产气荚膜梭菌α毒素亚单位基因的表达及表达产物活性分析

含有产气荚膜梭菌α毒素基因序列的克隆载体pMD18TCα ,经BamHⅠ和HindⅢ内切酶双酶切后 ,将α毒素亚单位基因亚克隆到原核表达载体pET30b中 ,构建表达载体pET30bPα。经酶切和测序鉴定 ,α毒素基因中的90 0bp的片段正确插入到表达载体中。重组菌株BL2 1(DE3)pET30bPα经IPTG诱导的表达产物经SDS PAGE和Western_blot分析 ,表达出大小为 38× 10 3的重组蛋白具有和α毒素阳性血清发生特异性的免疫反应。     

产气荚膜梭菌实验室诊断方法综述

气性坏疽不仅是战伤的严重并发症,也是其他创伤的严重并发症,其主要致病菌为产气荚膜梭菌。由于产气荚膜梭菌繁殖迅速,引起的临床症状严重,因此日益受到临床及实验室的广泛关注。近年来,国内外学者在对此菌的快速诊断方面作了大量的工作,本文就近年的研究成果进行综述。     

小儿产气荚膜梭菌感染临床分析

目的了解产气荚膜梭菌感染患儿的临床表现厦治疗方法。方法对20021～2005年7月在我院消化专科住院，且大便培养产气荚膜梭菌阳性的116例患儿的临床资料进行总结分析。结果临床症状主要有腹泻（有黏液便、黏液血丝便、糊状便、水样便）、腹胀，偶有腹痛。在较小婴儿多表现为腹泻，在较大儿童则表现为腹泻、腹胀、腹痛。给予肠道微生态制剂治疗，症状改善率为87.1％，复查产气荚膜梭菌阳性率为52．0％；肠道微生态制剂联合灭滴灵治疗，症状改善率为88.9％，复查产气荚膜梭菌阳性率为35.0％。结论应重视小儿，产气荚膜梭菌感染，其临床症状主要有腹泻和腹胀（腹痛），采用肠道微生态制剂治疗疗效确切，必要时可加用灭滴灵治疗。     

非食源性腹泻中产气荚膜梭菌的毒力型分布特征

目的 探讨非食源性腹泻患者中分离的产气荚膜梭菌毒力型分布特征。方法 选取2020年1月1日至12月31日清华大学附属北京清华长庚医院收治的非食源性腹泻住院患者粪便样本分离的86株产气荚膜梭菌,其中59株分离于抗生素相关性腹泻（antibiotic-associated diarrhea, AAD）患者,27株分离于非AAD患者。采用实时荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）检测菌株的6种毒素基因,即产气荚膜梭菌alpha毒素（cpa）、beta毒素（cpb）、epsilon毒素（etx）、iota毒素（ι-iap）、肠毒素（cpe）和坏死性肠炎B毒素（netB）,依据毒素类型将菌株分为A～G 7种毒力型,分析毒力型分布以及AAD组和非AAD组间毒力型的差异。结果 86株产气荚膜梭菌中,毒素基因cpa、cpb、etx、ι-iap、cpe和netB的检出率分别为100.0%、5.8%、0.0%、0.0%、18.6%和2.3%;A～G毒力型分别占74.4%、0.0%、5.8%、0.0%、0.0%、17.4%和2.3%。A毒力型在AAD组和非AAD组的...     

C型产气荚膜梭菌α-β2-β1融合蛋白的免疫原性研究

目的研究含α-β2-β1融合基因的重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)的免疫原性。方法用重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)制备包涵体和全细胞培养物两种抗原,采用氢氧化铝胶体作为免疫佐剂,免疫ICR小白鼠,用C型产气荚膜梭菌外毒素粗提物进行攻毒,观察小鼠的保护情况。结果包涵体加氢氧化铝凝胶制备的抗原保护效果对于1LD100和2LD100的攻毒均达到100%;全细胞培养物加氢氧化铝凝胶制备的抗原保护效果对于1LD100和2LD100的攻毒达到50%和20%。结论已获得具有一定免疫原性重组菌株,可作为预防C型产气荚膜梭菌所致疾病的候选菌株。     

