体外造血微环境对L_(801)白血病细胞增殖和分化的影响

本文观察到同系正常小鼠骨髓基质细胞层对L_(801)白血病细胞有明显抑制增殖和促进分化的作用,而基质细胞条件培养液只能抑制L_(801)细胞增殖,不能诱导其分化。提示基质层能产生抑白血病细胞增殖的抑制因子,基质细胞的直接接触或短距离因子的作用与L_(801)的细胞分化有关。这种抑制增殖和促进分化的作用可能不通过GM-CSF。     

三种国产血卟啉衍生物和Photofrin Ⅱ 生物学活性的比较

本文比较了三种国内血卟啉衍生物(HpD)试制的生物学活性。采用了L_(1210)细胞生长率,L_(1210)和B_(18)细胞的台盼蓝排斥率,L_(1210)细胞的集落形成能力,L_(1210)细胞的DNA和RNA合成率,615小鼠在接种L_(615)白血病细胞后的存活时间,以及注射HpD后小鼠Lewis肺癌中荧光强度等七种指标。结果一致地表明,Y-HpD和LF-019在体外对癌细胞的光动力学杀伤作用显著高于HpS。而HpS活性略高于美国生产的第二代HpD PhotofrinⅡ。荧光强度的测定表明,这四种HpD在Lewis肺癌中的浓度无明显差别。     

人类胚胎干细胞向造血干细胞分化的微环境研究

目的 探讨胎肝基质细胞和骨髓基质细胞在诱导胚胎干细胞向血液血管干细胞分化中的作用,分析基因表达差异.方法 通过将分化4 d的EBs分别接种到以下两组中:(1)胎肝基质细胞层+细胞因子;(2)骨髓基质细胞层+细胞因子:诱导结束后,流式细胞术检测各组中血液血管干细胞标志KDR阳性细胞数以及造血干细胞标志CD34阳性细胞数,计数细胞分化过程中形成的造血干细胞样的集落数,比较诱导分化效果;收集胎肝基质细胞和胚胎骨髓基质细胞,采用cDNA芯片分析基因表达差异.结果 流式细胞术检测发现,两组中KDR+细胞的比例为分别为:(1.06±0.20)%、(8.8±1.49)%;CD34+细胞比例为分别为:(1.25±0.16)%、(9.19±2.10)%;血岛样集落数量分别为0.9±0.36、10.6±0.63;上述结果均以骨髓基质细胞联合细胞因子诱导方法效率最高.基因芯片(hBMSCs/hFLSCs)中总共有240条基因在骨髓基质细胞中高表达,397条基因的在肝脏基质细胞中高表达.对细胞因子、细胞黏附分子以及细胞外基质蛋白的基凶加以分析,结果发现在hBMSCs高表达的相关的21条基因,推测可能与造血分化相关.结论 人类胚胎十细胞向造血干细胞分化过程中,涉及到细胞与细胞之间的相互作用,相关的细胞因子、细胞黏附分子、细胞外基质蛋白等可能起重要的作用.     

不同条件下体外扩增造血细胞促造血恢复能力的比较

目的 比较研究不同条件下体外扩增的造血细胞回输体内后促进造血功能恢复作用的差异，方法 在小鼠骨髓单个核细胞液体培养体系中，分别加入几种细胞因子组合和／或基质细胞层存在的条件下进行体外扩增，然后将不同条件下扩增的细胞经尾静脉回输至经致死量照射的小鼠体内，动态观察小鼠的外周血象变化及其一般状况和生存率。结果 ①单纯细胞因子介导BMMNC体外扩增后并不能增进这些细胞促造血恢复的能力；②含有骨髓基质细胞底层的体外扩增，无论是否加入细胞因子，均有明显的促进移植受体造血功能迅速恢复的作用。结论 骨髓基质细胞支持下的造血细胞体外扩增可能有助于维持扩增后造血干／祖细胞造血重建的功能，值得深入研究和应用。     

茯苓素对小鼠白血病L_(1210)细胞的抑制作用

本文报道中药茯苓提取物——茯苓素体外对小鼠白血病L_(1210)细胞的抑制作用,对L_(1210)细胞DNA合成的补偿途径各个环节的作用。实验表明,茯苓素可明显抑制细胞膜对核苷的转运,对胸苷激酶的抑制作用较弱,但对DNA聚合酶则无影响。提示茯苓素对核苷转运的作用可能是抑制DNA合成的一个重要环节。     

