不同来源STECO157:H7生物学特性研究

目的 探讨浙江省产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株PFGE分型及携带毒力基因以及耐药情况.方法 菌株生化、血清鉴定按API 20E鉴定系统;大肠杆菌O157:H7诊断血清凝集试验;采用聚合酶链反应(PCR)法检测O、H抗原及毒力基因SLT1、SLT2、Hly、eaeA;STEC O157:H7分型用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行;14种抗生素进行药敏试验采用K-B法.结果 5株可疑菌株经生化和血清鉴定符合O157:H7特性;毒力基因检测所有分离株SLT2、Hly、eaeA三种毒力基因均阳性而SLT1均阴性;脉冲场凝胶电泳分型结果显示,有2株菌PFGE电泳条带完全相同,其余3株菌电泳条带不同,5株菌共分为4个带型;经耐药性分析,菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星100%敏感;对复方新诺明、氨苄西林100%耐药.结论 STEC O157:H7菌株在浙江省一些地区存在,并且携带SLT2毒力基因,PFGE型别较多,同时也有人间感染病例的出现,提示应加强O157:H7监测力度,防止该菌在人间的感染和流行.     

安徽省114株EHECO157∶H7菌株毒力因子基因的初步分析

目的　对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHECO157∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力特征和致病特性。方法　采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO157∶H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素 (SLT)和溶血素 (hly)的特异性基因片段 ,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定。结果和结论　检测结果显示 ,有 63.2%的EHECO157∶H7菌株携带SLT、hly基因 ,动物源的菌株以家禽较高 ,家畜次之 ,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33.3% ,说明分离的EHECO157∶H7菌株具有较强的致病性 ;114株菌株中,有 14.0%的菌株在 24h内发酵山梨醇 ,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率 18.8% ,显著低于不发酵菌株的 70.4% ,显示出山梨醇发酵特性变异与毒力因子基因缺失之间具有一定的关联性。     

一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株的鉴定

目的 对一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株进行血清生化特征及毒力基因鉴定.方法 对154菌株进行常规血清生化鉴定,使用聚合酶链反应(PCR)方法检测该菌的志贺毒素基因及其他毒力因子,同时以southern杂交、Hela细胞毒实验进行证实.结果 菌株154的志贺毒素PCR检测、shouthern杂交为阴性,Hela细胞毒定量结果显示该菌株不产生志贺毒素,毒力因子eae,hly检测为阳性.结论 菌株154是不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株,且具有O157:H7菌株特异性的毒力因子.     

浙江省检出带毒力基因的人源性肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的了解肠出血性大肠杆菌O157:H7在浙江省人群中的感染情况和菌型分布特征,制定相应的防治对策。方法5～10月份肠道传染病高发季节,在浙江省各地(市)肠道门诊采集腹泻病人粪便,对O157:H7菌株进行分离培养,并用PCR方法检测其毒力基因。结果1998年开始至今的人群监测中,共检出2株无毒力的肠出血性大肠杆菌O157:H7。PCR毒力基因检测,SLT2和Hly阳性,SLT1阴性。结论与以往不同,此次分离到带有毒力基因的人源性肠出血性大肠杆菌O157:H7,说明浙江省O157:H7在菌型特征方面发生了变化,对人群健康构成了更大的威胁。     

江苏省建湖地区大肠埃希菌O157:H7毒力基因分析

目的对检测出的17份肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株进行毒力基因分析。方法收集江苏省建湖地区2008年5月～9月监测出的17株肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株,利用单一和多重PCR法检测不同来源菌株0157抗原编码（rfbE）、H7鞭毛抗原编码（fliC）、志贺样毒素（stx1和stx2）、溶血素（hly）和黏附抹平因子（eaeA）。结果通过血清学方法确定的17株肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株,再通过PCR法检测,其中15株大肠埃希菌rfbE和fliC基因检测为阳性,确认为EHEC O157：H7,其中9株菌株扩增出全部毒力基因,5株菌株扩增出除stxl外其它全部毒力基因,1株仅检出stx2,hly毒力基因;2株大肠埃希菌rfbE基因检测阳性、fliC基因检测为阴性,确认为O157：H7-大肠埃希菌,无毒力基因检出。结论该地区存在O157：H7大肠埃希菌强毒株污染,从流行病学角度看具潜在的流行性危险,当地疾控部门应加强O157：H7的综合监测。     

