涎腺多形性腺瘤的倍体分布及与基因治疗的关系

目的:探讨涎腺多形性腺瘤的DNA含量及倍体分布与HSV-tk基因治疗的关系.方法:采用流式细胞仪测定50例涎腺良性多形性腺瘤DNA含量和倍体分布并结合临床资料进行分析;应用腺病毒介导的HSV-tk基因分别转染培养中良性及交界性多形性腺瘤细胞;RT-PCR方法检测基因表达;四唑蓝比色(MTI)法测定HSV-tk系统对二倍体及异倍体肿瘤细胞的杀伤作用.结果:10例正常涎腺组织皆为二倍体;涎腺良性多形性腺瘤异倍体率20.0%;30岁以下年龄,病程在2年以内及瘤体直径＞5cm者异倍体率明显增高(P＜0.05).二倍体肿瘤细胞转染HSV-tk/GCV基因后3、5天,细胞存活率分别为78.3%和37.7%.异倍体肿瘤细胞转染HSV-tk/GCV基因后3、5天,细胞存活率分别为27.6%和27.2%,二者细胞存活率有显著性差异(P＜0.05).结论:1)涎腺多形性腺瘤异倍体检出率与患者的年龄,病程及瘤体直径有密切关系;2)HSV-tk/GCV在治疗后的3、5天对异倍体肿瘤细胞杀伤作用明显高于二倍体肿瘤.     

口腔、颌面

HSV-tK与IL-2基因对涎腺多形性腺瘤细胞的杀伤作用；腮腺肿瘤再手术时面神经的处理；择区性颈清术在临床N0舌鳞状细胞癌治疗中的应用；62倒扁桃体癌临床分析。[编者按]     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

涎腺肿瘤中细胞凋亡及其调控基因的表达

目的：探讨涎腺肿瘤中细胞财亡及调控基因p53、bcl-2、c-myc间的关系。方法：采用脱氧核糖核酸末断转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术，免疫组织化学染色和HE染色对18例多形性腺瘤和52例恶性涎腺肿瘤中细胞凋亡和bcl-2、p-53、c-myc蛋白表达进行观察和比较。结果：恶性涎腺肿瘤的凋亡细胞指数明显高于多形性腺瘤（P＜0．05），恶性涎腺肿瘤中bcl-2、p53和c-myc蛋白表达率及表达强度明显高于多形性腺瘤（P＜0．05）。结论：细胞凋亡的调控基因异常在涎腺肿瘤中可能起重要作用，bcl-2和c-myc蛋白的共同作用可抑制细胞凋亡。     

IL-2基因转染的CIK细胞联合DC对肝癌细胞的杀伤作用

目的 探讨IL-2基因转染的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合树突状细胞(DC)对肝癌细胞的杀伤作用.方法 采用密度梯度离心法从健康人外周血中分离单个核细胞(PMBC),分别诱导CIK细胞和DC.用携带IL-2基因的重组腺病毒AdBM5-GFP-IL-2转染CIK细胞,HepG2肝癌冻融抗原冲击致敏DC,然后将转染IL-2基因的CIK细胞(IL2-CIK)与肝癌抗原致敏DC(Lysate-DC)共培养,制备肝癌抗原致敏DC激活的IL-2基因修饰的CIK细胞(Lysate-DC-IL-2-CIK).采用MTT法检测单纯CIK、DC联合CIK(DC-CIK)、肿瘤抗原致敏DC激活的CIK(Lysate-DC-CIK)、Dc激活的IL2基因转染的CIK(DC-IL2-CIK)和肿瘤抗原致敏Dc激活的IL-2基因转染的CIK(Lysate-DC-IL2-CIK)对肝癌HepG2细胞的杀伤作用,效靶比分别为10:1、20:1、40:1,同时以肝癌细胞H7404、白血病细胞K562作为靶细胞进行杀伤对照实验.结果 研究结果表明,不同效靶比的Lysate-DC-IL-2-CIK效应细胞对HepG2的杀伤活性均显著高于对照组(P<0.05或0.01),且其杀瘤作用随着效靶比的增高而增强,在效靶比为40:1时达到最佳抗肿瘤活性.结论 经肝癌抗原致敏DC激活的IL-2基因转染的CIK细胞对AFP分泌功能的肝癌细胞具有更强的杀伤作用.     

