~3H-TdR、~(51)Cr、~(125)I-UdR释放试验测定NK活性的比较研究

用~3H-TdR、~(51)Cr、~(125)I-UdR 分别标记YAC-1细胞,测定小鼠 NK 细胞活性 ,三种方法所获得的结果呈高度相关性,~3H-TdR 分别与~(51)Cr、~(125)I-UdR 相比以及~(51)Cr与~(125)I-UdR 相比的相关系数依次为 0.9917(P<0.001),0.9725(P<0.001),0.9478(P<0.005),表明三种释放试验均可用于检测细胞毒活性。用收集器收集残存的~(125)I-UdR 标记细胞,不仅其特异性释放率比常规测上清液的释放率要高10％左右,而且制样快速、简便。本文对三种方法的优缺点作了比较,认为~3H-TdR 释放试验作为检测细胞毒是目前国内切实可行的方法。     

应用改良~(125)Ⅰ—UdR释放试验测定杀伤T细胞的细胞毒作用

自Brunner等介绍以~(51)Cr标记靶细胞的同位素释放法测定杀伤T细胞(CTL)的细胞毒作用以来,~(51)Cr释放法已成为测定CTL杀伤能力的常规。但~(51)Cr标记靶细胞的自发释放(SR)率高(1～2%/小时),不适用于较长培育时间的细胞毒试验。近年来~(111)In-oxine标记靶细胞被介绍来代替~(51)Cr标记,其优点为SR低(0.25     

中性粒细胞介导的抗体依赖性细胞的细胞毒作用:~(51)Cr释放伴随的形态学变化

近年来发现,中性粒细胞也具有抗体依赖性细胞的细胞毒活性(NADCC),但对这种细胞毒作用的许多特性尚不了解。本文研究了中性粒细胞与瘤细胞的凝聚物形成和解聚的动态变化及其与~(51)Cr释放的关系;并观察了~(51)Cr最大释放后瘤细胞的形态学变化。实验方法是将~(51)Cr标记的小鼠肝细胞瘤     

~(51)Cr释放法检测杀伤性T细胞的细胞毒作用和评价

本文报道了国产铬酸钠(Na_2~(51)CrO_4)标记P815细胞的条件,和用~(51)Cr释放法检测杀伤性T细胞(CTL)的细胞毒作用。~(51)Cr标记P815细胞的适宜条件是:2×10~5个P815细胞加入100μCi~(51)Cr,37℃恒温下温育2小时。效应细胞与靶细胞作用的条件是:效靶比100:1,作用时间4.5小时。C57小鼠脾脏CTL的特异杀伤作用在P815细胞致敏后第7天开始出现,第11天达高峰,以后开始下降。环磷酰胺50mg/kg可明显抑制小鼠CTL的细胞毒作用。     

CTL、NK和LAK细胞对腺病毒感染细胞的细胞毒作用的实验研究

以~(51)Cr标记Hela细胞和~(51)Cr标记感染腺病毒的Hela细胞为靶细胞;以腺病毒(Adv致敏的特异性杀伤性T淋巴细胞(CTL)、IL_2诱导的淋巴因子诱导杀伤细胞(LAK)和自然杀伤细胞(NK)为效应细胞,进行了细胞毒实验。结果再次显示,腺病毒诱导的特异性CTL对感染腺病毒的宿主细胞有明显的杀伤作用,並证明N K细胞亦有该作用,同CTL相比,其作用较弱,而LAK细胞对Hela细胞有杀伤作用,与Hela细胞是否感染腺病毒无关。     

天然杀伤(NK)细胞活性的测定——~(125)I—UdR及~(51)Cr释放试验的比较

自然杀伤(NK)细胞参与了机体免疫防御的第一道防线,在免疫监视系统中发挥了重要的作用。特别在抗肿瘤,抗病毒等疾病以及免疫调控的研究中NK细胞日益受到关注。有关NK细胞活性的测定国外多数用~(51)Cr标记靶细胞的方法,因其有敏感、简便、重复性好,流程短等优点。国内有人认为~(51)Cr产品比活性低,各批号不稳定难以获得理想的结果。此外,~(51)Cr释放法不适     