安徽省114株EHECO_(157)∶H_7菌株毒力因子基因的初步分析

目的　对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7(EHECO1 57∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7的毒力特征和致病特性。方法　采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO1 57∶H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素 (SLT)和溶血素 (hly)的特异性基因片段 ,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定。结果和结论　检测结果显示 ,有 6 3 2 %的EHECO1 57∶H7菌株携带SLT、hly基因 ,动物源的菌株以家禽较高 ,家畜次之 ,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33 3% ,说明分离的EHECO1 57∶H7菌株具有较强的致病性 ;114株菌株中 ,有 14 0 %的菌株在 2 4h内发酵山梨醇 ,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率 18 8% ,显著低于不发酵菌株的 70 4 % ,显示出山梨醇发酵特性变异与毒力因子基因缺失之间具有一定的关联性     

非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型鉴定及主要毒力基因分析

目的 了解中国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型及主要毒力基因的流行情况。方法 采用O抗原基因簇特异性聚合酶链反应（PCR）结合全套O抗血清凝聚法确定O血清群,以PCR扩增和测序fliC基因确定H型;采用PCR方法对所有菌株进行stx1、stx2、eae及ehxA基因检测。结果 434株非O157 STEC分离株中,除不可分型菌株外,共检测出82种O血清群和28种H型,其中O20:H30、O2:H32和O2:H45为优势血清型。stx1、stx2和stx1+stx2 3种志贺毒素基因型的检出率分别为25.35%、64.98%和9.68%,而eae和ehxA基因的阳性率分别为3.92%和32.95%。仅15株菌同时携带3种毒力基因,且主要为血清型O26:H11的腹泻患者分离株。结论 我国非O157 STEC分离株血清型复杂多样,同时检测eae和ehxA基因对于发现高致病潜力的菌株具有重要参考价值。     

2008-2010年浙江省衢州市动物粪便O157∶H7监测及其意义

目的 动态了解浙江省衢州市家禽、家畜肠出血性大肠埃希菌O157∶H7带菌情况和菌型分布特征,以制定相应的防制对策。 方法 6、7月肠道传染病高发季节,采集动物粪便标本,对O157∶H7菌株进行分离培养,并用PCR方法检测其毒力基因。 结果 共采集动物粪便标本914份,检出O157∶H7菌2株,总带菌率为0.22%,其中羊、牛各检出1株,带菌率分别为0.62%和0.71%。经PCR检测,其中1株携带stx2+ hly+ eaeA毒力因子,1株hly+eaeA阳性,stx1均为阴性。 结论 衢州市再次分离到带有毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7,对人群健康构成了威胁,应加强O157∶H7的综合监测。     

浙江省衢州市柯城区检出带毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7

目的　了解浙江省衢州市柯城区肠出血性大肠埃希菌O157∶H7人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况。方法　采集腹泻患者粪便、动物粪便以及各类食品、蝇类等标本，MEC肉汤增菌后，用特异性免疫磁珠集菌，以科玛嘉显色平板分离，纯化的菌株经生化鉴定、血清分型及毒力基因检测。结果　2007年采集动物粪便标本300份，共检出O157∶H7菌16株，总带菌率为5.33%，其中牛、羊、猪带菌率较高，分别为20.83%、12.70%和3.61%，腹泻患者、食品和媒介昆虫中均未检出。毒力基因检测所有分离株Istx/I2、hly、eaeA 3种毒力基因均呈阳性，而stx1均呈阴性。结论　衢州市柯城区部分动物中存在O157∶H7感染，且为产毒株，应加强O157∶H7的综合监测。     

