组织之间形成一明显透明带,实验组涂层螺钉与骨组织之间无明显间隙。对照组和实验组骨结合率分别为76.23%±15.54%和93.42%±5.53%,比较差异有统计学意义(t=8.843,P=0.000)。扫描电镜观察示实验组涂层与骨组织间结合紧密,对照组涂层与骨组织间存有明显空隙。结论 HA/Ag涂层螺钉具有良好的抗菌及成骨性能,能起到预防外固定支架螺钉钉道感染和松动的作用。     

载银纳米抗菌复合骨填充材料体外抗菌性能及生物相容性研究

[目的]探讨载银纳米抗菌复合骨填充材料其体外抗菌性能及生物相容性。[方法]采用抑菌环试验、菌落数试验检测材料对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的体外抗菌效果,采用扫描电镜观察材料对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的抗粘附效果。并采用MTT法检测细胞毒性及急性溶血实验评价载银纳米抗菌复合骨填充材料的生物相容性。[结果]抑菌环试验显示第1 d时载银纳米抗菌复合骨填充材料对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌环直径均最大,分别为(23.6±1.14)mm和(18.8±0.84)mm,随后抑菌环直径随时间延长而缩小,抑菌环在金黄色葡萄球菌和大肠杆菌中的持续时间分别为33、24 d;菌落数试验显示细菌与载银纳米抗菌复合骨填充材料接触24 h后,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌率分别为94.18%和85.96%;扫描电镜发现实验组材料表面黏附的细菌明显少于对照组。MTT法测定示载银纳米抗菌复合骨填充材料毒性分级为1级,急性溶血实验示载银纳米抗菌复合骨填充材料溶血率为0.28%。[结论]载银纳米抗菌复合骨填充材料有良好的生物相容性,对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌有明显抗菌作用,无明显细胞毒性和红细胞破坏性。     

载银与载庆大霉素硅灰石涂层体外抗菌性能的对比研究

目的 制备具有长效药物缓释效果的骨科抗菌植入材料表面涂层.方法 采用等离子体喷涂技术在钛合金表面沉积硅灰石涂层.一组试样在浓度为重量百分率5%的硝酸银溶液中浸泡24 h获得载银硅灰石涂层,另一组试样通过与装载庆大霉素的胶原溶液发生接枝反应制得载庆大霉素硅灰石涂层.两种涂层的性能通过抗菌剂体外溶液释放实验、抗会黄色葡萄球菌的抑菌环实验和成骨细胞接触培养毒性实验进行表征.结果 成功制备载银与载庆大霉素硅灰石涂层.载银硅灰石涂层均匀释放银离子达50 d;涂层抗金黄色葡萄球菌能力可维持40 d以上.载庆大霉素硅灰石涂层呈爆发性释放庆大霉素,涂层抗会黄色葡葡球菌能力可以维持18 d.两种涂层均不影响成骨细胞在其表面的黏附、增殖以及碱性磷酸酶活性的表达.结论 载银硅灰石涂层与载庆大霉素硅厌石涂层相比,抗菌剂释放较均匀、抗菌时效较长,更具临床应用前景.     