脂质体介导Endostatin IL-12基因联合治疗移植型鼠肝癌的实验研究

目的:探讨脂质体介导Endostatin及IL-12基因联合治疗肝癌的可行性.方法:将已构建的Endostatin和IL-12真核表达载体给荷瘤BALB/c鼠瘤内注射,每周两次测量瘤体积.ELISA法检测肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin含量,MTT法检测NK细胞杀伤活性,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况.结果:联合治疗组肿瘤体积明显小于其它各组(P＜0.05);肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin的表达明显高于pVAX1空载体和生理盐水对照组(P＜0.05);NK细胞杀伤率和肿瘤细胞凋亡率分别为52.0%和48.2%.结论:联合应用Endostatin和IL-12基因可有效抑制鼠肝癌的生长.     

p16抑制基因在腮腺多形性腺瘤恶性增殖中的作用

涎腺多形性腺瘤是比较常见的肿瘤．约占涎腺肿瘤的50％。p16基因(MTS1，CDK4I，CDKN2)是细胞周期的调控者，可能是在肿瘤发生中起重要作用的肿瘤抑制基因．主要与其编码蛋白产物调控细胞增殖有关。本研究应用流式细胞仪检测了不同类型的腮腺多形性腺瘤细胞周期变化．同时利用计算机图像处理系统，对p16基因在腮腺多形性腺瘤中的蛋白表达进行相对定量，探讨p16基因在腮腺多形性腺瘤发生、发展及在恶性增殖中的作用．为涎腺肿瘤的深人研究、肿瘤患者的早期辅助诊断和判断预后提供新的观点和途径。     

p53在涎腺良恶性多形性腺瘤中的表达及其意义

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的肿瘤抑制基因。本文对涎腺多形性腺瘤和癌在多形性腺癌中的p53蛋白进行检测，旨在明确p53基因在这二种良恶性肿瘤中的堆积特性及其临床意义。1材料与方法选择涎腺肿瘤标本39例，其中多形性腺瘤20例，癌在多形性腺瘤中19例，常规固定、包理，连续切片2张，厚4μm，1张HE染色，另1张用ABC法做免疫组化染色（一抗为鼠抗人基因重组p53蛋白抗体）2结果全部病例的组织切片背景清晰，免疫反应定位于肿瘤细胞核内，呈棕黄色或棕褐色。19例涎腺癌在多形性腺瘤中有4例阳性，占21％（图1）。其中1例恶性成份…     

腺病毒介导HSV—tk自杀基因联合野生型p53基因对直肠癌细胞的杀伤作用

目的 观察重组腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV－tk)基因联合人野生型p53基因共转染,对直肠癌细胞杀伤作用。方法 构建重组腺病毒质粒pAdCMV-Link1(tk/p53)、pAdCMV-Link(tik),pAdCMV-Link(p53),分别感染p53炎变的人直肠癌细胞SW837。进行细胞集落形成实验、细胞存活率的测定和裸鼠移植瘤治疗实验,观察HSV－tk/GCV系统与野生p53基因联合对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 应用pAdCMV-Link1(tk/p53),pAdCMV-Link(-),pAdCMV-Link(tk),pAdCMV-Link(p53)重组腺病毒感染SW837细胞,加入GCV,各组细胞集落数分别为8、95、40、70。pAdCMV-Link(CD/53)组肿瘤细胞集落形成减少、细胞存活率显著下降（P＜0．01）。裸鼠移植肿瘤生长抑制率分别为76．5％、0．8％、55．8％、23．2％,pACMV-Link(tk/p53)重组腺病毒对肿瘤的抑制作用最强。结论 HSV－tk自杀基因与野生型p53基因共转染,对肿瘤细胞有更强的杀伤作用。     