非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株的志贺毒素基因变种及黏附相关基因分析

目的 了解我国部分地区非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株的志贺毒素基因变种及其黏附相关基因,为进一步研究致病机制提供依据。 方法 采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对29株分离菌株的stx1、stx2基因全长扩增并测序,通过与GenBank中已公布的变种序列比对确定菌株stx1、stx2基因的变种类型。对位于LEE毒力岛上的eaeA、escF、escC、tir、espA、espB、espD基因及LEE以外其他黏附相关基因iha、toxB、efa1、sfpA、lpfAO157/OI-141、 lpfAO157/OI-154、saa、lpfAO113、eibG进行PCR检测。 结果 25株stx1阳性菌株中有13株携带stx1a原毒素,12株携带stx1c变种;10株stx2阳性菌株中,7株携带stx2d变种,1株为stx2a原毒素,1株携带stx2g变种,1株携带与stx2e A亚单位、stx2d B亚单位最接近的stx2变种。LEE岛上的7个基因检测结果均为阴性,黏附相关基因iha阳性率为89.7%(26/29),saa阳性菌株3株、eibG阳性菌株1株,其余6个黏附相关基因均为阴性。 结论 我国部分非O157 STEC菌株的志贺毒素基因以stx1c、stx2d变种为主,LEE毒力岛不存在,而黏附相关基因iha广泛存在于不同血清型的产志贺毒素大肠杆菌菌株中。     

Detection by 5'-nuclease PCR of Shiga-toxin producing Escherichia coli O26, O55, O91, O103, O111, O113, O145 and O157:H7, associated with the world's most frequent clinical cases

This paper describes 5'-nuclease PCR assays for detecting eight O-serogroups, H7 flagellar antigen and stx genes from the Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) associated with the world's most frequent clinical cases. A single set of primers was used to detect the genes stx1 and stx2 in the same reaction by 5'-nuclease PCR. Serotyping by 5'-nuclease PCR of STEC was based on the selection of primers and probes targeting the O-antigen gene clusters of E. coli O26, O55, O91, O111, O113, O157, the eae gene of E. coli O103, the O-island 29 of E. coli O145, and the flagellar H7 antigen gene. Results obtained on a collection of 190 strains indicate that the 5'-nuclease PCR assays used here could serve as a basis for rapid specific stx, O and H7 typing of these major pathogenic serogroups of E. coli. This work provides sensitive and specific tests for the rapid, reliable detection of the main pathogenic E. coli O-serogroups of major public health concern.     

大肠杆菌O157∶H7抗菌药物敏感性研究

为了解E .ColiO15 7∶H7对抗菌药物的敏感性及其耐药谱的差异 ,我们选择了常见的 19种抗生素 ,对 1999年分离到的 89株O15 7∶H7进行药敏试验。结果显示O15 7∶H7对氨基甙类、头孢类、喹诺酮类、呋喃类的实验药物、多肽类的多粘菌素B以及氯霉素的敏感率高 ,基本在 90 %以上。在宿主动物中家禽类的菌株耐药率大于家畜类 ,家畜类宿主中猪的菌株耐药率大于牛、羊。无毒力基因菌株对抗生素的耐药率高于有毒力基因的菌株 (P <0 0 5 )。样本来源不同和基因型别不同的耐药结果均显示菌株对抗生素的耐药情况与其是否携带有毒力基因有关。     

Multiplex PCR for detection of trait and virulence factors in enterohemorrhagic Escherichia coli serotypes

A multiplex PCR assay was developed which allowed the simultaneous detection of five trait genes or virulence markers in enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) serotypes. A primer pair, designed to detect a single base-pair mutation in the uidA gene, is specific only for the prototypic EHEC of O157:H7 serotype and its toxigenic, non-motile variants. In a similar way, primers to the eaeA gene of the gamma-intimin derivative specifically detects strains in the EHEC 1 clonal group, which consists mostly of O157:H7 and some O55:H7 serotypes. The other three primer pairs, specific for stx1, stx2 and both variants of ehxA genes, will detect the presence of these virulence genes in all EHEC serotypes. Analysis of 34 strains, including various serotypes of EHEC, Shiga toxin-producing E. coli and enteropathogenic E. coli, confirmed that the multiplex PCR assay detected the presence of these genes in a manner consistent with the known genotype of each respective strains.     