骨髓造血基质细胞研究的新突破

中国医学科学院血液学研究所宋增璇于八十年代初发现了两类骨髓基质细胞。1981年赴美学习期间用实验方法证明了在复杂的基质细胞层中只有一类基质细胞能支持造血细胞生长,并从小鼠骨髓分离且建立起一株基质细胞系(Tc-1)。随之,进一步从Tc-1细胞系分离出两个亚系即Tc-1-C-11和Tc-1-C-3,并对其细胞生物特性和功能进行了系统的研究。其主要成就和学术价值如下: 1.国外学者(Doxter等)认为造血基质细胞是由纤维母细胞、巨噬细胞、内皮     

IL-3对人脐血基质细胞调控作用的实验研究

目的：为了探讨ＩＬ－３对人脐血基质细胞诱导形成及经诱导后的基质细胞对粒单系造血祖细胞生成的调节作用。方法：用体外液体培养法观察ＩＬ－３诱导人脐血基质细胞层的建立及不同浓度ＩＬ－３对基质细胞数和基质细胞上清液中ＧＭＣＳＦ活性的影响。结果：ＩＬ－３能够促进人脐血基质细胞形成，其作用与ＩＬ－３浓度有依赖性，最适浓度为６０ｎｇ／ｍｌ。当浓度增加到９０ｎｇ／ｍｌ时，脐血基质细胞数值明显降低。粒系造血刺激因子在脐血基质细胞建层后的１—２周活性最高。结论：ＩＬ－３可促进造血实质细胞生成及改善造血微环境。     

系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞对造血干(祖)细胞的作用

[目的]探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓基质细胞上清液对造血干(祖)细胞的作用及其机制.[方法]半固体集落培养法观察28例活动期SLE骨髓基质细胞生长及其上清液对正常细胞、自身骨髓干/祖细胞的抑制作用;检测SLE其骨髓基质细胞上清液中TNF-α、IFN-γ的水平;RT-PCR法检测骨髓基质细胞IFN-γmR-NA的表达.[结果]①29%活动期SLE患者骨髓基质细胞的集落数较正常人明显减少(P＜0.05).②体积分数为15%的活动期SLE骨髓基质上清液对正常人骨髓、自身SLE造血干/祖细胞混合集落(CFU-Mix)的形成较对照组具有明显抑制作用(P＜0.05).③活动期SLE患者骨髓基质细胞的上清液TNF-α、IFN-γ的水平高于稳定期SLE组、正常对照组(P＜0.05).④70%活动期SLE患者骨髓基质细胞有IFN-γ mRNA的表达,而正常对照则未见有IFN-γmRNA的表达.[结论]活动期SLE患者骨髓基质细胞上清液对正常、自身骨髓造血干(祖)细胞的有抑制作用,这与其基质细胞存在高表达TNF-α、IFN-γ有关.     

抗CCT_2单克隆抗体和争光霉素A_6结合物的抗白血病细胞活性

应用N-琥珀酰胺-3-(2-二硫吡啶)丙酸与T淋巴细胞分化抗原的单克隆抗体(CCT_2McAb)和争光霉素A_6交连制备抗CCT_2 McAb-争光霉素A_6结合物。此结合物经免疫荧光测定与人白血病CEM细胞,小鼠白血病L_(1210)和P_(388)细胞呈特异性结合,但不与小鼠SP 2/0骨髓瘤细胞结合。此结合物在体外培养中对CEM细胞显示很强的抑制作用,约为游离争光霉素A_6的12倍。结果提示,这种免疫结合物对靶细胞具有选择性细胞毒作用。争光霉素A-6对造血和免疫功能毒性很低,这种结合物可能较安全地用于白血病化疗。     

黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达的影响

目的:观察黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞表面细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响.方法:(1)小鼠骨髓基质细胞体外培养;(2)倒置相差显微镜动态观察、HE染色光镜及透射电镜观察小鼠骨髓基质细胞的形态;(3)MTT法检测黄芪注射液对骨髓基质细胞增殖的影响;(4)采用流式细胞术检测黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞表面VCAM-1和ICAM-1的表达.结果:(1)MTT法检测黄芪注射液浓度为400μg/mL和600μg/mL均可促进小鼠骨髓基质细胞增殖(P<0.05),且两种剂量组间比较无差异;(2)与对照组比较,黄芪注射液能够增加小鼠骨髓基质细胞表面VCAM-1和ICAM-1蛋白表达(p<0.05).结论:黄芪注射液能促进小鼠骨髓基质细胞的增殖及表面VCAM-1和ICAM-1蛋白的表达.提示黄芪注射液对造血微环境有改善作用.     