羟基磷灰石涂层镁合金材料体内降解及生物相容性研究

目的 在家兔股骨髁上植入带羟基磷灰石(HAP)涂层的镁合金材料,观察该材料在家兔体内的降解、骨传导作用、骨诱导作用及其生物相容性.方法 将33只家兔分为3组,分别为对照组、无涂层材料组和带涂层材料组,于术后不同时期通过血清学测试观察家兔体内血清镁浓度的变化,观察材料在体内不良反应情况;通过放射学观察材料植入后的降解和新骨生长;通过组织病理学观察植入此材料后,周围组织和骨骼的变化,观察其降解的时间、过程等;通过不同降解速率的材料植入后的生物学观察,揭示该材料在体内的降解途径、代谢方式以及降解产物在体内的滞留情况,从而获得与骨组织正常生长相适配的降解速率,并评价该材料的生物相容性.结果 该材料植入后无血清镁含量的增高,材料降解产生的镁离子能够正常代谢,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),具备较好的生物相容性.放射学检查示HAP涂层镁合金材料在体内的降解速度缓慢,材料周围有新骨生成.未表面改性的材料在体内降解速度快,材料周围骨组织紊乱,可能有炎症反应发生.通过组织病理学观察,HAP涂层的试样周围有肉芽组织和新生骨小梁生成,未发现严重的肉芽肿胀和炎症反应;而无涂层的试样周围也有肉芽组织和骨小梁生成,但有较明显的肉芽肿胀和淋巴细胞反应.结论 HAP涂层镁合金材料不会造成血清中镁含量增高,可有效控制镁合金植入初期的降解速率,且具备良好的骨传导和骨诱导作用,加速骨组织的愈合.     

羟基磷灰石涂层镁铝合金的体外生物相容性研究

目的：评价羟基磷灰石（HA）涂层镁铝合金（AZ31B）的体外生物相容性。方法实验分为3组：HA涂层AZ31B浸提液组（H组）、阳性对照组（P组）和空白对照组（N组）。将L929细胞与各组混合液培养3、5和7 d,采用WST-1法检测细胞活力并进行细胞毒性分级。各组混合液与稀释兔血混匀,测定吸光度（OD）并计算溶血率。采用各组混合液对白化豚鼠分别进行皮内诱导、局部诱导和激发,观察去除贴敷片24、48、72 h动物激发部位皮肤情况。结果3、5和7dN组和H组细胞毒性反应分级为0级,P组部分细胞毒性反应分级为3级;各时间点H组、N组细胞活力均高于P组,差异有统计学意义（P ＜0.05）。H组、P组和N组OD值分别为（0.004±0.001）、（0.648±0.050）和（0.008±0.003）;H组溶血率为-0.6%,无溶血反应。去除贴敷片24、48、72 h H组皮肤无明显改变,P组可见中度至重度融合性红斑。结论体外实验提示HA涂层镁铝合金具有良好的体外生物相容性。     

羟基磷灰石涂层假体植入的实验研究及应用现状

人工髋关节术后因为假体松动需要再次翻修手术的例数逐年增多，翻修手术的效果明显不如第一次手术，Ｓｔｒｏｍｂｅｒｙ报道８年假体幸存率７５％，有些临床随访结果更不能令人满意。事实上，随着老龄化社会的迫近，越来越多的患者需要进行人工关节置换。对于活动量大的年...     

二氧化锆梯度复合羟基磷灰石的生物相容性研究

目的评价自制的新型骨科生物复合材料--二氧化锆(Zirconia,ZrO2)梯度复合羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)的生物相容性和安全性.方法用化学沉淀法制备ZrO2超细粉和HA粉体后,采用干铺-烧结法制备ZrO2梯度复合HA的新型生物复合材料,分别行以下实验①小鼠急性毒性实验分2组(n=10),分别按50 g/kg注射材料浸提液和生理盐水,观察小鼠毒性表现、死亡数和体重变化.②建立L929细胞生长代谢标准曲线.③细胞毒性实验分3组材料组(材料浸提液)、阳性对照组(0.64%苯酚的培养液)和阴性对照组(RPMI-1640培养液),分别与细胞悬液培养,行细胞形态学观察和相对增殖率(relative proliferation rate,RGR)计算及毒性分级.④体外溶血实验分3组,分别取10 ml材料浸提液、灭菌蒸馏水(阳性对照组)和0.9%生理盐水(阴性对照组),各加入抗凝稀释新鲜兔血0.2 ml,测定溶血率.⑤骨和肌肉内植入实验分4组(n=3),分别于双侧臀部肌肉和股骨外髁处植入生物复合材料,于术后3、6、12和24周处死动物,分别作组织切片和电镜扫描.结果①全身急性毒性实验3周内小鼠无死亡;3 d内各组动物未见中毒症状或不良反应;材料组体重增长3.57±0.49 g,对照组为3.62±0.61 g,差异无统计学意义(P＞0.05).②L929细胞生长代谢标准曲线表明,L929细胞接种量与细胞的增殖代谢率在接种细胞数为1～8×103个/孔范围内呈正直线相关.③细胞毒性实验阳性对照组细胞体变小成圆形,核固缩,贴壁细胞聚集成团,毒性级为Ⅳ级;材料组和阴性对照组细胞形态正常,数量增多,毒性级分别为Ⅰ级和0级;MTT比色法检测,阳性对照组明显低于材料组和阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);阴性对照组与材料组间差异无统计学意义(P＞0.05).④溶血实验阴性对照组的体外溶血率为0,阳性对照组体外溶血率为100%,而材料组的体外溶血率为1.66%,符合ISO规定的溶血率＜5%的标准.⑤兔肌肉和骨内植入实验植入体内后,无明显异物反应;材料与受体骨发生牢固的生物键合,具有良好的骨诱导作用.结论ZrO2梯度复合HA生物复合材料具有良好的生物相容性,适合作为生物骨科材料.     