昆明市首次检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7

为了解昆明市是否存在肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7及流行情况 ,了解蔬菜、食物、水等的污染情况 ,2 0 0 1年 10月采集昆明市鸡、鸭、牛 3个养殖场、西式快餐店 2个和市区 9个农贸市场的鸡、鸭、牛粪 ,生牛奶 ,生、熟肉馅 ,生蔬菜 ,生、熟猪、牛肉 ,海产品 ,以及猪、鱼、鸡内脏等 14种共 15 5份样品。按照大肠杆菌O15 7∶H7的常规分离鉴定方法和分子生物学和血清学试验鉴定 ,结果共发现 19株大肠杆菌O15 7∶H7,并且 19株菌株均含有志贺样毒素VT2的致病基因。其中从蔬菜 (33份 )分离到 9株、鸡内脏 (9份 )分离到 3株、生猪肠 (17份 )和卤猪肉 (12份 )各分离到 2株 ,发干菜 (6份 )、鱼内脏 (6份 )、海产品 (6份 )各分离到 1株大肠杆菌O15 7∶H7。食品中检出阳性菌株数之多在全国尚属少见。特别是蔬菜 ,其检出O15 7∶H7大肠杆菌阳性数 ,占总检出数的 4 3 37% ,与国内其它地区有所不同。昆明市存在发生肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7感染暴发或流行的潜在危险.     

Semi-automated fluorogenic PCR assays (TaqMan) forrapid detection of Escherichia coli O157:H7 and other shiga toxigenic E. coli.

Semi-automated detection of Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 and non-O157:H7 Shiga toxin-producing E. coli (STEC) was achieved using fluorogenic polymerase chain reaction (PCR). These PCR assays were designed to amplify 80, 120 and 150 bp regions of virulence genes stx1, stx2 and eaeA, respectively, using specific primers. The fluorogenic probes were used for specific detection of amplified products of the stx1 and stx2 genes of STEC, and the eaeA gene of EHEC O157:H7. For multiplex PCR assay, the three sets of primers and fluorogenic probes were included in one reaction to simultaneously amplify and detect any of the three targeted virulence genes. In non-multiplex PCR assay, each of the three virulence genes was amplified and detected in independent reactions. The specificity of these assays was evaluated using suspensions of STEC and other bacterial species lacking stx1, stx2 and eaeA. The multiplex assay detected all STEC harbouring any combination of three virulence genes. Three non-multiplex PCR reactions identified types of Shiga toxin genes carried by a STEC and identified STEC as either EHEC O157:H7 or non-O157:H7 STEC. Sensitivity limits of these assays in beef and faeces inoculated with EHEC O157:H7 were 5.8 to 580 cfu and 1.2 to 1200 cfu, respectively. These assays can be completed within 8-10 h when performed simultaneously or within 13 h if the multiplex assay is used as an initial screen for detecting STEC and the non-multiplex assay is used for subsequent detection of stx1 and stx2 of STEC and eaeA of EHEC O157:H7 Copyright 1999 Academic Press.     

一种鉴别与大肠埃希菌O157血清凝集的弗氏枸橼酸杆菌的PCR方法

目的利用基于O抗原翻转酶wzx基因的PCR方法,鉴别与大肠埃希菌O157血清凝集的弗氏枸橼酸杆菌和O157大肠埃希菌。方法用微生物鉴定仪对细菌进行生化鉴定,与O157血清凝集,同时扩增wzx基因。结果25株与大肠埃希菌O157血清凝集的弗氏枸橼酸杆菌及1株不与大肠埃希菌O157血清凝集的弗氏枸橼酸杆菌wzx基因扩增为阳性,8株与O157血清不凝集的弗氏枸橼酸杆菌wzx基因扩增为阴性,20株O157∶H7大肠埃希菌wzx基因扩增为阴性。结论对于可与O157血清发生强凝集的弗氏枸橼酸杆菌,基于O抗原翻转酶wzx基因的PCR方法是一种有效的快速鉴别方法。     

espP基因在O157∶H7大肠埃希菌分离株中的分布

目的了解espP基因在中国部分地区产志贺毒素O157大肠埃希菌分离株中的分布情况及特点。方法根据O157∶H7的溶血素基因hlyA和细胞外分泌蛋白基因espP设计特异性引物,对113株O157大肠埃希菌分离株进行PCR检测。结果 hlyA的阳性率为99.1%,espP的阳性率为72.5%,且只在有大质粒pO157的菌株中检测到espP。结论 espP存在于携带pO157大质粒的O157∶H7大肠埃希菌中,其分布与菌株来源、志贺毒素携带情况等没有相关性。