重组人白细胞介素—1的辐射防护作用的种属差异

重组人白细胞介素-1α(rhI1-1α,IL-1)对C3H和BALB/c小鼠的辐射防护作用有明显的种属差异。在C3H小鼠产生防护作用的IL-1剂量显著高于BALB/c小鼠的剂量.IL-1能增加BALB/c和C3H小鼠早期多能造血干细胞(CFU—S_(12))的数目,但C3H小鼠的CFU—S_(12)对IL-1的反应性低于BALB/c小鼠。BALB/c小鼠的骨髓基质细胞层在无TL-1存在时能很好地维持骨髓细胞的生长,而C3H小鼠的骨髓基质细胞层需有IL-1的存在才能维持骨髓有核细胞的生长。上述事实提示,IL-1对C3H和BALB/c小鼠的辐射防护作用存在种属差异。     

几种血卟啉衍生物对小鼠L_(1210)淋巴白血病及B_(16)黑色素瘤细胞动力学灭活作用的比较

本文用小鼠L_(1210)淋巴白血病细胞和B_(16)黑色素瘤细胞研究了几种国内试制的血卟啉制剂对肿瘤细胞的光动力学灭活作用。与国外第二代血卟啉衍生物Photofrin Ⅱ相比LF-019和激光3号的活性更为显著。Photofrin Ⅱ对B_(16)细胞光灭活作用的IC_(50)为8.2μg/ml,HA-308、激光3号和LF-019依次为6.2、5.3和     

照射小鼠骨髓基质对造血干细胞支持功能的观察

615小鼠全身照射500R和2000R后,取股骨骨髓建立贴壁细胞层,然后加入同种正常小鼠的骨髓细胞,进行体外培养,可见两个照射剂量的动物骨髓基质所支持的有核细胞及CFU-S数较正常组明显减少。但500R照射者的造血基质功能尚能恢复.2000R照射者损伤更严重,但其功能未完全丧失。照射小鼠骨髓基质细胞层对造血干细胞的增殖较正常组有更强的刺激作用。     

墓头回诱导脐血基质细胞形成及分泌ＧＭ—ＣＳＦ的实验研究

目的　应用细胞培养技术检测了墓头回水提物对人脐血基质细胞生成及其分泌粒系造血刺激因子的实验研究。方法　将不同浓度的墓头回水提物与脐血共同培养14d,检测基质细胞上清液中的GM-CSF活性。结果　墓头回水提物对人脐血基质细胞具有促进形成的作用,最高峰为0.01μg/mL,为了检测基质细胞上清液中的GM-CSF活性,进行了GM-CFU实验,结果表明,实验各组数据与对照组比较,具有非常显著性差异(P＜0.01)。结论　墓头回水提物不仅是一种强烈的抗癌药物,也是一种造血祖细胞促进剂。     

外源性shh蛋白对c-kit+造血祖细胞增殖分化作用研究

目的 探讨sonic hedgehog(Shh)信号对小鼠造血祖细胞的扩增分化调控作用.方法 取孕14.5天Balb/C小鼠,分离培养小鼠胎肝基质细胞作饲养层.免疫磁珠法分选小鼠骨髓来源c-kit+造血祖细胞,将分选的造血祖细胞在不同实验组培养条件下培养7d(a.对照组;b.Shh组;c.以胎肝基质细胞为饲养层的Transwefi共培养组;d.Shh+Transvcell共培养组).通过绘制细胞生长曲线,免疫表型鉴定及功能分析,观察胎肝基质细胞饲养层以及Shh活性肽对细胞增殖、分化、集落形成的调控作用.结果 和对照组相比,胎肝基质细胞可以明显促进造血祖细胞增殖(P<0.05);单纯的外源性Shh蛋白可以同时促进造血祖细胞的增殖和分化(P<0.05);在与胎肝基质细胞共培养体系中,外源性Shh蛋白可以明显地促进细胞增殖,经过体外培养7 d后,细胞数迭80×105,其中c-kit+细胞占(84±9.44)%,集落形成能力亦明显增强.结论 Shh蛋白参与调控造血祖细胞的增殖与分化,在胎肝基质细胞的支持下,Shh蛋白对小鼠c-kit+造血祖细胞的扩增有明显的促进作用,表明Shh蛋白与胎肝基质细胞存在着某种整合作用,这种作用在一定程度上调控着造血祖细胞的增殖与分化.     