白细胞粘附抑制试验法的改进

一、~(51)Cr LAI法:用国产~(51)Cr(13～20毫居里/毫升)标记接种过S180肉瘤的昆明杂种小鼠的白细胞以进行LAI。用通常剂量40微居里的~(51)Cr标记的白细胞5×10~4进行试验,不能鉴别粘附细胞的多少。改用200微居里的~(51)Cr与10~7～10~8(在0.2毫升内)细胞温育37℃30分钟,洗涤后每管用2×10~6/毫升0.05毫升(即1×10~6)细胞作LAI,则可从放射计数判断细胞数目的多少。用此方法测定接     

用~3H-TdR释放法测量细胞介导的细胞毒功能

本文用 ~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)标记多种靶细胞(YAC-1、P815、LAC-1、小鼠淋巴母细胞)与不同效应细胞培养4或18小时,再用胰酶和DNA 酶处理靶细胞,收集细胞,用液体闪烁微杯法测定小鼠特异性和非特异性淋巴细胞介导的细胞毒试验,均获得良好结果。与~(51)Cr释放相比,~3H-TdR 方法具有自然释放率低(<10％),特异性释放率高的特点。     

免疫印迹法的ABC免疫酶染色

<正> 研究细胞膜抗原较常用的技术有免疫印迹法(Western Blotting)、~(125)I标记或~(25)S-甲硫氨酸标记活细胞后电泳放射自显影等方法,而以前者最为普遍。但免疫印迹法需用同位素,一些实验室受到限制,故有采用免疫酶技术如AB法、PAP法等,但     

皮试抗原激活细胞介导细胞毒作用的研究 Ⅰ.念珠菌抗原体外激活细胞介导细胞毒作用与体内对念珠菌抗原皮试应答的比较

诱导迟发型超敏反应(DTH)的念珠菌和PPD等抗原,可在体外激活淋巴细胞的增殖应答。人外周血淋巴细胞(PBL)体外接触这些抗原,可能导致各种~(51)Cr标记的靶细胞溶解。结素阳性者的PBL,在体外接触PPD时,对张氏肝细胞或Auguet大鼠肝细胞瘤靶细胞产生较高的细胞毒;而慢性念珠菌病患者的PBL,在体外接触念珠菌抗原时,对~(51)Cr标记的鸡红细胞溶解活力低于同样处理的正常人PBL。本文研究皮试抗原刺激体     

单克隆抗体Leulla增强人NK细胞活性的机制

人NK细胞的单克隆抗体-Leulla具有增强NK细胞活性的作用。作者从淋巴因子、巨噬细胞方面对其作用机制进行了研究。 本文用Ficoll Paque比重离心法,从正常人末稍血分离出单个核细胞,作为效应细胞。用骨髓瘤细胞系的K_(562)细胞作为靶细胞。并用Na_2 ~(51)CrO_4作标记。采用4小时~(51)Cr释放试验计算出细胞毒性的百分数,作为NK细胞活性。用VSV—WISH细胞测定IFN。用小白鼠     

人单核细胞介导的细胞毒作用:用具有Ig的杂交瘤细胞作为靶细胞探测单核细胞表面触发分子

单克隆抗体32.2(MC32.2)是人单核细胞表面高亲和性IgG Fc段受体(FcgRI)的特异性抗体。作者从产生这种抗体的杂交瘤细胞中以流动细胞计数器选择出稳定表达大量32.2Ig的细胞(HC32.2)作为靶细胞,利用~(51)Cr释放测定单核细胞介导的细胞毒作用。结果表明单核细胞能有效地杀伤HC32.2。     

γ—干扰素的~(125)I偶联标记

<正>小分子量细胞因子的~(125)I同位素标记是研究细胞因子作用机理及其检测十分有用的技术。由于细胞因子分子量通常较小,~(125)I的直接偶连常导致生物活性丧失。我们在~(125)I标记重组人γ-干扰素的实验中,比较了几种连接方法后,用自制的Bolton-Hunter酰化试剂标记取得了较满意的结果。现报道如下。     

~(131)I-抗胃癌单克隆抗体369及其F(ab′)_2片段在人胃癌移植瘤裸鼠体分布的研究

抗胃癌单克隆抗体3G9(McAb3G9)系本所生化室制备,与管癌组织和细胞有较好的选择性结合,其亚类为IgG_1。 用~(131)I标记3G9及其F(ab′)_2进行体内生物学分布和显像研究,用~(125)I标记正常小鼠     