食品中产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型

目的调查广州地区食品中产气荚膜梭菌的污染水平及菌型分布。方法参照国家标准方法进行产气荚膜梭菌的分离鉴定,采用针对产气荚梭菌α、β、ε、ι、CPE和β2六种毒素的基因cpa、cpb、etx、iA、cpe和cpb2序列的6对特异性引物,用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型鉴定。同时用产气荚膜梭菌A型参照株NCTC64609作为阳性对照。结果从142份食品中分离到21株产气荚膜梭菌,以冷冻肉的带菌率最高,为19.6%;鲜肉和速冻肉饺分别为12.2%和11.9%。经多重PCR方法鉴定,均扩增出预期大小为324bp的cpa基因片段的特异性条带,未扩增出针对cpb、etx和iA基因的特异性条带,证实均为A型产气荚膜梭菌。携带β2毒素基因的产气荚膜梭菌共19株(占总分离株的90.4%),其中1株为肠毒素基因阳性的A型菌株。结论初步调查表明广州地区食品中存在可致人食物中毒的肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌污染,为进一步建立广州地区食品中及与食物中毒有关的厌氧菌分子分型数据库奠定了基础。     

输卵管癌术后化疗合并产气荚膜梭菌脓毒症1例

<正>患者,50岁,因输卵管恶性肿瘤术后2个月,发热伴腹痛1 d入院。2个月前因输卵管恶性肿瘤行腹腔镜下输卵管恶性肿瘤分期术,术后定期化疗。1 d前自诉进食外买熟鸡肉后出现发热,体温最高39.4℃,伴左下腹及臀部疼痛,排水样便,里急后重,恶心,呕吐,强迫侧卧位。于急诊查血常规:WBC 16×10~9/L,NUT 14.48×10~9/L,Hb 106 g/L;肝功能:ALT 127 U/L,AST 89     

含产气荚膜梭菌肠毒素基因重组质粒pET-28a-CPE的构建和表达

目的 构建含全长产气荚膜梭菌肠毒素(CPE)基因的重组表达质粒pET-28a-CPE并进行原核表达.方法 培养并提取表达肠毒素的产气荚膜梭菌标准菌株64615的基因组DNA,PCR扩增出全长CPE基因片段并连接入pET-28a载体质粒中,构建重组原核表达质粒pET-28a-CPE,进行酶切及测序鉴定,并转化入感受态大肠杆菌(E.coli)BL21中,用IPTG诱导CPE表达.结果 复苏、培养成功产肠毒素的产气荚膜梭菌标准菌株64615,成功构建了表达质粒pET-28a-CPE,经酶切及测序鉴定结果 与设计的完全相符,成功用E.coil BL21进行了原核表达,目的 蛋白CPE占总表达蛋白45.37%.结论 本实验成功构建并表达了含CPE的重组质粒pET-28a-CPE,为进一步观察CPE时前列腺肿瘤等的生物学作用奠定了基础.     

荧光定量PCR法检测小鼠肠道中产气荚膜梭菌的实验研究

目的 建立一系列浓度梯度的A型产气荚膜梭菌(clostridium perfringens,C.perfringens)感染小鼠肠道的动物模型,探讨实时荧光定量PCR法对肠道中C.perfringens的检测.方法 小鼠随机分成6组,每组10只,依次腹腔注射浓度为5.7×109、5.7×108、5.7×107、5.7×...     

C型产气荚膜梭菌重组菌株B121（DE3）pXETAB2B1表达条件的优化

目的优化C型产气荚膜梭菌重组菌株B1221（DE3）pXETAB2B1融合蛋白表达的条件。方法以IPTG（异丙基硫代-β—D-半乳糖苷）为诱导剂，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳比较pH值、培养温度、诱导时间、菌体生长密度等因素对重组α-β2-β1融合蛋白表达进行表达条件的影响。结果C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21（DE3）pXETAB2B1的表达优化条件是：最适培养基pH值是7．5，最适诱导时间是5小时，最适表达温度是37℃，最适菌体生长密度是OD6001．0，IPTG最适诱导浓度是0．4mmol／L。结论获得C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21（DE3）pXETAB2B1融合蛋白的最佳表达条件。     