正常和受照豚鼠、C_(57)小鼠骨髓基质贴壁细胞性质和功能的研究(摘要)

<正> 近年,随着实验血液学研究的进展,对构成造血微环境重要成分之一的骨髓基质细胞逐渐被人们所认识。了解到它对造血细胞的增殖与分化起着重要作用;本室的研究结果也发现回输的骨髓基质细胞对小鼠重度放射损伤造血恢复有明显疗效。但是,对骨髓基质细胞的来源、细胞构成及其功能性质还有待进一步研究。本文应用细胞化学、Fc受体检查和GM-CSF的测定,对正常与受照豚鼠,C_57小鼠体外培养骨髓基质贴壁细胞的构成及其上清液GM-CFU对刺激作用进行了研究。结果表明:正常与受照C_57小鼠和豚鼠骨     

体外培养人骨髓基质细胞的超微结构

体外培养人骨髓基质细胞的组成及功能与人体造血微环境相似，可作为研究人体造血微环境的良好模型。选择体外培养第４周的人骨髓基质细胞层，经固定、脱水、原位包埋、超薄切片染色后电镜观察。结果：可见基质层由３类基质细胞及ＥＣＭ组成。巨噬样细胞样基质细胞浆内可见ＣＩ；基质细胞表面ＥＣＭ包含胶原纤维；内皮细胞样基质细胞间可见细胞间连接，但这种连接未见于造血祖细胞及其他基质细胞间。结论：人骨髓体外培养基质细胞超微结构与人体及小鼠骨髓微环境既有相似也有不同处，其差异可能由于体内外不同生长条件所引起。     

琼脂糖覆盖法构建体外三维培养角膜基质细胞模型的研究

目的:建立琼脂糖覆盖法结合Transwell培养皿体外三维培养牛角膜基质细胞模型,评价其是否具有与角膜基质类似结构特点,为体外研究角膜基质创伤修复或角膜基质组织工程学提供候选模型.方法:应用原代培养的牛角膜基质细胞,种植于Transwell培养皿上室,实验组覆盖以琼脂糖,对照组无琼脂糖覆盖.培养2 d和2周时分别应用激光共聚焦显微镜扫描培养物,计算各培养皿细胞层数,比较实验组和对照组细胞层数.结果:培养2 d,实验组与对照组细胞层数分别为(0.92±0.13)层及(0.89±0.13)层;培养2周后,实验组与对照组细胞层数分别为(1.75±0.22)层及(1.42±0.28)层,实验组与对照组细胞层数均显著增加(P＜0.01),而实验组细胞层数明显多于对照组(P＜0.01).培养2周,实验组可以形成近2层平行的细胞.结论:琼脂糖覆盖法结合Transwell培养皿培养牛角膜基质细胞可以形成2层平行细胞培养物,该模型可作为角膜基质细胞体外三维培养的候选模型.     

人脐血基质细胞自发分泌多种造血生长因子的实验研究

目的探讨体外培养的人脐血基质细胞分泌血小板生成素(thrombopoietin,TPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、干细胞生长因子(stem cell factor,SCF)的能力.方法留取不同培养时相点的培养液上清,ELISA法检测上清中TPO、GM-CSF、SCF的浓度,并与骨髓基质细胞的培养上清液对照比较其特点.结果人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可分泌TPO、GM-CSF和SCF等造血生长因子,二者造血生长因子的分泌随着培养时间的延长而逐渐下降,其中人脐血基质细胞分泌TPO和SCF的高峰期出现在第7天,而GM-CSF的分泌则无高峰期的出现;通过与骨髓基质细胞分泌三种造血生长因子量进行对比发现,人脐血基质细胞SCF和GM-CSF的分泌量低于骨髓基质细胞,而TPO的分泌高于同期培养的骨髓基质细胞.结论人脐血基质细胞与骨髓基质细胞一样具有分泌造血生长因子,支持调控造血的作用.     

小鼠骨髓基质细胞的辐射敏感性及某些药物对其作用的观察

本实验证实,小鼠股骨骨髓(BM)基质由成纤维细胞、网状细胞、吞噬细胞及脂肪细胞构成。在本外,由2根股骨的BM细胞所形成的贴壁细胞层对造血多能干细胞CFU-S支持功能最好。BM基质细胞为辐射敏感性低于造血干细胞;AET和兜衣多糖对BM基质细胞及其支持造血干细胞的功能有明显的辐射防护作用。