用Percoll法、Ficoll法及常规法制备的效应细胞杀伤功能的比较

本文用Percoll配成的不连续密度梯度(Percoll法)对C57BL、C_(3H)和CBA品系小鼠的脾细胞进行了分离,并用不同密度梯度层分离所得的细胞对~3H-TdR或~(51)Cr标记的YAC-1靶细胞进行杀伤功能检测.发现以50～60％、60～70％二个密度梯度层之间的细胞杀伤活性最高,poly I:C可以增强这种活性.并且在同一效靶比例下,这种效应细胞对YAC-1靶细胞的杀伤活性均高于用Ficoll-Isopague分离的脾细胞(Ficoll法)及常规制备的脾细胞(常规法),前者与后二者所获数据间呈显著性差异(p<0.01)。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅱ、单克隆抗体介导ADCC效应的探讨

本文用HSV-1SM44株感染BHK细胞,经放射性同位素~(51)Cr标记制备靶细胞,以正常小鼠脾细胞为效应细胞,应用5株抗HSV McAb,建立了McAb介导ADCC-~(51)Cr释放试验的测定方法,对McAb介导的ADCC效应测定的有关试验条件做了选择,确定了最适工作条件。ADCC测定结果表明,5株抗HSV McAb介导ADCC的活性不同,McAb 1A12,2A8,1G8无ADCC活性;而1D10和2C5 2株McAb 1:10稀释时的~(51)Cr释放率分别为27.09和25.07％,进一步稀释至10~(-2)或10~(-3)时,这2株McAb仍有ADCC活性。结果提示,不同的HSV抗原决定簇诱导产生的抗体,在介导ADCC免疫保护作用上是有差异的。并为McAb用于临床治疗HSV感染的可能性提供了实验资料。     

~(51)Cr法测定绵羊红细胞寿命

六价铬阴离子(Na_2 ~(51)CrO_4)可以透过红细胞膜与珠蛋白结合。各种年龄的红细胞均可用~(51)Cr标记,体外标记率有80％以上。但进入红细胞的~(51)Cr约有1％从红细胞逸出。红细胞破裂放出的铬呈三价不能在体内重行标记。总之用~(51)Cr标记红细胞,再测定     

Hb-酶释放测定法(Hb-ERA)检测ADCC活性的方法学研究

目前已发展了几种检测抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)的方法,其中以~(51)Cr释放法应用最广.但是由于需要一定的设备、废弃物的处理以及对人体的危害,使得其推广受到限制.作者创建了血红     

IL-3选择性地维持NC而不是NK效应细胞的生长

白细胞介素-3(IL-3)能促进某些类型淋巴细胞增殖,这些细胞不同于依赖白细胞介素-2(IL-2)细胞.产生IL-3的培养条件与IL-2相同,且生成细胞似均为Thy1.2~+,lyt1~+,2~-;但IL-3反应细胞不同于IL-2反应细胞,一般为lyt2~-.作者利用~(51)Cr释放法检测了小鼠IL-3依赖细胞的自然细胞毒(NC)活性及自然杀伤(NK)活性.结果提示,与纯化的IL-3     

辐射敏感性启动子调控CD基因表达联合125I照射对膀肤癌EJ细胞的杀伤作用

以脂质体介导的辐射敏感性基因联合胞嘧啶脱氨酶(cytosine deantinase,CD)基因转染膀胱癌EJ细胞,研究放射性核素125 I照射后5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)对转染膀胧癌EJ细胞的杀伤作用.人工合成辐射敏感性启动子E8,将启动子克隆至质粒pCD2的CD基因上游,构建以E8为启动子、CD基因为目的基因的新质粒,并采用DNA测序法测定E8和CD基因的序列;脂质体Lipofectamine2000介导pE8-CD转染膀胧癌EJ细胞,用[3]I照射(吸收剂量为2舜)后,蛋白质免疫印迹分析(Western blot)测定CD蛋白表达;在转染EJ细胞中分别加人不同剂量125 I勺和5-FC,四哇盐比色法(MTT法)测定各组细胞存活率,并以未经125 I勺照射组、未加5-FC组和5-氟尿啼吮(5-FU)组(阳性对照组)进行对照.DNA测序显示构建的pE8-CD质粒含E8启动子及CD基因序列;Westem blot可检测到CD基因表达;125 I加5-FC组细胞存活率明显低于未经125 I照射组及未加5-FC组,与5-FU组相近.这表明放射性核素与基因治疗联合对肿瘤细胞具有协同杀伤作用.