用表达IL-2的重组腺病毒瘤体内注射诱导肿瘤消退及免疫反应

IL-2能通过增强CTL细胞的杀伤活性、诱导LAK细胞及激活TIL等具有抗肿瘤作用。而腺病毒以其扩增快、转染范围广,以及不整合入感染细胞的基因组等优点适于临床应用。本文作者将携带IL-2基因的重组腺病毒AdCA IL-2转入肿瘤细胞后种入小鼠体内或直接在肿瘤部位进行瘤体内注射,检测了IL-2的表达,并观察了对肿瘤生长的影响。     

多聚乙烯基亚胺介导的pOSP1-HSVtk基因对卵巢癌的抗瘤研究

目的: 研究多聚乙烯基亚胺(PEI)介导的卵巢特异性启动子调控下的自杀基因对卵巢癌的抗肿瘤作用.方法:(1)将卵巢特异性启动子调控下的真核表达质粒pOSP1-HSVtk利用PEI导入人卵巢癌细胞SKOV3,人肺癌细胞NCI-H460和人肝癌细胞HepG2,MTT法测定GCV对三种肿瘤细胞的杀伤作用;(2)建立卵巢癌移植瘤模型,瘤周注射PEI/pOSP1-HSVtk复合物,通过HPLC监测体内GCV浓度的变化来评价TK基因在肿瘤组织中的表达效率;同时记录裸鼠的体重、瘤体大小及瘤重,计算体积和重量抑瘤率,并进行肿瘤组织的病理学和TUNEL检测.结果: (1)GCV仅对SKOV3细胞具有杀伤作用;(2)与对照组相比,GCV的浓度在转染pOSP1-HSVtk的肿瘤组织局部显著降低(0.05>P>0.01);治疗组的肿瘤体积和瘤重显著减小(P<0.01),体积抑瘤率与重量抑瘤率分别为63.66%和58.98%.组织学示治疗组肿瘤细胞有出血及坏死,TUNEL证实了细胞的凋亡.结论: 多聚乙烯基亚胺介导的卵巢特异性启动子调控下的自杀基因对卵巢癌有靶向杀伤作用.     

多聚乙烯基亚胺介导的卵巢特异性启动子调控下的自杀基因抑制卵巢癌细胞生长的体外研究

背景与目的目前基因治疗领域的关键技术问题是如何提高基因载体的转导效率和靶向性。近年来以一种新的多聚阳离子化合物—多聚乙烯基亚胺(polyethylenimine,PEI)作为载体为基因转移提供了一条有效的新思路。本研究应用PEI介导卵巢特异性启动子OSP-1调控下的自杀基因HSV-tk体外处理人卵巢癌细胞SKOV3,观察其抗瘤效应和靶向性。方法(1)将pGL3-Luc质粒分别介导多聚乙烯基亚胺PEI、脂质体DOTAP和裸DNA转染人卵巢癌细胞SKOV3,检测荧光素酶表达RLU(relativeluciferaseunit);(2)利用PEI将卵巢特异性启动子调控下的真核表达质粒pOSP1-HSVtk导入人卵巢癌细胞SKOV3、人肝癌细胞SMMC7721,应用MTT法测定更昔洛韦(ganciclovir,GCV)对两种肿瘤细胞的毒性;高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测GCV在SKOV3的细胞内代谢;流式细胞仪和末端脱氧核苷酸转移酶原位标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)检测肿瘤细胞的凋亡。结果(1)PEI组的荧光素酶表达活性最高(187.35±6.48),与另两组相比(45.74±5.98,0.03±0.00),有显著性差异(P<0.01);(2)GCV对SKOV3细胞呈现明显的细胞毒性,对SMMC7721细胞没有产生细胞毒性;HPLC检测显示随着作用时间的延长,细胞内GCV水平逐渐下降;流式细胞仪显示转染pOSP1-HSVtk质粒的SKOV3细胞经GCV作用24、48、72h后,凋亡率分别为(8.42±0.76)%、(18.50±1.78)%、(34.80±3.46)%,呈明显的增高趋势;TUNEL检测SKOV3细胞可见大量凋亡细胞。结论多聚乙烯基亚胺介导卵巢特异性启动子调控下的自杀基因对卵巢癌有特异的体外杀伤作用,有助于提高基因治疗的有效性和靶向性。     