C型产气荚膜梭菌BL21(DE3)pXETAB2B1三价灭活苗的免疫效力试验

目的 研究C型产气荚膜梭菌BL21(DE3)(pXETAB281)三价灭活苗的免疫效力.方法 制备C型产气荚膜梭菌B121(DE3)(pXETAB281)三价灭活苗,免疫接种奶牛及ICR小鼠,分别进行静脉采血,观察抗血清中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物的情况.结果 奶牛抗血清中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物达到60%;ICR小鼠抗血清中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物达到100%.结论 C型产气荚膜梭菌BL21(DE3)(pXETAB281)三价灭活苗能中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物.     

艰难梭菌荚膜抗吞噬作用的观察

观察了毒力菌株和无毒菌株在小鼠体内的抗吞噬表现，以探讨该菌荚膜的局部侵袭作用。实验显示毒力菌株VPll0463有明显的抗吞噬作用，而无毒菌株A318和CDC279无此能力，对实验中发现的两种吞噬方式作了讨论。     

C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE3) pXETAB2B1表达条件的优化

目的 优化C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE3)pXETAB2B1融合蛋白表达的条件.方法 以IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)为诱导剂,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳比较pH值、培养温度、诱导时间、菌体生长密度等因素对重组α-β2-β1融合蛋白表达进行表达条件的影响.结果 C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE3)pXETAB2B1的表达优化条件是最适培养基pH值是7.5,最适诱导时间是5小时,最适表达温度是37℃,最适菌体生长密度是OD6001.0,IPTG最适诱导浓度是0.4 mmol/L.结论 获得C型产气荚膜梭菌重组菌株BL21(DE3)pXETAB2B1融合蛋白的最佳表达条件.     

产气荚膜梭茵的检验

目的 研究产气荚膜梭茵的检验方法.方法 分析其生态、生物学性状、致病性与免疫性、微生物学检验等.结论 要提高产气荚膜梭茵的检出率,要在多个环节上加以重视,严格按照操作规程,才能提高检出率,有效地治疗厌氧菌引起的化脓性炎症,使患者早日康复.     

艰难梭菌荚膜抗吞噬作用的观察

观察了毒力菌株和无毒菌株在小鼠体内的抗吞噬表现，以探讨该菌荚膜的局部侵袭作用。实验显示毒力菌株ＶＰＩ１０４６３有明显的抗吞噬作用，而无毒菌株Ａ３１８和ＣＤＣ２７９无此能力，对实验中发现的两种吞噬方式作了讨论。     

伤口分泌物涂片与实时荧光定量PCR对产气荚膜梭菌快速诊断的意义

目的比较涂片镜检查找革兰阳性粗大杆菌与实时荧光定量PCR这两种方法对快速诊断产气荚膜梭菌的意义。方法选取疑似气性坏疽且伤口分泌物涂片镜检发现革兰阳性粗大杆菌的患者16例,取其伤口分泌物进行实时荧光定量PCR及细菌培养。结果 16例涂片镜检查到革兰阳性粗大杆菌的患者中,有6例实时荧光定量PCR为阳性并培养出产气荚膜梭菌。结论与传统的涂片方法相比,实时荧光定量PCR方法能更准确,更灵敏地诊断产气荚膜梭菌。     

三例产气荚膜杆菌的培养与鉴定

三例产气荚膜杆菌的培养与鉴定青海省人民医院检验科周海凤，朱冬芝气性坏疽是一种创伤感染症，一般继发于开放性骨折，大块肌肉撕裂，可引起患者局部组织坏死、恶臭、气肿、水肿以及伴有全身中毒，引起本病的病原菌，包括产气荚膜杆菌，水肿梭菌，败毒梭菌等，但以产气荚...     

从土壤中分离产气荚膜杆菌用于实验教学

产气荚膜肝菌引起的气性坏疽病人较少，临床标本来源困难。几年来，我们从土壤中分离产气荚膜杆菌制备菌种、荚膜和芽胞标本片，用于临床检验专业厌氧芽胞杆菌的培养实验及其他专业荚膜和芽胞特殊结构的观察实验，取得了良好的实验教学效果。