载银硅灰石涂层抗菌性能实验研究

目的 通过动物实验验证载银硅灰石涂层体内抗菌性能.方法 将22只新西兰大白兔随机分为两组,随机取一侧股骨髁,试验组植入载银硅灰石钛板,对照组植入普通硅灰石钛板.术后第12天于术侧膝关节腔内注射金黄色葡萄球菌(ATCC25923)菌液108CFU.两组实验钛板的抗菌性能经实验兔肛温、体重变化,X线摄片结果,钛板、螺钉、骨...     

骨组织工程细胞支架复合珊瑚羟基磷灰石生物相容性研究

目的研究复合珊瑚羟基磷灰石(CCHA)与成骨细胞的生物相容性。方法将成骨细胞分别和复合骨形态发生蛋白的珊瑚羟基磷灰石(CCHA)、单纯珊瑚羟基磷灰石(CHA)混合培养,检测细胞增殖指数和碱性磷酸酶(ALP)活性。结果CCHA对成骨细胞的ALP活性有明显的促进作用,CHA对ALP活性没有影响。二者对细胞增殖指数均无影响。结论CCHA具有良好的生物相容性和骨诱导作用。     

聚氨基酸复合纳米羟基磷灰石的体内生物相容性实验研究

[目的]评价新型生物材料聚氨基酸复合纳米羟基磷灰石(n-HA/MACP)在体内肌组织内和骨组织内的生物相容性.[方法]取新西兰大白兔18只,每只动物同时建立背部皮下肌袋材料埋置及单侧挠骨骨缺损材料植人两个模型,分别于2,4,8周,3个时间点分批每次处死6只实验动物取材,背部肌袋处行组织学HE染色及酶组织化学染色,挠骨缺损处行HE染色及改良Masson三色法特殊染色,并抽血行肝肾功检测与术前对比.[结果]肌组织标本HE染色结果显示4周后组织反应消失,未见炎性细胞,酶组织化学结果显示材料对酶活性无影响.骨组织标本HE染色及改良Masson三色法特殊染色检测结果显示材料与骨缺损界面结合紧密,未产生排斥反应,并诱导大量的软细胞分化,8周后开始出现新生骨小梁.肝肾功检测结果显示材料植人动物体内,术前与术后比较差异无显著性意义.[结论)聚氨基酸复合纳米羚基磷灰石具有良好的生物体内相容性,并且具有骨诱导性,是一种安全、无毒、表面微降解的生物材料.     