24例涎腺恶性多形性腺瘤的临床分析

目的 了解涎腺恶性多形性腺瘤的临床特征、治疗和预后。方法 24例经病理证实的涎腺恶性多形性腺瘤,对其诊断、治疗以及生存率进行分析。结果 恶性多形性腺瘤患者总的5年生存率为66．7％,其中发生于大涎腺者5年生存率为63．6％,发生于小涎腺2例均存活5年以上。结论 治疗首选手术,提倡首治行规范切除,位于领下腺者建议行预防性颈清扫;术后补充放疗不提高局部控制率。     

涎腺多形性腺瘤106例诊治体会

目的 探讨涎腺多形性腺瘤的临床特点、诊断方法及治疗原则。方法 对我科近14年来收治的106例涎腺多形性腺瘤的临床资料进行回顾性分析。结果 106例涎腺多形性腺瘤中，以腮腺最为常见，占52％，颌下腺、腭部、上唇次之，分别为36．8％、8．5％、2．7％。本组共复发4例。结论 细针抽吸细胞学活检可作为涎腺多形性腺瘤的常规术前检查，治疗的成功与否关键在于第一次的手术方式。     

Malignant mixed tumor

The term "malignant mixed tumor" is usually synonymous with "carcinoma in pleomorphic adenoma," a secondary carcinoma developing in pre-existing pleomorphic adenoma. However, it sometimes indicates a group of tumors consisting of carcinoma in pleomorphic adenoma, carcinosarcoma (true malignant mixed tumor) and metastasizing benign mixed tumor, the latter 2 being the most infrequent. According to the data of the Japanese committee on TNM classification for salivary gland carcinomas, carcinoma in pleomorphic adenoma accounted for about 10% of all salivary gland carcinomas, both in the parotid and submandibular glands. The main type of carcinomas arising in pleomorphic adenoma were undifferentiated carcinoma, adenocarcinoma and squamous cell carcinoma. Crude 5- and 10-year survival rates were 54.7% and 42.7%, respectively. Invasive carcinomas and carcinomas of high grade malignancy carried worse prognoses. The treatment of choice for carcinoma in pleomorphic adenoma has consisted of en-bloc excision with wide margin. Invasive growth, facial nerve involvement, lymph node metastasis or high-grade malignant tumor are grounds for postoperative radiation therapy. The role of chemotherapy has not yet been well established.     

丹参酮Ⅱ A增强HSV-tk/GCV旁观者效应及其与Cx43 mRNA表达的关系

目的　研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA ,Tan)对HSV tk/GCV旁观者效应的增强作用及其与间隙连接蛋白Cx4 3转录表达的关系。方法　应用polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察Tan对宫颈癌细胞ME180 (ME)、ME/TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果　在HSV tk/GCV系统中 ,Tan显著地提高了ME/TK细胞对GCV的敏感性。在 2 μg/mlGCV作用下 ,以1.3× 10 9mol/LTan与不加Tan的作用相比较 ,在ME与ME/TK不同比例混合细胞的各组中 ,细胞的存活率明显降低 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。并观察到Tan对GCV旁观者效应的增强作用 ,在一定范围内为 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/L。RT PCR结果表明 ,经 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/LTan处理的ME细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 8.83倍及 8.4 7倍。结论　在宫颈癌ME180细胞中 ,Tan在 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/L范围内具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。Tan在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,与旁观者效应的增强作用密切相关。     