生物可降解人工胸壁的生物相容性与体内降解研究

目的对制备的人工胸壁材料的生物相容性及体内降解情况进行研究,为其应用于临床提供实验依据。方法参照医疗器械生物学评价标准和要求,对人工胸壁组分材料聚对二氧环己酮(A)、壳聚糖(B)、羟基磷灰石/胶原海绵(C)进行评价。溶血实验另设生理盐水为阴性对照组,蒸馏水为阳性对照组,各组取样本5个加抗凝兔血0.2ml,取上清测吸光度(A)值并计算溶血率。取20只小鼠行急性全身毒性实验,每组5只,分为A、B、C和阴性对照组;阴性对照注入生理盐水,A、B、C组由尾静脉注入A、B、C材料浸提液,50ml/kg,于24、48、72h时观察。热源实验取12只大白兔,每组3只,分为A、B、C组和阴性对照组(注入生理盐水),自耳静脉分别注射A、B、C材料浸提液,10ml/kg后,每隔1h测肛温1次,共3次,观察动物的体温变化,并计算各兔体温的升高度数和升高总数。体内植入及降解实验取12只大白兔,将A、B、C材料(制成10mm×10mm大小)分别植入背部肌肉内,于2、4、8、12、16、24周各时间点处死2只,行大体观察,组织学、材料降解及组织相容性观察。结果人工胸壁各组分材料的溶血率均小于国家规定的5%标准,在体外不引起溶血反应;与阴性对照组比较无统计学意义(P>0.05);不引起全身毒性反应,各材料注入后,A、B、C组动物均无死亡,活动进食正常。热源实验各组动物体温升高值均在0.6℃以下,且每组3只兔体温升高值的总数<1.4℃,无致热作用;各材料植入体内初期有轻度炎性反应,随植入时间延长逐步减轻;组分材料分期降解吸收,降解过程中未见组织变性、坏死和异常增生。结论人工胸壁各组分材料具有良好的生物相容性和适宜的降解性能,具有临床开发应用前景。     

剂量因素对羟基磷灰石/磷酸三钙成骨细胞相容性的影响

目的　检测不同剂量的羟基磷灰石 /磷酸三钙 (HA/ TCP)对兔成骨细胞增殖及碱性磷酸酶(AL P)活性的影响 ,明确材料的剂量因素在研究 HA/ TCP细胞相容性中的作用规律。方法　以兔成骨细胞为正常对照 ,细胞加入钛合金材料组为阴性对照 ,细胞加入聚氯乙烯材料组为阳性对照。选择三种材料剂量 ,以材料占细胞面积的比例表示 ,分别为 10 %、4 0 %和 70 %。将各组材料与兔成骨细胞复合培养 ,MTT法检测不同时间点、不同剂量材料作用下兔成骨细胞增殖的情况 ;偶氮偶联法检测不同时间点、不同剂量材料作用下兔成骨细胞表达 AL P的变化。结果　正常兔成骨细胞的生长呈现时间 -效应关系。与正常对照相比 ,10 % HA/ TCP不会对兔成骨细胞的生长产生影响 (P>0 .0 5 ) ;当 HA/ TCP剂量增大为 4 0 % ,细胞的生长速度明显变缓 (P<0 .0 5 ) ,细胞的生长仍呈现时间 -效应关系 ;70 %的 HA/ TCP使细胞生长趋于停滞 (P<0 .0 1)。 10 % HA/ TCP可造成细胞 AL P活性可逆性损伤 ,HA/ TCP浓度达 4 0 %时 ,AL P活性损伤至共培养 6天不可逆转。相对而言 ,惰性金属硬组织材料钛合金在检测三种剂量下均对细胞生长及细胞 AL P活性不会产生影响。结论　评价材料的细胞相容性应向材料接触剂量个体化、特异化的方向发展 ;除增殖指标之外 ,AL     

IN VITRO AND IN VIVO EXPERIMENTAL EFFECT OF KOREAN RED GINSENG ON ERECTION

PURPOSE: To elucidate the efficacy of Korean red ginseng (KRG) on penile erectile tissue and erectile response, the effect of ginseng was evaluated in both in vivo and in vitro experiments in laboratory animals. MATERIALS AND METHODS: Fifty milligrams of KRG per kilogram in weight was mixed in physiologic saline and given by mouth for 3 months to both rabbits and rats. In vitro experiments were performed by observing the responses to acetylcholine (ACh) and KRG of strips of rabbit corpus cavernosum. In vivo experiments were performed by measuring the cavernosal pressures after the stimulation of pelvic nerves innervating rat corpus cavernosum. RESULTS: On rabbit cavernosal muscle strips precontracted with phenylephrine (5x10(-6) M), increasing concentrations of ACh (10(-7), 10(-6), 10(-5), 10(-4) M) showed dose dependent relaxation in the control group (10(-7) M: 15.32%, 10(-6) M: 35.44%, 10(-5) M: 59.45%, 10(-4) M: 76.54%)(p<0.01). After 3 months of KRG administration, the relaxation responses to ACh were increased significantly (10(-7) M: 34.18%, 10(-6) M: 56.35%, 10(-5) M: 75.33%, 10(-4) M: 89.86%)(p<0.01). Relaxation effects of KRG were significantly increased after administering KRG for 3 months, as evident by the intracavernousal pressure to electrostimulation being 107.52 cm. water in the control group and significantly increased to 138.34 cm. water after 3 months administration of KRG (p<0.01). CONCLUSION: We confirmed that the long-term administration of KRG enhances erectile capacity and that its action is mediated by endothelium-derived relaxing factor and peripheral neurophysiologic enhancement.     

多孔羟基磷灰石陶瓷修复颅骨缺损的实验研究

为了探索多孔羟基磷灰石陶瓷（ＨＡＣ）作为人工材料修复颅骨缺损的可能性，选健康家兔２４只，切除颅顶骨造成缺损，分别用多孔ＨＡＣ植片及无孔甲基丙烯酸甲脂－苯乙烯共聚物（ＭＭＡＳ）植片修复家兔颅骨缺损，于术后第１，２及３个月处死动物，进行术后反应及组织学观察。结果发现：术后动物精神状态及活动均正常，无头皮下积液。组织学显示在不同阶段，多孔ＨＡＣ植片标本有肉芽组织、纤维组织和新生血管向微孔中生长及成骨细胞形成的骨小梁。界面结构未见异型细胞及炎性细胞浸润。无孔ＭＭＡＳ植片表面有纤维膜形成。实验表明，由于ＨＡＣ具有优良的生物学性能，有可能作为颅骨缺损的修复材料。     

胰岛素及丹参对体外培养成纤维细胞影响的实验研究

为了探讨胰岛素、丹参在伤口愈合过程中对胶原合成与分解代谢的影响，应用人胚皮肤培养成纤维细胞，分设胰岛素组、丹参组及对照组，培养２，４和６天，观察细胞的生长情况。成纤维细胞生长曲线显示：胰岛素组高于对照组，对照组高于丹参组。细胞核分裂率三组分别为１９．６０‰，２．５０‰和３．７７‰。扫描电镜观察发现胰岛素组成纤维细胞周围及表面有大量纤维状物，丹参组成纤维细胞表面光滑，仅有少量纤维状物。认为，胰岛素对成纤维细胞增殖和胶原合成有促进作用，而丹参对成纤维细胞增殖和胶原合成则有抑制作用     