Exogenous wt-p53 enhances the antitumor effect of HSV-TK/GCV on C6 glioma cells

Objective To study on the antitumor effect of combining wt-p53 gene with suicide gene therapy (HSV-tk+GCV) for malignant gliomas. Methods AdCMV-p53 was transfected into C6 glioma cells at MOI of (Multiplicity of infection) 0(G100), 10(TPG1), 100(TPG2), then AdCMV-tk was transducted to C6 glioma cells of G100, TPG1 and TPG2, respectively, at MOI of 100. The C6 glioma cells tranfected with both AdCMV-p53 and AdCMV-tk were exposed to various concentration of GCV. The cell survival rate was measured by MTT assay in vitro. Rat glioma model was established by injecting 5 × 10⁵ C6 glioma cells into right caudate nucleus of SD rats. AdCMV-p53 and AdCMV-tk were injected into glioma on day 5 and 6, respectively. On day 7, ganciclovir (GCV) was administrated intraperitoneally at 15 mg/kg/day for 14 days. The survival time of all rats was observed. The growth of intracerebral tumors was monitored dynamically by enhanced MRI. Cell apoptosis was evaluated by TUNEL method. Expression of HSV-tk gene was identified by in situ hybridization and expression of exogenous p53 gene was detected with Western blotting. Results In vitro, wt-p53 significantly enhanced antitumor effect of HSV-tk/GCV. The concentration of GCV for ID50 of TPG2 cells (0.001 μg/ml GCV) was 10 times lower than that for the cells of tk-GCV group (MOI = 100), while the concentration of GCV for ID100 of TPG2 (0.01 μg/ml GCV) and TPG1(0.1 μg/ml GCV) was 100 and 10 times lower than that for the cells of tk-GCV group (MOI = 100), respectively. Apoptosis of C6 glioma cells also could be induced by transfection with wt-p53 gene slightly. For in vivo study, the survival time of tumor-bearing rats treated with HSV-TK/GCV or wt-p53 combined with HSV-TK/GCV was significantly prolonged and the intracerebral tumors were regressed and disappeared earlier in the combined gene therapy group than those in the HSV-TK/GCV therapy group as shown in enhanced MRI. However, only half dose of GCV for the rats treated with both wt-p53 and HSV-TK/GCV was needed to obtain the same efficacy as those rats treated with HSV-TK/GCV alone. These results indicate that the transfection of wt-p53 potentiates the effect of HSV-TK/GCV therapy. Conclusions The combination of HSV-tk/GCV system with wt-p53 gene transduction is optimal for clinical therapeutic trials of suicide gene therapy for malignant gliomas.     

Ad-hTERTp-单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷系统联合奥沙利铂对人类肝癌细胞的影响

目的研究腺病毒介导的Ad—hTERTp一单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷（Ad-hTERTp—HSV—TK／GCV）自杀基因系统联合奥沙利铂对人类肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用。方法将带有hTERT启动子驱动HSV—TK基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-hTERTp-HSV-TK作为载体。感染复数（MOI）为100转染HepG2细胞,观察不同浓度的Ad-hTERTp—HSV-TK／GCV、奥沙利铂及二者联合对HepG2细胞生长的影响。用锥虫蓝活细胞拒染法、四甲基偶氮唑盐比色（MTF）法检测各干预组肝癌细胞生长的抑制率。结果3组HepG2细胞的生长均不同程度被抑制,且随药物浓度的增加抑制作用显著增强。Ad—hTERTp—HSV。TK／GCV联合奥沙利铂组抑制率最高（86．63％）,与Ad—hTERTp—HSV．TK／GCV组抑制率（72．12％）及奥沙利铂组抑制率（59．41％）相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad—hTRTq：Tp—HSV—TK／GCV联合奥沙利铂可显著增强对HepG2细胞的杀伤作用,增加靶向性的同时可以降低药物浓度,对临床用药有指导意义。