异种脱钙骨基质颗粒的生物相容性实验研究

目的 评价制备的异种脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)植入体内的生物相容性,为进一步实验研究和临床应用提供依据.方法 取猪四肢长管状骨皮质骨经理化处理后,制备脱脂脱钙(材料A)和脱脂脱钙去细胞(材料B)两种粒径为250～810 μm的DBM颗粒和浸提液,骨颗粒脱脂脱钙后测钙、磷含量.采用标准的毒理学方法进行急性毒性实验、皮肤刺激实验、热原实验、溶血实验、细胞毒性实验和肌肉植入实验.结果 未脱钙皮质骨钙、磷含量分别为(189.09±3.12)mg/g和(124.73±2.87)mg/g:DBM颗粒的钙、磷含量分别为(3.48±0.09)mg/g和(3.46±0.07)mg/g;DBM颗粒钙、磷含量分别为未脱钙皮质骨的1.87%和2.69%.急性毒性实验:各组小鼠活动正常,7 d内小鼠无死亡,各组动物未见中毒症状或不良反应;7 d后各组小鼠体重日平均增加差异无统计学意义(P>0.05).皮内刺激实验观察显示,注射材料A、B浸提液和生理盐水处无明显红斑、水肿和皮肤坏死,极轻微刺激.热原实验两组动物体温升高最高均为0.4℃,符合<0.6℃的国家标准.材料A浸提液的溶血率为1.14%,材料B为0.93%,符合<5%的国家标准.异种DBM的细胞毒性为0～1级.肌肉内植入实验显示动物术后生存良好,各植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染.术后不同时间点植入材料A、B组局部细胞免疫定量评分比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 DBM颗粒的毒性程度为无毒,皮肤无刺激,无热原性,溶血率<5%,对细胞无明显毒性,具有良好的生物相容性和一定的骨诱导性.     

自体PRP促进人脂肪来源干细胞成骨分化的体外实验研究

目的 探讨自体PRP对体外培养人脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖及成骨分化的影响.方法 取自愿捐献吸脂术获取的脂肪组织进行分离培养ADSCs,倒置显微镜下观察细胞生长情况.将第3代ADSCs分别行成脂、成软骨定向诱导培养鉴定,并行CD29及CD44免疫荧光染色观察.取第3代ADSCs分别采用含10 mL/L PRP的成骨诱导培养基(PRP组)和不含PRP的成骨诱导培养基(对照组)进行培养,倒置显微镜观察细胞生长情况,培养后1、2、3、4、5 d采用MTT法检测细胞增殖活性;7、14、21、28 d行ALP活性检测,另取培养7、14 d的PRP组细胞行ALP染色观察;14 d时行PRP组茜素红染色检测钙结节形成情况.结果 倒置显微镜下第3代ADSCs多为梭形,倍增时间约35 h.成脂及成软骨诱导鉴定均为阳性,免疫荧光染色CD29和CD44呈阳性.MTT法示PRP组1、2、3、4、5 d的吸光度值分别为0.137±0.015、0.219±0.023、0.367±0.031、0.586±0.039、0.948±0.046,对照组分别为0.081±0.009、0.115±0.012、0.162±0.017、0.242±0.025、0.356±0.032,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).成骨诱导7 d后,PRP组ALP染色阳性,细胞胞浆呈灰黑色,可见黑色沉淀:14 d后阳性细胞增多.ALP活性检测示PRP组7、14、21、28 d细胞活性值分别为23.96±2.05、41.26±3.38、38.12±3.03、35.89±2.24,对照组分别为17.83±1.62、26.64±2.37、23.85±1.99、20.78±1.81,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).成骨诱导14 d后,茜索红染色示PRP组钙结节形成.结论 体外培养时,自体PRP可促进人ADSCs的增殖并诱导成骨分化,为骨组织工程提供一种新的种子细胞来源.     

几丁质及几丁糖与雪旺氏细胞相容性的实验研究

为了观察几丁质及几丁糖对雪旺氏细胞生长的影响，用新生Ｗｉｓｔｅｒ鼠坐骨神经及臂丛神经的雪旺氏细胞接种于几丁质膜片及几丁糖液上，在培养１，３，７天时用光镜及扫描电镜进行观察。发现，几丁质及几丁糖上生长的雪旺氏细胞占９４％，成纤维细胞占６％；对照组雪旺氏细胞占７１％，成纤维细胞占２９％。几丁糖内的细胞数多于几丁质膜片上的细胞数。认为，几丁质及几丁糖与雪旺氏细胞有着良好的组织相容性，几丁糖液优于几丁质膜片，两者均可抑制成纤维细胞的生长。     

角蛋白在血管生成中的作用实验研究

目的 研究角蛋白17(keratin 17,K-17)对血管内皮细胞迁移、增殖和管样结构形成的影响,了解K-17在血管生成过程中的作用. 方法 将人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)于含10?S的DMEM培养液培养过夜,采用脂质体转染法向HUVEC中分别加入K-17-小分子干扰RNA(small interfer-ing RNA,siRNA).转染试剂(Lipofectamine 2000)混合液(实验组)、siRNA-转染试剂混合液(阴性对照组),使siRNA终浓度为50 nmol/L;对照组加相同体积仅含载体(脂质体Lipofectamine 2000)的培养基,采用RT-PCR和Western blot法检测K-17-siRNA沉默效果.于培养后36 h采用细胞计数法检测细胞增殖能力;培养后30 h,分别采用24孔板Millicell 小室检测细胞迁移能力以及胶原纤维凝胶实验法检测细胞分化成管能力.另取未经siRNA处理的HUVEC分别在含10?S的培养基(A组)、含2?S的培养基(B组)和含2?S及10 ng/mL bFGF的培养基(c组)中培养24 h,检测HUVEC K-17的表达. 结果 实验组K.17-siRNA作用于HUVEC 30 h后,RT-PCR检测示细胞内K-17 mRNA的表达为0.09±0.01,较阴性对照组0.35 ±0.07和对照组0.34±0.06均降低了约74%(P<0.01);Westem blot检测示实验组K-17-siRNA作用于HUVEC 30 h后,细胞内K-17蛋白表达为0.19±0.01,较阴性对照组0.52±0.01和对照组0.55±0.02分别降低了63%和65%(P<0.01);阴性对照组和对照组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).K-17-siRNA作用HUVEC 36 h后,实验组细胞增殖能力与阴性对照组和对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05).HUVEC转染K-17-siRNA 30 h后,实验组HUVEC 24 h穿过Millicell小室上室膜进入下室的细胞数为(3 719.0 ±319.0)个,明显低于阴性对照组(7 356.3 ±795.7)个和对照组(7 437.5 ±212.0)个,差异有统计学意义(P<0.01),阴性对照组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05).实验组、阴性对照组和对照组HUVEC 24 h分化形成的管数分别为(1.1 ±0.5)、(3.6±0.5)和(3.2 ±0.6)管/视野,实验组与阴性对照组、对照组间比较差异均有统计学意义(P<0.01),阴性对照组和对照组间比较差异无统计学意义(P>0.05).A、B、C组HUVEC K.17的表达分别为0.25 ±0.02、0.08 ±0.01和0.72 ±0.03,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.01). 结论 K-17对HUVEC增殖无影响,但增强其迁移能力,有利于血管生成.     

FGL多肽自组装纳米纤维与神经干细胞生物相容性研究

目的 观察组织工程支架材料FGL多肽组装纳米纤维和神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的生物相容性. 方法同相法合成FGL多肽两亲性分子(FGL peptide-amphiphile,FGL-PA),采用高效液相色谱仪和质谱仪进行纯化和分析.加入0.1mol/LHCI于FGL-PA溶液,降低pH值引发其自组装,透射电镜观察自组装后的材料.取新生1 d大鼠大脑皮质,培养大鼠NSCs,分别加入最终浓度为0、50、100、200、400 mg/L FGL-PA,采用CCK-8试剂盒检测FGL-PA对细胞增殖的影响.将NSCs分别加入分化培养基(对照组:DMEM/F12、2?7和10?S)和含FGL-PA的分化培养基(实验组:DMEM/F12、2?7、10?S和100 mg/L FGL-PA)诱导分化,采用免疫荧光法检测FGL-PA对NSCs分化的影响. 结果 FGL-PA可自组装形成凝胶,透射电镜示其为纳米纤维,直径为10～20 nm,长度可达数百纳米.加入各浓度FGL-PA 48 h后,当FGL-PA浓度为50、100、200 mg/L时,吸光度(A)值显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).NSCs诱导分化培养14 d,免疫荧光结果 显示对照组NSCs分化为神经元比例为46.35%4±1.27%,实验组为72.85%±1.35%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 FGL-PA能自组装形成纳米纤维凝胶,具有良好的生物相容性和生物活性.